-Allgemeine Aspekte -Spezielle Aspekte

-Allgemeine Aspekte

-Spezielle AspekteHmostasediagnostikHannover, November 2005

Allgemeine Aspekte-Testsystematik

-Qualittssicherung

-Befundinterpretation

Testsystematik-Phnotyp-Analytik-Funktionelle Testverfahren-Strukturelle Testverfahren

-Genotyp-Analytik-DNA-basiert-RNA-basiert

Funktionelle Testverfahren-Funktionelle Testverfahren bestimmen die biologische Aktivitt eines Analyten.

-Testmatrix: Vollblut, plttchenreiches Plasmaoder plttchenarmes Plasma

-Read-out-System:-turbidometrisch-koagulometrisch-amidolytisch

Thromboplastinzeit Messprinzip: koagulometrisch

Messparameter:Fibrinbildung

Messgre:Gerinnungszeit in Sek.

Befundmitteilung:in Prozent bezogen auf Normalplasma

Prothrombin-Ratio

International normalized ratio (INR)Prothrombin-Ratio = PatientenwertNormalwertINR = Prothrombin-RatioISI-WertISI = International Sensitivity Index

Korrelation Quick-Wert und INR

Diagramm1

2.62

0.99

1.13

1.21

1

1.03

1.02

1

0.97

0.81

1.03

1.19

1.01

0.91

1.17

1.16

1.13

1.73

2.57

1.8

2.4

1.17

1.69

0.92

2.2

1.12

1.07

1.25

1.24

1.2

0.98

1.18

1.25

1.87

1.28

4.78

Quick-Wert (%)

INR

Tabelle1

242.62

1010.99

811.13

721.21

1001

951.03

961.02

1001

1050.97

1300.81

951.03

741.19

981.01

1170.91

761.17

771.16

811.13

421.73

252.57

401.8

272.4

761.17

431.69

1150.92

302.2

821.12

891.07

681.25

691.24

731.2

1030.98

751.18

681.25

381.87

651.28

124.78

Tabelle1

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

0

Quick-Wert (%)

INR

Tabelle2

Tabelle3

Koagulometrisches TestverfahrenThrombinFibrinogenFibrinMessparameter: Fibrinbildung

Amidolytisches TestverfahrenH-D-Phe-Pip-Arg-pNApNAThrombinMessparameter: Hydrolyse eines Peptidsubstrats

Thrombinbestimmung: koagulometrisch

Diagramm2

241

112

54

21

14

10

13

Thrombinkonzentration (U/ml)

Gerinnungszeit (s)

Tabelle1

Thrombinsec.

0.01241

0.05112

0.154

0.521

114

510

1013

Tabelle1


Gerinnungszeit (s)

Tabelle2

Tabelle3

Thrombinbestimmung: amidolytisch

Diagramm5

0.1

0.15

0.3

0.75

1.06

2.37

2.5


Delta OD (405 nm)

Tabelle1

Thrombinsec.

0.01241

0.05112

0.154

0.521

114

510

1013

Tabelle1


Gerinnungszeit (s)

Tabelle2

ThrombinOD (405 nm)

0.010.1

0.050.15

0.10.3

0.50.75

11.06

52.37

102.5

Tabelle2


Delta OD (405 nm)

Tabelle3

TF-induced thrombin formationclot formation

Diagramm1

0

2.5

3.5

11.3

21

54

148

545

990

3950

5600

Time after TF (min)

T-AT complexes (ng/ml)

Tabelle1

0

12.5

23.5

311.3

421

554

6148

7545

8990

93950

105600

Tabelle1

Time after TF (min)

T-AT complexes (ng/ml)

Tabelle2

Tabelle3

Amidolytische TestverfahrenAmidolytische Testverfahren

-sind eine Alternative zu koagulometrischenVerfahren.

-ermglichen kinetische Untersuchungen Endogene Thrombinbildungspotenzial.

Testsystematik-Phnotyp-Analytik-Funktionelle Testverfahren-Strukturelle Testverfahren

-Genotyp-Analytik-DNA-basiert-RNA-basiert

AntigentesteDefinition:Antigenteste messen die Konzentration und/oder die molekulare Struktur eines Analyten.

