152 G . Sauer, A . Shimaoka, H. Minato und K . Takeda Bd. 142

Liebigs Ann. Chem. 742, 152-162 (1970)

Inhaltsstoffe von Chionographis japonicu Maxim., V1)

Struktur von vier neuen Sapogeninen2)

von Gerhard Sauer3), Ariyoshi Shimaoka, Hitoshi Minato und Ken'ichi Takeda4. *)

Aus dem Shionogi Forschungslaboratorium, Shionogi & Co. Ltd., Fukushima-ku/Osaka, Japan

Eingegangen am 4. Juni 1970

Die fruher aus Chionographis japonica Maxim. isolierte ,,Verbindung H" erweist sich als Gemisch von Chionographolon (1 a), Isochionographolon (2a), Allochionographolon (3a) und Isoallochionographolon (421). Durch Luftoxydation wird aus 2a und 4a 11 a-Hydroxy- chiogralacton (5a) erhalten.

Components of Chionographis japonica Maxim., Yl). Structure of Four New Sapogenins

,,Compound H", previouslyisolated from Chionographisjaponica Maxim., has been shown to be a mixture of chionographolone (1 a), isochionographolone @a), allochionographolone (3a) and isoallochionographolone (4a). 11 a-Hydroxy-chiogralactone (5a) has been obtained by air oxidation from 2a and 4a.

Aus dem Extrakt von Chionogvuphis juponica Maxim. (japanischer Name Shirai- toso) wurden nach Saurehydrolyse mehrere Steroide isoliert, deren Struktur aufge- klart werden konntes-7). Die ,,Verbindungen E und H"5) waren bisher noch unbekannt. Beide erwiesen sich als Gemische sehr ahnlicher Steroide. Uber Fraktion E wurde in der vorhergehenden Mitteilung 1) berichtet.

Hier sollen die Auftrennung von Fraktion H und die Strukturaufklarung ihrer Komponenten beschrieben werden. Zur Reindarstellung wurde Fraktion H erneut an Aluminiumoxid chromatographiert und, auf Grund einer C=O-Bande bei 171 5 cm-1,

*) Herrn Professor Dr. R . Tschesche in Verehrung zum 65. Geburtstag gewidmet. 1) IV. Mitteilung: G . Sauer, A . Shimaoka und K. Takeda, J. chem. SOC. [London] (C) 1970,

2) Untersuchungen der Sterol-Komponenten einheimischer Pflanzen, LXII. Mitteilung. 3) Neue Adresse: Schering AG, D-1 Berlin 65, Mullerstr. 170-172. 4) Anfragen und Bitten urn Sonderdrucke sind an diesen Autor erheten. 5 ) K. Takeda, A . Shimaoka, M. Iwasaki und H. Minato, Chem. parmac. Bull. [Tokyo] 13,

6) K. Takeda, M. Iwasaki, A . Shimaoka und H. Minato, Tetrahedron [London], Suppl. 8,

7) K, Takeda, H . Minato und A, Shimaoka, Chem. Commun. 1968, 104.

910.

691 (1965).

Teil 1, 123 (1966).

1970 Inhaltsstoffe von Chionographis japonica Maxim., V 153

rnit Girard-T-Reagenz behandelt. Die aus der Keton-Phase isolierte Substanz lie13 sich durch zweimalige praparative Dunnschichtchromatographie in funf Kompo- nenten auftrennen, und zwar in die vier Sapogenine Chionographolon (1 a), Isochiono- grapholon (2a), Allochionographolon (3a) sowie Isoallochionographolon (4a) rnit ahnlichen Wanderungsgeschwindigkeiten und ein Lacton 5a mit kleinerem Rp-Wert.

Die Verbindungen 1 a-4a sind amorph, ihre Acetate jedoch kristallin. Das massenspek- troskopisch bestimmte Molekulargewicht 446 von 1 a-4a legt die Summenformel C27H4205,

das Molekulargewicht 530 von deren Acetylierungsprodukten die Summenformel C31H4607

nahe. Das Lacton 5a mit der Massenzahl 390 (C23H3405) bildet ebenfalls ein Diacetat (Mo1.-Gew. 474; C27H3807).

la, b Za, b # # RO

R H O H O

3a, b 4a, b

a: R = H, b: R = COCH3

5a ist das stabile Endprodukt bei der Zersetzung der Sapogenine 2a und4a. Es zeigt im IR-Spektrum eine Hydroxyl-Bande bei 3615, eine Lacton-Bande bei 1743 und eine Carbonyl-Bande bei 1715 cm-1. Durch Acetylierung von 5a erhalt man das Diacetat 5b, aus dem sich durch partielle Entacetylierung rnit Natriummethylat in Methanol das Monoacetat 5 c darstellen laat. Die Oxydation von 5 c rnit Jones-Reagenz liefert das Diketon 6.

