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- 1 - TESTBERICHT RINGANA CAPS „move“ Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624 4. Oktober 2011 – Testbericht und Fachinformation für Angehörige von Heilberufen – Tierversuchsfreie zellbiologische Untersuchungen zu antioxidativen Wirkeffekten von RINGANA CAPS „move“ Zusammenfassung Mit tierversuchsfreien zellbiologischen Testmethoden wurde RINGANA CAPS „move“ auf seine förderlichen Wirkeffekte untersucht. Die Testergebnisse zeigen, dass die synergetische Wirkstoffkombination in RINGANA CAPS „move“ die schädigende Wirkung von endogen gebildeten Radikalen, wie sie bei- spielsweise im Gewebe und in Gelenken bei Entzündungs- oder komplizierten Wundhei- lungsprozessen auftreten können, dosisabhängig nahezu vollständig reduziert. Dadurch können Gelenkprobleme in vivo, welche auf Entzündungsprozessen basieren, verbessert werden. RINGANA CAPS „move“ steigert zudem die Stoffwechselaktivität von kultivierten Knorpel- zellen des Menschen im relevanten Konzentrationsbereich um ca. 35%. Daraus kann in vivo eine vermehrte Bildung von Kollagen und extrazellulärer Matrix resultieren, welche die Beweglichkeit der Gelenke verbessert und Gelenkschmerzen reduziert. Die Einnahme von RINGANA CAPS „move“ kann anhand der Versuchsergebnisse be- stens bei Gelenkproblemen empfohlen werden und zur Förderung des allgemeinen Wohl- befindens beitragen. Schongau, den 4. Oktober 2011 ………………………………… Prof. Dr. Peter C. Dartsch Dartsch Scientific GmbH Institut für zellbiologische Testsysteme Oskar-von-Miller-Straße 10 D-86956 Schongau Fon +49 (0) 8861 256-5250 Fax +49 (0) 8861 256-7162 E-Mail [email protected] Internet www.dartsch-scientific.com Dartsch Scientific GmbH Oskar-von-Miller-Str. 10 D-86956 Schongau RINGANA Kosmetik GmbH Schloss Hartberg Herrengasse 1 A-8230 Hartberg

Testbericht RINGANA CAPS move 04.10.2011-korr2

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TTEESSTTBBEERRIICCHHTT RRIINNGGAANNAA CCAAPPSS „„ mmoovvee““

Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624

4. Oktober 2011

–– TTeess tt bb ee rr ii cc hh tt uu nn dd FFaacc hh ii nn ff oo rr mm aatt ii oo nn ff üü rr AA nn gg eehh öö rr ii gg ee vv oo nn HHee ii ll bb eerr uu ff eenn ––

TTii eerrvveerrssuucchhssffrreeiiee zzeell llbbiioollooggiisscchhee UUnntteerrssuucchhuunnggeenn zzuu aanntt iiooxxiiddaatt iivveenn WWiirrkkeeffffeekktteenn vvoonn RRIINNGGAANNAA CCAAPPSS „„ mmoovvee““ Zusammenfassung Mit tierversuchsfreien zellbiologischen Testmethoden wurde RINGANA CAPS „move“ auf seine förderlichen Wirkeffekte untersucht.

Die Testergebnisse zeigen, dass die synergetische Wirkstoffkombination in RINGANA CAPS „move“ die schädigende Wirkung von endogen gebildeten Radikalen, wie sie bei-spielsweise im Gewebe und in Gelenken bei Entzündungs- oder komplizierten Wundhei-lungsprozessen auftreten können, dosisabhängig nahezu vollständig reduziert. Dadurch können Gelenkprobleme in vivo, welche auf Entzündungsprozessen basieren, verbessert werden.

RINGANA CAPS „move“ steigert zudem die Stoffwechselaktivität von kultivierten Knorpel-zellen des Menschen im relevanten Konzentrationsbereich um ca. 35%. Daraus kann in vivo eine vermehrte Bildung von Kollagen und extrazellulärer Matrix resultieren, welche die Beweglichkeit der Gelenke verbessert und Gelenkschmerzen reduziert.

