62

1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

  • Upload
    others

  • View
    0

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 2: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

1. พนธวศวกรรม (genetic engineering)

กระบวนการตดตอยนจากการสงเคราะหขน หรอจากสงมชวตแหลงตาง ๆ หลายแหลงเขาดวยกนตามความเหมาะสม แลวใสเขาไปในสงมชวตชนดหนง (host) เพอใหผลตสารโปรตนตามทตองการ เชน การตดตอยนทควบคมการสรางอนซลนของคนใสเขาไปในแบคทเรยสรางอนซลนได เปนตน

หมายถง

Page 3: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การเปลยนแปลงสารพนธกรรมโดยกระบวนการธรรมชาตอาจเกดโดยมวเทชน แตลกษณะทไดมกเปนลกษณะทไมพงปรารถนา หรออาจเกดจากการแลกเปลยนยนในกระบวนการสบพนธหรอการจดกลมใหมของยนตามกฎพนธกรรมของเมนเดล ซงเกดเฉพาะในสายพนธหรอสงมชวตชนดเดยวกน (same species) ไมมการผสมขามพนธและกเกดในอตราทชามาก แตโดยกระบวนการทางพนธวศวกรรมทาใหเกดการแปรผนของยนไดรวมเรวและตรงตามจดประสงค รวมทงยงผสมยนขามสายพนธได เชน คนกบแบคทเรย เปนตน

Page 4: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

2. พนธวศวกรรมโดยการตดตอ DNA

ภายในเซลลของสงมชวต จะมกระบวนการตด-ตอ DNA ตามธรรมชาต โดยอาศยการทางานของเอนไซมตางๆ ภายในเซลล ในกระบวนการจดกลมใหมของยน (gene recombination) ซงมกเกดขนในกระบวนการแบงเซลลกเปนผลจากการตด-ตอ DNA พนธวศวกรรม โดยการตด-ตอ DNA หรออาจเรยกวาการสราง DNA สายผสม หรอรคอมบแนนท ดเอนเอ (recombinant DNA) กเปนการเลยนแบบการตด-ตอ DNA ภายในเซลล แตทวากระทาในหลอดทดลองเทานนเอง ความสามารถในการตด-ตอ DNA ในหลอดทดลองดงกลาว ทาใหเราสามารถตด-ตอ DNA จากสายพนธตางๆ กนโดยไมมขอบเขตจากด นนคอ สามารถสรางสงมชวตใหมๆ ขนมาได

Page 5: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 6: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

ทศทางไมแนนอน Gene mutation

กระบวนการธรรมชาต ไดลกษณะไมเหมาะสม

Same species only

Gene recombination

เกดลกษณะทตองการไมเตมท, เกดชามาก

Crossing over

Allele frequency

อตราทชามาก

Page 7: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การสราง Recombinant DNA

การนา Recombinant DNA เขาส host

การคดเลอก host ทไดรบ recombinant DNA Transformation

DNA fragmentทตองการโดยใช

Restriction enzyme ตด

ใช DNA ligase เชอม Transfection Transduction Conjugation

GMOs (GMOs) ชนดแรกสดคอมะเขอเทศ

DNA vector (Plasmid,

phage cosmid)

Page 8: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การทา recombinant DNA ในเทคนควศวพนธกรรม มขนตอนดงน

แยก DNA ออกจากเซลลผใหทมยนทตองการ

ตด DNA ทมยนทตองการเปนชนยอยๆ ดวยเอนไซมตดจาเพาะ

เชอมตอ DNA ชนยอยๆ กบ DNA พาหะ ซงตดดวยเอนไซมตดจาเพาะเกดเปน recombinant DNA

นา recombinant DNA เขาสเซลลของแบคทเรย

คดเลอกเซลลของแบคทเรยทมยนทตองการและสรางโปรตนทตองการได

Page 9: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การโคลนยน หรอ การโคลน DNA หมายถง กระบวนการทางเทคนคพนธวศวกรรมทใชเพมปรมาณยนและประมาณ DNA ทตองการ โดยสวนของ DNA ทมยนทตองการจะถกตดตอเชอมเขากบจโนมของไวรสหรอพลาสมดของแบคทเรย

