Efecto normoglicemiante de la pasuchaca.pdf

8/11/2019 Efecto normoglicemiante de la pasuchaca.pdf

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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUMICA

PROYECTO DE INVESTIGACIN

EFECTO NORMOGLICEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHLICO DEGeranium rui zii H ieron EN RATAS INDUCIDAS CON ALOXANO

INTEGRANTES:

CASTILLO PARDO KLAUSSFERNANDEZ REBAZA GUSTAVO

LLAHUILLA COTA LIZBETHMAGALLANES QUISPE JHONNATAN

MONTES CJUNO JEANETTQUIONES HUAYANEY MARA EUGENIA

TOLENTINO CHAVEZ JORGE LUISVIZCONDE MNDEZ SILVANA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE BIOQUMICA

(UNIVERSIDAD DEL PER,DECANA DE AMRICA)

ASESORA: Dra. Gloria Gordillo

LIMA-PER

2014


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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

I. TTULO

EFECTO NORMOGLICEMIANTE DEL EXTRACTO HIDROALCOHLICO DEHOJAS DE Geranium r uizii H ieron EN RATAS INDUCIDAS CON ALOXANO

II. ANTECEDENTES

La diabetes es una enfermedad metablica crnica que aparece debido a que el pncreas no

fabrica la cantidad de insulina que el cuerpo humano necesita, o bien la fbrica de una calidad

inferior. La insulina, una hormona producida por el pncreas, es la principal sustancia

responsable del mantenimiento de los valores adecuados de azcar en sangre. Permite que la

glucosa sea transportada al interior de las clulas, de modo que stas produzcan energa o

almacenen la glucosa hasta que su utilizacin sea necesaria. Cuando falla, origina un aumento

excesivo del azcar que contiene la sangre (hiperglucemia).1

Diabetes Mellitus se considera como una de las enfermedades crnicas ms complicadas detratar. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que para el 2030 el nmero

de diabticos ser de 32.9 millones de personas en el mundo. El Per representa el 0.11% del

mercado farmacutico mundial. Hay que tener en cuenta que ms del 50% de los peruanos

se ubican en el nivel de pobreza y ms del 20% en extrema pobreza sin posibilidades de

acceso a medicamentos convencionales. Por lo tanto, se hace indispensable la bsqueda de

medicamentos eficaces y de bajo costo.2

IMPORTANCIA DE LA REGULACIN DE LA GLICEMIA

La glucosa es el carbohidrato ms importante en los mamferos, por ser su principal fuente

de energa y, la nica en el feto y los tejidos glucodependientes (retina, eritrocitos y el epitelio

germinativo de las gonadas). Adems de esta vital funcin tiene otra de gran importancia,

por ejemplo: puede almacenarse como glucgeno, se puede transformar en lpidos, origina la


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ribosa para los cidos nucleicos y puede formar complejos con protenas como en el

glucoclix.3

En una persona normal, la concentracin de glucosa en la sangre, est regulada en limites

muy estrechos, habitualmente entre 70-110mg/dl en una persona en ayunas (8hs. aprox.).

Esta concentracin se eleva a 140mg/dl, una hora despus de la ingesta, pero un sistema

hormonal devuelve estos valores a los normales, cerca de las dos horas despus. A la inversa,

en momentos prolongados de inanicin, el hgado se encarga de mantener la glucemia

mediante la glucogenlisis y la gluconeognesis, principalmente. Como es de suponer este

fino balance es llevado a cabo por un preciso mecanismo hormonal.

Un valor elevado de glicemia promueve los siguientes efectos sobre el organismo:

La glucosa puede ejercer presin osmtica intensa en el lquido extracelular, y si

aumenta provocara una deshidratacin celular exagerada.

Diuresis osmtica renal que disminuye los lquidos y electrolitos orgnicos.

El incremento a largo plazo de la glicemia puede daar muchos tejidos, sobre todo,

los vasos sanguneos. Las lesiones vasculares, junto con una Diabetes Mellitus no

controlada, aumentan el riesgo de ataques al corazn, accidente cerebro vascular,

enfermedad renal terminal y ceguera.4

Existen dos principales mtodos para la determinacin de la glucosa: el mtodo PTGO y por

el mtodo de la glucosa oxidasa.5

a) DETERMINACION DE GLUCOSA POR EL METODO PTGO

Se puede realizar pero el mtodo PTGO (Prueba de tolerancia de la glucosa oral) en el cual

primero se toma una muestra de sangre para observar el nivel de glucosa en sangre, luego sele proporciona un lquido que contiene una cierta cantidad de glucosa, despus de 30 a 60minutos se realiza la toma de muestra de sangre para observar la variacin de los niveles deglucosa.


