C O - I MMUNOPRÄZIPITATION. E IN P ROTEINGEMISCH …

CO-IMMUNOPRÄZIPITATION

EIN PROTEINGEMISCH….

…WIRD MIT ANTIKÖRPERN VERSETZT…

…DIESE BINDEN SPEZIFISCH AN DAS „KÖDERPROTEIN“,…

…WELCHES WIEDERUM MIT DEM „BEUTEPROTEIN“ ASSOZIIERT IST…

DIE ZUGABE SOG. BEADS…

PROTEIN A BZW. G BINDEN AN ANTIKÖRPER

…FÄNGT DIE GANZE MEUTE EIN…

…NUR NOCH ABZENTRIFUGIEREN, UND VOILÀ!

FAZIT

Vorteile: Der Standard zum Nachweis von Protein-Protein-

Interaktion Kann zum Nachweis der De-novo-Biosynthese

von Proteinen genutzt werden

Nachteile: Begrenzte Verfügbarkeit von spezifischen

Antikörpern Auftreten des sog. Prozoneneffekts erschwert

Durchführung

DER PROZONENEFFEKT

MUTAGENESE-METHODEN

SINN UND ZWECK

Ziel: Erzeugung neuartiger Proteine durch Mutagenese, Verbesserung bereits bekannter Proteine

Zwei Möglichkeiten: Zufällige Mutagenese Gezielte Mutagenese

GEZIELTE MUTAGENESE

Mit Hilfe rekombinanter Gentechnik gezielte Veränderung der DNA

Drei Arten von gezielten Veränderungen: Deletion Substitution Insertion

DELETION

5‘

5‘

5‘

5‘

3‘

3‘

3‘

3‘

DELETION

5‘

5‘

‘

5‘

‘

5‘

3‘3‘

3‘

3‘

SUBSTITUTION

5‘

5‘

5‘

5‘

3‘

3‘

3‘

3‘

INSERTION

5‘

5‘

5‘

5‘3‘

3‘

3‘

3‘

INSERTION5‘ 5‘

5‘

5‘

5‘

5‘

3‘

3‘3‘

3‘

3‘

3‘

VIELEN DANK FÜR DIE AUFMERKSAMKEIT

ENDE