Page 10: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

วธการโคลนยน หรอ การโคลน DNA มหลายวธ ดงน

1. พลาสมด (plasmid) เปน DNA วงแหวน (circular DNA) สายคทอยนอกโครโมโซมของแบคทเรย (extrachromosome DNA) ซงมขนาดประมาณ 1 กโลเบส - 200 กโลเบส (1,000-200,000 คเบส) พบในเซลลแบคทเรย

Page 11: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

แตในปจจบนพลาสมดทนยมใชในการโคลนยนไดพฒนามาในมขนาดประมาณ 3-4 กโลเบส โดยมยนตานทานยาปฏชวนะอยเพอใชเครองหมาย (marker) ในการคดเลอกเซลลแบคทเรยทมพลาสมด และจะมบรเวณของ DNA ทสามารถตดดวยเอนไซมตดจาเพาะหลายชนดเพอสอดแทรก DNA ทตองการเขาไป 2. พลาสมดของแบคทเรยจะถกใชเปน DNA พาหะ (DNA vector) สาหรบการโคลน DNA โดยในแบคทเรย 1 เซลลอาจมพลาสมด 1 ถง 300 ยน เมอนาแบคทเรยไปเพาะเลยงเพอเพมจานวนชดของพลาสมดทสอดแทรก DNA หรอยนทตองการ

Page 12: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การตงชอ หรอเรยกเอนไซมตดจาเพาะนนไดอาศยหลกของ smith และ Nathans ระบบอกษร 3 ตว พมพตวเอน ดงน 1. ใชอกษรยอตวแรกของชอระบชนด (Genus) โดยเขยนตวใหญและตดตามดวยอกษรสองตวแรกของชอระบชนด (specific epithet) แตใหเขยนตวเลก เชน เอนไซม restriction endonuclease ทแยกไดจากแบคทเรย Escherichia coli = Eco หรอ Haemophilus influenzae = Hin

Page 13: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

2. เมอจาแนกจลนทรยไดเปนสายพนธหรอ strain กใหใสชอหรอรหสของสายพนธนนตามมา เชน EcoR มาจากแบคทเรยสายพนธ Escherichia coli RY13 (RY13 เปนรหสสายพนธของแบคทเรย) 3. ถาสายพนธนนมเอนไซมจาเพาะ แตกตางกน กใหเขยนลาดบของเอนไซมทแยกไดจากจลนทรยเปนเลขโรมน เปนลาดบสดทาย เชน

Page 14: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

แสดงเอนไซมตดจาเพาะ และจดตดจาเพาะ (ลกศรชจดทถกตดจาเพาะ) ชนดของจลนทรย ชอเอนไซม

ตดจาเพาะ จดตดจาเพาะ ชนสวนของ DNA ทไดภายหลงการตด

Escherichia coli RY13 Eco RI 5 ---GAATTC---3

3 ---CTTAAG--- 5

5 ---G AATTC---3

และ 3 ---CTTAA G--- 5

Hemophilus influenzae Rd Hind III 5 ---AAGCTT---3

3 ---TTCGAA--- 5

5 ---A AGCTT---3

และ 3 ---TTCGA A--- 5

Bacillus amyloliquefaciens H Bam HI 5 ---GGATCC---3

3 ---CCTAGG--- 5

5 ---G GATCC---3

และ 3 ---CCTAG G--- 5

Haemophilus parainfluenzae Hap I 5 ---GTTAAC---3

3 ---CAATTG--- 5

5 ---GTT AAC---3

และ 3 ---CAA TTC--- 5

Haemophilus parainfluenzae Hap II 5 ---CCGG---3

3 ---GGCC--- 5

5 ---C CGG---3

และ 3 ---GGC C--- 5

Page 15: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 16: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 17: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 18: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การโคลนยนทตองการอกวธหนงกคอ การใสยนนนสอดเขาไปตอกบ DNA ของไวรส เชน การนาเอาสวนของ DNA ทมยนของมนษยเชอมรวมกบ DNA ของไวรสทเขาทาลายแบคทเรย (bacteriophage) เกดเปนโมเลกลของ DNA สายผสม (Recombinant DNA molecule) ขน จากนนกนาไวรสดงกลาวนเขาไปในเซลลของแบคทเรย ไวรสจะเพมจานวนตวเอง (replication) ทาใหไดไวรสทมโมเลกล DNA มากกวา 1012 โมเลกลภายในเวลาเพยง 1 วน ซงเปนวธการเพมปรมาณ DNA ของมนษยทใสใหกบไวรส สาหรบไวรสหรอพลาสมดทใชในการเพมปรมาณยนหรอ DNA ทเรยกวา cloning vector

