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SCHLAGANFALLPRÄVENTION

MIT PLÄTTCHENHEMMERN

BEI NEUER TIA UND LEICHTEM

ISCHÄMISCHEN SCHLAGANFALL (PLATELET-ORIENTED INHIBITION IN NEW TIA

AND MINOR ISCHEMIC STROKE)

PROTOKOLL ZU BLUTPROBEN FÜR ZUSÄTZLICHE BIOMARKER-STUDIE

OUS-Studienzentren

DNS und Plasma

BLUTPROBEN FÜR ZUSÄTZLICHE POINT-STUDIE ZU BIOMARKERN, PROTOKOLL-V.2,02AUG2013

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INHALTSVERZEICHNIS

I. PROTOKOLL ZU DNS- UND PLASMAPROBEN ........................................................ 2

1. ANFORDERUNGEN AN DAS Studienzentrum für die ENTHNAHME von DNS- und PLASMAPROBEN ....................................................................................................... 2

2. DNS- und PLASMA-PROBENENTNAHMEKITS ........................................................... 2

3. DNS- und PLASMA-PROBENENTNAHME UND -VORBEREITUNG .............................. 3

4. ZENTRIFUGIERUNG ................................................................................................... 6

5. DNS- und PLASMA-PROBENLAGERUNG ................................................................... 6

6. VERPACKUNG UND VERSAND VON DNS- und PLASMAPROBEN – Details befinden sich im LabCorp Laborhandbuch. ............................................................................. 7

II. HÄUFIGE PROBLEME/FEHLER ............................................................................... 8

III. LABCORP-ADRESSE FÜR PROBENVERSAND .......................................................... 8

IV. MAYO CLINIC-ADRESSE FÜR PROBENLAGERUNG .................................................. 8

V. ANHÄNGE ........................................................................................................... 8

Anhang A: 10-ML-EDTA-BLUTPROBERÖHRCHEN MIT LAVENDELFARBENEM VERSCHLUSS ...................................................................................................................... 9

Anhang B: 10-ML-CRYOVIAL-RÖHRCHEN für ÜBRIGE ZELLEN und BUFFY-COAT ...... 10

Anhang C: BLUTPROBEN-DIAGRAMM NACH DER ZENTRIFUGIERUNG ...................... 11

Anhang D: 2-ML-CRYOVIAL-PLASMA-RÖHRCHEN ........................................................ 12


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I. PROTOKOLL ZU DNS- UND PLASMAPROBEN

1. ANFORDERUNGEN AN DAS Studienzentrum für die ENTHNAHME von DNS- und PLASMAPROBEN

Für die richtige Verarbeitung und Lagerung der Proben ist Folgendes erforderlich:

Vorzugsweise (nicht unbedingt erforderlich) - Eine Zentrifuge, die bei 1000 x g und 4 °C arbeitet.

Erforderlich – Eine Zentrifuge, die bei 1000 x g arbeitet.

Vorzugsweise (nicht unbedingt erforderlich) - Ein Gefrierschrank für –70 °C bis –90 °C. Proben können vor dem Versand 3 Monate gelagert werden. Der Versand der Proben erfolgt auf Trockeneis.

Erforderlich – Ein Gefrierschrank für –20 °C, –30 °C oder –40 °C. Wird ein Gefrierschrank bis –20 °C, –30 °C oder –40°C verwendet, müssen die Proben innerhalb von 4 Tagen auf Trockeneis versandt werden.

Trockeneis zum Versand aller Proben muss verfügbar sein. (Bezugsquellen für Trockeneis sind im LabCorp Laborhandbuch angeführt).

2. DNS- und PLASMA-PROBENENTNAHMEKITS

LabCorp Clinical Trials stellt Probenentnahmekits bereit, die bei LabCorp zusammengestellt und in einem für das Zurückschicken der Proben an LabCorp wiederverwendbaren Behälter direkt an die Studienzentren gesandt werden. Jedes DNA- und Plasma- Probenentnahmekit enthält die erforderlichen Materialien für die Entnahme, Vorbereitung und den Versand der Proben an LabCorp Clinical Trials. (Zusätzlicher Materialvorrat wird dem Studienzentrum bei Bruch oder Beschädigung von Kits als Ergänzung zur Verfügung gestellt)

Jedes DNA- und Plasma- Probenentnahmekit enthält Folgendes:

ELEMENT MENGE

FORMULARE

Labortestanforderungsformular (Anforderungsformular) mit Barcode 1 ]

BLUTENTNAHMEZUBEHÖR

Blutentnahme: 1

a. 1 10-ml-EDTA-Röhrchen (Vacutainer) mit lavendelfarbenem Verschluss und Barcode

b. 1 10-ml-Cryovial-Röhrchen für Buffy-Coat und übrige Zellen ohne Barcode

c. 6 2-ml-Cryovial-Röhrchen für Plasma mit Barcodes d. 1 mit Alkohol getränktes Reinigungstuch e. 1 Nadel f. 1 Tourniquet


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g. 1 Tupfer h. 1 Bandage i. 1 Nicht sterile Pipetten

Probebeutel für biologische Risikostoffe 1

VERSANDZUBEHÖR

Kit-Box (Versand-Box) 1

Im Voraus bezahlter und vorgedruckter Luftfrachtbrief 1

Styropor-Verpackung 1

Trockeneis-Versandaufkleber Mehrere

HINWEIS: Die Studienzentren müssen Trockeneis zum Versand von Proben beziehen – Bezugsquellen für Trockeneis finden sich im LabCorp-Handbuch.

Das Labor-Anforderungsformular (Siehe LabCorp Laborhandbuch) und mit Barcode gekennzeichnete Elemente in der Probenentnahmekit-Box sind vorgedruckt und enthalten dieselbe Barcode-Nummer.

Nicht die Inhalte zwischen den Probenentnahmekits austauschen.

NACHBESTELLEN VON ZUBEHÖR

1. Die Anweisungen für die Nachbestellung von Kits und Zubehör sind im LabCorp Laborhandbuch aufgeführt.

Bei Nachbestellungen von Zubehör müssen mindestens 5 bis 7 Werktage für das Zusammenstellen und die Lieferung des

Zubehörs eingeplant werden. 3. DNS- und PLASMA-PROBENENTNAHME UND -VORBEREITUNG

Blutproben werden bei der Aufnahme in die Studie entnommen. Idealerweise werden die Proben bei der Randomisierung entnommen, nachdem dem Studienteilnehmer die Anfangsdosis verabreicht wurde. Proben können jedoch bis zu 12 Stunden nach der Randomisierung entnommen werden, wenn dies unvermeidlich ist. Ein Phlebotomie-Labor im Krankenhaus kann verwendet werden, wenn der Studienkoordinator die Phlebotomie nicht durchführen kann, der Koordinator jedoch für den Transport der Blutprobe zum Labor für die Zentrifugierung, die Verpackung und den Versand aller Proben an LabCorp verantwortlich ist. VOR DER PROBENENTNAHME

1. Prüfen, ob die Einverständniserklärung für die Biomarker-Studie erhalten wurde.


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2. Sicherstellen, dass das richtige Probenentnahmekit für die Entnahme von DNS- und Plasma- Proben gewählt wurde.

3. Das Ablaufdatum des ausgewählten Probenentnahmekits überprüfen. (Die örtlichen Richtlinien für die Entsorgung abgelaufener Probenentnahmekits befolgen.)

4. Den LabCorp-Kalender im LabCorp Laborhandbuch auf Schließtage aufgrund von regionalen und nationalen Feiertagen überprüfen.

PROBENENTNAHME UND -VORBEREITUNG

1. Für die Venenpunktion sterile Standard-Techniken verwenden.

2. Wenn eine Infusion erforderlich ist, den anderen Arm nehmen. Wenn eine Infusion auf beiden Armen erforderlich ist, das Blut aus einer Vene distal zur Infusion entnehmen.

3. Das im Probenentnahmekit enthaltene EDTA-Röhrchen mit lavendelfarbenem Verschluss komplett füllen (Anhang A).

4. Das Röhrchen sofort nach der Entnahme vorsichtig mindestens 6-8 Mal umdrehen, um eine Gerinnung zu verhindern. Nicht extremer Hitze oder Kälte aussetzen.

Röhrchen mit der POINT-Studienteilnehmer-ID und der Randomisierungsnummer (die Randomisierungsnummer ist die Nummer der Studienmedikamentflasche) beschriften .

HINWEIS: Zum Ausfüllen aller Probeetiketten und des Labor-Anforderungsformulars einen wasserfesten Stift oder einen Kugelschreiber verwenden.