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b) DETERMINACIN DE GLUCOSA POR EL MTODO DE GLUCOSA OXIDASA

La reaccin de la glucosa oxidasa junto con una reaccin auxiliar se ha utilizado ampliamentepara la determinacin de la glucosa en los fluidos biolgicos. Se han desarrollado multitud

de reacciones auxiliares distintas a fi n de mejorar la especificidad global del sistema de

reaccin o para retener la especificidad inherente de la glucosa oxidasa. El mtodo utilizadoen este reactivo se basa en la reaccin indicadora de perxido de hidrgeno que une 4-aminoantipirina a un compuesto fenlico.

Figura 1: Reaccin de la glucosa oxidasa

EL CIDO URICO PLASMTICO

Se relaciona con factores de riesgo cardiovascular, especialmente con la hipertensin y laDiabetes Mellitus. En el sndrome metablico, la hiperinsulinemia activa el sistema renina-

angiotensina-aldosterona y la angiotensina II acta como un inductor potente de actividad deNADPH que aumenta las especies reactivas de oxgeno (EROX) y O2 en la intima-mediaarterial. El estrs xido-reductivo agota los antioxidantes locales como la superxidodismutasa (SOD), la glutatin peroxidasa y la catalasa; en estas condiciones, el cido ricodesarrolla su cambio de actividad antioxidante a prooxidante cuando penetra en la placaaterosclertica, contribuyendo en ese medio a oxidar las lipoprotenas, en pacientes consndrome metablico y Diabetes Mellitus tipo 2.6

LAS TRANSAMINASAS

Las transaminasas GOT/AST y GPT/ALT son enzimas ampliamente difundidas en elorganismo con elevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin yeritrocitos. La actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o enfermedaden cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles sricos. As, luego de uninfarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT(abundante en msculo cardaco).


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En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica que involucren necrosis tisular,predominar la actividad srica de GPT (abundante en tejido heptico). Una elevadaactividad de transaminasas puede detectarse tambin en traumas accidentales o quirrgicosy en distrofias musculares o miositis.

Fundamento del mtodo

Figura 2: Las reacciones de GOT

El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato), reacciona conla 2,4-dinitrofenilhidracina producindose, en medio alcalino, un compuesto coloreado quese mide a 505 nm.7

MECANISMOS HIPOGLICEMIANTES DE LAS PLANTAS

De acuerdo con Negri (2005), los mecanismos implicados en la accin de las plantas comohipoglicemiante estn relacionados con los siguientes factores:

Aumento de la liberacin de insulina a travs de la estimulacin de las clulas -pancreticas.

Resistencia a las hormonas que aumentan la cantidad de glucosa en sangre.

Aumento del nmero y de la sensibilidad de los sitios receptores de insulina

Disminucin de la prdida de glucgeno

Aumento del consumo de glucosa en rganos y tejidos

Eliminacin de radicales libres

Resistencia a la peroxidacin de los lpidos

Correccin de los trastornos metablicos causados en lpidos y protenas.

Estimulacin del aumento de la microcirculacin dela sangre en el cuerpo.8


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Estudios In vitro

Los estudios in vitro, sirven como herramienta complementaria para explorar hallazgosobtenidos con modelos in vivo y avanzar en el mecanismo de accin de un producto natural.Los agentes antidiabticos convencionales pueden afectar diferentes vas del metabolismo de

la glucosa, como la secrecin de insulina, la captacin de glucosa por los rganos diana, y laabsorcin de nutrientes. Existen estudios in vitro, en los cuales se evala la secrecin deinsulina (con lneas celulares aisladas de los islotes pancreticos o, con lneas celularessecretoras de insulina), o la captacin de glucosa. Otro de los enfoques teraputicos en estetipo de estudios, es disminuir la hiperglicemia postprandial al retardar la absorcin de laglucosa mediante la inhibicin de enzimas como la -amilasa y la -glucosidasa. Estudiosclnicos han demostrado que la ingesta de inhibidores de la -glucosidasa interfiere con ladegradacin de hidratos de carbono, reduciendo su tasa de absorcin y por tanto,disminuyendo los niveles de glucosa postprandiales; previniendo de esta manera la aparicinde diabetes y sus complicaciones.9

Se han realizado diversos estudios con plantas de efecto hipoglucemiante, pero solo hayhiptesis de los posibles mecanismos de accin los cuales se presentan a continuacin:

El efecto hipoglucemiante observado es por la presencia de la enzima i somerasaglucosa 6 fosfato, encontrada previamente en la Opuntia ficus-indica,5,6 pero no enla Opuntia streptacantha.