Page 19: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 20: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

PCR เปนเทคนคการเพมปรมาณชนสวนของ DNA ในหลอดทดลอง จงอาจเรยกอกชอหนงวา In vitro enzymatic gene amplification

Page 21: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

ในการเพมปรมาณ DNA โดยเทคนคการทา PCR จะตองใชองคประกอบตางๆ ดงน

คอ

1. DNA แมแบบ (template DNA) เปน DNA ทตองการโคลน

2. นวคลโอไทดทง 4 ชนด (deoxyribonucletide triphosphate [dNTPs])

3. ไพรเมอร (Oligonucleotid Primer) เปน DNA สายสนๆ ทจะจบกบ DNA ทตองการเพอเปนจดเรมตนของการสรางสาย DNA

4. เครองเทอรมอลไซเคลอร (Thermal cycler) หรอ เทอรมอไซเคลอร (Thermocycler)

เปนเครองมอตงโปรแกรมอณหภมใหปรบเปลยนตามกาหนดเวลาทตงไวตามทตองการ

5. บฟเฟอรทเหมาะสม

6. เอนไซม DNA polymerase ชนดอณหภมสงได ซงจะสกดมาจากแบคทเรยในนาพรอน

Page 22: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

เปนขนตอนการแยกสายคของ DNA แมแบบใหเปนสายเดยว โดยใชอณหภมประมาณ 90-95 oC เปนขนตอนลดอณหภมลงมาท 50-55 oC เพอใหไพรเมอรสามารถเกาะตดกบ DNA แมสายแบบเดยว ตรงบรเวณลาดบนวคลโอไทดทจบคกนไดดวยพนธะไฮโดรเจน (นวคลโอไทดคสม)

ปฏกรยาการสงเคราะห DNA จะเกดตอเนองซากนเปนวงจรลกโซ โดยในแตละรอบ (cycle) ประกอบดวย 3 ขนตอน คอ

เปนขนตอนการสรางสาย DNA สายใหมตอขยายจากไพรเมอรไปในทศทางจาก 5 ไป 3 โดยการทางานของเอนไซม DNA polymerase โดยอณหภมในขนนจะอยในชวง 70-75 oC

การสงเคราะหจะดาเนนตามลาดบ 3 ขนตอนซาๆ กน เปนจานวน 20-30 รอบ ทาใหได DNA สายใหมเพมเปนจานวนมาก (amplified product) หรอ ทเรยกวา Amplicon

Page 23: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การสรางสาย DNA โดยพอลเมอเรสเชนรเอกชน (PCR)

Page 24: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

1. เทคนคนไมสามารถทาใหยนทโคลนขนมาแสดงออกโดยการสรางโปรตนทตองการ ซงตางจากการโคลนโดยใช พลาสมดของแบคทเรย หรอใชไวรสทยนสามารถแสดงออกโดยการสรางโปรตนออกมาได

2. การเพมจานวนชดของ DNA โดยวธ PCR อาจมขอผดพลาดเกดขน เนองจากไมมกระบวนการตรวจสอบความถกตองของลาดบนวคลโอไทดของ DNA ทสรางขนเหมอนกบระบบในสงมชวตทมการตรวจสอบอยางละเอยดถกตอง

Page 25: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

1. ใชเพมปรมาณยนทมปรมาณนอยๆ ใหมปรมาณมากพอเปนจดเรมตนกอน แลวจงนายนนนไปโคลนตอ โดยอาศยพลาสมด ของแบคทเรย เชน การเพมปรมาณ DNA จากซากแมมมอธ (mammoth) ทสญพนธไปเมอสหมนปกอน ทาใหสามารถศกษาววฒนาการในสงมชวตทสญพนธไปแลว

2. สามารถใชตรวจสอบ DNA ปรมาณนอยในชนสวนเซลล คราบเลอด นาอสจของอาชญากรรมตางๆ ซงเปนประโยชน ในดานนตเวชหรอนตวทยาศาสตรในกระบวนการยตธรรม

3. ใชตรวจสอบ DNA ของเซลลจากเอมบรโอในครรภในแง ความผดปกตทางพนธกรรม รวมทงตรวจการตดเชอไวรสเอดส (HIV)

Page 26: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การศกษาจโนม (genome)

