Upload
magdalene-heiden
View
116
Download
3
Embed Size (px)
Citation preview
Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse
Gliederung
Überblick Transgene Mäuse Rückkreuzungen Keimbahn-„Knockout“-Mäuse Konditionelle „Knockout“-Mäuse Zusammenfassung
Überblick
Ziel: Charakterisierung bestimmter Gene aufgrund von Genveränderungen
Transgene Mäuse: zusätzliche oder veränderte Gene im Genom
„knockout“ Mäuse: ein Gen wird komplett deletiert
Aufteilung in Keimbahn- und konditioneller Knockout
Erstellung transgener Mäuse
Auslösung einer Superovulation und Paarung
Entnahme der befruchteten Eizelle und Injektion der DNA
Übertragung der behandelten Eier in eine scheinträchtige Maus
Integration des Gens in einige Nachkommen
Quelle: Janeway
Rückkreuzungen
Einschleusen der Transgene
Nachkommen sind genetisch heterogen
Rückkreuzung mit gewünschtem Stamm
Fortgesetzte Rückkreuzung
Quelle: Janeway
„Knockout“-Mäuse
Gen
Einbau AB-Resistenz
Keine IntegrationAbtöten der Zelle durch AB
Einbau HSV-tk an den Enden
Integration an beliebiger StelleAbtöten durch Ganciclovir
Einbau an der richtigen Stelle durch homologe RekombinationResistenz
Quelle: Janeway
Züchtung „Knockout“-Mäuse
Transfektion von ES-Zellen mit Knockout- Konstrukt
Injektion der ES-Zellen in Blastocysten
Reimplantation in eine scheinträchtige Maus
Enstehung einiger chimärer Mäuse
Quelle: Janeway
Konditionelle „Knockout“-Mäuse
Problem: Deletion eines Gens, das fürs Überleben essentiell ist (rezessiv letales Gen)
Erstellung homozygoter Tiere nicht möglich
Verwendung RAG--Mäuse Nutzung Cre-loxP-System
Verwendung von RAG-defekten Mäusen
Injektion der ES-Zellen in RAG--Blastocyste
Chimäre Maus, deren Lymphozyten von den ES-Zellen abstammen
RAG--Maus: keine B- und T-Zellen
Quelle: Janeway
Cre-loxP-SystemGen wird von loxP flankiert
Cre-Rekombinase schneidet das Gen raus
Quelle: Janeway
Zusammenfassung
Transgene Mäuse:-zusätzliches oder verändertes Gen-Injektion in Eizelle, Einbau unspezifisch Knockout Mäuse:-Keimbahn: Deletion eines Gens in allen
Zellen, Einbau über homologe Rekombination (AB-Resistenz, HSV-tk)
-Konditionell: Gewebespezifisch oder induziert, RAG-, Cre-loxP
Vielen Dank für die Aufmerksamkeit