Die Natur- 3 8 l(urze Or ig ina lmi t t e i t ungen wissenschafien

s t e h e n a u c h der S c h m e l z p u n k t u n d die T e m p e r a t u r , bet welcher die V e r b i n d u n g s ich ve r f~ rb t (zu Orange bis Dunke l - braun).

Alle 16sen sich in 6 M HINOs oder heif3em Wasser, aber nicht in CH~OH, C2I.I~OH, CHCIa, CCI~, C~I.I~ oder Dioxan. Zuerst waren sie alle schneeweif3, aber nach kurzer Zeit hatten sic eine leicht braune Farbe angenommen.

Department o[ Chemistry, Southern Illinois University, Carbondale, Illinois, U.S.A. 1{. F. TRIMBLtB, LORETTA LING-TSE XZOH u n d KENNETH 2AxSHLEY

Eingegangen am 2. August 1963

x) SCHMIDT, J. G., u. R . F . TR1B~BLE: J. Phys. Chela. 66, 1063 (~ 962).

The Synthesis and Cleavage of Dipyridazo [4,5-b: 4,5-e]-l,4-difhlin-l,6-dione

The nove l nucleophi l ic d i s p l a c e m e n t of ha logen f rom 4 ,5 -d id romo-6-pyr idazone or 4 ,5-d ich loro-6-pyr idazone (I) w i th p h o s p h o r u s pen t a su l f i de ~) sugges t ed a s t u d y of t h e re- ac t ion of I w i th s o d i u m hydrosu l f ide in abso lu te e t hano l in order to o b t a i n i n f o r m a t i o n oil t h e course of th i s reac t ion .

W h e n I (0 ' t mole) was a l lowed to reac t w i t h an abso lu t e e thano l ic so lu t ion of s o d i u m hydrosu l f ide (0"4 mole), n o n e of t h e expec ted 4 ,5 -d imercap to -6 -py r idazone (IV) was ob- ta ined . However , t he re was ob ta ined in 90% yield a c o m p o u n d f o r m u l a t e d as d ipyr idazo [4,5-b : 4 ,5 -e ] - t ,4 -d i th i in - t ,6 -d ione (II), m . p . > 3 5 0 ~ (CsH~N~O~N ~ requi res : C, 38'08; H, 1'59; N, 22 .2 t ; S, 25'42. F o u n d : C, 38'01; H, 1"47; N, 2 t ' 86 ; S, 25"05). These d a t a do n o t exc lude s t r u c t u r e I I I , however , i t is more r easonab le to a s s u m e t h a t I I ar ises f r om t h e con- d e n s a t i o n of two moles of 4 -ch lo ro -5 -mercap to -6 -pyr idazone (or t he a l t e rna t e 5-chloro-4-mercapto-6-pyr idazone) in t h e a lka l ine r eac t ion m e d i u m t h a n to v isual ize t h e c o n d e n s a t i o n of one mole of 4 ,5 -d imercap to -6 -py r idazone (IV) w i th one mole of I. F u r t h e r m o r e if I a n d IV were to condense in a lka l ine m e d i u m , one wou ld expec t to o b t a i n b o t h I I a n d I I I . On ly one p r o d u c t w a s ob t a i ned and th i s fac t is p r e s e n t e d as addi- t iona l ev idence t h a t t he correc t s t r u c t u r e ha s been ass igned to I I .

W h e n I I was Mlowed to reac t w i t h p h o s p h o r u s p e n t a - sulf ide in b o i l i n g py r id ine so lu t ion , none of t h e expec ted d ipy r idazo [4 ,5 -b :4 ,5 -e ] - l , 4 -d i th i i n , t , 6 -d i th io l (VI) was ob- t a ined . However , pyr idaz ine -3 ,4 ,5 - t r i th io l (V) was isola ted

o o SH ,I C II I

o I II v o o SH

HN ~ . . . / S ~ . / ~ . N H . . l i I S H N / ~ / S H

N ~ ~ S / - - . . ~ j ~ N N ~ . ~ S H ~ / ' ~ S/'-k...l~- N SH

III IV VI O O

II C, HsNI ~)l~-i-/C1 Naris C tt N / ~ ' / S ~ N

o v i i v i i i

o o

C s H , N / ~ I ~ C 1 C~HsN ~"~t ~ SH , IJ

IX X

in 88% yie ld r e su l t ing f rom t he c leavage of II . C o m p o u n d V was iden t ica l to t h a t p r ev i ous l y r epor t ed 1) and ha s been ident i f ied b y conver s ion in to t he p rev ious ly r epor t ed 3,4,5- t r i benzy l th iopyr idaz ine l ) .