จโนม (genome) สารพนธกรรมหรอ กรดนวคลอกทงหมดภายในเซลลของสงมชวต ซงประกอบดวยสารพนธกรรมในนวเคลยส (จโนมในนวเคลยส) ในไมโทคอนเดรยและในคลอโรพลาสต เชน ขนาดของจโนมมนษยเทากบ 3,200 ลานคเบส (3,200 เมกะเบส) ประกอบขนดวยยนประมาณ 80,000 ยน หรอแบคทเรยน Eschrichia coli มขนาดของจโนม 4 กโลเบส ประกอบดวยยนประมาณ 4,000 ยน เปนตน

หมายถง

Page 27: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

จโนมของสงมชวตชนดเดยวกนมความแตกตางกน ซงสามารถตรวจสอบความแตกตางนนได โดยใชการตด DNA ดวยเอนไซมตดจาเพาะ แลวนาชนสวน DNA ไปแยกขนาดโดยวธการ เจลอเลกโตรโฟรซส จะไดรปแบบของแถบ DNA (DNA band) ทแตกตางกน รปแบบของแถบ DNA จะสามารถเชอมโยงถงจโนมของสงมชวต รวมทงเชอมโยงถงฟโนไทปบางลกษณะของสงมชวตนนๆ ได เราเรยกความแตกตางของรปของแถบ DNA ทเกดจากการตดของเอนไซมตดจาเพาะวา Restriction Fragment Length Polymorphism = RFLP ซงสามารถใชเปนเครองหมายทางพนธกรรม (genetic marker) ได

Page 28: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 29: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

Biotechnology การประยกตใชความร เกยวกบสงมชวตเพอประโยชน ดานปรมาณ, คณภาพทตองการโดยอาศยกระบวนการพนธวศวกรรม (genetic engineering) และเทคนคอนๆ

Page 30: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 31: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การสวนทาง Natural

Selection

การพฒนาเทคโนโลย

การแพทยและสาธารณสข

เทคโนโลยการพนธ

เทคโนโลยการเกษตร

Sperm bank

Egg bank

Cloning

Page 32: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 33: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 34: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

1. พนธวศวเปนพนฐานนาไปสการศกษาเพอความเขาใจทางพนธศาสตรของสงมชวต

ในปจจบนการใชประโยชนจากเทคโนโลยชวภาพและเทคโนโลยทาง DNA สามารถประมวลไดดงน

เชน การจดเรยงตวของเบสเปนชวงๆ

นายนของโพรคารโอตและยคารโอตตดและเชอมตอกน ทาใหสามารถศกษาพฤตกรรมของยนยคารโอต (eukaryotic genes) ในเซลลโพรคารโอตได

ความเขาใจในประเดนทแตกตางระหวางยนของโพรคารโอตและยคารโอต ความเขาใจกลไกการควบคมการทาหนาทของยน

Page 35: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

2.1 การวนจฉยโรคทมการตดเชอ

2. การประยกตใชในเชงการแพทยและเภสชกรรม ตวอยางเชน

2.2 การตรวจวนจฉยโรคทางพนธกรรม ใชในการตรวจสอบวเคราะหการตดเชอ HIV เปนตน

การใชเทคนค PCR และตรวจสอบดวยเทคนคเจลอเลกโทรโฟรซส เพอตรวจสอบวาจโนมของไวรสในสงมชวตนนหรอไม

กอนทจะมการแสดงอาการ ตรวจหาการเปนพาหะของโรค

Page 36: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

2.3 การบาบดยน (gene therapy)

เปนเทคนคในการถายยนทปกตเขาไปยงเซลลหรอเนอเยอทผดปกต เนองจากความบกพรองของยน เพอใหยนทเปนปกตนนทาหนาทแทน บาบดอาการบกพรองไดโดยใชไวรสเปนพาหะในการนายนเขาไป ไวรสทใชในการถายยนจะตองมการตดยนทเปนอนตรายตอคนทงไป และใสยนปกตทตองการเขาไปแทนทเพอใหไวรสมยนทตองการแทรกอย ไวรสมความสามารถในการแทรกจโนมของตวไวรสเองเขาสโครโมโซมของคนไดโดยไมสามารถจาลองตวเองเพอเพมจานวน เนองจากยนททาหนาทในการจาลองตวเองของไวรสไดถกตดทงไปแลว

