(Aus der Abteilung fiir Krebsforschung des Staatlichen Instituts ffir experimentelle Therapie in Frankfurt s. M. - - Direktor: Geheimrat Prof. Dr. /~. Otto.)

Uber das Vorkommen yon d (--)-Glutamins~ure in Tumorproteinen. I.

Von Carl Dittmar.

(Eingegangen am 9. September 1929.)

Vor einiger Zeit berichteten F. K6gl und tt . Erxleben 1 fiber eine chemisch erfaBbare Ver/~nderung yon Tumorproteinen gegenfiber nor- malen Eiweil~stoffen. Die Verf. konnten aus dem Eiwei$ yon Mamma- carcinomen, OvarJaltumoren und yon Brown-Pearce-Kaninchentumoren dureh S/~urehydrolyse Aminos/~urer~ (Glutamins/iure, Leucin, Lysin, Oxyglutamins/~ure, Valin) mi~ verminderter optischer ])rehung isolieren, was auf ein Vorkommen der optischen Antipodea dieser Aminos/iuren neben den natfirlichen 1-Formen im Tumoreiwei8 schlieBen ]/~Bt. Be- sonders s tark war der Ausschlag bei der Glutamins/~ure. Nach K~]ls Berechnung kann diese Aminos/iure im Tumoreiweil~ (Brown-Pearce- Tumor) bis zu 40% aus der unnatfirlichen d ( - - ) -Fo rm bes~ehen. Bei dem relativ hohen Gehalt der Proteine gerade an dieser Aminosaure war der Befund auch ffir die J~tiologie der Tumoren yon grSl3ter Bedeutung. Nun wurden K6gls Untersuchungen inzwischen yon anderer Seite'-' nach- gepriift und konnten n icht bestiitigt werden. Die dabei angewandte Methode zur Is01ierung der Glutaminsiiure unterschied sich jedoch yon der K6gls. Die Aminodicarbons~turen wurden zuniichst zur Vorreinigung als Ca- bzw. Ba-Salze in alkoholiseher LSsung ausgefiillt und dann erst aus den Dicarbons~uren die Glutamins~iure als Chlorhydrat isoliert, wiihrend K6gldiese Vorreinigung nicht vornahm. K6gl ~ wendet gegen diese Methode ein, dall bei Fiillung yon d, 1-Calciumglutaminat mit 90proz. Alkohol die d( - - ) -Form 10real ]Sslicher sei wie die ](-}-)-Form, so dalt dann die d ( - - ) -Form herausgereinigt werde und nur die l (+ ) - Form isoliert werden kSnne. Wir haben uns daher entschlossen, eben- falls die Ergebnisse KSgls naehzuprfifen nach dem yon ibm angegebenen Verfahren zur Isolierung der Glutaminsiiure. Wir verwandten ffir unsere Versuche Tumoreiweil~ aus t~ous-Sarkomen, Jensen.Sarkomen, aus M~iusecarcinomen und -sarkomen (auch aus solchen, die mit Benzpyren erzeugt waren) und aus Miiusechondromen; zur Kontrolle wurde EiweiIl aus Rat ten- und Hfihnermuskulatur untersucht.

])as Veffahren der Isolierung entsprach dem yon K6gl angegebenen. Das Eiweilt wurde mit konzentrierter Salzs~ure hydrolysiert. ])ie Hydrolysate zur Entfernung der Salzsaure mehrmals im Vakuum eingedampft, durch Schiitteln