5. Das Plasma durch sofortiges Zentrifugieren oder Zentrifugieren innerhalb von 30 Minuten bis 1 Stunde nach der Entnahme von den Zellen trennen (siehe LabCorp Laborhandbuch, Abschnitt Zentrifugierung). Die Röhrchen vor der Zentrifugierung aufrecht halten. Im LabCorp Laborhandbuch finden sich die Kontaktinformationen des LabCorp Projekt-Monitors, der für zusätzliche Unterstützung bei der Zentrifugierung kontaktiert werden kann.

6. Wenn nach der Zentrifugierung keine deutliche Schicht zwischen den Blutzellen, dem Buffy-Coat und dem Plasma zu sehen ist, die Probe ein zweites Mal zentrifugieren. In Anhang C befindet sich das Diagramm einer Blutprobe nach der Zentrifugierung, das den Buffy-Coat zeigt.

7. Mit der im Probenentnahmekit bereitgestellten Pipette 0,7ml Plasma von dem EDTA-Röhrchen mit lavendelfarbenem Verschluss in jedes der sechs 2-ml-Cryovial-Röhrchen füllen. Die 2-ml-Cryovial-Röhrchen bis zur 0,7-ml-Markierung füllen. (Anhang D)


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HINWEIS: Nicht die Buffy-Coat-Schicht zwischen den Blutzellen und dem Plasma aufwühlen. Es sollte eine deutliche Schicht zwischen dem Plasma und den Zellen zu sehen sein, die Buffy-Coat genannt wird.

8. Sicherstellen, dass der Buffy-Coat NICHT mit dem Plasma pipettiert wird. Wird etwas von dem Buffy-Coat mit dem Plasma aufgesaugt, dies bitte unten auf dem Labor-Anforderungsformular vermerken.

9. Die Verschlüsse auf die Plasma-Cryovial-Röhrchen geben.

10. Auf den Etiketten für die sechs 2-ml-Cryovial-Röhrchen die POINT-Studienteilnehmer-ID und die Randomisierungsnummer (die Randomisierungsnummer ist die Nummer der Studienmedikamentflasche) eintragen.

HINWEIS: Zum Ausfüllen aller Probeetiketten und des Labor-Anforderungsformulars einen wasserfesten Stift oder einen Kugelschreiber verwenden.

11. Mit der im Probenentnahmekit bereitgestellten zusätzlichen Pipette die gesamten restlichen Zellen und den Buffy-Coat von dem 10-ml-EDTA-Röhrchen in das 10-ml-Cryovial-Röhrchen füllen.

12. Den Verschluss wieder auf das 10-ml-Cryovial-Röhrchen geben.

13. Die sechs 2-ml-Plasma-Cryovials und das 10-ml-Cryovial-Röhrchen mit den übrigen Zellen und dem Buffy-Coat in den Aqui-Pak (Röhrchenhalter mit sechs Plätzen und Absorbtionsmaterial) geben.

14. Den Aqui-Pak in das größte Fach des Beutels für biologische Risikostoffe geben und versiegeln. Eine Kopie des Labor-Anforderungsformulars in die äußere Tasche des Beutels stecken (eine Kopie für das Archiv aufbewahren).

15. DEN BEUTEL SOFORT AUFRECHT STEHEND IN DEN GEFRIERSCHRANK GEBEN.

16. Die Proben müssen im Gefrierschrank bleiben, bis sie GFROREN sind, bevor sie versandt werden können. Wenn sie gefroren sind, müssen die Proben gefroren auf Trockeneis versandt werden. Die Anweisungen für Verpackung und Versand im LabCorp Laborhandbuch befolgen und das 10-ml-Cryovial-Röhrchen und die sechs 2-ml-Cryovial-Röhrchen zusammen auf Trockeneis versenden.

17. Wenn die übrigen Zellen und das Plasma in einemGefrierschrank bei –20 °C, –30 °C oder –40°C gefroren werden, müssen die Proben auf Trockeneis innerhalb von 4 Tagen versandt werden. Wenn die Proben in einem Gefrierschrank bei –70 °C bis -90 °C gelagert werden, können sie vor dem Versand auf Trockeneis bis zu drei Monate gelagert werden.