Aislamiento e identificacin de compuestos tipo polisacridos en O. ficus-indica y O.streptacantha con actividad hipoglucemiante proponen que los efectos observadoscon el nopal, se deben a su contenido en fibra. Se sabe que la fibra es una mezcla de

lignina, celulosa, hemicelulosa, pectina, muclago y gomas, capaz de disminu ir laabsorcin gastrointestinal de vari os nutr ientes; y en consecuencia los nivelessanguneos de colesterol, triglicridos y glucosa disminuyen por falta de absorcin.

Para explicar el efecto de disminucin de insulina sangunea, se menciona una posibleaccin i nh ibitor ia de la f ibra sobre el pptido gstr ico, sustancia que normalmenteincrementa la sensibilidad del receptor de insulina e induce la liberacin de estahormona en los islotes de Langerhans. Los autores proponen un mecanismosensibilizante del receptor a la insulina. El argumento que apoya esta hiptesis es elhaber obtenido bajos niveles de insulina e importante efecto hipoglucmico.

Si consideramos que el modelo de produccin de hiperglicemia, utilizado pornosotros, es el de diabetes qumica por aloxano, sustancia que destruye las clulasbeta del pncreas, encargadas de producir insulina, a priori, podramos inferir queestas plantas protegen al pncreas de la accin txica del aloxano; sin embargo, enestudios anteriores realizados, por nosotros, con Cuti Cuti, encontramos que estaplanta previene la hiperglicemia aloxnica y recupera, hasta lmites normales, laglicemia incrementada por accin del aloxano, cuando suponemos que las clulasbeta ya fueron destruidas, como sera el caso del presente trabajo. Lo expuesto, nos


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hace plantear la hiptesis de que estas plantas favoreceran la uti l izacin de laglucosa por parte de las clul as del organismo,con un efecto parecido a la insulina.Los alcaloides constituyen los principios activos responsables del efectohipoglicemiante de las 4 plantas estudiadas.10

Las plantas medicinales con capacidad antidiabtica son una fuente de nuevos compuestosen el tratamiento de la diabetes. La Pasuchaca (Geranium lechleri knuth ) es una de ellas,oriunda del Per utilizada desde hace mucho tiempo para controlar los niveles de glucosa.Esta planta se cultiva en la sierra del Per, a ms de 3500 metros sobre el nivel del mar, sepuede encontrar en los departamentos de Cajamarca, La Libertad, Cerro de Pasco y Ancash.11

Descripcin botnica

La planta es inherente, acaule, silvestre que crece en forma espontnea.

La raz es pivotante. Las hojas son basales pubescentes, sostenidas por peciolos (21 mm de largo), alternas,

palmatipartidas en 7, dentibuladas. Los lbulos ampliamente cuneados - abovados.

Inflorescencia en umbela, pednculo, floral de 10 mm de largo.

Su flor es periantica, diclamidea, heteroclamidea, hermafrodita, actinomorfa.Presenta en su base 5 verticilos de brcteas conolenas.

Su fruto es un esquizocrpico de tipo regma que procede de un gineceo pluricarpelarcon muchos estilos soldados entre s, pero al madurar el fruto se separa cada uno conel correspondiente carpelo.12

Figura N 3: Pasuchaca


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La pasuchaca en su composicin qumica presenta glucsidos (cianogenticosantraquinnicos, anticinicos, saponnicos) gomas, muclagos, taninos, saponinas, clorofila,grasas, esencias ceras, resinas, Flavonoides y Carotenoides que brindan un efectoantioxidante, azucares reductoras.13

Las principales propiedades medicinales atribuidas a la Pasuchaca son: antidiabtico,hipoglucemiante y depurador de la sangre; as mismo, se le considera un fuerte astringente,se suele emplear para combatir diarreas crnicas, clera infantil, hemorragias, inflamacionesde la garganta y lceras bucales.

