A Chrom Journal 2 DEde.vwr-cmd.com/ex/downloads/chrom/journal0701/de/ChromJournal_0107_DE.pdf · ihrer hohen Permeabilität nur einen relativ geringen Rückdruck auf, so dass sie

vwr.com

Spezielle Probengläser für dieGC-Headspaceanalytik.

Seite 16-17

Schnelle präparativeChromatographie mit demVWR LaPrep® System undden Chromolith® Säulen.

Seite 20-21

AUSGABE 2 - FEBRUAR 2007Produkte für die Chromatographie

ChromJournal

vwr.com

LaChrome Elite® - Wirgarantieren Ihre HPLC-Anwendung!

Seite 10-11

Zeitsparende Softwarepaketevon VWR International!

Seiten 12

Schnelle Aufreinigung von Proteinen mitChromolith® SemiPrep.

Seite 22-23Alle neuesten Informationen undAktionen finden Sie unter vwr.com

Ein frohes Neues Jahr und herzlich Willkommen zur neuesten Ausgabe

des ChromJournals.

Wie immer ist es randvoll gefüllt mit Informationen zu neuen

Produkten und Applikationen aus dem Bereich der Chromatographie.

Diese Ausgabe enthält:

Acrodisc® von Pall und Mini-UniPrepTM von Whatman - wichtige

Verbrauchsmaterialien für die effektive Probenvorbereitung.

Das neue LaChrom Elite® System von VWR mit interessanten Softwarepaketen

für die automatische Methodenentwicklung und -validierung.

Kundenapplikationen zu Chromolith, sowie neue Produkte für

GC-Anwender.

Wir wünschen Ihnen viel Spaß beim Lesen und freuen uns auf Ihre

Kommentare und Anfragen zu dieser Ausgabe. Sie erreichen uns ganz

einfach unter [email protected].

Probenvorbereitung Acrodisc® Spritzenvorsatzfilter für die Analyse 3

Drei Mal schnellere Entfernung von unerwünschten Proteinen 4-5

Analytische HPLC Schelle Analyse von Peptiden mit geringer Bindungsneigung 6-7

Applikation vom Advanced Biotechnology Centre am Imperial College London 8-9

Die neue LaChrom Elite® Generation 10-11

Einzigartige Software-Tools zum Zeitsparen im Labor 12

VWR-Hitachi L-8900 Aminosäureanalysator 13

DC Fälschungssicheres Arbeiten mit GLP-Platten von Merck 14

Gaschromatographie Die neue Generation von Hamilton-Spritzen für 15Autosampler von CTC Analytics

Chromacol Headspace-Flaschen und -Verschlüsse 16-17

SGE sorgt für längere Lebenszeit bei forteTM Säulen 18

BioChromatographie Wesentliche Technologien für die Aufreinigung von Biomolekülen 19

Präparative Schnelle präparative Chromatographie mit dem 20-21Chromatographie VWR LaPrep® System in Kombination mit Chromolith®

Prep RP-18e Säulen

Schnelle Aufreinigung von polaren Verbindungen 22-23mit Chromolith® SemiPrep RP-18

EditorVWR International Europe bvbaHaasrode Researchpark Zone 3Geldenaaksebaan 4643001 LeuvenBelgium

CopywritingVWR International Europe bvba

Layout and typesettingMarketing Services VWR

PrintingCentral Production, Paris, FranceNo part of this publication may be reproduced or copied without priorpermission by writing of VWR International Europe.

Run45.000 copiesPublication date: February 2007

ChromJournal

In dieser Ausgabe

VWR C h r o m J o u r n a l Ausgabe 2 F e b r u a r 2 0 0 72

Wie können Sie sich auf unsere HPLC-Zertifizierung verlassen?

VWR C h r o m J o u r n a l Ausgabe 2 F e b r u a r 2 0 0 7 3

Vor mehr als 30 Jahren

revolutionierte Pall Life Sciences

mit der Entwicklung des Acrodisc®

Spritzenvorsatzfilters die

Probenvorbereitung in der

analytischen Chemie. Heute

produziert Pall Spritzenvorsatzfilter

in erstklassiger Qualität zur

Probenvorbereitung und für

Freisetzungstests.

Da die HPLC (High Performance

Liquid Chromatography) und

andere analytische Methoden sehr

empfindliche Verfahren sind und

als qualitative und quantitative

Techniken dienen, ist es wichtig,

die Integrität der Proben zu

wahren.

Filter für HPLC-Anwendungen sind so konzipiert,dass sie die Genauigkeit durch Entfernenunerwünschter Partikel erhöhen. Wird jedoch der falsche Filter verwendet, stellt dieser eineKontaminationsquelle in Form von extrahierbarenSubstanzen dar, welche vom Filtergerät in dieProbe eluieren. Extrahierbare Substanzen könnendie Analyseergebnisse gefährden, indem siefalsche Quantifizierungen und störende Peaksverursachen.

Extrahierbare Substanzen können in Form vonMaterialbestandteilen von Membranen oderGehäusen vorliegen, oder in Form einesBestandteils, der während der Herstellung mitdem Produkt in Berührung kam. Das Auftretenextrahierbarer Substanzen in einemSpritzenvorsatzfilter hängt von der Löslichkeit derBestandteile in der Probenflüssigkeit und von derAuswahl eines möglichst „reinen“Ausgangsstoffes für die Probenvorbereitung ab.

Die Löslichkeit steht in Zusammenhang mit derchemischen Verträglichkeit. Mit steigenderLöslichkeit von Membran- bzw.Gehäusebestandteilen in der Probe steigt dieMenge der extrahierbaren Materialien. Deshalbist es wichtig, die Kompatibilität desSpritzenvorsatzfilters mit der Probenflüssigkeit zuberücksichtigen.Membranhersteller wenden eigene Formeln undunterschiedliche Fertigungstechniken an. Darumunterscheiden sich die Membranen von Pall Life

Sciences – Acrodisc® und Acrodisc® PSFSpritzenvorsatzfilter – von anderen, ähnlichenProdukten. Die den jeweiligen Rohmaterialieneigene Qualität, das Ausmaß der Qualitätskontrolle,Membranwasch- und Nachbehandlungsverfahrenwirken sich allesamt auf die Menge derextrahierbaren Materialien aus.

Pall Life Sciences wählt für seine Membran-produkte bewusst hochwertige Materialien ausund wendet intensive Reinigungsmethoden an,um das Auftreten unerwünschter extrahierbarerSubstanzen auszuschließen. Darüber hinaus bestehtunser Polypropylen-Gehäusematerial, das auchfür medizinische Geräte von Pall Life Sciencesverwendet wird, aus höchstwertigem Kunststoffmit einem minimalen Gehalt an Zusatzstoffen.Es hat die USP-Kunststoffprüfung (United StatesPharmacopeia) „Biological Reactivity Test, In Vivo<88>“ bestanden.

Durch die HPLC -Zertifizierung von Pall Life Sciencesist sichergestellt, dass Analyseergebnisse nicht durchextrahierbare Filtermaterialien beeinträchtigt werden.

Unsere Membranen wurden in anerkannten HPLC-Verfahren auf Kompatibilität mit üblichen HPLC-Lösungsmitteln (Wasser, Acetonitril und Methanol)getestet. Zusätzlich werden Proben der gesamtenProduktlinie der Acrodisc® Spritzenvorsatzfilter vorder Markteinführung bewertet, um den niedrigenGehalt an im UV-Licht nachweisbarenextrahierbaren Substanzen zu überprüfen.