PROBLEME MIT DER PROBENENTNAHME UND -VERBEREITUNG

Wenn ein Element im Probenentnahmekit zerbrochen oder verbraucht ist, dieses durch ein Element aus dem Materialvorrat ersetzen. Jedes Probenentnahmekit enthält zusätzliche Barcode-Etiketten. Eines der zusätzlichen Barcode-Etiketten so


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befestigen, dass es leicht gescannt werden kann (z. B. der Länge nach auf einem Röhrchen). Sicherstellen, dass der Barcode mit dem Verfallsdatum der Charge nicht verdeckt ist. Die erforderlichen Informationen auf dem Etikett ausfüllen.

4. ZENTRIFUGIERUNG

Zur Vorbereitung von zellfreiem Plasma müssen die Blutproben zentrifugiert werden. Das Nomogramm im LabCorp Laborhandbuch für die Berechnung der Geschwindigkeit (U/m oder Umdrehungen pro Minute) zum Zentrifugieren der Probe verwenden. Für die Berechnung der Geschwindigkeit müssen der Radius (der Abstand vom Zentrum der verwendeten Zentrifuge bis zur Mitte des zentrifugierten Röhrchens) und die RCF (relative Zentrifugalkraft, auch mit „g” bezeichnet; in dieser Studie g = 1000) bekannt sein. Die Geschwindigkeit oder U/m muss für eine bestimmte Zentrifuge ein Mal berechnet werden.

Wenn die Geschwindigkeit festgelegt worden ist, das 10-ml-EDTA-Röhrchen 15 Minuten bei 1000 x g zentrifugieren. Dadurch wird das Plasma von den Zellen getrennt.

Zwischen Plasma und Zellen sollte eine deutliche Schicht, der Buffy-Coat, zu sehen sein. Den Buffy-Coat nicht aufwühlen. Es ist entscheidend, dass der Buffy-Coat bei den übrigen Zellen bleibt, um bei der DNS-Extraktion bei LabCorp verwendet werden zu können. Wenn keine deutliche Schicht zwischen den Blutzellen, dem Buffy-Coat und dem Plasma zu sehen ist, die Probe ein zweites Mal zentrifugieren.

HINWEIS: Weitere Unterstützung bietet der LabCorp Projekt-Monitor (siehe LabCorp Laborhandbuch).

5. DNS- und PLASMA-PROBENLAGERUNG

Die verbleibenden übrigen Zellen und Plasmaproben müssen vor dem Versand im Studienzentrum eingefroren werden. Die Proben müssen bei –70 °C bis –90 °C, ODER –20 °C, –30 °C oder –40 °C bis zum Versand gefroren bleiben.

Wird ein Gefrierschrank bis –20 °C, –30 °C oder –40 °C verwendet, müssen die Proben innerhalb von 4 Tagen auf Trockeneis versandt werden.

Wird ein Gefrierschrank mit –70 °C bis –90 °C verwendet, können die Proben vor dem Versand auf Trockeneis 3 Monate gelagert werden.

Während der Lagerung im Gefrierschrank müssen die Proben aufrecht stehend im Probebeuteln für biologische Risikostoffe bleiben.

HINWEIS: Die verbleibenden Zellen und das extrahierte Plasma werden zusammen auf Trockeneis versandt.

VOR DEM VERSAND

1. Überprüfen, ob jedes der sechs 2-ml-Cryovial-Röhrchen und das 10-ml-Cryovial-Röhrchen beschriftet sind.


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2. Überprüfen, ob auf jedem 2-ml-Cryovial-Etikett die POINT-Studienteilnehmer-ID und die Randomisierungsnummer (die Nr. der Studienmedikamentflasche) eingetragen wurden).

3. Überprüfen, ob auf dem Etikett auf dem 10-ml-Cryovial-Röhrchen die POINT-Studienteilnehmer-ID und die Randomisierungsnummer eingetragen wurden.

6. VERPACKUNG UND VERSAND VON DNS- und PLASMAPROBEN – Details befinden

sich im LabCorp Laborhandbuch.

1. Die Versandmaterialien zusammenstellen.

2. Die Versand-Box bis zur Hälfte mit Trockeneis füllen.

3. Den Probenbeutel aufrecht stehend auf das Trockeneis geben und die restliche Versand-Box mit Trockeneis befüllen.

HINWEIS: Proben von mehreren Studienteilnehmer können in einem Behälter versandt werden und müssen zusammen mit den entsprechenden Labor-Anforderungsformularen in den jeweiligen Probebeuteln bleiben.