W h e n 4, 5 -d ich lo ro - l -pheny l -6 -pyr idazone (VII) (0.02mole) was al lowed to ref lux w i t h s o d i u m hydrosu l f ide in abso lu t e e t h a n o l so lu t ion , 2,7-diphenyldipyridazo[4,5-b:4,5-e]-t,4-di- t h i i n - t , 6 -d ione (VIII) , m . p . > 3 5 0 ~ (C~0HI~N~O2S ~ requi res : C, 59"41; H, 2"94; N, 13.86; S, ~5'86. F o u n d : C, 59'68; H, 2"90; N, t3"93; S, 15-80) was ob t a i ned in 62% yield. W h e n 5 - c h l o r o - 4 - m e t h o x y - t - p h e n y l - 6 - p y r i d a z o n e (IX) was al lowed to reac t w i t h s o d i u m hydrosu l f i de in abso lu t e e t hano l solut ion, a m i x t u r e of V I I I in "20% yie ld and 5-mercap-

t o - 4 - m e t h o x y - l - p h e n y l - 6 - p y r i d a z o n e (X), m . p . t 3 7 - - t 3 8 ~ (CllI-IIoN2OgS requi res : C, 56"39; H, 4 '30; N, 11"96; S, 13"69. F o u n d : C, 56'40; H, 3"95; N, 12.24; S, 13"70) in 51% yield was ob ta ined . Therefore, i t is ce r ta in t h a t V I I I arises f rom the c o n d e n s a t i o n of two moles of X in a lkal ine so lu t ion where in d i s p l a c e m e n t of t he m e t h o x y l group occurs b y t h e s t r ong ly nucleophi l ic m e r c a p t i d e anion. The fo rma t ion of V I I I f rom I X offers add i t iona l ev idence t h a t I I ha s beeI1 cor rec t ly fo rmula t ed . The inf ra red spec t r a of V I I I f rom e i ther VI I or I X were ident ica l a n d these spec t r a were s imi la r to t h e infrared s p e c t r u m of I I .

]Research on this new ring system and on this novel ring cleavage is be ing con t inued .

Th i s i nves t i ga t i on was s u p p o r t e d b y a PHtS research G r a n t No. CY-2653 f rom the Na t i ona l Cancer In s t i t u t e , Pub l i c H e a l t h Service. The a u t h o r s are g ra te fu l to Miss YoKo T o K u s m G x for t he ana ly t i ca l d a t a repor ted .

Department o[ Chemistry, the University of New Mexico, Albuquerque, New Mexico

I~AYMOND N. CASTLE and KENJI KAJI Eingegangen am 18. Juni 1963

~) CASTLE, R. N., and K. KMI: Tetrahedron Letters 393 (1962).

Anthracen-chrom-trlcarb0nyl D u r c h Modif iz ierung eines f r t iheren Ver fah rens 1) k o n n t e

Cr(CO)6 m i t A n t h r a c e n in n - D i b u t y l ~ t h e r bet 140~ n a c h

C14H10 + Cr(CO)6 -> C14HioCr(CO) ~ + 3 CO zu kr i s ta l l inem, a n a l y s e n r e i n e m A n t h r a e e n - c h r o m - t r i c a r b o n y l u m g e s e t z t werden . Schwarze, d i amagne t i s che , ill o rgan i schen Medien v io le t t ro t 16sliche, gri in i r is ierende Bl~tttchen u n d N a d e l n v o m S c h m e l z p u n k t ~ t 8 9 bis 192 ~ C, u n t e r s t a rke r Ze r se t zung sub l imie rbar . Aus d e m 1 H - N M R - S p e k t r u m is t m i t fl inf S igna len e indeu t ig ~z-Bindung des Cr(CO)3-Restes an e inen Se i tenr ing zu folgern2). Bet M i t t e l r i n g b i n d u n g w~ren n u r drei Signale m i t den I n t e n s i t ~ t e n 2 : 4 : 4 zu e rwar ten .

Tabelle. *H-NMR-Spektrum und Zuordnung liar Anthracen-ehrom- triearbonyl (in C~D~)

HI Hg H s

H~dr~0 H, C / ~ \C

O / ~ \O O

Pro- Inten- ton sitar ~*)

2,3 2 5,43 1,4 2 4,97 6,7 2 3,35 5,8 2 2,95 9,t0 2 2,85

*) rel. intern. TMS.