Acrodisc® Spritzenvorsatzfilter für die Analyse – Qualität und Leistung

Extrahierbare Substanzen

Informationen zu unseren Produkten erhalten Sie bei Ihrem lokalen WR-Ansprechpartner oder senden Sie uns eine EMail an: [email protected]

Bestellen Sie unseren neuen technischenLeitfaden zur Probenvorbereitung für die Analyse„Use of Acrodisc® Syring Filters for AnalyticalSample Preparation; Including HPLC andDissolution Testing“. Er enthält umfassendeInformationen zu Palls HPLC-Zertifizierungs-methoden zu extrahierbaren Substanzen sowieUntersuchungen zur Adsorption von Wirkstoffen,welche die Qualität der Produktlinie der Acrodiscund Acrodisc PSF Spritzenvorsatzfilterdemonstrieren.Weitere Informationen zu unseren Produktenfür die Probenvorbereitung zur Analyse erhaltenSie bei Ihrem VWR-Kundenbetreuer vor Ortoder auf der Website www.pall.com/lab.

Weitere Informationen erhalten Sie mitabgebildeter Brochüre. Prospekt-Nummer:PALL4005-EN.

Probenvorbereitung

>


Die Reproduzierbarkeit der Entfernung vonProteinen aus Plasmaproben wurde unterAnwendung des MUP-PPT-Verfahrens auf 40Replikate von normalem Humanplasmagemessen. Das Filtrat wurde aus dem Mini-UniPrep™ entfernt, in einemMikrozentrifugenröhrchen getrocknet,

anschließend erneut in Salzlösung suspendiertund das Protein durch Micro-BCA quantifiziert.Die Proteinentfernung in Prozent wurde durch Vergleich der Proteinkonzentrationen der Plasma/ACN-Gemische vor und nach der Filtration ermittelt.

Reproduzierbarkeit der Proteinentfernung

Effiziente Proteinentfernung für verschiedene Probentypen

Drei Mal schnellere Entfernung von unerwünschten Proteinen

Es wurde die Wirksamkeit der Entfernung vonProteinen aus verschiedenen Probentypenbeurteilt. Plasma, Serum und Vollblut (verdünnt1:1 in H2O) wurden dem Mini-UniPrep PPT-Verfahren unterzogen. Dieselben Proben wurdenauch konventionell durch Zentrifugierungaufgereinigt. Anstelle von Mini-UniPrep™wurden 1,5 ml-Mikrozentrifugenröhrchen

verwendet und die Proteine 5 Minuten lang bei10.000 x g abzentrifugiert. Der Überstand wurdezur Analyse in ein separates Röhrchen aspiriertund die Proteine wie zuvor beschrieben mittelsMicro-BCA quantifiziert. Alle Ergebnisse werdenals Verringerung der Proteinkonzentration inProzent angegeben.

Spritzenlose Mini-UniPrep™ (MUP)

von Whatman bieten eine

hocheffiziente und einfache

Alternative um unerwünschte

Proteine vor der HPLC/MS-Analyse

zu entfernen. Die Methode ist ideal

für die analytische Charakterisierung

in der Arzneimittelforschung

geeignet und entfernt Proteine

mithilfe von Acetonitrilpräzipitation

und Filtration aus Plasma, Serum,

Vollblut und anderen biologischen

Flüssigkeiten. Durch die "All-in-one"-

Filtrations- und Aufnahmegefäße

reduziert sich der Zeitaufwand

erheblich. Die manuellen

Transferschritte, die bei der

Zentrifugalaufreinigung

problematisch sind, entfallen.

Probentyp

Probenvorbereitung


erlaubt die gleichzeitige Berarbeitung von biszu sechs Mini-UniPrep Filtern. Dieses praktischeWerkzeug beschleunigt die Probenvorbereitungund senkt das Risiko eines Karpaltunnel-Syndroms.

Der Mini-UniPrep™ Kompressor


Merkmale und Vorteile

Bestellinformationen

• Einfache Ein-Schritt-Methode mit Einzelröhrchen

Keine Zentrifugierungs- und Aspirationsprobleme durch Transferschritte

• Drei Mal schnellere Probenvorbereitung

Aufreinigung von 6 Proben in 3 Minuten, 48 Proben in weniger als 30 Minuten

• >99 % Proteinentfernung bei Plasmaproben

Zur Quantifizierung von Verbindungen und für eine längere Säulenlebensdauer

• Selbstdichtende Septa für wiederholte Injektionen

Schutz vor Verdampfung und Wahrung der Probenintegrität

• Kompatibel mit allen gängigen Autosamplern

Best.-Nr. Porengröße Medien Menge

514-8075 0,45 µm PTFE 100/Pkg516-6356 0,45 µm PTFE 1.000/Pkg516-6351 Kompressor, 6 Positionen 1


Stabile Retentionszeiten bei hohen FlüssenDer Flussbereich des LaChrom Elite®-Systems bis zu 10 ml/min ist für die schnelle Chromatographiemit monolithischen Säulen von 3 oder 4,6 mm Innendurchmesser ideal. Um eine hohe Stabilität derPeak-Retentionszeiten und Flächen zu gewährleisten, bietet das System eine sehr hohe Fluss- undLösungsmittel-Gradienten-Präzision auch bei hohen Fließgeschwindigkeiten.

Noch schneller mit FlussgradientenDer niedrige Rückdruck der monolithischen Säulen ermöglicht die Anwendung von unterschiedlichenFließgeschwindigkeiten während eines Chromatogramms. Zum Beispiel kann der Fluss an den Stellenerhöht werden, an denen keine interessierenden Peaks oder gut aufgelöste Peaks erscheinen oderauch zum Spülen und Reäquilibrieren der Säule. Die Voraussetzung für stabile Retentionszeiten istwiederum eine sehr hohe Präzision solcher Flussgradienten (s.Abb. 3+4).

Vorheizung des EluentenBei einer Säule, die bei 1 ml/min und 60 °C in einem Säulen-Thermostat ohne Eluentenvorheizungbetrieben wird, beträgt der lineare Temperaturgradient auf der Säule immerhin 7,6 °C. Dies kannzu einer Verschlechterung der Trennleistung und der Peakform führen. Daher ist eine effizienteEluenten-Temperierung bei höheren Fließgeschwindigkeiten besonders wichtig. Die Vorheizzone derLaChrom Elite®-Säulen-Thermostate ermöglicht es, die Länge der vorgeheizten Verbindungskapillarean die jeweilige Fließgeschwindigkeit anzupassen.

Schnelle Analytik mit einem Standard HPLC-System

Auf Kieselgel basierende monolithische Säulen haben sich inzwischen inForschung und Routineanalytik wegen Ihrer phantastischen Eigenschaften alsvorteilhafte Alternative zu Säulen mit partikulären Sorbentien durchgesetzt.Ein besonderer Vorteil, der sich aus der hohen Permeabilität dieser Säulenergibt, ist die Möglichkeit sie bei erhöhten Fließgeschwindigkeiten unterErhalt der sehr guten Trennleistung zu betreiben und so die Analysenzeitenerheblich zu verkürzen. Chromolith®-Säulen mit 4,6 mm Innendurchmesserkönnen z.B. mit Fließgeschwindigkeiten bis zu 9 ml/min betrieben werden,Chromolith®-Säulen mit 3 mm Innendurchmesser mit bis zu 4 ml/min,wodurch sich die Analysengeschwindigkeit um das 3- bis 10-fache erhöhenlässt. Trotz dieser hohen Fließgeschwindigkeiten bauen diese Säulen wegenihrer hohen Permeabilität nur einen relativ geringen Rückdruck auf, so dasssie mit Standard-HPLC-Systemen betrieben werden können.Um alle Anwendungsmöglichkeiten ausnutzen zu können, die durch diebesonderen Eigenschaften der monolithischen Säulen eröffnet werden,werden jedoch einige spezielle Anforderungen an das HPLC-System gestellt(s.u.). Das LaChrom Elite® HPLC-System von VWR-Hitachi wurde schon bei derEntwicklung im Hinblick auf die Anwendung von Chromolith®-Säulen mitdiesen speziellen Funktionen ausgestattet.