CH3CO..

Sa: R', R~ = H b: R', R2 = COCH, c: R' = H, R2 = COCH,

6

154 G . Sauer, A . Shimuoka, H . Minato und K. Tukedu Bd. 142

Tabelle 1 zeigt, daR die Circulardichroismus-Kurven von 5a und 5 b mit jener von Chiogralacton 1.6,8), dem 3 0.16 @-Dihydroxy-6-oxo-24-nor-5 ol.23-cholansaure-lacton (7a), gut ubereinstimmen. Auch fur das Diketon 6 beobachtete man einen Cotton-Effekt, der sich mit jenem des aus Chiogralacton durch Oxydation erhaltenen Diketons6) 7 b als nahezu identisch erwies (Tab. 2). Die Anderung der CD-Kurve bei Zugabe von Salzsaure zur me- thanolischen Losung der Diketone 6 und 7 b war ebenfalls gleich. Ein 3-Keton bildet unter diesen Bedingungen leicht ein Ketals), so daB allein der Cotton-Effekt des 6-Ketons gefunden wird.

Die Konfiguration der 3-Hydroxy-Gruppe lal3t sich aus dem NMR-Spektrum von 5c erhalten: Man findet fur das Proton an C-3 ein Multiplett bei 5 = 6.44 mit einer Kopplungskonstante von ca. 20 Hz; es handelt sich also um ein axiales Proton. Somit ist 5a ein 3 P-Hydroxy-6-keto-Steroid.

Tabelle 1. Circulardichroismus [@ .10-2] von 38.1 1ol. 16@-Trihydroxy-6-0~0-24-nor-5cc.23- cholansaure-lacton @a), dem Diacetat 5 b und von 3p.16p-Dihydroxy-6-0x0-24-nor-5a.23-

cholansaure-lacton (7a) in Chloroform bei 23"

335 0 0 0 298 - 14.4 -28.2 -29.0 250 0 -1.4 0

Tabelle 2. Circulardichroismus [O .10-2] der Diketone 7b und 6 in Methanol bzw. salzsaurem Methanol bei 23"

A [nml 7 b 7b/H@*) 6 6/H@*)

320 0 0 0 0 300 -13.7 - -11.4 -

294 - -30.9 -

0 284 0 272 + 5.3 - + 5.5 -

250 0 -1.0 0 0

-21.0 - -

*) In Methanol nach Zugabe von einem Tropfen konz. Salzsaure.

8) M. Iwasaki, Tetrahedron [London] 23,2145 (1967). 9) C. Djerassi, Optical Rotatory Dispersion: Application to Organic Chemistry, S. 143,

McGraw-Hill, New York 1960.

1970 Inhaltsstoffe von Chionographis japonica Maxim., V 155

Das Diketon 6 wurde durch Behandlung mit Methyl-athyl-dioxolan in das Diketal 8b ubergefuhrt. Nach Entacetylierung zu 8a und dessen Oxydation mit Chrom (V1)- oxid in Pyridin erhielt man das Keton 9 mit IR-Banden bei 1738 (Lacton) und 1706 cm-1. Unterwarf man 9 einer modifizierten Wolff-Kishner-Reduktion10), so isolierte man nach Ansauern das Triketon 10 und ein Diketon, das nach IR- und Massen- Spektrum rnit 7b identisch war. Aus diesen Ergebnissen folgt, daR es sich bei 5a urn ein Hydroxy-Derivat 7a des Chiogralactons handelt.

6 - +

8a: R = H b: R = COCH3

10

e0 8 H.."U" 9

R & H O

l la: R = H b: R = COCH,

Zur Festlegung der verbleibenden Hydroxy-Gruppe wurden folgende Ergebnisse herangezogen: Die Oxydation von 5a mit Perjodat und der a-Ketol-Test fielen negativ aus. Die Absorptionsbande von 9 bei 1706 cm-1 deutet auf ein Sechsring-Keton. Die Messung des Circulardichroismus von 9 ergab einen positiven Cotton-Effekt bei 305 nm (0 =- + 1190), was fur ein 11-Keto-Steroid sprichtll). Die Werte fur die cheniische Verschiebung der 18- und 19-Methyl-Signale des Alkohols 8a und dessen Acetats 8b sind in Tabelle 3 zusammengestellt.