Die Einnahme von RINGANA CAPS „move“ kann anhand der Versuchsergebnisse be-stens bei Gelenkproblemen empfohlen werden und zur Förderung des allgemeinen Wohl-befindens beitragen.

Schongau, den 4. Oktober 2011

………………………………… Prof. Dr. Peter C. Dartsch

Dartsch Scientific GmbH Institut für zellbiologische Testsysteme Oskar-von-Miller-Straße 10 D-86956 Schongau Fon +49 (0) 8861 256-5250 Fax +49 (0) 8861 256-7162 E-Mail [email protected] Internet www.dartsch-scientific.com

Dartsch Scientific GmbH � Oskar-von-Miller-Str. 10 � D-86956 Schongau

RINGANA Kosmetik GmbH Schloss Hartberg Herrengasse 1 A-8230 Hartberg

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TTEESSTTBBEERRIICCHHTT RRIINNGGAANNAA CCAAPPSS „„ mmoovvee““

Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624

1 RINGANA CAPS „move“

Produktauslobung: Die konzen-trierte, ausgewogene Nahrungs-ergänzung – zur Unterstützung der Regeneration von Gelenken und Knorpeln. Durch Bewegungs-mangel, Nikotin, Alkohol, falsche Ernährung und mangelhafte Ver-sorgung mit wichtigen Vitaminen und Mineralstoffen werden die Knochen schneller porös und die Gelenke unbeweglich. In den CAPS move steckt ein wahres Kraftpaket an hocheffizienten Essenzen, die dem Körper wieder auf die Sprünge helfen! 35 exklusive Ingredienzien - darunter der besonders wirksame Weihrauchextrakt - sorgen für eine Stärkung der Knochen und Gelenke und unterstützen diese bei Bewegung und Sport. Gemeinsam mit dem wertvollen antioxidativen Basiskomplex ist diese einzigartige Rezeptur ein wahres Wellnesspro-gramm für Gelenke und Knorpel!

Inhaltsstoffe: 35 wertvolle Wirkstoffe, u.a. Weihrauchextrakt, Mangosteen-, Papaya und Yuccawurzel-Extrakte, Teufelskrallenextrakt sowie ein spezieller Basiskomplex, welcher in erster Linie aus Polyphenolen verschiedener Pflanzenextrakte besteht. Polyphenole sind bioaktive aromatische Verbindungen, die in Pflanzen als Farbstoffe, Geschmackstoffe oder Gerbstoffe vorkommen. Sie wirken stark antioxidativ, d.h. sie sind in der Lage, freie reaktive Sauerstoffradikale – wie sie beispielsweise bei oxidativem Stress vorkommen – zu neutralisieren und so unschädlich zu machen.

2 Fragestellungen der durchgeführten Untersuchunge n

• Kann RINGANA CAPS „move“ endogene und lokal im Gewebe gebildete überschüs-sige Sauerstoffradikale inaktivieren? Ein solcher Radikalüberschuss direkt im Gewebe kann bei Entzündungsprozessen (z.B. Arthritis) oder komplizierten Wundheilungen durch die aus dem Blut eingewanderten neutrophilen Granulozyten als entzündungs-vermittelnde Zellen hervorgerufen werden.

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TTEESSTTBBEERRIICCHHTT RRIINNGGAANNAA CCAAPPSS „„ mmoovvee““

Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624

• Kann RINGANA CAPS „move“ den Energiestoffwechsel von kultivierten humanen Knorpelzellen stimulieren und so – zumindest teilweise – durch die vermehrte Synthe-se von Kollagen und extrazellulärer Matrix einen Knorpelverlust und die damit verbun-denen Schmerzen und Unbeweglichkeit der Gelenke ausgleichen? Bei Arthrose kommt es durch Verschleiß, Alterung, Fehl- oder Nichtgebrauch zu einer Verstärkung der natürlichen Abnutzung. Durch den allmählichen Verlust des Knorpels, der beim Erwachsenen nicht mehr erneuerbar ist, können so dauerhaft Entzündungen und Schmerzen entstehen.