>Abbildung 1. Schnelle HPLC-Analyse vonSüßstoffen in einem Cola-GetränkHPLC-System: VWR-Hitachi LaChrom Elite®

Säule: Chromolith® Performance 100 mm x 4.6 mmEluent: Puffer / Acetonitril-GradientFluss: 4 ml/minWellenlänge: 220 nmTemperatur: 30 °C.

Analytische HPLC

La Chrom EliteSystem!



Schnelle Detektorreaktion

Heutige HPLC-Detektoren haben variable Ansprechzeiten, die dem jeweiligen Chromatogrammangepasst werden können, um die Ergebnisse zu optimieren. So lässt sich durch eine geeigneteWahl der Detektoransprechzeit das im Vergleich zu den chromatographischen Peaks hochfrequenteRauschen weitgehend unterdrücken, wodurch die Nachweisempfindlichkeit erhöht wird. Schnelleluierende Peaks erforden jedoch sehr kurze Ansprechzeiten der verwendeten Detektoren, damit diePeakformen richtig wiedergegeben werden und mit maximaler Empfindlichkeit gemessen werdenkann. Für die schnelle Chromatographie können bei den LaChrom Elite®-Detektoren besonderskurze Ansprechzeiten eingestellt werden.

FazitSchnelle Chromatographie lässt sich hervorragend mit Standard-HPLC-Systemen unter Verwendungvon monolithischen Kieselgelsäulen betreiben, die aufgrund ihres geringen Rückdruckes dasArbeiten mit erhöhten Fließgeschwindigkeiten zulassen. Um alle Vorteile dieser Säulen ausnutzen zu können, wurde das LaChrom Elite® HPLC-System mit folgenden Funktionen und Spezifikationenausgestattet:• Flussbereich bis 10 ml/min• hohe Fluss- und Lösungsmittelgradienten-Präzision auch bei hohen Fliessgeschwindigkeiten• Flussgradienten mit hoher Präzision• Eluenten-Temperierung• sehr kurze Detektoransprechzeiten.

Abbildung 3. Schnelle Chromatographie miteinem kombinierten Lösungsmittel- undFlussgradienten sehr hoher Präzision,Überlagerung von 10 LäufenProbe: 7 PhenoleHPLC-System: VWR-Hitachi LaChrom Elite®

Säule: Chromolith® Performance 100 x 4.6 mmEluent: Wasser + 0,1% Phosphorsäure /

Acetonitril-GradientFluss: 4 ml/min, Programm sieheDetektion: L-2450 DAD-DetektorTemperatur: 40 °C

Abbildung 2. Schnelle HPLC-Trennung von 8Sulfonamiden mit einer 3 mm Chromolith®-Säule nach automatischer Trennoptimierungmit der ChromSword® Auto SoftwareHPLC-System: VWR-Hitachi LaChrom Elite®

Säule: Chromolith® PerformanceRP-18e 100-3 mm

Eluent: Wasser / Acetonitril (+ 0.1%TFA)-GradientFluss: 2 ml/minDetektion: L-2455 DAD-DetektorTemperatur: 45 °C

Abbildung 4.Programmierung des LaChrom Elite®

Pumpenprogramms mit dem EZChrom Elite®

Chromatographie-Datensystem

Wolf-Dieter Beinert und Hans-Peter ScholzVWR International GmbHScientific InstrumentsHilpertstr.20 AD-64295 [email protected]


Applikation vom Advanced Biotechnology Centre am Imperial College London

Ian MOSS - Peptide Synthesis Manager, ABC

Das Advanced Biotechnology Centre (ABC) am Imperial College London ist

eine zentrale Einrichtung, die Peptidsynthese-, DNA-Sequenzierungs- und

GeneScan-Service für das College und für Forscher weltweit bereitstellt.

Der Service für Peptidsynthe setzt Reversed-Phase-HPLC in der Qualitätskontrolle und zurAufreinigung von Peptidprodukten ein. Die fürden Service erforderliche Analysenzahl und dievariablen physikalisch-chemischenEigenschaften von Peptiden stellen hoheAnforderungen an die Säulenleistung. Zweiwichtige Faktoren für unseren Service in Bezugauf Reversed-Phase-Säulen sind 1) die Möglichkeit, mit hohen Flussratenarbeiten zu können, um die Analysendauerohne Leistungseinbußen zu minimieren, und

2) die Möglichkeit, Peptide unterschiedlichsterGröße und Hydrophobie binden und eluieren zukönnen.

Die Spezifikation der Chromolith Reversed-Phase-Säulen deutete darauf hin, dass sieunseren Anforderungen entsprechen würden.Besonders wichtig war es für uns, eineAnalysedauer von weniger als fünf Minuten zu erreichen. Eine Chromolith RP 18,50 mm x 4,6 mm Säule wurde wie folgt getestet.

Eine Mischung von zwei nicht verwandtenPeptiden A und B (OVA 323-339 undmMOG35-55) wurde bei vier verschiedenenFlussraten und konstanter Eluentenmengeanalysiert. Analysenbedingungen:• Equilibrierung: 94,5 % A, 5,5 % B 4 ml• Probenmenge: 5 µl ca. 1 mg/ml• Probenbeladung: 94,5 % A, 5,5 % B 4 ml• Gradient: 94,5 % A, 5,5 % B bis 100 % B

in 16 ml• Spülschritt:100 % B, 4 ml• Flussraten: 1,6 ml/min, 4 ml/min, 8 ml/min,

16 ml/min• UV-Detektion: 220 nm

Abb. 1 bis 4 zeigen Chromatogramme beiverschiedenen Flussraten. Es ist zu erkennen,dass sich die Auflösung und Peakform bei denverschiedenen Flussraten nicht signifikantunterscheiden. Bei der höchsten Flussratebetrug der höchste gemessene Rückdruck 1900psi und liegt damit deutlich unterhalb derBetriebsgrenze der Säule (2500 psi).

Die Gesamtanalysendauer bei einer Flussrate von1,6 ml/min (entspricht ca. 2 Säulenvolumen [SV]pro Minute) betrug 17,5 min. Bei 16 ml/min (ca.20 SV/min) betrug die Gesamtanalysendauer1,75 min, eine Zeitersparnis von 15,75 min jeProbe. Für Routineapplikationen wurde eineFlussrate von 8 ml/min (ca. 10 SV/min) gewählt,die in einer Gesamtanalysendauer von 3,5 minund einem maximalen Säulendruck von rund1000 psi resultierte.

Applikation

Analyse von Peptidmischung A + B bei verschiedenenFlussraten

Versuch 1:

Untersuchung der Auswirkung verschiedener Flussraten

Abb. 4 16 ml/min

Abb. 3 8 ml/min

Abb. 2 4,0 ml/min

Abb. 1 1,6 ml/min

Das ABC-Team von links nach rechts: Rachel Emerson,Wanda Stowe, Axel Montoya und Ian Moss

Im Endergebnis wurde festgestellt,dass wir mit der Chromolith-Säuleschnelle Analysen mit weniger als vier Minuten Gesamtdauerdurchführen können. Durch einegeringfügige Änderung derSäulenkonditionen konnten wir einPeptid mit geringer Bindungsneigunganalysieren. UnterschiedlicheElutionsbedingungen lassen sich aufGrund der durch die Chromolith-Säule ermöglichten kurzenLaufzeiten schnell vergleichen. Wirerwarten, diese Eigenschaften desChromolithen auf den semipräparativenMaßstab übertragen zu können.



Analyse von Peptid C unter verschiedenen Stabilisierungs- undBeladungsbedingungen

Abb. 8 Bedingungen (d)

Abb. 6 Bedingungen (b)

Abb. 7 Bedingungen (c)

Abb. 5 Bedingungen (a)

Manche kleinen oder hydrophilen Peptidebinden sich bei standardmäßiger Equilibrierungnicht an Reverse-Phase-Säulen. ImAllgemeinen gilt eine Konzentration von 5 %Acetonitril als optimal zur Equilibrierung einerSäule vor der Probenbeladung. Bei diesemVersuch haben wir die Fähigkeit derChromolith-Säule untersucht, ein Peptid nacheiner Equilibrierung mit 1 % Acetonitril zubinden.