Page 37: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

ตวอยางของโรคทมการรกษาดวยยนบาบดโรค เชน • โรค Severe combined immunodeficiency (SCID) เปนโรคทางพนธกรรม ผเปนโรคนไมสามารถสรางภมคมกนไดและมก

เสยชวตจากการตดเชอเพยงเลกนอย

ขอจากดในการบาบดดวยยนทตองคานงถง คอ 1. การควบคมกจกรรมของยนใหมการผลตผลตภณฑทตองการอยางเหมาะสม 2. การปองกนไมใหการแทรกตวของยนเขาไปในจโนมของคน ไมไปทาใหเกดมวเทชนในยนปกตยนอน

3. ความสามารถในการบรรจยนในไวรสจากดเฉพาะยนขนาดเลก

Page 38: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 39: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 40: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

• การผลตฮอรโมนอนซลน โกรทฮอรโมน โดยใชการโคลนยนดวยพลาสมดทม DNA สายผสม

• การผลตยายบยงไวรส HIV โดยการสรางโมเลกลโปรตนเลยนแบบตวรบท HIV ใชในการเขาสเซลลทาให HIV ไปเกาะกบโมเลกลเหลานในกระแสเลอดแทนทจะจบกบตวรบทเยอหมเซลลเมดเลอดขาว จงสามารถทาลายไวรสได

• การผลตโปรตนของผวไวรสทเปนแอนตเจนกระตนใหรางกายสรางภมคมกน แทนการใชไวรสฉดเขาสรางกายเพอกระตนระบบภมคมกน

2.4 การสรางผลตภณฑทางเภสชกรรม

• เพาะเลยงแบคทเรยทมยนนนใหสงเคราะหโปรตนทตองการ

Page 41: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

ตาราง แสดงผลตภณฑโปรตนบางชนดทไดจากเทคโนโลย DNA สายผสม

(revombinant DNA technology)

Some protein products of recombinant DNA technology

ผลตภณฑ (product) ผลตจาก (made in) การใชประโยชน (use) Human insulin E. coli Treatment for disease (รกษาเบาหวาน)

Human growth hormone (GH) E. coli Treatment for growth defects (เพมความสง)

Epidermal growth factor (EGF) E. coli Treatment for burns, ulcers (รกษาแผลไฟลวก)

Tumor necrosis factor E. coli Killing of certain tumor cells (ฆาเซลลเนองอก) Interleukin-2 (IL-2) E. coli Possible treatment for cancer (รกษามะเรง) Prourokinase E. coli Treatment for heart attacks (บาบดโรคหวใจ)

Porcine growth hormone (PGH) E. coli Improving weight gain in hogs (เพมนาหนกสกร)

Bovine growth hormone (BGH) E. coli Improving weight gain in cattle (เพมนาหนกวว)

Page 42: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

ตารางแสดงผลตภณฑโปรตนบางชนดทไดจากเทคโนโลย DNA สายผสม (revombinant DNA technology)

Some protein products of recombinant DNA technology

ผลตภณฑ (product) ผลตจาก (made in) การใชประโยชน (use)

cellulase E. coli Breaking down cellulose for animal feeds

(ยอยเซลลโลสเปนอาหารสตว)

snomax Pseudomonas bacterium Making snow for ski resort (ผลตหมะเพอเลนสก) Interferon (alpha and gamma) S. cerevisiae; E. coli Possible treatment for cancer and virus infections (บาบดมะเรงท

เกดจากไวรส)

Hepatitis B vaccine S. cerevisiae Prevention of hepatitis-virus infection

(ปองกนการตดเชอไวรสตบอกเสบ)

Colony-stimulating factor (CSF) Mammalian cells Treatment for leukemia; boosts resistance to AIDS and other

infections disease (บาบดมะเรงเมดเลอดขาว และตานเอดส รวมทงโรคตดเชออนๆ)

Erythropoietin (EPO) Mammalian cells Treatment for anemia (บาบดโลหตจาง)

Factor VIII Mammalian cells Treatment for hemophilla (บาบดโลหตไหลไมหยด)

Tissue plasminogen activator (t-PA) Mammalian cells Treatment for heart attacks (บาบดโรคหวใจ)

Page 43: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 44: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