Multiplett Multiplett Multiplett Multiplett

breites Singulett

Mi t dieser Molekelges ta l t s t e h t s u c h dos D i p o l m o m e n t in C6H 8 m i t /z = 5, t2 ~: 0,06 Debye in l '~bere ins t immung, da es d e m y o n P h e n a n t h r e n - c h r o m - t r i e a r b o n y l m i t #C~H,= 5,03 + 0 , 0 8 D e b y e w e i t g e h e n d s t gleicht3). Fiir le tz teres is t die S e i t e n r i n g - a - B i n d u n g des Meta l l ca rbony l res t e s r6n tgeno- g raph i sch berei ts gesichert4).

Anorganisch-ehemisches Institut der Universittit, Mi~nehen B. R. WILLEFORD*) und E. O. FISCHER

Eingegangen am 16. August 1963

*) Bucknel l University, Lewisburg, Pa. National Science Foundation Science Faculty Fellow, 1962--1963.

') FISCHER, E. O., N. KR~ESITZSCK U. R .D . FISCHER: Chem. Ber. 92, 3214 (t959). - - "} Untersuchungen von C. G. KRE~TER. - - 3) Nach Messungen yon H . H . LINDNER. --- 4) DEIJTSCHL, H.: Diss. TH. Mfinehen 1962.

Die Trennung yon Actinomycin-6emischen durch Verteilungschromato- graphic an Sephadex

A c t i n o m y c i n - G e m i s c h e lassen s ich du rch Ver te i lungschro- m a t o g r a p h i e an ZeI lulosepulver in die E i n z e l k o m p o n e n t e n zerlegenl) . Die T r e n n u n g an der Zelluloses~ule is t zwar sehr wi rksam, doch i s t sie d a d u r e h bee in t r~ch t ig t , dab die Zonen normale rweise n i ch t m i t hor i zon ta le r S t rOmungs f igur du rch die S~ule laufen. Wi r h a b e n desha lb n a c h ande ren TrAgern fiir die V e r t e i l u n g s c h r o m a t o g r a p h i e gesuch t . N~hezu hori- zontale StrSmungsfiguren erhielten wir mit Sephadex als Tr~iger der station~ir hydrophilen Phase. Auf die Verwendungs- m6gl ichke i t von Sephadex fiir die V e r t e i l u n g s c h r o m a t o g r a p h i e is t y o n der F i r m a P h a r m a e i a in P r o s p e k t e n a l lgemein h inge- wiesen worden2) ; spezielle A n g a b e n fiber T r e n n u n g s m 6 g l i c h - ke i t en dieser Me thod ik w u r d e n b i sher n i ch t b e k a n n t .

Heft 2 i (urze Or ig inahl l i t te i lungel l 39 ~964 (Jg. 51)

Wi r lassen t rockenes S e p h a d e x in der h y d r o p h i l e n P h a s e des Ver t e i lu l lg s sys t ems u n t e r R i ih ren quellen. Die gequol lenen, m i t der h y d r o p h i l e n P h a s e gefi i l l ten S e p h a d e x - P a r t i k e t n wet - dell m i t d e r h y d r o p h i l e n P h a s e des Ver t e i lu l lgs sys tems in e ine t empe r i e r t e S~ule e ingeschI~mmt . Die zwischen den Sephadex - Tei lchen befi l ldl iche hydroph i l e P h a s e wird du rch Aufgeben l ipophi ler P h a s e he rausgedr i i ck t . Das in e i nem mOglichst k le inen V o l u m e n l ipophi ler P h a s e gel6ste S u b s t a n z g e m i s c h wird au f die SS, ule a u f g e t r a g e n u n d die S~ule m i t d e r lipo- ph i len Phase , gegebenel lfal ls u n t e r A n w e n d u n g eilles le ich ten {3berdruckes, el l twickelt . Das zu t r e n n e n d e S ubs t anzge ln i s ch k a n n s u c h in der h y d r o p h i l e n P h a s e gel6st werden. I n d iesem Fall wird die m6g l i chs t konzen t r i e r t e L 6 s u n g m i t t r o c k e n e m S e p h a d e x zu e inem Brei ange r i ih r t u n d die A u f s c h l ~ m m u n g auf die vo rhe r m i t l ipophiler P h a s e ins Gle ichgewicht gese tz te SguIe au fge t r agen , iVian k a n n in der SguIe eille seh r schnel le S t r 6 m u n g eillstellen, ohlle dab d a d u r c h die T re l l nung be- e inf Iugt wird. Die S t r6mul lgsgeschwind igke i t i s t pr imXr ab- h~tngig v a n tier Korngr6Be des v e r w e n d e t e n .Sephadex.