Beispiele:ELISA-VerfahrenElektrophoresetechniken/Western-BlotHPLCDurchflusszytometrie

Sandwich-ELISA: Prinzip (1)Fnger-AkMikrotiterplatte

Sandwich-ELISA: Prinzip (2)Fnger-AkMikrotiterplatteAntigen

Sandwich-ELISA: Prinzip (3)Fnger-AkMikrotiterplatte**Detektions-AkAntigen

Sandwich-ELISA: Prinzip (4)Fnger-AkMikrotiterplatte**Detektions-AkAntigenSubstratFarbstoff

Allgemeine Aspekte-Testprinzipien

-Qualittssicherung


Testvaliditt-Eignung des Tests fr die klinische Diagnostik.

Testvaliditt: Parameter-Przision (RiLiBK)

-Spezifitt

-Sensitivitt

TestprzisionIntra-assay Varianz:Schwankungen eines Messwertes innerhalbeiner Messserie.

Inter-assay Varianz:Schwankungen einesMesswertes von Seriezu Serie.

Testsensitivitt: DefinitionDie Testsensitivitt ist definiert als die

Wahrscheinlichkeit mit der erkrankte

Personen vom Test als krank erkannt

werden.

Krankheits-Testergebnisstatuspositivnegativ

positivrichtig positivfalsch negativ

negativfalsch positivrichtig negativTestvaliditt

Testsensitivitt: DefinitionSensitivitt =

RPRP + FNRP = richtig positiv, FN = falsch negativ

D-Dimer und DVT-DiagnostikTestSensitivittNegativer pr-(%) diktiver WertElisa9796Vidas-DD9898Latex-Assay8392Simplired8592Perrier A, Bounameaux. Thromb Haemost 2001; 86: 475 - 487

Testspezifitt: DefinitionDie Testspezifitt ist definiert als die

Wahrscheinlichkeit mit der gesunde

Personen vom Test als nicht krank

erkannt werden.

Krankheits-Testergebnisstatuspositivnegativ

krankrichtig positivfalsch negativ

gesundfalsch positivrichtig negativTestvaliditt

Testspezifitt: DefinitionSpezifitt =

RNRN + FPRN = richtig negativ, FN = falsch positiv

Testvaliditt-Eignung des Tests fr die klinische Diagnostik.

-Evidence-based diagnostics

EBD: BewertungenDas Ergebnis des diagnostischen Verfahrens ist ...

Level 1: diagnoseentscheidend und therapierelevant.

Level 2: diagnoseentscheidend oder therapierelevant.

Level 3: diagnosehinfhrend.

Level 4: zur Diagnostik und Therapie ungeeignet.

Qualittssicherung: Ziele- Erkennen von Einflssen, die unab-hngig von dem Messparameter dasTestergebnis beeinflussen.

-Sicherung einer gleichbleibendenErgebnisqualitt.

EinflussgrenEinflussgren beeinflussen das Messergebnis

unabhngig von der eigentlichen Messgre.

Einflussgren-Physiologische Einflussgren

-Methodische Einflussgren(Analytische Strgren)

Analytische Strgren-Pranalytische Fehler

-In-process Fehler

-Interpretationsfehler

Pranalytische Strgren-Art der Blutabnahme

-Verhltnis Blut : Antikoagulanz

-Art des Antikoagulanz

Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz

Diagramm1

0

0.15

0.45

1.02

1.66

2.06

CTAD-antikoaguliertes Plasma

Citrat-antikoaguliertes Plasma

Tabelle1

HeparinDade-Behring

CTADCitratCTAD

0000

0.10.240.150.24

0.250.560.450.56

0.51.171.021.17

0.752.121.662.12

12.42.062.4

Tabelle1

00

00

00

00

00

00



Tabelle2

Tabelle3

Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz

Diagramm1

00

0.150.24

0.450.56

1.021.17

1.662.12

2.062.4



Tabelle1

HeparinDade-Behring

CTADCitratCTAD

0000

0.10.240.150.24

0.250.560.450.56

0.51.171.021.17

0.752.121.662.12

12.42.062.4

Tabelle1



Tabelle2

Tabelle3

Analytische Strgren: Beispiel aPTTPranalytische Fehler: Abnahme in SerumrhrchenAbnahme aus Heparinzugang