En la medicina homeoptica se recomienda, adems de los casos ya mencionados, en lasblenorragias, diabetes, hemoptisis, menorragias, lceras de las mamas y atonas del estmagoy laringitis.14

Efecto hipoglucemiante: Segn varios estudios realizados sobre esta planta, se ha

podido verificar que la Pasuchaca es la especie vegetal que se le atribuye comoinhibidor de la -glucosidasa, la protena que degrada el glucgeno en la sntesis dela glucosa.

Propiedades antidiabticas: Estimula la secrecin de la insulina por el pncreas conel fin de eliminar el nivel de azcar en sangre. Otro beneficio importante mediante elconsumo de la Pasuchaca es que inhibe la gluconeognesis que es aumentada en losdiabticos o aumenta la captacin de insulina por sus receptores. Por lo tanto teniendoen cuenta estas dos propiedades mencionadas anteriormente, esta planta estrecomendada para el tratamiento de ciertos tipos de diabetes (diabetes tipo I y II).

Poderoso astringente: Por lo que se utiliza para combatir la diarrea crnica,hemorragias, inflamaciones de la garganta, clera infantil. lceras bucales: De igual manera la Pasuchaca tambin se aplica como depurador de

la sangre.

Se utiliza desde hace muchos aos por el ser humano sin que se produzcan efectos colaterales,se supone que su ingesta no implica riesgo para la salud.15

Se han llevado estudios en el Instituto Nacional de Salud, en cuanto a medir el efectohipoglicemiantes de la pasuchaca en conejos con diabetes experimental tratados con extracto

acuoso de Geranium delsianum Knuth, administrando una hora antes de cada determinacinde glucosa (dosis de 10 g/kg p.c); observndose que la baja de glicemia empieza a la primerahora, acentundose a la cuarta hora y mantenindose a la sptima.

Estos estudios revelaron que el extracto acuoso produjo un efecto hipoglicmico al seradministrado por va oral a conejos diabticos (por accin del aloxano). Este efecto fue cortoy un poco menor a dosis nica de 5 g/kg p.c. que a dosis de 10 g/kg p.c. con la que lleg a


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alcanzar el mximo efecto hipoglicemiante cuatro horas despus de la administracin delextracto.16

Al administrar la droga cada dos horas (una antes de cada determinacin de la glicemia), severific que la hipoglicemia persiste hasta la sptima hora, siendo ms significativa con la

dosis de 10 g/kg p.c.

Se han efectuado estudios de toxicidad aguda, administrando extracto acuoso por va oralmediante sonda metlica a ratones con ayuno de 14 horas; primero se busc por tanteo ladosis aproximada (20, 30 y 100 g/kg p.c) que determina el efecto de un pequeo nmero deanimales, luego se procedi a hacer un ensayo de animales (10 ratones por grupo)observndose la mortalidad en cada dosis empleada por un perodo de 7 das, sobre cuyosresultados se practicaron los clculos estadsticos a fin de determinar la DL50 exacta.17

La dosis de 20 g/kg p.c. administrada al primer grupo no produjo muertes, en el segundo con

la dosis de 30 g/kg p.c. se produjo el 10% de muertes. El porcentaje de mortalidad aumentacon el incremento de la dosis de 50 g/kg p.c. La DL50 corresponde a 35 g/kg p.c.

Despus de cada administracin de la droga y especialmente con las mayores dosis seobserv primero la fase de excitacin con aumento de la frecuencia respiratoria, poraproximadamente 20 minutos, luego viene una fase de depresin disminuyendo la actividadespontnea y la reaccin de alarma, y aumento de la pasividad; posteriormente algunosexperimentaron convulsiones seguidos de una muerte lenta. En la diseccin de los ratones seobserv distensin intestinal.18

III. PROBLEMA

El extracto hidroalcohlico de Geranium r uizii H ieron (Pasuchaca) tendr actividadnormoglicemiante sobre ratas hiperglicmicas inducidas con aloxano?

IV. HIPTESIS

El extracto hidroalcohlico de hojas de Geranium rui zii H ieron (pasuchaca) presenta

actividad normoglicemiante sobre una poblacin de ratas hiperglicmicas inducidas conaloxano.