/O,O

/ o,~

o, o71 I I ', I 0 /0 b-o TOO /6O

/-~oktlonszcrh/ Fig. 1. Verteilungschromatographie mit Sephadex G 2S medium als Tr~iger der station~ir hydroptlilen Phase; Verteilungssystem: 3 Volumenteile Di-n-butyl~ther, 2 Volumenteile n-ButauoI, 5 Vo- lumenteile ether 9 %igen w~il3rigen L6sung von m-kresotinsaurem Natr ium; S~iulendurchmesser 3,5 cm; FtillhShe 40 cm; Temperatur 240 C; Trennung y o n 320 mg Aetinomyein C in Aetinomyein Ca (erstes Maximum), C~ (zweites Maximum) und C, (drittes Maximum) ; DurchfluBgeschwindigkeit 0,3 ml pro Minute; Frakt ionsvolumen 10 roll; Abszisse: Frakt ionsnummer; Ordinate: Milligramm Aetino- mycin im logarithmisehen Mal3stab (spektralphotometrisch bet

Z= 447 my best immt)

Zur T r e n n u n g des Ac t inomyc i l l -C-Gemisches h a b e n wi t Sephadex G 25 m e d i u m als Tr~ger der station~tr h y d r o p h i l e n P h a s e u n d ein V e r t e i l u n g s s y s t e m a u s drei V o l u m e n t e i l e n Di-n-buty l -Xther , zwei Volumente i l e l l n - B u t a n o l ul ld f i inf VolumenteileI1 e ther 9 % i g e n w~Brigell L 6 s u n g voll m-kreso- t i n s a u r e m N a t r i u m v e r w e n d e t (Fig. l). Ill der L6sung , die zwischell den reil len K o m p o l l e n t e n herauslXuft , g eh t die Act i- nomyci l l - lKonzel l t ra t io l l au f W e r t e zuriick, die ve rnach l~ss ig t werden kSllnen. I n dieser Hil ls icht , aber a u c h in Ei l l fachhei t u n d Geschwind igke i t i s t die Sephadex-S~tule e ther gleich groBen Zelluloses/~ule wef t t iberlegen. Die S t r S m u n g s f i g u r e n der d u t c h die Sgule wande r l l den Ac t i nomyc i l l -Zonen s ind nahezu hor izonta l . Sie e r l auben a u c h die T r e n l l u n g groBer Subs ta l l zmenge l l in we i ten S~ulen.

Die V e r t e i l u n g s c h r o m a t o g r a p h i e m i t S ephadex als Tr~tger der s t a t i o n e r h y d r o p h i l e n P h a s e i s t a l lgemein a l lwendbar . A u g e r d e m hier g e n a n n t e n Beispiel l assen s ich auch z .B. Pen ic i l lmgemische u n d P e p t i d g e m i s c h e ohne Sehwier igke i ten in ihre K o m p o n e n t e n zerlegen. Obe r de ren Trenl l l lng soll an e ther a n d e r e n Stelle be r i ch t e t werden .

Biochemisches Laboratorium der Fa~ben/abriken Bayer A G., Werk Wuppertal-Elberfeld (Letter: Dr. E. AUI~AGXI'~)

G. SCHMIDT-I~ASTNER

Eingegangen am 8. August 1963

1) Au~IAoI~N,E., u. G. ScH~IDT-KAsTNER: DBP930579 u. Dt3P 934715. - - ~) Chemical a - 4 Engineering News vom 5.3. t962.

L u m i n e s z e n z y o n Here

Zur P r t i fung der Frage , ob die bet v ie len Oxyda t ions~ r eak t i onen b e o b a c h t b a r e s chwache Lumi l l e szenz 1~) auch bet lebelldell Organ i smel l au f t r i t t , w u r d e e ine Suspens ion ro l l Backhefe in e iner s chon fr t iher be sch r i ebenen empf ind l i chen A p p a r a t u r lb) u n t e r s u c h t . I n so lchen Hefesuspe l l s ionen (1,65 �9 t0SZe l l en /cm a, N X h r m e d i u m : 0 , 2 5 m o l Glucose, je 0, t g /L A m m o n i u m s u l f a t , K a l i u m d i h y d r o g e n p h o s p h a t , lVIaguesium- sul fa t , Pep ton) zeigte s ich zull/~chst p r a k t i s c h keine L ich t - emiss ion , doch se t z t diese augel lbl ickl ich ein, wenll du rch die Fl t i ss igkei t L u f t oder Sauers to f f gele i te t wird. Die L u m i n e s - zenz in tens i t / i t der g e s a m t e n Probe (t5 ml, ha lbkuge l fSrmiges , h i n t e n vers i lber tes Gef~tg) b e t r u g e twa 5" t0 -la Lumen/cm3- YVegen der n i ch t bekan l l t en Se lb s t abso rp t i on der Suspens ion k a n n l lur m i t Vors i ch t e in Schlul3 au f die pro Hefezelle in der Ze i te inhe i t emi t t i e r t e S t rah lu l lg gezogen werden . Bet An- n a h m e eines Ausbeu tekoe f f i z i en t en y o n 70% l~gt s ich eille S t r a h l u n g y o n e i n e m P h o t o n ( S e h w e r p u n k t 5000 ~) je Hefe- zelle in e twa 20 rain absch~tzel l . - - Die S t rah lu l lg ,,Irischer" Here k l ing t seh r l a n g s a m ab. B e h a n d e l t m a n die Susp en s io n im N/~hrmedium m i t L u f t bet 30 bis 35 ~ C, so l l i m m t die In t ens i t / i t der L u m i n e s z e n z nl i t der B e h a n d l u n g s d a u e r zu, ihre Abk l inggeschwind igke i t wird dabei gr6ger . I n Fig. t i s t