Zunächst wurde das Peptid C (ein nichtaufgereinigtes, synthetisches Produkt) unterden in Versuch 1 angegebenen Bedingungen(a) bei einer Flussrate von 8 ml/min analysiert.Das resultierende Chromatogramm ist in Abb. 5dargestellt. Es ist zu erkennen, dass das Peptidinnerhalb weniger Sekunden eluiert, was eineschlechte Bindung des Peptids an die Säuleanzeigt. Die Analyse wurde unter denfolgenden modifizierten Bedingungenwiederholt:

(b) Die Konzentration vonAcetonitril wurde für dieEquilibrierungsphase auf 1 %reduziert, siehe Abb. 6.(c) Wie (b), jedoch mit 1 %Acetonitril für dieProbenbeladungsphase,siehe Abb. 7.(d) Wie (c), jedoch mit auf 8 mlerhöhtem Equilibrierungsvolumen,siehe Abb. 8.

Unter den Bedingungen (b) und (c)wurde keine Verbesserung derBindung des Peptids an die Säulebeobachtet. Unter denBedingungen (d), bei verdoppeltemEquilibrierungsvolumen, wurde einnormales Chromatogramm erzielt,das überwiegend ein einziges Peptid sowie Spuren vonNebenprodukten zeigt, wie sie bei einer nicht aufgereinigtenProbe zu erwarten sind.

Versuch 2:

Untersuchung der Bindung von Peptid C (Ac-ASQVRPSQR-nh2)

Zur weiterenInformation senden wir Ihnengerne dieChromolith®

3mm Broschüre(MERC4022-EN) zu.


Die neue LaChrom Elite Generation®

Das zuverlässige HPLC-System für höchsteAnforderungen und minimale Betriebskosten

Das LaChrom Elite® System der neuen Generation von VWR-Hitachi ist ein

sehr robustes, langlebiges, vielseitiges und sehr leistungsfähiges HPLC-

Instrument mit hervorragender Präzision und Empfindlichkeit sowie

minimaler Probenverschleppung. Es ist sehr benutzerfreundlich, da alle für

Bedienung und Wartung relevanten Teile von vorne zugänglich sind. Die

Kombination mit dem umfassenden FDA-konformen Chromatographie-

Datensystem EZChrom Elite® bietet eine große Flexibilität bei der

Steuerung des Chromatographiesystems und bei der Datenverarbeitung.

Einzigartige DetektorempfindlichkeitDas LaChrom Elite® System der neuen Generation erweitert seine Detektorfamilie um zweibrandneue Detektoren mit einer weltweit einzigartigen Empfindlichkeit. Der neue L-2455Diodenarray-Detektor mit einer fortschrittlichen Referenzwellenlängenfunktion weist extrem hoheEmpfindlichkeitsspezifikationen auf, die mit einem sehr guten UV-Detektor vergleichbar sind.Er kann auch als Mehrwellenlängen-Detektor eingesetzt werden. Der neue L-2485Fluoreszenzdetektor weist ebenfalls eine sehr hohe Empfindlichkeit auf, so dass selbst kleinsteSpuren nachgewiesen werden können.

Von der Mikro- bis zur Standard-HPLCDas LaChrom Elite® System arbeitet optimal bei Fliessgeschwindigkeiten von 50 µl/min bis 10 ml/min unter Verwendung von Säulen mit 1, 2, 3, 4 und 4,6 mm Innendurchmesser sowie beider Hochgeschwindigkeitschromatographie mit Chromolith® Säulen.

Schnelle ChromatographieDer Flussbereich von 1-10 ml/min ist für die schnelle Chromatographie mit Chromolith® Säulen miteinem Innendurchmesser von 3 oder 4,6 mm ideal. Mit Chromolith® Säulen wird dieAnalysengeschwindigkeit im Vergleich zu konventionellen Partikelsäulen um das 3- bis 10-fache erhöht.Das spart Zeit und Geld bei Routineanalysen. Der geringe Rückdruck der Säulen reduziert dasRisiko von Leckagen auf ein Minimum und gewährleistet gleichzeitig eine sehr lange Lebensdauerder Dichtungen und des gesamten Systems. Dies erhöht die Betriebsbereitschaft sowie dieZuverlässigkeit und reduziert die Analysenkosten.

LaChrom Elite®

>>neu



Schnelle automatische MethodenentwicklungLaChrom Elite® kann in Kombination mit der einzigartigen ChromSword® Auto Softwarevollautomatisch innerhalb weniger Stunden HPLC-Methoden entwickeln und optimieren.Mit dem Optimierungsziel optimale Auflösung bei minimaler Analysenzeit können auch bestehendeMethoden verbessert und die Analysenzeit deutlich reduziert werden. Dies führt zu einererheblichen Zeit- und Kostenersparnis.

Zuverlässige Analysenergebnisse dank überlegenerSäulenthermostatisierungstechnikNeben dem bewährten L-2300 Säulenthermostat bietet das LaChrom Elite® System der neuenGeneration den neuen leistungsfähigen L-2350 Säulenthermostat mit exzellenterTemperaturhomogenität und einem erweiterten Temperaturbereich. Er ist für bis zu 8 Säulenausgelegt. Die auf 85 °C erweiterte Maximaltemperatur erhöht die Flexibilität des Ofens in Bezugauf Hochtemperaturanwendungen. Ferner kann der Thermostat mit bis zu zwei Schaltventilenausgestattet werden. Damit können automatische Säulenschalt-Verfahren, Probenvorbereitungsschrittedurch Vorsäulenschalten sowie andere Anwendungen durchgeführt werden.

LC-MSDas LaChrom Elite® System lässt sich auf einfache Weise mit den esquire™ Ionenfallen- odermicrOTOF™ MS-Systemen von Bruker Daltonics kombinieren. Dadurch bieten sich einzigartigeMöglichkeiten der Massendetektion, Strukturaufklärung und Substanzidentifizierung in Forschungund Routineanalytik.

Automatische Operational Qualification (OQ)In Kombination mit der Auto Validation Software führt LaChrom Elite® den OQ-Test vollautomatischdurch und erstellt einen umfassenden GMP-konformen Qualifizierungsreport. Dies reduziert denQualifizierungsaufwand im Labor erheblich.

>

Unser speziellesAngebot:

LaChrom Elite® -Application inside!

Wir garantierenIhre HPLC-

Anwendung.Wenden Sie sich

an uns, um weitereInformationen

zu erhalten.

Trennung aller Verunreinigungen einer pharmazeutischen Probe mit einemmehrstufigen Gradient, der mit dem LaChrom Elite® System

und ChromSword Auto® optimiert wurde.

LaChrom Elite® –Robuste HitachiTechnologie hilftdie Laborkostenzu reduzieren


Software

Einzigartige Software-Tools zum Zeitsparen im Labor

ChromSword Auto Version 3.5Die einzigartige ChromSword® Auto Software kann innerhalb weniger Stunden HPLC-Methodenvollautomatisch entwickeln und optimieren. Sogar bereits vorhandene Methoden können optimiertund die Analysezeiten noch einmal deutlich reduziert werden. Nach wenigen Eingaben kannChromSword® Auto Methodenbedingungen vorhersagen und steuert dann das angeschlosseneVWR-Hitachi LaChrom Elite®-, Agilent- oder Waters-HPLC-System, so dass es die erforderlichenChromatogramme aufnimmt. Diese werden anschließend von der Software analysiert, um dieendgültigen optimalen Bedingungen zu ermitteln. Der schnelle Optimierungsmodus gibt einenÜberblick über die chromatographische Leistung des eingesetzten Säulen/Lösungsmittel-Systems.Der Fein-Optimierungsmodus erfasst und analysiert darüber hinaus weitere Daten und entwickeltmehrere alternative optimale HPLC-Bedingungen. Beide Arbeitsweisen können gemeinsam undkombiniert mit Säulen- und Lösungsmittel-Schaltverfahren angewendet werden, um eine Vielzahl vonSäulen/Lösungsmittel-Kombinationen vollautomatisch zu testen. Sowohl in der Methodenentwicklungals auch in der Routineanalytik können mit ChromSword® Auto erhebliche Zeiteinsparungen sowieVerbesserungen der Analysenmethoden erreicht werden.