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V. JUSTIFICACIN

En la actualidad, la diabetes se considera uno de los principales problemas de salud pblicaen el Per, debido a su elevada prevalencia, as como a la grave y variada morbilidad queacompaa a esta enfermedad. Aunque no se conoce el nmero exacto de personas afectadas

por esta enfermedad se calcula que el 8% de la poblacin peruana (aproximadamente 2 400000 personas) la padece.19Es necesario buscar tratamientos alternativos como la herbolaria,sin embargo debido a la poca informacin cientfica existente respecto a la eficacia, seguridady utilizacin de plantas como por ejemplo Geranium rui zii H ieron es necesario generar elconocimiento que proporcione las bases necesarias en cuanto a la forma de utilizacin, dosisy posibles efectos que estas plantas puedan producir, y as ofrecer una alternativa para elmejor aprovechamiento de los recursos naturales.

VI. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:

Determinar el efecto normoglicemiante del extracto hidroalcohlico de Geranium

ruizii H ieron (pasuchaca) en ratones macho con hiperglicemia inducida con aloxano

OBJETIVOS ESPECFICOS:

Elaborar el extracto hidroalcohlico de Geranium rui zii H ieron(pasuchaca)

Determinar los componentes qumicos del extracto hidroalcohlico de pasuchaca Determinar los niveles de Glucemia en ratas

Determinar los niveles de cido rico y transaminasas en suero de ratas luego de la

administracin del extracto

Determinacin del posible mecanismo de accin hipoglicemiante

VII. MATERIAL Y EQUIPOS

MATERIALES

25 Papel Kraft 1 Tamiz N 16 5 bolsas de polietileno 3 frascos ambar de 2 L Embudo de Buchner 1 pliego de papel filtro


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1 recipiente de vidrio Beakers Tubos de ensayo Probeta de 50 mL Pipetas de 1 mL Pipetas de 5 mL Cromatofolios Cuba cromatogrfica Viales Alcohol 96 Agua destilada

Metanol

Diclorometano

Cloroformo

n-Hexano

Benceno

Aloxano 5%

Reactivos

cido rico

in de transaminasas

terminacin de alfa glucosidasa

Reactivos de Precipitacin

Molish

Antrona

Fehling

Tricloruro de hierro

Gelatina

Shinoda

Ninhidrina

Dragendorff Mayer

Bertrand

Sonnenschein

Borntrager

Leberman-Buchard

Hidrxido de amonio


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Equipos

Estufa

Molino de cuchillas

Bomba de vaco o mquina de presin negativa DIVAC 0.6 L

Equipo de Bao Mara Lmpara UV-infrarroja 365 nm-254nm Marca IVA Serial N M02 0955

Espectrofotmetro UV-visible

Glucosmetro

MATERIAL BIOLGICO

Se trabajar con cinco kilos de Pasuchaca (Geranium r uizii H ieron) obtenidas de losalrededores del mercado mayorista La Parada, ubicado entre las avenidas Humboldt y

Aviacin.

ANIMALES DE EXPERIMENTACINLos animales que sern sometidos a este ensayo sern ratas albinas machos de la cepaHoltzman con un peso promedio de 180g provenientes del Instituto Nacional de Salud.

VIII. METODOLOGA:

1. ETAPA FARMACOGNSTICA:

I. ELABORACIN DEL EXTRACTO

CONSERVACIN DE LA DROGA

Recoleccin de la muestra aproximadamente 5 kilos. Identificacin de la muestra en el Museo de Historia Natural de la UNMSM, es este

caso se trata de Geranium rui zii H ieron Pasuchaca. Seleccin de muestras en buen estado (se utiliz toda la planta). Lavado y secado a temperatura ambiente de las plantas de Geranium rui zii H ieron

Pasuchaca. Secado artificial en estufa (45C) de las plantas de Geranium ruizii Hieron

Pasuchaca. Reduccin de tamao del material vegetal en molino de cuchillas. Tamizado de la muestra (1 kilo en total) en mallas N10, N30, N40, N50 y N80

de los trozos de Geranium r uizii H ieron Pasuchaca.


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Guardar en bolsas de polietileno el polvo de Geranium rui zii H ieron Pasuchaca.

ELABORACION DEL EXTRACTO

Maceracin hidroalcohlica (Agua: Alcohol 96) 50:50.

Los componentes solidos se colocan en un recipiente con el solvente y se deja reposar

durante un periodo de 2 semanas, agitndolo con frecuencia hasta la disolucin de

material soluble.

Filtracin al vaco (Embudo de Buchner, bomba de vaco).