Tabelle 3. Chemische Verschiebung [Hz] der 18- und 19-Methyl-Signale des Alkohols 8 a und dessen Acetats 8 b in CDCI3 bei 60 MHz

Signal 8 a 8 b Differenz (8b-Sa)

18-CH3 50 51.5 + 1.5 19-CH3 66 63 -3.0

10) W. Nagata und H. Itaznki, Chem. and Ind. 1964, 1194. 11) L. Velluz, M. Legrand und M. Grosjean, Optical Circular Dichroism, Verlag Chemie,

Weinheim 1965.

156 G . Sauer, A . Shimaoka, H . Minato und K . Takeda Bd. 142

Fur die Differenz der chemischen Verschiebungen der Signale der 18- und 19-Methyl-Grup- pen vor und nach dem Acetylieren werden fur die 1 la-Hydroxy-Gruppe Werte von +1.8 bzw. -3.3 Hz, fur die llp-Hydroxy-Gruppe von -6.2 bis -7.6 und -10.5 bis -11.3 Hz ange- geben12).

Daraus folgt, daR Verbindung 5a eine 1 la-Hydroxy-Gruppe besitzt und damit ein 3 3 . 1 1 a.16 ~-Trihydroxy-6-oxo-24-nor-5a.23-cholansaure-lacton ist.

Da die Verbindungen l a -4a nur als an der Luft und bei der Diinnschichtchro- matographie zersetzliche, amorphe Pulver erhalten wurden, fiihrten wir die Struktur- aufklarung mit den stabileren Acetaten lb-4b aus.

4b ergab an feuchter Luft in wenigen Tagen das Lacton 5b und Isobuttersaure. Nach 5 Stunden bei 80" in Anwesenheit von Wasser und Luft war diese Umwandlung quantitativ. 3 b war gegenuber Luftoxydation stabiler, enthielt aber, nach mehreren Wochen an der Luft, ebenfalls Spuren des Lactons 5b. Mit Kalium-tert.-butylat in tert.-Butanol wurde aus 3b in geringer Ausbeute 5a erhalten.

Da das Verhalten von 3b und 4b bei der Luftoxydation identisch mit demjenigen von Chiograsteron (12b) und Isochiograsteronl) (13b) war, lag ein Vergleich der physikalischen Eigenschaften dieser Verbindungen nahe (Tab. 4).

12 a: R = H, b: R = COCH, 13

Tabelle 4. Circulardichroismusa) [@. 10-21 der Acetate l b - 4 b und des Lactons 11 b im Vergleich zu demjenigen des Diacetats 5b, des Chiograsterons (12b) und des Isochio-

grasterons (13b)

- 0 - + 9.0 321 + 3.5 - - 323 0 - +11.6 - - - + 12.5 304 -81.9 -94.7 - - --76.0 - - 302 - - -31.1 -62.0 - -28.1 -16.0 298 - - -29.0 -59.8 -82.7 -27.8 -19.5 296 -92.0 -101.4 - 294 - - -34.2 -61.3 - -27.4 -25.1 290 -81.9 -86.8 - - - - -23.5 254 -

- - - -

- - - -4.2 -1.4 0 a) Bei 23'. - b) In Dioxan. - c) In Chloroform. - d) In Ather/Isopentan/Athanol(5 : 5 : 2).

0 - -

-60.0 -66.0 -

-70.0 -65.0

12) Y. Kuwazoe, Y. Sato, M , Natsume, H. Haseguwu, T. Okumoto und K . Tsudu, Chem. pharmac. Bull. [Tokyo] 10 ,338 (1962).

1970 Inhaltsstoffe von Chionographis japonica Maxim., V 157

Wie aus Tabelle 4 ersichtlich, zeigt 3 b den fur 6-Keto-Steroide charakteristischen Cotton- Effekt bei ungefahr 295 nm in Dioxanl.6). Der positive Cotton-Effekt bei 323 nm muR, ebenso wie beim Chiograsteronl) (12b), einer Carbonylgruppe in der Seitenkette zugeordnet werden. Auf Grund des Cotton-Effekts von 0 3 0 2 = -6200 fur 4 b sollte diese Verbindung die gleichen Ketofunktionen wie Isochiograsteron 1) (13 b) besitzen.