AutoRobustFür neu entwickelte oder schon vorhandene Analysenmethoden sollten Robustheitsstudiendurchgeführt werden, um die Toleranzgrenzen für kleine Abweichungen von den Methodenparameternzu ermitteln. Diese Toleranzgrenzen sollten in der Methoden-SOP beschrieben werden. Mit der AutoRobust-Software programmieren Sie die Matrix der durchzuführenden Experimente in kürzester Zeit und dieSoftware führt dann diese Robustheitstests von HPLC-Methoden vollautomatisch durch. Dazu steuertdie Software VWR-Hitachi LaChrom Elite®-, Agilent- oder Waters-HPLC-Systeme und erfasst die Chromato-gramme mit den gewünschten kleinen Variationen der HPLC-Bedingungen. Die aufgenommenenChromatogramme werden angezeigt und die Software erstellt einen übersichtlichen Robustheitstest-Report.

Validation Manager

Validation Manager prüft, ob Ihre Analysenmethode für den vorgesehenen Zweck geeignet ist understellt automatisch den Validierungsreport. Ein Programmier-Dialog fragt die benötigten Eingaben ab,dann wird auf Knopfdruck der Validierungsplan erstellt. Es wird sofort angezeigt, wie viele Probenvorbereitet werden müssen und wie viele Injektionen notwendig sind, um die Verfahrenskenngrößen(Charakteristika) der Methode zu berechnen. Sogar die Autosampler-Injektionstabellen für EZChromElite® werden automatisch erstellt und stehen für die Datenaufnahme bereit. Aus den Daten werdendie Verfahrenskenngrößen automatisch berechnet und mit anerkannten Verfahren statistisch geprüft.Nach Eingabe Ihrer Kommentare und Entscheidungen wird per Mausklick der Validierungsreporterstellt. Mit dem Validation Manager sparen Sie bei der Validierung beliebiger Analyseverfahren Tageoder sogar Wochen an Arbeit.

VWR bietet eine Auswahl an speziellen Software-Werkzeugen, mit denen Sie Tageoder sogar Wochen an Arbeit einsparen können.

UncertaintyManagerDie Kenntnis der Messunsicherheit ist eine Voraussetzung, um Analysenresultate richtig beurteilenzu können. Deshalb ist die Messunsicherheit der Analyseergebnisse ein Parameter, der immerhäufiger gefordert wird, insbesondere von akkreditierten Laboratorien. UncertaintyManager® isteine neue Software zur schnellen Bestimmung der Messunsicherheit von Analysenergebnissen nachden internationalen Normen „ISO Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement (GUM)“und „Eurachem/CITAC Guide – Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement“. Die Softwarebasiert auf einer umfangreichen Datenbank und bietet eine Vielfalt von Funktionen zurErleichterung der Dateneingabe, zur Visualisierung der Einflussparameter, zur Berechnung derMessunsicherheit und zur Reporterstellung. Die UncertaintyManager® Software ermöglicht diekomplette Berechnung der Messunsicherheit von Analysenergebnissen innerhalb weniger Minuten.Dabei wird das gesamte Analysenverfahren berücksichtigt.



Der neue flexible automatische Aminosäurenanalysator L-8900 vonVWR-Hitachi kombiniert die Vorteile des klassischen Ionenaustausch-Trennverfahrens mit moderner HPLC-Technik. HochauflösendeFertigsäulen, sowie ein exzellent entwickeltesGradiententrennverfahren, das auf optimierten gebrauchsfertigenPuffern basiert, garantieren eine einzigartig schnelle undreproduzierbare Analytik. Der L-8900 ist damit das leistungsfähigsteInstrument für die Aminosäurenanalyse auf dem Markt. Das System ist daher für alleLaboratorien geeignet, die routinemäßig Aminosäuren analysieren.Der L-8900 wird vollständig durch das bewährte und FDA-konforme EZChrom Elite®

Chromatographiedatensystem gesteuert.

Zu den besonderen Merkmalen zählen:• Sehr hohe Empfindlichkeit von 3 pmol (Asp)• Extrem gute Reproduzierbarkeit von Peakflächen und Retentionszeiten • Sehr schnelle Trennung von Proteinhydrolysaten und physiologischen Flüssigkeiten• Daraus resultieren sehr niedrige Analysekosten.

>Autosampler Säulenofen

Detektorzelle

Reaktor

Reagenz

Behälter für Puffer-und Waschlösungen

N2-Gasversorgung

Pumpen 1/2

Entgaser

Abfall

• Hervorragende

Auflösung

• Sehr kurze

Analysenzeiten

• Sehr niedrige

Analysekosten

• FDA-konform

VWR-Hitachi L-8900 Aminosäurenanalysator

Wünschen Sie weitere

Informationen oder eine

Demonstration bei Ihnen vor Ort?

Ihr lokaler Ansprechpartner bei

VWR hilft Ihnen gerne weiter,

oder senden Sie ein Mail an:

[email protected]

Seit 2004 schreibt das Europäische Arzneibuch,englische Ausgabe, die Dokumentation vonDünnschicht-Chromatogrammen mittelsFotografie oder Datenfile vor. Aber nicht nur imBereich der Pharmazie, auch in vielen anderenLaboratorien müssen die Ergebnisse frei vonVerwechselungen und/oder Fälschungen sein.Dies gelingt eindeutig nur bei Verwendung vonlasercodierten Platten. Im Handel erhältlich sinddiese Fertigplatten nur mit dem am häufigstenverwendeten Sorbens Kieselgel 60. Neben demHerstellernamen, der Artikelnummer und derChargenbezeichnung beinhaltet die Codierungeine individuelle Plattennummer. In dieserZusammensetzung wird jede DC-Platte zumUnikat.

Verwechslungs- und fälschungssicheres Arbeiten in derDünnschicht-Chromatographie mit Merck Kieselgel GLP-Platten

Sorbens Format (cm) Anzahl Platten Best.-Nr.

TLC GLP silica gel 60 F254 20 x 20 25 1.05566.000110 x 20 25 1.05702.0001

HPTLC GLP silica gel 60 20 x 10 25 1.13326.0001HPTLC GLP silica gel 60 F254 20 x 10 25 1.05613.0001

10 x 10 25 1.05564.0001

Abb. 1: Birkenblätter Trockenextrakt,gestresste Proben auf HPTLC-Kieselgel 60F254, 20 x 10 cm Aufnahme bei UV254 nm in s/w (Ausschnitt)

Abb. 4: Identifizierung von Safranproben,die in Ägypten, der Türkei, Spanien undIran gekauft wurden, auf HPTLC-Kieselgel60 F254, 10 x 10 cm, Aufnahme unterWeißlicht.

Abb. 3: Flavonoidhaltige Drogen aufHPTLC-Kieselgel 60 F254, 20 x 10 cm,Aufnahme bei UV 365 nm mit einemkleinen weißen Papierstreifen unterder Codierung

Abb. 2: Pharmazeutischer Wirkstoff,Stressproben und verwandteVerbindungen auf DC-Kieselgel 60 F254, 20 x 20 cm, Aufnahme bei UV 254 nm in s/w

Die Fotos der Platten Nr. 11 und 12 wurden aus dem DC-Buch von Elke Hahn-Deinstrop entnommen. Die 2. überarbeiteteund erweiterte Auflage in englischer Sprache ist beim Verlag Wiley-VCH erschienen (ISBN 3-527-31553-5).Das Buch ist im Fachhandel erhältlich.