3. การประยกตใชในเชงนตวทยาศาสตร DNA ในคนๆ เดยวกน ไมวาจะมาจากเซลลสวนใดของรางกายกตามมาจะมรปแบบทเหมอนกน และแตกตางจากคนอน DNA ในแตละคนถายทอดมาจากพอและแมอยางละครงและเปลยนแปลงไมได จงสามารถนา DNA มาพสจนตวบคคลไดโดยใชเทคนค RFLP maker ตรวจสอบรปแบบ DNA รวมกบการทาเจลอเลกโทรโฟลซส เพอแยกสลาย DNA ตามขนาดตางๆ ทตดดวยเอนไซมตดจาเพาะหลายชนด เรยกวาลายพมพ DNA (DNA fingerprint) เพราะลายพมพ DNA ของแตละคนจะแตกตางกน ยกเวนกรณฝาแฝดแท

Page 45: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

• ปจจบนไดมการใชลายพมพ DNA ตรวจพสจนความเกยวพนคดตางๆ เชน การฆาตกรรม การทารายรางกาย • พสจนความสมพนธทางสายเลอด พสจนชาตพนธและการใหสทธในการอาศยบนแผนดนไทย การสบหาบคคลทเสยชวต เชน กรณเครองบนตก เหตการณสนาม เปนตน ประเทศไทยมสถาบนทตรวจลายพมพ DNA ไดเชน สถาบนนตเวช กองพสจนหลกฐาน สงกดสานกงานตารวจแหงชาต โรงพยาบาลตางๆ สถาบนนตวทยาศาสตร กระทรวงยตธรรม เปนตน

Page 46: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 47: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 48: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

4. การประยกตใชในเชงการเกษตร

จากการใชเทคโนโลย DNA ทาใหทราบวายนใดในสตว ทาใหสตวนนใหลกษณะตามตองการได เชน ใหนานมมากขน เปนตน

Page 49: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 50: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การสรางสงมชวตดดแปรพนธกรรม (genetically modified organism: GMOs หรอ genetically engineered organism: GEOs) และทาขนทงในสตวและพช เชน

4.1 การสรางฟารมสตวทเสมอนโรงงานผลตยาดานการแพทย

เชน ผลตโปรตนยบยงเอนไซมททาลายเซลลปอดในผปวยโรคซสตก โบรซส (cystic fibrosis) และโรคระบบทางเดนหายใจเรอรงชนดอนๆ

4.2 การสรางสตวดดแปลงพนธกรรม (transgenic animals) เรมจากการแยกเซลลไขออกจากเพศเมย ฉดยนทตองการใสนวเคลยสของเซลลไข (microinjection) จะมเซลลไขบางเซลลยอมรบยนจากนนนาไปผสมพนธในหลอดทดลอง (in vitro fertilization) ถายฝากเขาตวแมผรบเพอเจรญเปนลกตวใหมทมยนทตองการอย โดยไมจาเปนตองมาจากสปชสเดยวกน

Page 51: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 52: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

4.3 การสรางพชดดแปลงพนธกรรม (transgenic plant)

เปนการถายยนโดยใช Agrobacterium ซงเปนแบคทเรยแกรมลบ ตวอยางทนยมใชเชน Agrobacterium tumefaciens หรอใช gene gun ยงยนทเกาะอยบนผวอนภาคของทองใหเขาไปในเซลลพช จากนนยนจะแทรกตวรวมอยกบโครโมโซมของพชจนกลายเปนสวนหนงของโครโมโซมพช

Page 53: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การสรางพชดดแปรพนธกรรมสามารถทาไดงายกวาในสตว เนองจากมการศกษาเทคโนโลยการเพาะเลยงเนอเยอในหลอดทดลองซงสามารถสรางตนพชขนใหมจากชนสวนตางๆ ของพชได ตวอยางการสรางพชดดแปลงพนธกรรม เชน 1. พชตานทานแมลง เปนการถายยนบททสรางพษจากแบคทเรย

Bacillus thuringensis ซงสามารถทาลายตวออนของแมลงบางประเภทอยางเฉพาะเจาะจง โดยไมเปนอนตรายตอสงมชวตอน พชทมการถายยนสรางสารพษเขาไปในเซลล