Im NMR-Spektrum findet man wieder je ein Dublett bei 1.05 und 1.10 ppm fur 3b und bei 1.04 und 1.07 ppm fur 4 b, die den analogen Seitenkettenaufbau wie in 12 b und 13 b bestatigen.

Die physikalischen Daten und das Verhalten bei der Luftoxydation ergeben also fur Allochionographolon (3a) die Struktur eines 11 cr-Hydroxy-chiograsterons und fur Isoallochionographolon (4a) die eines 1 1 ct-Hydroxy-isochiograsterons.

Man erhielt aus l b bei Raumtemperatur an Aluminiumoxid 3b und aus 2b die Verbindung 4b. Ebenso wie aus 4a waren aus 2a nach einigen Tagen bei Raumtem- peratur an feuchter Luft die Verbindungen 4a, 5a und l l a neben Isobuttersaure ent- standen. Das Lacton l l a lieferte beim Acetylieren l lb, und dieses wandelte sich an Aluminiumoxid quantitativ in 5b um. Diese Umwandlung beweist, daB 2a und 4a sich nicht in der Seitenkette unterscheiden, sondern Stereoisomere (cis- bzw. trans- Verknupfung der Ringe A und B) sind.

Die in Tabelle 4 aufgefuhrten Circulardichroismus-Werte bestatigen diesen SchluB. Die grooen, negativen @-Werte von l b , 2b und l l b stimmen mit Werten fur A/B- cis-6-Keto-Steroide gut uberein 10). Damit durften fur Chionographolon Struktur 1 a und fur Isochinographolon Struktur 2a feststehen.

Die Stereochemie an C-23 in den Verbindungen 1 und 3 bzw. an (2-24 in 2 und 4 ist noch nicht bekannt.

Die hier beschriebenen Steroide wurden durch Saurehydrolyse aus Pflanzen- extrakten gewonnen. Unter diesen Bedingungen (5 proz. Salzsaure in Methanol, 5 Stdn., RuckfluB) konnen, ausgehend von reiner Verbindung l a oder 3a, jeweils gleiche Gemische von l a , 3a, 4a und 5a im Verhaltnis von etwa 1 : 2 : 3 : 1 erhalten werden. Es ist also kein RuckschluB moglich, welche Steroide in der Pflanze vor- kommen und welche Artefakte der Aufarbeitung sind. Zur Klarung dieser Frage sol1 die enzymatische Hydrolyse der Saponine beitragen, die zur Zeit bearbeitet wird.

Beschreibung der Versuche Die NMR-Spektren wurden in CDClyLosung mit einem Varian-A-60-Spektrometer ge-

messen, die CD-Messungen mit einem automatisch aufzeichnenden Spektralpolarimeter der Firma Japan Spectroscopic Co. (Modell ORD-50) und die Massenspektren rnit einem Hitachi- RMU-6-Massenspektrometer aufgenommen. Die ZR-Spektren und die optischen Drehwerte wurden von Losungen in Chloroform bei 23" aufgenommen, die Schmelzpunkte auf einem Kofler-Heiztisch bestimmt.

Zsolierung von 3~.lla-Dihydroxy-l6~.23-epoxy-5~-cholestan-6.24-dion (la), 3B.Ila-Dihy- droxy-16t9.24-epoxy-5~-cholestan-6.23-dion (2 a), 38. I la-Dihydroxy-16~.23-epoxy-5a-cholestan- 6.24-dion (3a), 3~.IIa-Dihydroxy-I6~.24-epoxy-5a-cholestan-6.23-dion (4a) und 3B.Ila.16B-

