226 Bericht: Spezielle analytisehe Methoden Bd. 176

Uber die Trennung einiger Gallensiiuren dureh Glaspapierchromatographie berichten J. G. ~-~AlVIILTON und J . W . DIECKE~T 1. Mit der Glaspapierchromato- graphie 2-4 lassen sich auch Gallensi~ure und deren Ketooxydat ionsprodukte guy t rennen und nachweisen, es geniigen 0,1 --5/~g. Die Rr-Werte in 3 bzw. 4 Laufmit tel- systemen ~o]gender Verbindungen sind in Tabel]en aufgefiihrt: 3,12.Diketocholan- s~iure; Lithocholdiure; Deshydrochols~iure; 3~-Hydroxy-J2-ketocholansSure; 3g- H ydroxy-7,12-Diketocholans~iure ; Desoxycholsiiure ; 3 c~, 6 fi, 7 fl- Trihydroxycholan- s5ure; 3~,12~-Dihydroxy.7-ketocholansiiure; 3c~,6fl,7c~-TrihydroxycholansSure; 3~,6~,Tfl-Trihydroxycholansgure; Chols~iure. Verff. geben ein modifiziertes Veffahren zur Herstellung yon Alumininmoxyd-Glaspapier an.

Arch. Biochem. Biophysics 82, 203--211 (1959). Tu]ane Univ. School Med., New Or]eans, Louisiana (USA). -- e DI~CKEI~T, J. W., u. N. J . Mo~ms: J. agrie. Food. Chem. 6, 930 (1958). - - ~ DI~C~:ERT, J. W., N. J. 3/Io~IS u. A. F. M~SOX: Arch. Biochem. Biophysics 82, 220 (1959). - - ~ DIECJ~T, J. W., W. B. C~xv.Y, l~. L. O~Y u. N. J. MORriS: Ana]y~. Chemistry 30, 1442 (1958).

E. Mti~SER, Wfirzburg

EiIle Methode zur Bestimmung yon Cholsiiure und Chenodesoxycholsiiure nebeneinander im Menschenplasma geben R. t I . P. I~ ID und G. S. BOYD 1 an. Die Trennung der beiden Gallens~uren erfolgt chromatographisch nach J . T . )IATSCttINEI~, T. A. MAtIOWALD, W. ]-I. ELLIOTT, E. A. DOISY jr., S. L. HsIA und E. A. DolsY e. Zur spektrophotometr ischen Auswer~ung benutzen Verff. eine modi- fizierte Pettenkofer-Probe. - - Auffiihrung. 2 , 0 m l Plasma Gelbsuchtlu 'anker extrahier t man 2 real mi t 25 ml_~thanol und bringt den Athanolex t rak t zur Trockne. Den in 25 ml 0,1 m NaHC0~-Na2CO3-PufferlSsung ge]6sten Ri ickstand extrahiert~ man mit der gleichen Menge Leiehtpetrolcum (60--80 ~ ), die Wasserphase gibt mart in einen Nickeltiegel, setzt 25 ml 5 n Natrmflauge zu, bedeckt und erhitzt 3 Std im Autok]aven bei 110 ~ C. Naeh dem Abktihlen macht man mi t konz. Salzs~ure gegert Lackmus sauer, extrahiert 3 real mi t j e 70 ml Chloroform-J~thanol (9:1) und b r ing t die Ex t rak te im Vakuum zur Trockne. Den t~iickstand n immt man in ~ thano l auf, verdampft zur Trockne, 15st in 0,75 ml 70~ Essigsaure and giel3t in 0,75 g Celite, das mit Leichtpetroleum (60--80 ~ verrf ihrt ist, und gibt das Ganze auf sine S~ule aus 4 g Celite. Die Trennung erfo]gt nach 2. Die entsprechenden Frak t ionen verdampf t man in etwa 8 Std bei 70 ~ C zur Trockne. Man setzt 5,0 m170~ Sehwe- fels~ure und 1,0 m] 0,25~ FurfuraldehydlSsung zu und mifit naeh 70 rain die Ext ink t ion bei 510 nm. Die Werte entlf immt man Standardkurven. 100/~g Nat r ium- taurocholat finder man zu 75 -- 40/0 wieder.

1 Biochemie. J. 73, 9 1 ) (1959). Univ. Edinburgh (Sehottland). -- 2 j . bioL Chemistry 225, 771 (1957). E. MiiLLER, Wiirzburg

Die papierchromatographische Bes t immung yon Gallens~uren im Gallen- und Duodenum- lnha l t f i ihrt J . SJ6u 1 durch, indem er die OriginMmethode 2 s(~ modifiziert, dab sie sich zm" Untersuchung biologischen Materials eignet. - - Arbeits- weise. Das Papier (Wha tman 3MM) muB vorbehandel~ werden. Man w~scht es absteigend nacheinander mi t 400 ml 96~ Alkohol, 400 ml 0,5 n Salzsgure, 400 ml Wasser, 400 ml Alkohol, 150 ml Isoamylacetat und 400 ml Alkohol. Diese Prozedur n immt 3 - -4 Tage in Anspruch. Unmi t te lbar vor dem Gebraueh wird der Bogen bei 100 ~ C getrocknet, sonst im Tank belassen und jeden Tag mi t 150 ml J~thanol angefeuehtet. Aus den 90 • mm gro~en Bogen schneider man 3 15 • 355 mm groBe Streifen aus, wodurch 4 Bahnen entstehen, die an beiden Enden durch intaktes Papier verbunden sind und auf denen man gleichzeitig chroma~o- graphieren kann. ])as ha t den Vorteil, dab man bei gleichen Testgemischen auf