3 Dosierung und Blutflüssigkeitskonzentration

Um in den hier durchgeführten tierversuchsfreien zellbiologischen Untersuchungen die Testkonzentration von RINGANA CAPS „move“ abschätzen zu können, wurde von den folgenden Überlegungen ausgegangen: Die empfohlene Tagesdosierung für RINGANA CAPS „move“ beträgt während der ersten 1 bis 3 Monate der Einnahme 6 Kapseln täglich (entsprechend 2,4 g); die Erhaltungsdosis bei Langzeiteinnahme 3 Kapseln täglich (ent-sprechend 1,2 g). Diese Tagesdosis verteilt sich bei einer angenommenen vollständigen Wirkstoffresorption in ca. 6 Litern Blut. Davon entfallen 3,3 Liter auf die Blutflüssigkeit; das restliche Volumen beinhaltet die korpuskulären Bestandteile wie Blutkörperchen etc. Somit verteilen sich 2,4 g (bzw. 1,2 g) Wirkstoffe auf 3,3 Litern Blutflüssigkeit, was einer Blutflüs-sigkeitskonzentration im ersten Einnahmequartal von 0,75 mg/ml oder 750 µg/ml ent-spricht.

Die am stärksten konzentrierte wässrige Stammlösung/Wirkstoffsuspension wurde mit ei-ner Konzentration von 100 mg/ml durch Mörsern hergestellt und dann entsprechend weiter verdünnt. Die Untersuchungen wurden im Konzentrationsbereich zwischen 0 und 5 bzw. 10 mg/ml durchgeführt. Dabei bezeichnet die Konzentration „0“ die unbehandelte Kontrolle ohne Wirkstoff.

4 Antioxidative Wirkung bei einem lokalen Überschu ss körpereigener (endogener) Sauerstoffradikale

Hintergrund: Ohne Sauerstoff können wir nicht leben, aber Sauerstoff in Form von hoch-reaktiven freien Sauerstoffradikalen (ROS = reactive oxygen species) kann pathophysiolo-gische Veränderungen bewirken und auch den vorzeitigen Alterungsprozess fördern. Freie Radikale werden als natürliche Stoffwechselprodukte permanent in unserem Körper pro-duziert und erfüllen grundsätzlich lebenswichtige Aufgaben. Umweltbelastungen, Ernäh-rungsmängel, körperlicher oder seelischer Stress, aber auch Medikamente, Verletzungen

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und Entzündungen können zu einer unkontrollierten Überproduktion freier Radikale führen. Die Selbstregulation durch den Körper ist gestört. Übersteigt die Aufnahme oder Bildung freier Radikale deren körpereigene Entgiftung, so spricht man von „oxidativem Stress“. Die schnell und aggressiv wirkenden freien Radikale stören und zerstören wichtige Funktionen und Strukturen im Körper; sie können oxidative Veränderungen verursachen und damit Schädigungen und Fehlfunktionen aller wichtigen Biomoleküle wie Nukleinsäuren (DNA und RNA), Proteine, Lipide und Kohlenhydrate.

Versuchsdurchführung: Humane Promyelozyten (Zelllinie HL60, ECACC 98070106) wurden als permanente Zelllinie in Routinekultur durch sechstägige Behandlung mit Di-methylsulfoxid zu sog. „funktionalen Neutrophilen“ differenziert. Dies sind Zellen, welche die Eigenschaften von phagozytierenden und entzündungsvermittelnden Zellen (neutrophi-le Granulozyten) im Blut besitzen. Nach Stimulation bilden diese Zellen in einem sog. oxi-dativen oder respiratorischen Burst Superoxidanion-Radikale, welche das Gewebe lokal zerstören können. Ein solcher Burst stellt nach der Einwanderung dieser Zellen aus dem Blut ins betroffenene Gewebe einen Teilaspekt des komplexen Entzündungsprozesses dar und kann durch die weitere Gewebezerstörung diesen Prozess dauerhaft in Gang halten. Die funktionalen Neutrophilen wurden durch Zugabe eines Phorbolesters (Phorbol-12-myristat-13-acetat; Sigma-Chemie, Taufkirchen) dazu angeregt, Superoxidanion-Radikale zu bilden. Die Radikale führen zu einer Spaltung des ebenfalls dem Versuchsansatz zuge-setzten Tetrazoliumfarbstoffes WST-1. Dabei ist die Menge der gebildeten Sauerstoffradi-kale direkt proportional zur Farbstoffspaltung, d.h. je mehr reaktive Radikale vorhanden sind, desto stärker ist die Farbstoffspaltung und damit auch die Änderung der optischen Dichte. Werden die von den Zellen gebildeten Radikale durch den Wirkstoff inaktiviert, so verändert sich die optische Dichte weniger stark. Es wurde die optische Dichte als Diffe-renzmessung ∆OD = 450 – 690 nm kontinuierlich aufgezeichnet und nach linearer Re-gression der erhaltenen Kurvenzüge in Form der Steigung in mOD/min ausgewertet. Die erhaltenen Ergebnisse wurden dann als Relativwerte im Vergleich zur unbehandelten Kon-trolle dargestellt und gegen die Konzentration aufgetragen. Eine schematische Darstellung der Vorgehensweise ist zum besseren Verständnis in Abb. 1 dargestellt.