158 G. Sauer, A . Shimaoka, H. Minato und K. Takeda Bd. 742

Trihydroxy-6-oxo-24-nor-5a.23-cholansaure-lacton (5a): Wie bereits mitgeteilts), wurde der aus 7 kg getrockneten und zerkleinerten ganzen Pflanzen Chionogruphis japonica Maxim. gewonnene Extrukt rnit Saure hydrolysiert und an Aluminiumoxid chromatographiert. Die Anteile mit einem Gehalt an Fraktion H wurden an Aluminiumoxid (standardisiert, Merck) mit Chloroform und danach rnit Chloroform/Methanol (95 : 5) erneut chromatographiert und ergaben 8.0 g oliges Produkt. Daraus wurden die Ketoverbindungen rnit Girard-T-Reagenz abgetrennt und die einzelnen Komponenten der Keton-Phase durch praparative Dunnschicht- chromatographie an Kieselgel G (Merck) in folgender Weise dargestellt : Die Diinnschichtplatte wurde zur Desaktivierung kurze Zeit in Essigester/Benzol (2 : 1) gestellt und dann rnit warmer Luft getrocknet. Im gleichen Losungsmittel wurde die Platte 4mal entwickelt. Eine zweite Reinigung in der gleichen Weise lieferte die reinen Verbindungen. Die Platten sind so wenig wie moglich dem Zutritt feuchter Luft auszusetzen, da 2a und 4a leicht oxydative Zersetzung erleiden. Trotz sofortigen Extrahierens der Zonen rnit Chloroform war stets ein kleiner Anteil von Zersetzungsprodukt vorhanden. Physikalische Daten von 1 a--5a, der Acetylierungs- produkte lb-5b sowie die Analysen von 1-5 sind in den Tabb. 5-7 zusammengestellt.

Tabelle 5. Physikalische Daten der isolierten Sapogenine 1 a-4a und des Lactons 5a

Nr. Ausbeute Schmp. ~ $ 3 RF- IR-Banden [mgl ["CI (4a) Wertb) [cm-I]

l a 330 97 - lo@) -84.1 5 9.3" 0.41 3615, 1710, 1165, (0.134) 895, 873

2a 250 102 - 105~) -112.1 i 7.4" 0.37 3612, 1712,895,872

3a 600 115 - 119~) -40.3 i 3.9" 0.30 3614, 1712, 1165, 901 (0.21 1)

4a 890 108 - 1 1 4 ~ ) -71.2 5.3" 0.25 3615, 1713,900 (0.212)

5a 150 241 -243d) -103.5 k 15.2" 0.15 3615, 1743, 1715, 1275, (0.0947) 1051, 1035,966,902

(0.206)

a) Gemessen in Chloroform bei 23'. - b) Losungsmittel: Essigester/Benzol (2: 1). - C) Amorphes Pulver (aus Petrolather). - d) Umwandlungspunkt 155 - 160' (aus Methanol).

Tabelle 6 . Physikalische Daten der Acetylierungsprodukte 1 b--5 b

Nr. Schmp. RF-Werta) IR-Banden [cml]

l b 178-180"b) 0.65 1728, 1710, 1378, 890 2b 154- 155"b) 0.61 1727, 1378, 890 3b 188 - 190"b) 0.74 1720, 1378, 1365 4b 156- 158"b) 0.69 1720, 1383, 1368 5 bd) 293 -295"~) 0.45 1730, 1077, 1035,963

a) Losungsmittel: Essigester/Benzol(2 : 1). - b) Aus Petrolather. - C) Aus Aceton/n-Hexan. - d) [a]$3 = - 114.4 7.5" (c = 0.208, Chloroform).

1970 Inhaltsstoffe von Chionographis japonica Maxim., V 159

Tabelle 7. Massenspektrometrisch bestimmte Molekulargewichte und Analysen der Sapogenine la-4a, des Lactons 5a und ihrer Acetylierungsprodukte 1 b-5b

Nr. Molekiil-lon Summenformel Analysen Ma (Mo1.-Gew.) C H

l a 446 Cz7H420s Ber. 72.61 9.48 (446.6) Gef. 72.32 9.55

2a 446 C27H42.05 Ber. 72.61 9.48 (446.6) Gef. 72.46 9.79

3a 446 C27H4205 Ber. 72.61 9.48 (446.6) Gef. 72.51 9.42

4a 446 C27H4205 (446.6)

(390.5)

(530.7)

(530.7)

(530.7)

(530.7)

5b 474 C47H3807 (474.6)

5a 390 C23H3405

l b 530 C31H4607

2b 530 C31H4607

3b 530 C31H4607

4b 530 C31H4607

Ber. 72.61 9.48 Gef. 72.42 9.75 Ber. 67.62 8.88 Gef. 67.89 8.68 Ber. 70.16 8.74 Gef. 70.39 9.02 Ber. 70.16 8.74 Gef. 70.41 8.83