GLP-Platten von MerckDC


Hamilton Hamilton CTC-Produktnr. Spritzenbezeichnung Produktnr. Best.-Nr.

203185 7701.2 CTC SyrC L1.2-26P-AS 549-1307203189 75 N CTC (26S/AS) SyrC L5-26S-AS 549-1311203072 701 N CTC (26S/2) SyrC L10-26S-2 549-1310203205 701 N CTC (26S/AS) SyrC L10-26S-AS 549-1312203361 701 N CTC (23S/AS) SyrC L10-23-AS 549-1309203362 701 N CTC (23S/26S/AS) SyrC L10-23S/26S-AS 549-0525203043 1702 N CTC (26S/AS) SyrC G25-26S-AS 549-1313203076 1710 N CTC (26S/AS) SyrC G100-26S-AS 549-1314203078 1725 N CTC (26/AS) SyrC G250-26-AS 549-1315

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Gaschromatographie

Gemeinsam mit HamiltonBonaduz (Schweiz) hat CTCAnalytics eine neueMikroliterspritze entwickelt.Die so genannte C-Line ist dieneue Generation der CTC-Mikroliterspritzen.Hauptmerkmale der neuen C-Line:

• Keine Verschleppung

• Neue Teflon-Polymer-Mischungals Dichtmaterial für dieKolbendichtung- Höhere

Temperaturbeständigkeit

- Weniger poröse Oberfläche

• Farbcodierter Flanschidentifiziert Nadel Gauge blau: Gauge 22, rot: Gauge 22s

• Justierbarer Kolben schütztdie Kolbendichtung vorQuetschungen

• Nadelfixierung direkt amGlaszylinder. Kein Kontakt der Proben mit Klebstoff oder Zement

Die neue Generation von HAMILTON-Spritzen für Autosampler von CTCAnalytics

Hamilton CTC-Produktnr. Beschreibung Produktnr. Best.-Nr.

203245 1702 Kolben CTC 10Stk./Packung Plg G25 549-0526203246 1710 Kolben CTC 10Stk./Packung Plg G100 549-0527203249 1725 Kolben CTC 10Stk./Packung Plg G250 549-0528

Spritzen für GC PAL (C-Line)

Ersatzkolben für GC PAL (C-Line)


Chromacol Headspace-Flaschen und -Verschlüsse für GC-Instrumente

Durch den wachsenden Bedarf an

Umweltüberwachungssystemen für

den Nachweis von Schadstoffen

und anderen organischen Stoffen

ist die Headspace-GC-Analyse zu

einer wichtigen Methode für

Umwelt- und Analytiklaboratorien

geworden. Auch spezielle

Instrumente für Applikationen in

der Lebensmittel- , Parfüm- und

Sicherheitsindustrie benutzen die

GC-Headspace-Technologie. Einer

der wichtigsten Faktoren für den

Erfolg des Verfahrens ist die

korrekte und einfache

Probenvorbereitung zur

Generierung der Gasphase. Die feste oder flüssige Probe muss zunächst die flüchtigen Komponenten in den Dampfraum desverschlossenen Probenglases freisetzen. Damit die Headspace-Analyse repräsentativ für diegesamte Probe ist, muss sich zwischen Probe und Gasraum ein Gleichgewicht einstellen. DasGleichgewicht entsteht in der Regel durch die Inkubation der Probe in einer aufgeheiztenOfenkammer bei einer Temperatur, die die flüchtigen Komponenten von der Probenmatrix freisetzt.

Das heißt, dass die für die Headspace-Analyse verwendeten Flaschen vollkommen anderenKriterien entsprechen müssen als konventionelle Flaschen.

Anforderungen an Headspace-Flaschen und -Verschlüsse für die GC• Großes Volumen und weite Öffnung um genügend Probe einzufüllen• Robustheit, die Druckaufbau in der Flaschen aushält ohne Rissbildung und Undichtigkeit• Neutrales Borosilikatglas entsprechend USP-Klasse 1 – robust, hitzebeständig, geringe

Freisetzung von extrahierbaren Substanzen• Septen aus verschiedenen Materialien für die Verwendung bei Temperaturen von unter Null bis 250 °C• Kappen, die effiziente Abdichtung während der Inkubation gewährleisten• Kompatibel mit den benötigten Taransportmechanismen für die verschlossenen Flaschen zu den

Equilibrationsöfen und zur Probenentnahme.

Probengläser und Verschlüsse

Chromacol Headspace-Flaschen – Merkmale:

• Abgerundete Böden und Schultern um hohem Druck standzuhalten• 20-mm-Bördelhals mit abgeschrägter Oberkante für eine optimale Abdichtung mit Bördelkappen• Verschiedene Volumina und Kompatibilität mit zahlreichen Instrumententypen• Bernsteinfarbene 10-ml und 20-ml Flaschen mit denselben Merkmalen für lichtempfindlichere Proben• Kompatibel mit magnetischen Kappen für Autosampler der Serie CTC CombiPAL

Chromacol SeptenDie für die Headspace-Systeme verwendeten Septen sind der Schlüssel für richtige Ergebnisse.Diese Septen sind aus hochwertigen Elastomeren mit Fluoropolymeroberfläche hergestellt undminimieren die Extraktion und Interferenz während der Equilibration. Auf sie fällt die Wahl aus derReihe verschiedener Septen mit unterschiedlichen Dichtungspermeabilitäten, Temperaturbereichenund Härten. Für die meisten Headspace-Instrumente und -Anwendungen wird eine Standarddickevon 3 mm empfohlen. Um den Komfort zu erhöhen und Kontaminationsquellen zu minimieren,sind viele Verschlüsse vormontiert. Der Einsatz des 20-mm-Bördelverschlusses ermöglicht dieVerwendung von Standardbördelkappen aus Aluminium, welche einen sicheren Verschlußgewährleisten.

Chromacol Headspace-Septen für hohe TemperaturenDie Septen für Applikationen bei hohen Temperaturen bestehen aus speziellen Materialien, ummögliche Interferenzen mit dem Elastomer zu verhindern. Sie können zur Equilibrierung beiTemperaturen von 220 °C eingesetzt werden.

Magnetische BördelkappenDie wachsende Popularität des CTC-Autosamplers CombiPAL erhöht den Bedarf an magnetischenVerschlüssen. Neben den standardisierten magnetischen Kappen bietet Chromacol Kappen ausAluminium/Stahl an, die einfacher gebördelt werden können und umfassend für den Einsatz indiesen Systemen getestet wurden.

Neue Headspace-SchraubflaschenBei der Headspace-Analyse wurde bisher in der Regel eine 20-mm-Bördelkappe verwendet.Diese Kappe gewährleistet einen permanenten und manipulationssicheren Verschluss. Falls jedochnach dem Bördeln Probe ergänzt werden soll, muss der Verschluss geöffnet und erneut gebördeltwerden. Neue Probenvorbereitungsverfahren wie SBSE (Stir Bar Sorbent Extraction) und dieBenutzung solcher Produkte in elektonisch gesteuerten Geräten von Unternehmen wie Alpha MOS und Cyrano Systems erfordern den Einsatz von Schraubverschlüssen.

Magnetische KappenDie Schraubverschlüsse bestehen aus vernickeltem Metall und haben magnetische Eigenschaften.Daher sind sie für den Transport von Flaschen in gängigen CTC-Autosamplern geeignet.

Neue Headspace-Schraubflaschen



Die neuen ChromacolHeadspace-Schraubflaschenund die dazugehörendenKappen sind für Headspace-und Probenextraktionsprozessekonzipiert. Sie sind tatsächlichuniversell, da sie Kappenhaben, die sowohl mit dickenHeadspace-Septen als auch mitdünnen, empfindlichen Septen(SPME-Fasern) eisetzbar sind.