398 C. Dit tmar: Vorkommen yon d(--)-Glutamins~ure in Tumorproteinen. I.

mit Kupferoxydul gereinigt, wobei die Aminos~turen als Kupfersalze in L6sung gehen. Durch Einleiten yon Schwefelwasserstoff in die LSsung wurden die Amino- s~uren frei gemacht, dann wurde im Vakuum eingeengt und in die eingeengte L6sung unter Eiskiihlung Chlorwasserstoff bis zur S~ttigung eingeleitet. Nach Impfung mit einer Spur reinem Glu~aminsiiurechlorhydrat lie~en wit die LSsung l~ngere Zeit ira Eisschrank stehen. Wit machten die Erfahrung, dab das Glutamin- .s~urechlorhydrat dann sehr langsam, oft erst nach Wochen ausfMlt. Die aus- gefallene Krystallmasse wurde abfiltriert mit wenig konzentrierter Salzsi~ure gewaschen und in m6glichst wenig verdtinnter Salzs~ure gel6st, dann wurde bei Eiskiihlung mit Chlorwasserstoff gesi~ttigt, wobei das Chlorhydrat wieder aus- tiel; dieses Verfahren der Reinigung wurde wiederholt, dann hatten die Pr~parate konstanten Schmelzpunkt und konstante Drehung.

W i r b r i n g e n a n b e i d ie W e r t e ff ir da s i so l ie r te G l u t a m i n s ~ u r e c h l o r -

h y d r a t aus E i w e i g y o n Rous-Sarkomen, y o n Jensen-Sarkomen u n d y o n

H i i h n e r m u s k u l a t u r u n d z u r K o n t r o l l e f i i r re ines Glu tamins /~urech lo r -

h y d r a t . D ie R e i n d a r s t e l l u n g d e r G l u t a m i n s / i u r e aus d e n a n d e r e n Tu-

m o r e n i s t n o c h n i c h t abgesch lo s sen .

l-Iiihnermuskel . . . . t~ous-Sarkom . . . . densen-Sarkom . . . . Kontrolle . . . . . .

Trockert- Glutaminsfiure { substanz chlorhYd r. rein I

20 g 0,9 g I 25 g 0,7 g I 18 g 0,6 g

reines Olutamins~urechlor- hydrat I

Schmelzpunkt OPt. Drehung

208 ~ 208 ~ 208 ~ 209 ~

32,0 ~ -~ 32,0 ~ ~- 32,0 ~ -~ 32,1 ~

Z u r D r e h u n g s b e s t i m m u n g w u r d e e ine 5 proz. L S s u n g y o n G l u t a m i n -

s a u r e c h l o r h y d r a t in 9p roz . Salzs/~ure he rges t e l l t .

Sdmtllche Prdparate zeigen also praktisch denselben Schmelzpunkt und dieselbe optische Drehung, w / i h r e n d K6gl bei se inen M e s s u n g e n bei T u m o r -

e iwe i l~g lu t aminsau re v e r s c h i e d e n e S c h m e i z p u n k t e u n d v e r m i n d e r t e

Opt i sche D r e h u n g e n b e o b a c h t e t h a t :

Men schliches Mammacarcinom . . . . Menschliches Ovarialcarcinom . . . . K a n i n c h e n - B r o w n - P e a r c e - T u m o r . . . Kaninchenherz . . . . . . . . : . Kaninehenlunge . . . . . . . . . . . .

Schmelzounkt O13t. Drehung

1 9 6 ~ 199 ~ 194 ~ 208 ~ 209 o

21,8 ~ ~- 4,6 ~ ~- 31,3 ~

31,4 ~

E s i s t a l l e r d i n g s zu b e m e r k e n , d a b es s ich bei d e m y o n K6gl u n t e r ,

s u c h t e n T u m o r e i w e i B aussch l ieBl ich u m so lches aus C a r c i n o m e n h a n d e l t , e s i s t mSg l i ch , dal~ d ie v o n KSgl g e f u n d e n e E i w e i B v e r ~ n d e r u n g n u r f i i r

e p i t h e l i a l e T u m o r e n z u t r i f f t .

Literaturverzeichnis. 1 KSgl, F., u. H. Erxleben, I-Ioppe-Seylers Z. ~58, 57--95 (1939). - - 2 Kbgl, F.,

~a. H. Erxleben, Naturwiss. ~7, 486 (1939).