Ber. 70.16 8.74 Gef. 70.44 8.68 Ber. 70.16 8.74 Gef. 70.45 9.03 Ber. 68.33 8.07 Gef. 68.56 8.07

Partielle Entacetylierung von 5 b: 30 mg Diacetat 5 b wurden in 30 ccm Methanol gelost und mit 0.15 ccm 1 n methanol. Natriummethylat-Losung versetzt. Nach 6 Stdn. bei Raumtem- peratur wurde mit einern Tropfen Essigsaure neutralisiert und eingedampft. Man nahm in Chloroform auf, wusch rnit 5proz. NaHCO3-Losung und mit Wasser, trocknete (Na2S04) und erhielt einen krist. Ruckstand. Dieser ergab, aus Essigester/n-Hexan umkristallisiert, 22 mg Ila-Acetoxy-chiogralacton (5c) als farblose Prismen vom Schmp. 262-263" und dem massenspektroskopisch bestimmten Molekulargewicht 432. - ZR-Banden: 3450, 1730, 1273, 1073, 1028 und 957 cm-1.

C25H3606 (432.5) Ber. C 69.43 H 8.39 Gef. C 69.43 H 8.39

Oxydation von 5c: 36 mg Monoacetat 5 c wurden in 15 ccm Aceton gelost und mit 0.2 ccm Jones-Reagenz bei 0" unter Ruhren oxydiert. Nach 5 Min. wurde rnit Eis/Wasser verdunnt, mit Chloroform extrahiert und die organische Phase rnit NaHCO3-Losung und Wasser ge- waschen. Der krist. Eindampfruckstand ergab nach Umkristallisieren aus Essigester/n-Hexan 29mg Diketon 6 als farblose Prismen vom Schmp. 242-245". - ZR-Banden: 1739 und 1718 cm-1.

C25H3406 (430.5) Ber. C 69.74 H 7.96 Gef. C 69.68 H 7.85

160 G . Sauer, A. Shimaoka, H . Minafo und K. Takeda Bd. 742

Darstellung des Diketals von 6 : In 15 ccm Methyl-athyl-dioxolan (iiber LiAlH4 getrocknet und destilliert) loste man 30mg Diketon 6 sowie 2mg p-Toluolsulfonsaure und erhitzte (Olbad). Innerhalb von 2 Stdn. wurde die Temperatur langsam von 130 auf 160" gesteigert und gleich- zeitig etwa die halbe Menge des Solvens iiber eine kleine Kolonne abdestilliertl3). Der Riick- stand wurde 30 Min. mit Nap203 geriihrt, filtriert und eingedampft. Nach praparativer Diinnschichtchromatographie auf Kieselgel G rnit Essigester/Benzol (2: 1) erhielt man das aus Essigester/n-Hexan umkristallisierte Diketal8 b in einer Ausbeute von 26 mg als farblose Nadeln vom Schmp.290-293". - Massenspektrum: M@ = 518. - ZR-Banden: 1740 und 1729 cm-1.

C29H4208 (518.6) Ber. C 67.16 H 8.16 Gef. C 66.93 H 8.26

Entacetylierung von 8b: 13 mg Diketal 8b, in 5 ccm Methanol gelost, wurden rnit 0.2 ccm 1 n methanol. Natriummethylat-Losung versetzt, 6 Stdn. in einer Ampulle bei 60" gehalten, rnit Essigsaure neutralisiert und eingedampft. Der Riickstand wurde mit Essigester extrahiert und aus Essigester/n-Hexan umkristallisiert: 11 mg 8a als farblose Blattchen vom Schmp. 305-306". - ZR-Banden: 3495, 1738, 1102, 1035 und 964 cm-1.

C27H4007 (460.6) Ber. C 68.04 H 8.46 Gef. C 67.85 H 8.48

Oxydation von 8a: 12 mg 8a, gelost in 1 ccm Pyridin, wurden rnit 20 mg Chrom(V1)-oxid in 0.2 ccm Pyridin versetzt und 5 Stdn. bei Raumtemperatur belassen. Es wurde Eis/Wasser zugegeben, mit Chloroform extrahiert, rnit Wasser gewaschen und eingedampft. Der Riick- stand (18 mg) lieferte nach Chromatographie an Kieselgel G mit Essigester/n-Hexan und Um- kristallisieren aus Essigester 9 mg Keton 9 als farblose Prismen vom Schmp. 276-278". - ZR-Banden: 1738, 1706, 1100, 1034 und 942 cm-1.