ไดแก ฝาย ขาวโพด มนฝรง ยาสบ มะเขอเทศ เปนตน ขอดคอสามารถลดการใชสารเคมกาจดแมลงลงได

Page 54: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

2. พชตานทานโรค เชน การดดแปรพนธกรรมมะละกอใหตานทานโรคใบดางจดวงแหวนซงเกดจากไวรส โดยนายนสรางโปรตนเปลอกไวรส (coat protein gene) ถายฝากเขาไปในเซลลมะละกอ เพอชกนาใหมะละกอสรางโปรตนดงกลาว จงสามารถตานทานเชอไวรสได

3. พชทเพมคณคาทางอาหาร เชน นายนจากตนแดฟโฟดล (Daffodils) และจากแบคทเรย Erwinia breteria ถายฝากใหขาว ทาใหขาวสามารถสรางวตามนเอในเมลดได เรยกวา ขาวสทอง (golden rice) เพอชวยลดภาวะการขาดวตามนในประเทศทขาดแคลนอาหาร

Page 55: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

4. การยดอายของผลผลตใหยาวนานขน โดยนายนทยบยงการสงเคราะหเอทลนใสเขาไปในผลไมทาใหสกชาลง สามารถเกบรกษาไดนานขน เชน มะเขอเทศ เปนตน นอกจากนยงไดพยายามดดแปรพนธกรรมใหทนทานความแหงแลง ทนดนเคม และทนนาทวมอกดวย นอกจากนจากงานวจยของ รศ. ดร. พฒนา (ศรฟา) ฮนเนอร ไดนายนทสรางสนาเงนของดอกอญชนถายใหกบกลวยไมเพอสรางกลวยไมดอกสนาเงน

Page 56: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

การปรบปรงพนธโดยอาศยการผสมพนธระดบโมเลกลหรอวธโมเลกลลารบรดดง (molecular breeding)

คอ การตรวจหายนจากเครองหมายทางพนธกรรม แลวคดเลอกสารพนธทมยนนนอย จากนนผสมพนธเพอใหไดลกษณะตามทตองการ โดยการตรวจสอบและคดเลอกเฉพาะรนตอไปทมเครองหมายทางพนธกรรมทลงคเกจยนทตองการ ทาใหการปรบปรงพนธเรวขน จงมโอกาสทจะไดพชหรอสตวพนธใหมทมลกษณะตางๆ รวมกนในระยะเวลาทเรวกวาเดม

Page 57: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 58: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 59: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 60: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั
Page 61: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

• อาศยหลกการยบยงการทางานของโปรตนหรอทาใหโปรตนทางานผดปกต

• เมอศกษายอนกลบไปวาการเปลยนแปลงเกดขนทโปรตนใดยนใด จะทาใหทราบหนาทของยนนนได นนคอการชกนาทาใหเกดมวเทชน ทเรยกวา การสรางมวแทนท (mutant)

ใหมการเปลยนแปลงของบางฟโนไทป แลวศกษาวาการเปลยนแปลงนเกดขนทยนใด

• ตวอยางเชน รศ. ดร. อภชาต วรรณะวจตร และคณะ จากมหาวทยาลยเกษตรศาสตร

ศกษาพบวายนควบคมความหอมของขาวเหนยวเปนยนดอยอยบนโครโมโซมแทงท 8

และสามารถโคลนยน Os2AP ซงควบคมลกษณะความหอมของขาวไดสาเรจ

พบวาโปรตนทสรางยน Os2AP จะยบยงการสรางสารใหความหอม ดงนนถายบยงการแสดงออกของยน Os2AP จะไดขาวทมความหอม โดยสารใหความหอมในขาวมาจากสารหลกคอ 2-acetyl-1-pyroline ซงมกลนคลายขาวโพดคว

5. การใชพนธศาสตรเพอศกษาคนควายนและหนาทของยน

Page 62: 1. พนธัุวิศวกรรม genetic engineering · 2017-04-27 · 1. พนธัุวิศวกรรม (genetic engineering) กระบวนการตดตั่อยีนจากการสงเคราะหั

• เชน การสรายสายพนธพชทชวยบาบดสงแวดลอม (phytoremediation)

• หรอสายพนธจลนทรยทสามารถยอยสลายสารปนเปอนในดน นา ของเสยจากโรงงานอตสาหกรรม หรอเหมองแรกอนปลองลงสธรรมชาต แตการใชสงมชวตดดแปรพนธกรรมเหลานตองอยภายใตการควบคมและสอดคลองกบกฏหมายการควบคมการใช GMOs ในแตละประเทศ

6. การประยกตใชเพอสงแวดลอม