In-process Fehler:Fehlende Zugabe von CalciumchloridVerzicht auf Przisionskontrollen

Interpretationsfehler:Interpretation bei fehlendem Referenz-bereich

Physiologische Einflussgrssen-Alter

-AB0-Blutgruppe

-Akute-Phase-Reaktion

-Geschlecht

ParameterBlutgruppenA/B0

vWF-Ag:64 150 %46 125 %

RiCof:65 165 %50 130 %

CBA:69 116 %61 121 %

vWF-Parameter: Referenzbereiche** IHT Uniklinikum Bonn

Referenzintervall*: Definition-Das Referenzintervall bildet die bio-logische Streuung eines Messpara-meters in einer definierten Popula-tion ab.

-Die obere und untere Grenze des Referenzintervalls wird durch das 95% Konfidenzintervall bestimmt.

* Synonym: Referenzbereich

X- 2s+ 2s95 %Referenzgrenzen: Bewertung

Referenzwerte-Referenzstichprobe

-Referenzintervall

-Referenzgrenzen

Referenzstichprobe: SelektionInduktiv:Ausgewhlte Population ohne Krankheits-merkmale (Blutspender, Krankenhausper-sonal)

Deduktiv:Unselektierte Patienten bilden das Basis-material. Durch Ausschlusskriterien wirddas Kollektiv der nicht kranken ermittelt.

Mathematisch:Bhattacharya Plot

Referenzstichprobe: induktivPopulation: 100 gesunde Blutspender50 Frauen/ 50 Mnner

Berechnung:95 % Konfidenzintervall** Fast alle Hmostaseparameter sind nicht normalverteilt.

Referenzstichprobe: DeduktivParameter: D-Dimer als Thrombose-indikator

Basiskollektiv:Patienten mit thrombose-typischer Symptomatik

Selektionskriterium:bildgebende Diagnostik

Allgemeine Aspekte-Testprinzipien

-Qualittssicherung


TransversalbeurteilungWert in Bezug zum Referenzintervall:

- innerhalb:gesund?

- auerhalb:pathologisch?

Entscheidungsgrenzen-Entscheidungsgrenzen korrelieren eine klinische Symptomatik mit ein-em Messwert.

-Entscheidungsgrenzen knnen nur an einem Kollektiv von erkrankten Personen ermittelt werden.

-Entscheidungsgrenzen und Referenz-grenzen sind nicht deckungsgleich.

Entscheidungsgrenzen: BeispielParameter:FVIII-Aktivitt

Referenzintervall:60 150 %

Entscheidungsgrenze:

-Hmophilie:< 30 %

-Thrombophilie:> 250 %

MesswertBewertungsalgorithmus: Laboranalytiklaborinterne QualittskontrollefehlerfreiFreigabeFehlersucheArzt informierenWiederholungrztliche Befundungjanein

Qualittskontrolle & ReferenzintervallUnprzision von Tag zu Tag:-hchstens 1/8 des Referenzintervalls-besser 1/12 des Referenzintervalls

Beispiel: aPTT (26 34 s)-1/8 1 s-1/12 0,7 s

freigegebener MesswertBewertungsalgorithmus: LaboranalytikInnerhalb desReferenzbereichsVerlaufs-kontrolleKrankheits-bezugjaneinBezug zu VorwertenNormal-wertjaneinKlinisch-relevantKlinisch-nichtrelevantjanein

180.000/lBeispiel: ThrombzytenzahlReferenzbereich:150.000 300.000/LVerlaufs-kontrolleKrankheits-bezugjaneinBezug zu VorwertenNormal-wertjaneinKlinisch-relevantKlinisch-nichtrelevantjanein

Beispiel: ThrombozytenzahlKlinischer Verlauf:-Beginn Heparintherapie vor 5 TagenAusgangswert: 290.000/l

Aktueller Messwert:180.000/l

Bewertung: V. a. relative Thrombozytopenie

-Allgemeine Aspekte

-Spezielle AspekteHmostasediagnostik

Documents

-Allgemeine Aspekte -Spezielle Aspekte