23. September 2015 Von Stefanie Herndler und Nadine Mayerhofer

Tec-Maniatag23. September 2015Von Stefanie Herndler und Nadine Mayerhofer

Geschichte der Kinderkrebsforschung

1837: St. Anna wurde als erstes Kinderspital Österreichs eröffnet

1970: Beginn der Behandlungen von krebskranken Kindern

1988: Start der Forschungsarbeiten2009: Erweiterung des Forschungsinstituts auf

12 Arbeitsgruppen auf den Gebieten: Tumorzytogenetik, Immunologie, Molekularbiologie, Zellbiologie, Klinische Forschung

Wir durften einen Tag in der Abteilung Molekularbiologie unter der Leitung von Univ. Prof. Dr. Heinrich Kovar verbringen. Diese Abteilung spezialisiert sich auf die Erkrankungen Ewing Sarkom (Knochentumor) und LCH (Langerhans Zell Histiozytose).

Western BlotNachweis von Proteinen

Arbeitsschritte:1. Gelanfertigung2. Proben auf Gel laden3. Elektrophorese des Gels4. Aufbau des Transfers vom Gel auf

Membran5. Elektotransfer6. Membraneinfärbung7. Blockierung unspezifischer Bindungen

Gelanfertigung

Man braucht 2 verschiedene Gele , ein Trenngel und ein Sammelgel. Dafür verwendet man 6 Lösungen. Diese Gele werden zwischen zwei Glasplatten gefüllt und eine Art Kamm oben hineingesteckt.

Proben auf Gel ladenZuerst werden Zellen aufgeknackt und daraus das Protein entnommen.Durch Entfernen des Kammes entstehen Taschen, in die Proteine eingefüllt werden.

Elektrophorese vom GelDie Glasplatten werden in eine Halterung eingeklemmt und in eine Plastikbox gegeben. Diese wird mit einer Lösung gefüllt. Anschließend wird der Deckel geschlossen und an den Strom angeschlossen. Dieser Vorgang dauert zwischen 20 und 40 Minuten. Dabei wandern die Proteine von oben nach unten durch das Gel. Das Gel funktioniert dabei wie ein Sieb, bei dem die großen Proteine sich oben und die kleinsten sich unten ansammeln.

Aufbau des Transfers von Gel auf MembranDabei wird ein dünner Schwamm, drei Lagen dickes Papier, die Gelschicht, eine Membran, drei Lagen Papier und wieder ein dünner Schwamm aufeinander gelegt und in einer Pufferlösung eingeweicht.

ElektrotransferIn einer speziellen Halterung wird dieser „Sandwich“ eingespannt. Anschließend kommt die Halterung in eine spezielle Plastikbox. Diese muss mit Eis gekühlt werden und wird wieder an den Strom angeschlossen. Dieser Vorgang dauert 1 Stunde.Dabei wandern die Proteine aus dem Gel in die Membran.

MembraneinfärbungDer „Sandwich“ wird vorsichtig auseinander genommen und die Membran in eine Schüssel mit roter Spezialfarbe gelegt.Anschließend wird ein paar Minuten geschwenkt. Danach wäscht man die Membran mit entsalztem Wasser ab. Zum Schluss wird die Membran im Computer eingescannt.

Blockierung unspezifischer BindungenDabei wird die Farbe wieder entfernt. Dieser Vorgang dauert zirka eine Stunde. Anschließend werden Antikörper aufgebracht. Dabei sieht man welche Proteine mit diesem Antikörper reagieren.

DANKE

Uns hat es sehr gefallen, da wir sehr viel ausprobieren durften!

Außerdem fanden wir es interessant, dass wir einen Tag mit den netten Damen Gunhild und Karin , die uns das

alles gezeigt und vieles erklärt haben , verbringen durften!