1962 4. Analyse yon biologischem Material 279

elektrophoretische Auftrennung wird bei 80 V (120 -4- 10 Milliamp.) bei nicht mehr a]s 22 ~ C vorgenommen. ~ach der Trelmung werden die Fraktionen auf einfache Weise entnommen, indem man sie dureh zwei Flat ten abgrenzt, die Pla%en mit der linken Hand fes~ aufdrtiekt und mit einer vertikal gehaltenen Pipette in mSg- liehst nut zwei Teilen das Agaxgel aus der ganzen Zone aufsaug~. Die so erhaltenen ~raktionen werden bei -- 20 ~ C fiber ~qaeht eingefroren, wieder aufgetaut und dureh Whatman-Papier Nr. 1 veto Agar filtriert. Verff. haben eine Apparatur fiir 1 ml Probe und in grSl3eren Dimensionen eine ffir maximal 20 ml geb~ut.

Clin. chim. Aeta (Amsterdam) 6, 743--746 (1961). Baker Med. Res. Inst., Alfred Hosp., Melbourne (Australien). MARGOT ZIM~[ER~VLA2ff:bl

Die densitometrisehe Auswertung yon Serumproteiniraktionen, die mikro. elektrophoretisch auf Celluloseacetatmembranen getrennt werden, beschreiben B. W. GR~AV-~r, W. J . F~ss]~L und C. F. ~ L I : 1Vfan tr~gt die unverdfinnten Serumproben auf 1 cm breite Celluloseacetat-Membranen auf und elektrophoresiert 120 rain bei Zimmer~emperatur in einem Veron~l-Puffer von pK 8,6 mit 200 V, wie friiher beschrieben 3. Nach dem Troeknen mach~ man die Proteine mit einer 0,2 0/oigen LSsung von Ponceau S in 3~ Trichloressigs~urelSsung siohtbar, Lipoproteine und Glykoproteine fi~rbt man nach der Methode yon g. K o ~ 3 an. Man wetter die ]~lektropherogramme dann mit der Analytrol-Apparatur der Fa. Spinco unter Ver- wendung des Mikroanalyzer-Zusatzger~tes aus.

1 Analyt. Chemistry 88, 860--861 (1961) Dep. of Pediatrics, Univ. of Calif. ivied. Center, San Francisco, Calif. (USA). - - ~ GnV~BAV~, B. W., P. L. Kink u. W . A . ATc~L~Y: Analyt. Chemistry. 82, 136i (1960); vgl. diese Z. 183, 290 (1961). - - s London, Queen Mary's Hosp., Private Mitt. UnSVLA B A V ~ A ~

Die Best|mmung yon Lipoproteiden mittels Papierelektrophorese in vorher mit Sudanschwarz gef~irbtem Serum ~ beschreiben B. N. U~AxOV and S . D . POLO~E~C~V 2. -- Aus]i~hrung. 5 ml 96~ Alkohol werden mit 0,25 g Sudan- sehwarz B versetzt und auf 20--30 rain in Wasser yon maximal 80 ~ C gestellt. Naeh Abkfihlung werden 5 ml Ather hinzugeffigt. Die LSsung ist diehb versehlossen aufzubewahren. -- 1 ml nieht h~imolytisches(!) Serum wird dureh 0,10 ml obiger SudanlSsung blau gef~rbt, 30 min auf 37 ~ C gehalten und 30 rain mit 5000 U/rain zentrifugier$. 0,05 ml des Ubers~andes werden auf einen ehromatographischen Papiers~reifen (Marke ,,M") aufgetragen und einer 12stfindigen Elektrophorese mit 0,06 m-Medinall5sung (12,36 g/1 Wasser) bei 220 V nnd 0,2 Mflliamp. auf i em Breite unterzogen. Die Streifen werden im Troekensehrank bei < 80~ fixiert. Gew5hnlich treten nur zwei dunkelblaue Flecken auf. Eine dritte Fraktion (haupt- s~chlich hochmolekulares Neutr~Ifett) wnrde nur selten gefunden. Die Sehatzung der Frak~ionen erfolg~ im Densitometer ohne Behandlung der Elektropherogramme mi~ Vaselin. Auch eine Elu~ion wurde unterlassen.

MoDoI~ALD, H. J. , n. E. W. B ~ s : Biochim. biophysiea Aeta (Amster- dam) 17, 290 (1955). -- ~ Lab. Delo 7, ~r . 7, 12--15 (1961) [l~ussiseh]. 2. Lehrst. fiir Fakult~tstherapie der militarmediz. Akad. ,,S. M. Kirov" (UdSSR).

P. HAAS

Aueh D. B. ZII/SnR~rAN und A. A. MOZBn~KO 1 fgrben die Lipoproteide vor der Elek$rophorese, jedoeh wird der Farbs~off nach P. SOr.I~As, 1~. B]~TT~ und E. F. P. DI LEo ~ in Diaeetin (CHsOCOCHa)~CHOH gel5st, t t ierzu wird Sudan ~V zun~ehst aeetyliert, wit im Original beschrieben. -- Untersuchung au] Igpoproteide. 1 ml Serum wird mit 0,1 ml ges~t . , fil~rier~er Sudan IV-LSsung in Diaeetin ver- setzt; man schfittel$ kr~f$ig, bel~13t 1 Std bei Zimmertemperatur mid zentrifugiert

19"