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Weitere Bestellinformationen erhalten Sie bei Ihren lokalen VWR-Ansprechpartner oder [email protected]


Säulen

Ihre Analysen profitierten von der SilGuardTM

Technologie, da sich weniger nichtflüchtigesMaterial in der Säule ansammelt. Dadurcherreichen die forteTM Kapillaren eine längereLebensdauer ohne Empfindlichkeitsverlust.Darüber hinaus eröffnet SilGuardTM einegrößere Flexibilität für anspruchsvolle

Analysenanwendungen, beispielsweise könnenmit weniger Aufwand verschiedeneInjektionsmethoden verwendet werden.SilGuardTM kann auch für Restiktoren nach der Säule oder für Transferleitungeneingesetzt werden.

Ein revolutionäres neues integriertes Vorsäulensystem

Was ist das Besondere an SilGuard™?

SGE sorgt für längere Lebensdauer bei forte™ Säulen

Die einzigartige integrierte VorsäulentechnologieSilGuard™ von SGE gehört jetzt zum Standardbei den beliebtesten BPX5 Säulen, um dieanalytische Säule vor Kontamination durchnichtflüchtige Substanzen zu schützen.Zudem erlaubt es die SilGuard™ Konstruktion,dass die Vorsäule und die analytische Säuleunterschiedliche IDs haben, wodurch eineVielzahl von Anwendungen ermöglicht werden,

die sich mit anderen integrierten Vorsäulennicht realisieren lassen. Die neue SilGuard™Technologie ist jetzt außerdem für allepolyimidbeschichteten Säulen von SGEerhältlich. Sie müssen hierfür bei der Bestellung lediglich angeben, dass die Säule als Sonderausführung mit einer 5 Meter SilGuard™ ausgestattet werden soll.

SGE hat sich schon immer zum

Ziel gesetzt, allen

Chromatographieanwendern

höchste Leistung zu bieten.

Ein besonders gutes Beispiel

hierfür sind die GC-Kapillarsäulen

der forte Reihe. Die forte Säulen

vereinen hohe Leistung mit äußerst

langer Lebensdauer, sodass Sie

sich jederzeit auf Ihre

Analyseergebnisse verlassen

können.

>SilGuard™ ist ein einzigartiges integriertesVorsäulensystem, das unter Verwendung derbewährten SilTite™ Metallferrules von SGEentwickelt wurde. SilGuard™ bietet deutlicheVorteile gegenüber anderen integriertenVorsäulen oder konventionellen Kopplungen:• Chromatographieleistung: Die Kopplung

ist speziell auf eine niedrige thermischeMasse ausgelegt, um auch bei einemschnellen Temperaturprogramm eineoptimale Peakform zu erreichen.

• Perfekte Verbindungen: SGE presstSilGuard™ im Werk ein, sodass eineperfekte, dichte Verbindung gewährleistet ist,die die Peakform nicht beeinträchtigt.

• Flexibilität: Die analytische Säule und dieVorsäule können einen unterschiedlichenInnendurchmesser aufweisen, was ideal fürOn-Column-Injektion unter Verwendung einerVorsäule mit weiter Bohrung ist.

• Benutzerfreundlichkeit: Die Vorsäule wirdim Werk eingepresst, sodass eine dauerhaftdichte Verbindung gewährleistet ist, die ohneMuttern zum Festziehen und Polyimiddichtmasseauskommt.

• Hohe Transparenz: Die Grenze zwischender Analyse- und der Vorsäule ist durch dieSilGuard Kopplung deutlich gekennzeichnet,sodass die verbleibende Vorsäulenlänge klarzu erkennen ist.

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Biochromatographie

Wesentliche Technologien für die Aufreinigung von Biomolekülen

Ob Ihre Herausforderungen in

Anwendungen des Bereichs

Forschung, Scale-up oder Polishing

liegen, Pall bietet Ihnen ein

umfangreiches Portfolio an

Medien für Affinitäts-,

Ionenaustausch-,

Größenausschluss-, hydrophobe

Interaktion- und Hydroxylapatit-

Chromatographie. Das Pall

Portfolio umfasst den Bedarf

sowohl für die Chromatographie

auf Grundlage von Sorbentien als

auch für die

Membranchromatographie.

Das Produktsortiment von Pall

umfasst eine Reihe von Produkten

für die häufigsten und einige

sehr spezielle

Chromatographiemethoden.

Pall Chromatographiemedien können zurAufreinigung von Biomolekülen (Nukleinsäuren,Proteine) und Verbindungen im Forschungs-und Industriebereich verwendet werden. PallBioSepra® Sorbentien sind für Probenvorbereitungvon Proteinen, Bioverfahrenstechnik im Laborund Scale-up-Anwendungen geeignet.

Entwicklung spezifischerSorbentien fürHochleistungsergebnisse

Bei der chromatographischen Aufreinigung istdie Wahl der Sorbentien entscheidend für eineeffektive Erfassung (Bindungsselektivität/-kapazität) und ausreichende Trennung(Auflösung). Pall bietet zahlreicheBasismaterialien von weichen Perlen (Trisacryl®,Ultrogel®, Hypercel™) über feste Perlen bis zueiner einzigartigen hybriden Perle (HyperD®

und HyperZ®). Palls Biosepra HyperD undHyperZ Chromatographiesorbentien werdenmithilfe der patentierten „Gel-in-a-shell“-Technologie hergestellt. Diese „Gel-in-a-shell“-Perle wird aus einem hochleistungsfähigenHydrogel entwickelt, das in den Gigaporeneiner festen Keramikperle polymerisiert ist.Die Chemikalie oder der Ligand zur Erfassungwird mit dem Hydrogel innerhalb derPerlenporen gebunden. Diese Struktur hatviele Vorteile, unter anderem eine höhereKapazität als üblich, Toleranz gegenüberschnellen Chromatographieläufen ohnegleichzeitigen Anstieg des Gegendrucks sowie höhere Salztoleranz fürIonenaustauscher.

„Gel-in-a-Shell“-Technologie

Alle Pall BioSepra® Sorbentien werden alsBulkmaterial von 1 bis 100 ml angeboten.Pall hat außerdem Chromatographie-Kits zurEntfernung hoher Proteinkonzentrationen imAngebot. Diese gebrauchsfertigen Kitsenthalten alle Komponenten, die für dieReduktion oder Selektion von Albumin und/oderIgG zahlreicher Spezies benötigt werden..

Die Pall BioSepra® Chromatographiesorbentiensind für den Einsatz in herkömmlichenChromatographiesäulen geeignet oder können fürschnelle Trennungen in Zentrifugeneinheiten (z. B.Pall Nanosep®) verwendet werden. Für High-Throughput-Trennungen oder für Scouting Assayskann das Sorbens mit AcroPrep™ Filterplattenkombiniert werden. Bis zu 96 Minisäulen könnendann gleichzeitig bearbeitet werden.Um weitere Informationen über Pall BioSepra®Chromatographiesorbentien zu erhaltenwenden Sie sich bitte an Ihr lokales VWR-Vertriebszentrum oder besuchen Sie dieHomepage www.pall.com/lab


Schnelle präparative Chromatographie mit dem VWR LaPrep®

System in Kombination mit Chromolith® Prep RP-18e-Säulen

Das VWR LaPrep System in Kombination mitden Chromolith® Säulen deckt den gesamtenAnwendungsbereich von analytischer bispräparativer HPLC im Laborbereich ab.LaPrep® steht nicht nur für eine Gerätelinie,sondern für ein vollständiges Portfolio anKomponenten und Zubehör, das notwenig ist,um beste Ergebnisse zu erzielen.Viele individuelle Lösungen lassen sich dankumfangreichem Zubehör entwickeln. Ergänztund kontrolliert wird das Modulensembledurch die speziell für die präparativeChromatographie entwickelte EZPrep® Software,basierend auf der EZChrom Elite® Plattform.Die Chromolith® Prep-Säule erhöht mit ihrerspeziell entwickelten bimodalenPorenstruktur die Geschwindigkeit, Effizienzund Produktivität der Trennung, wobei dermonolithische Silica-Rod gleichzeitig dasAuftreten von zu hohen Gegendrückenverhindert.