4. Die Versand-Box schließen und versiegeln.

5 Im LabCorp Laborhandbuch sind der für Ihr Land ausgewählte Kurierdienst und Informationen zum Ausfüllen des Luftfrachtbriefs enthalten. Die Luftfrachtbriefe bitte komplett ausfüllen; auf dem Luftfrachtbrief sind der Name des Studienzentrums und die LabCorp-Informationen vorgedruckt.

6. Eine Kopie für das Archiv aufbewahren.

7. Im LabCorp Laborhandbuch ist angeführt, ob vorab ein Trockeneis-Etikett auf der Versand-Box angebracht wurde oder ob ein bereitgestelltes Trockeneis-Etikett auf der Versand-Box anzubringen ist.

9. Die Probe an LabCorp Clinical Trials senden. Wenden Sie sich an die LabCorp Laboratory-Kontaktperson, die in Ihrem LabCorp Lab-Handbuch angeführt ist, wenn Sie mit jemandem über den Versand reden möchten.

ERINNERUNG: Der Versand von Proben an LabCorp Clinical Trials kann nur

VON MONTAG BIS DONNERSTAG erfolgen


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II. HÄUFIGE PROBLEME/FEHLER Abziehen der Buffy-Coat-Schicht während der Extraktion des Plasmas

Wird versehentlich etwas von der Buffy-Coat-Schicht in eine Pipette abgezogen, dies bitte auf dem Labor-Anforderungsformular vermerken. Dadurch kann die Genauigkeit der Biomarker-Werte beeinträchtigt werden.

Unzureichende Trennung von Zellen, Buffy-Coat oder Plasmaschichten

Bitte die Probe ein zweites Mal zentrifugieren. Nicht genügend Trockeneis

Dies kann zu einem Auftauen der Proben führen und beeinträchtigt die Genauigkeit der Biomarker-Werte.

III. LABCORP-ADRESSE FÜR PROBENVERSAND

Siehe LabCorp Laborhandbuch

IV. MAYO CLINIC-ADRESSE FÜR PROBENLAGERUNG

Mayo Clinic ist für die langfristige Lagerung von DNS und Plasma verantwortlich.

PROBEN NICHT DIREKT AN MAYO CLINIC SENDEN.

Mayo Clinic z.H.: Dr. Owen Ross 4500 San Pablo Road Birdsall Room 225 Jacksonville, FL 32224, USA Telefon: (904) 953-6280

V. ANHÄNGE


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Anhang A

10-ML-EDTA-BLUTPROBERÖHRCHEN MIT LAVENDELFARBENEM VERSCHLUSS


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Anhang B

10-ML-CRYOVIAL-RÖHRCHEN für ÜBRIGE ZELLEN und BUFFY-COAT

Vorgedruckter Barcode Nicht den Barcode verdecken

In Voraus angebrachtes Etikett wie folgt ausfüllen:

POINT Studienteilnehmer-ID (SubjID)

Randomisierungsnummer (Random-Nr.)

Im Voraus angebrachtes DNS-Extraktions-Etikett

s

Vorgedruckter Barcode

In Voraus angebrachtes Etikett wie folgt ausfüllen:

POINT Studienteilnehmer-ID (SubjID)

Randomisierungsnummer (Random-Nr.)

Nicht den Barcode verdecken

Im Voraus angebrachtes DNS-Extraktions-Etikett


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Anhang C

BLUTPROBEN-DIAGRAMM NACH DER ZENTRIFUGIERUNG

Hinweis: Nicht die Buffy-Coat-Schicht zwischen den Blutzellen und dem Plasma zerstören.


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Anhang D

2-ML-CRYOVIAL-PLASMA-RÖHRCHEN

Mit der im Probenentnahmekit bereitgestellten Pipette 0,7ml Plasma von dem EDTA-Röhrchen mit lavendelfarbenem Verschluss in jedes der sechs 2ml-Cryovial-Plasma-

Röhrchen füllen.

Die Plasma-Cryovial-Röhrchen bis zur 0,7-ml-Markierung füllen.

Hinweis: Die Buffy-Coat-Schicht zwischen Blutzellen und Plasma nicht

aufwühlen. Wird etwas von dem Buffy-Coat in eine Pipette aufgezogen, dies bitte unten auf dem Labor-Anforderungsformular vermerken.

In Anhang C befindet sich das Diagramm einer Blutprobe nach der Zentrifugierung, das

den Buffy-Coat zeigt.

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