C27H38O7 (458.6) Ber. C 68.33 H 8.07 Gef. C 68.35 H 8.05

Modijzierte Wolff-Kishner-Reduktionlo) von 9: 10 mg Keton 9, 0.3 ccm 8Oproz. Hydrazin- hydrat und 63 mg Hydrazin-hydrochlorid wurden in 1.5 ccm Triathylenglykol 2 Stdn. auf 120-130" erhitzt. Nach Zugabe von 76 mg K O H wurde 2 Stdn. bei 210" gehalten und nach Abkiihlen rnit Eis/Wasser versetzt. Die Mischung wurde rnit 2n HCl angesauert und nach 30 Min. rnit Essigester extrahiert. Man wusch rnit NaHCO3-Losung sowie Wasser und erhielt 16 mg oligen Riickstand. Dieser wurde in 2 ccm Dioxan gelost, rnit 2 Tropfen konz. Salzsiiure versetzt und 2 Stdn. bei Raumtemperatur aufbewahrt. Man verdiinnte mit 10 ccm Wasser, extrahierte rnit Essigester und erhielt nach Waschen mit NaHCO3-Losung sowie Wasser und Eindampfen 6 mg Kristalle. Dieser Riickstand war ein Gemisch von zwei Verbindungen, die durch praparative Dunnschichtchrornatographie auf Kieselgel G mit Essigester/Benzol (2:1) getrennt wurden. Man erhielt 4 mg Triketon 10 (RF = 0.28) vom Schmp. 264-265" (aus Atherln-Hexan), das rnit dem aus 9 durch Entketalisieren erhaltlichen Triketon identisch war, und 1.4mg Diketon 7 b (RF = 0.39) vom Schmp. 210-213°, das rnit dem aus 7 a durch Oxydation entstandenen Keton6) nach IR- und Massen-Spektrum iibereinstimmte.

C23H3204 (372.5) Ber. C 74.15 H 8.65 Gef. C 73.72 H 8.41

Umwandlung von 1 b in 3b: 25 mg 1 b wurden in 5 ccm Benzol gelost und iiber Aluminium- oxid (2 g; Woelm) filtriert. Der Eindampfriickstand wurde durch praparative Diinnschicht-

13) G . Rosenkranz, M. Valesco und F. Sondheimer, J. Amer. chem. SOC. 76, 5024 (1954).

1970 Inhaltsstoffe von Chionographis japonica Maxim., V 161

chromatographie auf Kieselgel G rnit Essigester/Benzol (2: 1) getrennt. Man isolierte 9 mg Ausgangsmateriall b und 14 mg 3 b vom Schmp. 188- 190', das durch Vergleich des TR-Spek- trums und des Rp-Werts rnit denjenigen von authent. Material identifiziert wurde.

Umwandiung von 2 b in 4 b: 13 mg 2 b wurden in 5 ccm Benzol gelost und iiber Aiuminiumoxid (2g) filtriert. Man erhielt nach Auftrennung 4.5 mg 2 b + 7mg 4b, die rnit authant. Material laut IR-Spektrum und RF-Werten ubereinstimmten.

Luftoxydation von 4b: 40 mg 4b, in 0.5 ccm Methanol gelost, wurden rnit 8 ccm Wasser verdiinnt, 5 Stdn. auf 90" an der Luft erhitzt und nach Abkiihlen rnit 2proz. NaHCO3- Losung neutralisiert. Durch Extrahieren rnit Chloroform erhielt man 34 mg Lacton 5 b vom Schmp. 290-293". Aus der waBr. Phase wurde Isobuttersaure isoliert : RF = 0.67 aufDC-Karten (Eastman chromagram sheet-type K 301 R) in Athanol/konz. Ammoniak (98 : 2); Spriihreagenz 0.05 % Methylrot in Athanol. - AuBerdem wurde der Ruckstand in 1 ccm 70proz. Athanol mit 0.1 n HCI neutralisiert. Dazu gab man eine Losung von 7 mg S-Benzyi-thiuroniumchiorid in 0.5 ccm Athanol, dampfte auf das halbe Volumen ein und lie8 bei Raumtemperatur bis zur Bildung von Kristallen stehen. Nach Umkristallisieren aus Athanol wurden 1.6 mg farblose Blattchen vom Schmp. 155- 156" erhalten, die rnit authent. S-Benzyl-thiuronium-isobutyrar identisch waren.