Präperative HPLC

Die Hauptvorteile sind:• Die speziell für die präparative HPLC

entwickelte Software unterstützt ihre Arbeit.Alle wichtigen Funktionen wie Peakerkennung,Fraktionssammlung, Probenrecycling undLösungsmittelrückgewinnung sind darinberücksichtigt. Die Software verfügt übereine "Direct Control" sowie eine “Teach-In”-Funktion, die Ihnen einzelne Arbeitsschritteonline während der Methodenentwicklungabnehmen.

• Durch die verschiedenen Pumpen mitaustauschbaren Pumpenköpfen können – je nach Gerätetyp und bei stets hervorragenderReproduzierbarkeit - Flussraten von 0,1 biszu 1000 ml/min gefördert werden.

• Eine große Bandbreite vonunterschiedlichen Detektoren wie z.B.Filterphotometer, Spektralphotometer,Photodiodenarry-Detektor undBrechungsindex-Detektor sind verfügbar.Sämtliche Detektoren sind sowohl manuellzeitprogrammierbar als auch über dieEZPrep® Software kontrollierbar und könnenebenfalls in einer Lichtwellenleiterversionzur Verfügung gestellt werden.

• Unterschiedliche Schaltventile für die Injektion,Säulenschaltung und zur Fraktionierunggewährleisten eine maximale Flexibilität.

Analytische Bedingungen:Säule: Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6Eluent: 93% Methanol / 7% Water (v/v)Flussrate: 3 ml/minWellenlänge: 280 nmProbe.: 4 mg - Tocopherol Rixen e Rohöl/ ml Methanol mit

1% iso-Propanol als Lösevermittler Injektion: 100 µl

TypischesanalytischesChromatogramm

Aufreinigung von Tocopherol Rixen e Rohöl mit derZielsubstanz ∂-Tocopherol

Analytisches Chromatogramm, LaPrep®-System, Flussrate von : 3 ml/min

LaPrep System

Zielsubstanz



Präparatives Chromatogramm, LaPrep®–System, Flussrate: 60 ml/min

Präparative Bedinungen:Säule: Chromolith® Prep RP-18e 100-25Eluent: 93% Methanol/ 7% Water (v/v)Fluss- rate: 60 ml/minWellenlänge: 280 nmProbe: 10 mg – Tocopherol Rixen e Rohöl / ml Methanol

mit 1% iso-Propanol als Lösevermittler Injektion: 2 ml alle 3,2 min

Mehrfach-Injektion (5x) von Tocopherol Rixen e Rohöl innerhalb einesChromatographielaufes von 20 Minuten. Der Vorteil ist hierbei die hohe Produktivität: -mehr als 300 mg Produkt pro Stunde.

Zusammenfassung:Die Zeitersparnis durch die wiederholten Injektionen während des Laufes erhöht die Produktivitätbeträchtlich. Sie ist in diesem Beispiel mehr als 300 mg Zielsubstanz pro Stunde und kann durchweitere Überladung noch erhöht werden. Die Kombination mit der Chromolith® Prep RP-18e Säuleerlaubt einen hohen Probendurchsatz bei geringerem Lösungsmittelverbrauch im Vergleich zu einerherkömmlichen partikulären Säule.

Inj.1 Inj.2 Inj.3 Inj.4 Inj.5 Inj.6


Bericht über die Aufreinigung von Proben mit Chromolith®

SemiPrep 100-10 mm RP-18 Pascal VERDIE, Yann BROUILLETTE, Jean MARTINEZ

Im LAPP* spielt sich die Forschung

an der Schnittstelle zwischen

Chemie und Biologie ab. Chemiker,

Biologen, Immunologen und

Kliniker arbeiten eng zusammen,

um biologisch aktive

Verbindungen zu entwickeln und

herzustellen. Eines unserer

Tätigkeitsfelder befasst sich mit

der Synthese, Aufreinigung und

massenspektrometrischen Analyse

von Neuropeptiden und der

Erstelluung von heterozyklischen

kombinatorischen Bibliotheken.

*Laboratoire des Aminoacides, Peptides et Protéines,UMR 5810 Faculté de Pharmacie, Université deMontpellier I et II 15 avenue Charles Flahault, 34060 Montpellier, Frankreich

Ein Bestandteil unserer Arbeit ist die High Throughput Aufreinigung von Proben fürkombinatorische Bibliotheken. Zu diesem Zweck verwenden wir ein automatisiertes System fürpräparative HPLC mit Massenspektrometer (Prep-LC/MS). Dieses Verfahren ist als effizientes undeffektives Mittel zur High Throughput Aufreinigung für parallele Syntheseprogramme anerkannt.Die Fraktionierung der Proben wird durch Massendetektion gesteuert. Der Einsatz der Chromolith®

SemiPrep 100-10 mm RP-18 Säule erlaubt uns die schnelle (Gradient in10 min) und effektiveAufreinigung von Peptiden und heterozyklischen Verbindungen. Vor kurzem mussten wir eineFamilie polarer Verbindungen aufreinigen: Benzodiazepine mit einer Imidazol-Untereinheit. Wirtesteten die Trennleistung verschiedener Säulen für die Separation mit einer repräsentativen Probeaus der Bibliothek.

Die aufzureinigende Ausgangsmischung bestand aus 5 Verbindungen (nummeriert von 1 bis 5):dem zu untersuchenden Produkt mit einer Masse von [M+H ]+ m/z = 263,4, einem zweitenProdukt mit derselben Masse sowie drei weiteren Nebenreaktionsprodukten. Während diestandardmäßigen partikulären C-18 Kieselgelsäulen keine Trennung polarer Verbindungenerlaubten, konnten wir mit der „Monolith“-Säule die Probe aufreinigen.

Beispielreinigung

Analytische HPLC-BedingungenSäule: Chromolith® SpeedRod RP-18 50-4.6 mm Mobile phase: A: H2O 0,1%TFA - B: AcN 0,1%TFA Gradient: B von 0% auf 100% in 5 min Flussrate: 3 ml/min

Präparative HPLC-BedingungenSäule: Chromolith® SemiPrep 100-10 mm Mobile phase: A: H2O 0,1%TFA - B: AcN 0,1%TFA Gradient: 0% B für 4 min, dann von 0% auf 5% in 5 min Flussrate: 20 ml/min Probe: 80 mg der Mischung gelöst in A

A - Analytisches Chromatogramm der aufzureinigenden Mischung

B - Analytisches Chromatogramm des durch Aufreinigung gewonnenenreinen Produkts

A

B

1

23

4

5


Schlussfolgerung

Der Einsatz der Chromolith® SemiPrep100-10 mm RP-18 Säule erlaubt eineschnelle und effektive Aufreinigungselbst von polaren Verbindungen, dieauf C-18 Standardsäulen schweraufzureinigen sind.


C - SIR-Chromatogramm der fünf in der Mischung enthaltenen Produkte. Die gesammelte Fraktion des gewünschten Produkts ist grün dargestellt.

D - SIR-Chromatogramm der Produkte 3 und 5 (identisches Molekulargewicht, m/z = 263,4),erfasst mit einer Chromolith-Säule und einer Standard-Kieselgelsäule. Im zweiten Fallwurden die Produkte lediglich gemeinsam eluiert und keine reinen Fraktionen gewonnen.

1

2

3 5

3

3

5

5

Monolithisches Kieselgel

Partikuläres Kieselgel

D

c4

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