Ergebnis: RINGANA CAPS „move“ inaktivierte die endogen gebildeten Sauerstoffradikale in einer dosisabhängigen Weise bis zur nahezu vollständigen Neutralisierung bei der ma-ximalen Testkonzentration von 5 mg/ml ( Abb. 2). Bereits ab einer Konzentration von 0,25 mg/ml und damit deutlich unterhalb der theoretisch berechneten Blutflüssigkeitskonzentra-tion wurde eine statistisch signifikante Inaktivierung der endogen gebildeten Radikale er-zielt. Im Bereich der berechneten Blutflüssigkeitskonzentration betrug die Wirksamkit zur Inaktivierung etwa 65% im Vergleich zur unbehandelten Kontrolle. In einem weiteren Serie von Experimenten mit den funktionalen Neutrophilen wurde auch die Stoffwechselaktivität der Zellen untersucht und dem Potenzial zur Inaktivierung der Radikale gegenüber ge-

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Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624

stellt. Dabei zeigte sich, dass die Wirkstoffe von RINGANA CAPS „move“ die Bildung der Radikale durch diese entzündungsvermittelnden Zellen zu etwa 90 bis 95% hemmen (Abb. 3).

Abb. 1: Schematische Darstellung zur Differenzierung von Promyelozyten zu funktionalen Neutrophilen, welche bei der Entstehung von entzündlichen Prozessen eine wichtige Rolle spielen. Nähere Erläuterungen im Text.

Stimulation durch einen Phorbolester

Bildung von Superoxidanion-Radikalen durcheinen oxidativen oder respiratorischen Burst

Spaltung des roten Farbstoffes unter Bildungeiner gelben wasserlöslichen Verbindung

Kontinuierliche Messung der optischen Dichteals Differenzmessung 450 – 690 nm

Wirkstoffe, welche endogengebildete Radikale entgiften

Funktionaler neutrophiler Granulozyt,welcher durch chemische Differenzie-rung aus einer Zellkultur mit Promyelo-zyten (Zelllinie HL60) erhalten wird.

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TTEESSTTBBEERRIICCHHTT RRIINNGGAANNAA CCAAPPSS „„ mmoovvee““

Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624

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Neutralisierung freier RadikaleHemmung der Radikalbildung

vollständige Inaktivierung der Radikale

Abb. 2: Dosisabhängige Inaktivierung von endogenen Sauerstoffradikalen durch RINGA-NA CAPS „move“. Auf der linken Seite ist repräsentativ ein Teil der direkten absoluten Messwerte in Abhängigkeit von der Wirkstoffkonzentration aufgetragen und auf der rech-ten Seite die prozentuale Inaktivierung der Radikale im Vergleich zur unbehandelten Kon-trolle. Angegeben ist der Mittelwert ± Standardabweichung aus jeweils drei Messungen. BF = Berechnete Konzentration in der Blutflüssigkeit nach vollständiger Resorption.

Abb. 3: Nachweis, dass es durch die Wirkstoffe in RINGANA CAPS „move“ in erster Linie zu einer Hemmung der Radikal-bildung durch die entzün-dungsvermittelnden Zellen (funktionale Neutrophile) kommt (gelbe Säulen).