Fig. I. Verlauf der Intensit~it ether Hefesuspension mit der Zeit

der Ver lauf der Intensi t /~t e iner He fe suspens ion m i t d e r Zeit, e twa 7 S td bet 33 ~ C m i t L u f t behande l t , s i s Rep rod n k t i o l l des a u t o m a t i s c h aufgeze ichne te l l S c h r e i b e r d i a g r a m m s dar- gestell t . An der m i t d e m Pfeil beze i chne t en Stelle w u r d e Sauers to f f eillgeleitet. - - N a c h Abzen t r i fug ie ren der Hefe- zellen zeigte der {3berstand auch bet E in le i t en y o n Sauers to f f ke ine Lumineszenz , dagegen t r a t sie wieder auf, wenll die abzen t r i fug ie r te l l Zel len e r n e u t a u f g e s c h w e m m t wllrden. -- Das Verha l t en der Hefe Xnderte s ich n i ch t m e h r bet for tge- s e t z t e r t3ebr t i tung ill G e g e n w a r t y o n Lu l l .

Der re la t iv kurz a l ldauernde E f f ek t 1/il3t v e r m u t e n , dal3 es s ich h ierbe i u m die A u s w i r k u n g eines ~ b e r g a n g s z u s t a l l d e s (overshoot) hande l t , der au s d e m e r h 6 h t e n O2-Allgebot re- sul t ier t .

Dieser Ve r such beweist , dab im lebendel l O r g a n i s m u s aul3er der eigel l t l ichen BiolumineszellZ, die m e h r e r e GrSl3en- o r d n u n g e n i n t e n s i v e r u n d all das A u f t r e t e n b e s t i m m t e r E n z y m - S u b s t r a t - S y s t e m e gekn t ip f t istlC), noch andere seh r s chwache L e u c h t e r s c h e i n u n g e n a u f t r e t e n k6nnel l . N a c h den m i t a n o r g a n i s c h e n Sys temel l g e m a c h t e n E r f ah ru l l gen 1~) k6n- n e n diese a u l Anregungszus t~ tnden des Sauers toffs , wegen der AnregungsfXhigke i t yon Prote inel l ~) l lnd Nuclei l ls / iuren ~) ab e t s u c h auf ange reg t en Zust~tnden der l e tz te ren be ruhen . D a we i t e rh in solche Chemi lumi l l e szenz in w/il3rigen L 6 s u n g e n n u r bet R e a k t i o n e n m i t s aue r s to f fha l t i gen R a d i k a i e n (OH, O~H) b e o b a c h t e t worden is t 1"), l iegt es nahe , dera r t ige Prozesse s u c h in der Hefe zu v e r m u t e n , was aber n i ch t ausseh l ieg t , dab n i ch t auch noch andere energie l iefernde Vorg/~nge hierft ir ill F r age kommel l .

Institu~ /i~r physikalische Biochemie u~d Kolloidchemie im Institut /2;ir physihalische Chernie der Universildl, Frankfurt

J. STt,~F~ u n d G. R E s x ~

Eingegangen am 3. August 1963

1) STAUFF, J., u. H. SCItMIDKUNZ: Z. physik. Chem. (Frankfurt) N.F. a) s3, 273 (1962); b) 3s, 295 (1962); - - c) Nature 198, 281 (1963). - - ~) McELRou D., u. H. H. S~LIGER, in: Symposium on Light and Life, p. 219ff. Baltimore (Md.) : John Hopkins 1 9 6 ~ . - a) STAUFF, J., U. H. WOL~: Z. Naturforseh. Tell B (im Druek). - - *) Unver6ffentiiehte Versuehe.