280 Bericht: Spezielle analytische Methoden Bd. 190

5 rain (3000 U/min). ~ach Befeuehten mit Veronal-]~ediaalpuffer (p]~ 8,6) werden Streffen yon chromatograplfischem Papier , , ~ " (4)/40 cm) mit 0,1 ml gefiirbtem Serum mittels eines Plexiglas-Pl~ttchens (2 • 3 era) mit Handgriff betupft. Die horizontale Elektrophorese dauert in dem Puffer mit der Ionenst~rke 0,05 bei 400 V 5 Std. Man erh~lt auf weil]em Hintergrund 3 deutliehe rotorange l~ecken yon ~- , fl- und ?-Lipiden. Die Streifen werden auf 10 rain in einen Trockensehrank yon 80 ~ C gebracht. Der Gehalt der Fraktionen wird a) im FEK-~LPhotoelektro- colorimeter oder b) unmittelbar densitometrisch mit Hilfe eines entspreehenden Lichtfilters bestimmt. A4 a ) :De r Streifen wird in seine 3 Teile zerschnitten, die F~rbung wird mit 3 ml einer 20~ LSsung yon Eisessig in 96~ Alkohol in einem lest versehlossenen Probierglas wenigstnes 30 min extrahiert. - - Die Ab- scheidung der dritten Fraktion erfolgt auch bei Elektrophorese iu Agar. - - Bei der F~rbung des Serums mit 0,2 start 0,1 ml Acetyl-Sudan IV in Diacetin t r i t t regelm~l~ig zwischen den fl- und y-Lipiden eine noch nieht aufgekl~rte vierte Fraktion auf.

L~b. Delo 7, Nr. 7, 16--18 (1961) [Russisch]. Abt. ffir Minische H~matologie d. Ukrain. Wiss. Forschungsinst. f. klin. Medizin (UdSSR). -- ~ Ciin. chim. Aeta (Amsterdam) 2, 586 (1957). ~t. HAAS

Methoden zur Best|mmung yon Metaboliten des Kohlenhydratstoffwechsels im I terzmuskel teilen G. MIO~AL und W. LAWIPREC~T ~ mit. Verff. ffihren ver- gleichende kritisehe Untersuchungen verschiedener Analysenverfahren zur Ermi~t- lung der in Frage stehenden Stoffwechselprodukte i~ gleichen Organproben dutch. Auf enzymatiseh-photometrischer Grundlage ffihren Verff. die Bestimmung folgen- der ~etabol i te aus: Pyruvat, Dihydroxyacetonphosphat, ~ructose-l,6-diphosphat, a-Ketoglutarat, Lactat, Glycerin-l-phosphat, Adenosintriphosphat, Hexosemonophos- phate, Adenosindiphosphat und Adenosinmonophosphat. Die exakten Auforderungen entsprechenden Einzelheiten der Verfahrea sind angegeben. Die bislang in der Literatur aufgefiihrten l~ethoden zur Bestimmung yon Phosphokreatin liefern unrichtige Werte. Stimmende Werte erh~lt man mit der Methode von W. L ~ - PR~CnT und P. STEr~ 2, die mit Kreatinkinase arbeitet. Von den Pyridinnucleotiden bestimmen Verff. DPN + und T P ~ + enzymatiseh-photometriseh, dagegen DPIqH -~ H + und T P ~ -~ I-I+ fluorometriseh. Methodische Einzelheiten sind angegeben. Als Aufschlui~verfahren gibt nur die Frierstopmethode yon A. W O L L ~ B ~ m ~ , E.-G. K~AvSE und B. E. W A ~ . ~ 3 zuverl~ssige Werte, w~hrencl Perchlors~ure- enteiweil~ung uacl besonders tti tzedenaturierung nicht genfigen, da sie zu viel Zeit beanspruehen.

1 ttoppe-Seyler 's Z. physiol. Chem. 82~, 170--187 (1961). Organ.chem. Inst., Techn. Hoehschule Mihlchen. - - 2 BERG~]~Y~: ~[ethoden zur enzymatischen Ana- lyse, u Chemie, Wein_heim, 1962. - - 3 Naturwissenschaften 45, 294 (1958).

E. ~ i ~ L ~ , Wiirzburg

2-Desoxy-D-glueese (DOG) bestimmen ~ . BLECH~R und B. DVORKIN 1 fluorimetrisch nach Reaktion mit 3,5-Diaminobenzoes~ure (DABA) zu 2-(l-Gly- cerin)-5-carboxy-7-amiaochinolin. Die Bestimmung ist geeignet fiir den Bereich yon 2,8 bis 125 �9 10 -9 Mol/ml und wird dureh die Gegenwart yon Glucose ~md Des- oxyribose nicht gestSrt. Phosphatpuffer p~ 7,4 (Krebs-Ringer), 0,154 m KC1 sowie 5"/0ige Trichloressigsi~ure (maximal 0,5 ml) zeigten keinen Effekt auf die Fluores- cenz. Im Bereich yon 0,3 bis 2,6 �9 10 -~ Mol/ml kann die Konzentration yon DoG auch colorimetrisch bei 420 nm unter Beriicksiehtigung yon Glucose und Desoxy- ribose gemessen werden. - - Aus/i~hrung. LOstmgen mit 22 bis 1000 �9 10 -~ Mol DoG werden mi t Wasser auf 3 ml erg~nzt. Dazu gibt man 3 ml 0,01 m DABA-2HC1-