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vollständige Inaktivierung

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Dartsch Scientific GmbH Geschäftsführer: Amtsgericht München HRB 169719 KSK Freudenstadt Oskar-von-Miller-Straße 10 Prof. Dr. rer. nat. Peter C. Dartsch Steuer-Nr. 119/124/10155 BLZ 642 510 60 D-86956 Schongau Diplom-Biochemiker USt-IdNr. DE 222586342 Kto-Nr. 400 624

5 Wirkung auf den Energiestoffwechsel von kultivie rten Knorpelzellen des Menschen

Hintergrund: Bei Arthrose kommt es durch Verschleiß, Alterung, Fehl- oder Nichtge-brauch zu einer Verstärkung der natürlichen Abnutzung. Durch den allmählichen Verlust des Knorpels, der beim Erwachsenen nicht mehr erneuerbar ist, können so dauerhaft Ent-zündungen und Schmerzen entstehen. Durch die Untersuchungen mit humanen primären Knorpelzellen sollte der Frage nachgegangen werden, ob RINGANA CAPS „move“ den Energiestoffwechsel dieser Zellen stimulieren und so möglicherweise durch die vermehrte Synthese von Kollagen und extrazellulärer Matrix einen Knorpelverlust ausgleichen kann.

Versuchsdurchführung: Isolierte Knorpelzellen des Menschen (Promocell GmbH, Hei-delberg, Abb. 4) wurden in einer Dichte von 20.000 Zellen/Vertiefung in 96-Loch-Platten ausgesät. Nach 3 Tagen, welche die Zellen zur Adhäsion und zur Normalisierung ihres Stoffwechsels brauchen, wurden sie durch die Zugabe von Phosphatpuffer mit 10 mM Glucose stimuliert und die verschiedenen Wirkstoffkonzentrationen von RINGANA CAPS „move“ zugesetzt. Der Energiestoffwechsel mit seinen verschiedenen Redoxprozessen führt dabei zu einer Spaltung und in der Folge zu einer Änderung der optischen Dichte des ebenfalls zum Ansatz zugegebenen Tetrazoliumfarbstoffes WST-1 (Roche Diagnostics, Mannheim). Dessen optische Dichte wurde als Differenzmessung ∆OD = 450 – 690 nm kontinuierlich für 180 min aufgezeichnet und nach linearer Regression der erhaltenen Kur-venzüge in Form der Steigung (30-90 min) in mOD/min ausgewertet.

Abb. 4: Knorpelzellen (Chondrozyten) des Menschen in Kultur. Auf der linken Seite ist ei-ne Kultur einen Tag nach der Aussaat und auf der rechten Seite nach einer Woche abge-bildet. Die rundlichen Strukturen sind Zellen, die sich gerade teilen. Olympus IX50 Invers-mikroskop mit Olympus E-10 Digitalkamera. Phasenkontrast-Verfahren.

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Ergebnis: Wie aus Abb. 5 ersichtlich, bewirkte RINGANA CAPS „move“ bereits bei der niedrigsten Testkonzentration von 0,1 mg/ml eine mehr als 35%ige Steigerung des Ener-giestoffwechsels der Knorpelzellen. Diese Stimulation blieb auf etwa diesem Niveau bis zu einer Konzentration von 1 mg/ml und nahm dann langsam ab. Dennoch betrug die Stimu-lation bei der höchsten Testkonzentration von 5 mg/ml noch annähernd 20%. Dieses Er-gebnis zeigt, dass RINGANA CAPS „move“ im Konzentrationsbereich, welcher für die in vivo-Situation relevant ist, den Stoffwechsel und damit die Aktivität von kultivierten Knor-pelzellen stimuliert. Dies wiederum kann zu einer vermehrten Synthese von Kollagen und extrazellulärer Matrix in vivo führen.

Abb. 5: Stimulation des Energiestoffwechsels von kultivierten Knorpelzellen des Men-schen. Angegeben ist der Mittelwert ± Standardabweichung aus jeweils drei Messungen. BF = Berechnete Konzentration in der Blutflüssigkeit nach vollständiger Resorption.

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0 0,1 0,25 0,5 1 2,5 5Testkonzentration in mg/ml

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