1960 4. Analyse yon bioiogisehem Material 227

einem Streifen entwickeln und den Sitz der gesuehten Substanz ermitteln und aus dem anderen eluieren kann. Man ehromatogralohiert mit versehiedenen Systemen bei 23 =h 1 ~ C und zwar: 1. Mobile Phage 70% Athylenehlorid-Heptan, station~re Phase 70~ Essigs~ure-Wasser. Das Papier soll vor Versuehsbeginn 8--16 Std in der LSsungsmittelatmosph&re h~ngen. Man chromatogralotfiert 6--8 Std au~- steigend. Trermung yon glylcolcollgebundeneu Gallens#iuren in Abwesenheit yon Gly]cochenodesoxy- und Gly]codesoxy-Cholsiiure. -- 2. 500/o J~thylenehlorid-Heptan, stationi~r wie 1. Einstellung des Paloiers wie 1.18 Std absteigende Chromatographie. Trennung der Glykokoll-gebundenen Galtens~uren, wenn Chenodesoxy. und 1)es- oxychols#iure vorhanden sind. -- 3. 85~ Isoamylace~at-Heptan; 700/0 Ameisens~ure- Wasser. Aquilibrierung des Papiers 1/2 Std in der Atmosphere der mobilen Phage. 20 Std aufsteigende Chromatographie. Trennung der Taurocholsiiure yon den tauringebundenen Dihydrocholaus~uren, wenn diese nieht getrennt werden miissen. -- 4. 800/0 Isoamylacetat-Hept~n. Station~re Phase wie 1. Einstellung des Papiers wie 3. 40 Std absteigend ehromatographiert. Trennung der tauringebundenen Dihydroxycholans#iuren. -- 5. 400/0 J~thylenglykol-Heiotan. Station&re Phase wie 1. Einste[lung des Papiers wie 1. 6 Std aufsteigend chromatographiert. Trennung freier Gallensiiuren, wenn keine Chenodesoxy- und DesoxychoIJiuren vorhanden sind. -- 6. 20~ Athylenehlorid-I-Ieptan. Station&re Phase wie 1. Einstellung des Papiers wie 5. 18 Std absteigende Chromatographie. Tremmng der /reien Gallen- s~iuren in Anwesenheit yon Chenodesoxy. und Desoxycholsiiuren -- Der Nachweis auf den bei Zimmertemper~tur getroekneten C]~'omatogrammen erfolgt dutch Bespriihen mit 15~ alkoholischer Phosphormolybd&ns~ure-LSsnng nnd Erhitzen auf etwa 80 ~ C. ~Ian elniert mit spektrographisch reinem J~thanol in der friiher beschriebenen 2 Apparatur, dampft bei 100 ~ C zur Troekne ein nnd nimmt die Proben in I ml 65~ Sehwelelsgure anf. Man schfittelt bei verschiedener Temperatur, kfihlt ab und mi~t die Extinktion in einem Spektrophotometer und zwar: Taurocholsgure, 60 rain in Sehwefels~ure bei 20 ~ C, Messung bei 320 nnd 389nm. Taurochenodesoxycho]s&ure 15rain, 60~ 305 und 389nm. Tanro- desoxyehols&ure 10rain, 60 o C, 308 und 389 nm. Tauroehenodesoxychols~ure + Taurodesoxychols&ure, 15 rain, 50 ~ C, 305 und 389 rim. Glykocholsgure 60 rain, 20 ~ C, 320 und 389 nm. Glykoehenodesoxycholsi~ure 15 rain, 60 ~ C, 305 nnd 389nm. Glykodesoxyehols&ure 10 mill, 60 ~ C, 308 und 389 nm. Cholsi~m'e 60 rain, 20 ~ C, 320 und 389 nm. Chenodesoxycholsgure 60 rain, 60 ~ C, 380 und 310 nm. Desoxy- cholsgure 60 rain, 60 ~ C, 385 und 310 nm.

Clin. ehim. Acta (Amsterdam) 4, 652--664~ (1959). Univ. Lnnd (Sehweden). -- SJbVALL, J. : Ark. Kemi 8, 317 (1955). U~SVLA BAV~A~

(~ber die Trennung yon Thyroidhormonen mid verwandten Verbindungen alas Serum und Geweben mit Anionenaustauscher berichten V.A. G~LTO~ und .[~. PITT-I~r~RS 1. Es handelt sich um eine Modifikation bekannter Verfahren und die Ver~nderung, die Verff. einffihren, besteht hanptsi~chlich darin0 dai] sie start mit Salzs~ure mit Essigs~ure steigender Konzentration eluieren. Verff. benutzen Dowex-ll~l , X2, 200--400 mesh, C1--Form, in S~ulen yon 1 cm ;~ und 3 cm H5he, die mit AcetatpufferlSsung yon p~ 5,6 ins Gleichgewieht gebracht sind. Zur Untersuchung ge]angen Serum und 2~iereuhomogenat, denen die mit la l j mar- kierten Verbindungen zugesetzt sind, oder Trypsinhydrolysat der Schilddriisen von Miiusen, denen 4 Std vorher radioaktives Jodid injiziert wurde. Im Eluat erscheinen praktisch quantitativ bei p~ 3,6 Thyreoglobulin, bei 3,0 Monojodtyrosin, bei 2,2 Dij odtyrosin und bei 1,4 Thyroxin s owie Trij odthyronin.

1 Biochemic. J. 72, 310--313 (1959). Nat. Inst. Med. l~es., Mill Hill, London (England). E. Mi~LL~R, Wfirzburg

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