CI2H18N202S (254.4) Ber. C 56.68 H 7.14 N 11.02 Gef. C 56.50 H 7.53 N 10.94

Luftoxydation von 2b: Zu einer Losung von 30 mg 2 b in 0.5 ccm Methanol gab man 1.5 ccm Wasser und erhitzte 4 Stdn. bei Luftzutritt auf 80". Man extrahierte mit Chloroform und trennte den Riickstand durch praparative Diinnschichtchromatographie auf Kieselgel G rnit n- Hexan/Benzol/Essigester (1 : 1 : 1) in 11 mg Ausgangsmaterial 2 b (RF = 0.61), 1.5 mg 4 b ( R R = 0.69), 9 mg Lacton 5 b (RF = 0.14) und 4.4 mg Lacton l l b (RF = 0.20), das als farb- lose Blattchen vom Schmp. 290-292" (aus Aceton/n-Hexan) erhalten wurde. - IR-Spekrrum von l l b : 1705 bis 1740 (breit), 1380, 1078, 1030,960 und 897 cm-1.

C27H3807 (474.6) Ber. C 68.33 H 8.07 Gef. C 68.01 H 8.11

Luftoxydation von 2 a : 86 mg 2a lie8 man unter Luftzutritt 4 Tage bei Raumtemperatur stehen und trennte dann durch praparative Diinnschichtchromatographie auf Kieselgel G rnit Benzol/Aceton/Essigester (1 : 1 : 1) in 48 mg Ausgangsmaterial 2a (RF = 0.67), 13 mg 4a (RF = 0.61), 5 mg Lacton 5a (RF 7 0.21) und 11 mg amorphesLacton 11 a (RF - 0.39).

l l a : Mussenspektrum: Me = 390. - = -133.9 & 5.9" (c = 0.280). - IR-Spektrum: 3580,3460,1740,171 1,1276,1025,956und888cm-1. Das Acetatwarnach Misch-Schmelzpunkt, IR-Spektrum und RF-Werten identisch rnit 11 b.

Umwandiung von 11 b in 5 b: 5 mg Acetat 11 b wurden in 2 ccm Benzol gelost und uber 2 g Aiuminiumoxid filtriert. Nach Abdampfen erhielt man 5 mg farblose Blattchen vom Schmp. 293 -294". Die Substanz war rnit authent. 5 b nach IR-Spektrum und RE-Werten identisch.

Oxydative Zersetzung von 3b: 9 mg 3 b wurden in 20 mg Kaiium-tert.-butyiat + 2 ccm tert.-Butanol gelost und 3 Stdn. unter Luftzutritt bei Raumtemperatur geriihrt. Es wurde mit 2 n HCl angesauert und rnit Essigester extrahiert. Durch praparative Dunnschichtchromato- graphie auf Kieselgel G rnit Essigester/Benzol(2:1) konnten 2.4 mg Lacton 5a vom Schmp. 238-241" und 1.2 mg Ausgangsmaterial 3a isoliert werden.

Liebigs Ann. Chem. Bd. 742 11

162 G. Sauer, A . Shimaoka, H . Minato und K. Takeda Bd. 142

Behandlung von 3a rnit methanol. Salzsaure: 28 mg 3a wurden in 2 ccm 6 n HCI + 5 ccm Methanol geliist und 5 Stdn. unter RiickRuB erhitzt. Es wurde mit Essigester extrahiert, die orgdnische Phase rnit NaHCO3-Losung sowie Wasser gewaschen und eingedampft. Der Riick- stand wurde durch praparative Diinnschichtchromatographie auf Kieselgel G mit E?sigester/ Benzol (2: 1) in 3.1 mg 1 a, 5.7 mg 3a, 9 mg 4a und 2.9 mg 5 a aufgetrennt.

Behandlung von 1 a mit methanol. Salzsiinrc: 6 mg 1 a wurden rnit 5 HC1 in CH30H unter den gleichen Bedingungen wie Verbindung 3 s behandelt und ergaben 0.7 mg l a , 1.5 mg 3a, 1.8 mg 4 a und 0.5 mg 5a.

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