Concentracin (Estufa de aire circulante, bandeja de vidrio).

Temperatura:40C, Tiempo:2 das. Almacenamiento a temperatura ambiente.

Recoleccin Seleccin

Reduccion de tamao AlmacenamientoTamizado

Figura 4: Proceso de elaboracin de extracto


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II. COMPOSICIN QUMICA DE PASUCHACA (Geranium rui zii H ieron)

Pasuchaca revela la presencia de las sustancias tpicas para el gnero Geranium:principalmente flavonoides, Alcaloides, taninos y tambin contiene glucsidos deantocianinas, glucsidos de antraquinona, saponinas, gomas y muclagos de plantas, as comolos carotenoides, grasas (incluyendo cera), resinas y aceite etreo. Las cumarinas, esteroidesy triterpenos.1

II.1 METABOLISMO Y TAMIZAJE FITOQUMICO

El tamizaje fitoqumico consiste en un conjunto de reacciones que se realizan para tener unanocin de los posibles componentes qumicos de la planta en estudio.

II.2 COMPONENTES QUMICOS POR TAMIZAJE FITOQUMICODentro de la gran variedad de componentes qumicos, tericamente la Tabebuia ochraceapresenta los siguientes componentes qumicos:

Macerado Filtrado

Secado Extracto seco

Figura 5: Proceso de elaboracin de extracto seco


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FLAVONOIDES

De todos los compuestos fenlicos, el grupo de los flavonoides es el ms extendido en lanaturaleza y dentro de ellos, los flavonoles son los que poseen una mayor actividadantioxidante. Estudios epidemiolgicos han demostrado que una ingestin rica en

flavonoides se correlaciona con un menor riesgo de enfermedad cardiovascular y se haobservado que actan a diferentes niveles (tabla 2). Por un lado, disminuyen las tasas decolesterol y de LDL oxidada debido a sus propiedades antioxidantes como fuertes quelantesde metales y como donadores de hidrgeno (a travs de los grupos hidroxilo). As, en general,el grado de actividad antioxidante se correlaciona con el nmero de grupos hidroxilo. Porello, los ortodifenoles son buenos antioxidantes, mientras que compuestos monofenol, comoel tirosol, no lo son tanto. 2

Segn un estudio de cuti cuti existen algunos principios activos aislados de las plantas como:Los flavonoides y alcaloides que se encuentran en gran proporcin en esta y otras plantas con

efecto hipoglucemiante, entre los cuales tenemos a los flavonoides: rutina y quercetina quecuentan con investigaciones probadas de su efecto hipoglucemiante; la quercetina ejerce unefecto hipoglucemiante, inhibiendo a la enzima aldosa reductasa, la cual est relacionada conla produccin de polioles, responsables de los efectos crnicos en la diabetes y, por suspropiedades antioxidantes, reduce la incidencia de enfermedades cardiovasculares,incluyendo las trombosis vasculares.3, 4

En otro estudio relacionan el extracto etanlico, observaron mayor efecto hipoglicemiante (pes menor que 0.05) y mejor proteccin del pncreas, hgado y rin del dao causado por

aloxano segn el estudio histopatolgico. Los hallazgos posiblemente justifican porque losalcaloides podran inducir secrecin de insulina; los flavonoides libres actuaran comobarredores de especies reactivas de oxgeno, y los compuestos fenlicos que estaran ligadosa receptores proliferadores de peroxisomas.5

II.3 RELACIN DE LOS COMPUESTOS QUIMICOS CON LA ACTIVIDADNORMOGLUCEMIANTE.

Grupos de compuestos qumicos relacionados con la actividad hipoglucemiante de plantasson, de mayor a menor importancia: polisacridos, alcaloides, glucopptidos, terpenos,pptidos, aminas, estero ides, flavonoides, lpidos, cumarinas, compuestos azufrados, ionesinorgnicos y otros.

La importancia del cromo en el metabolismo de los glcidos se debe a que, junto con el cidonicotnico y aminocidos, forma parte del factor de tolerancia a la glucosa (GTF, GlucoseToleran - ce Factor), protena cuya funcin es facilitar la unin de la insulina a los receptores

1. Drogas ricas en cromo.


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celulares de insulina y por tanto aumentar la capacidad de esta hormona para transportaraminocidos y glucosa al interior de la clula, ayudando a normalizar el nivel de glucosa ensangre.

La actividad hipoglucemiante parece deberse a las saponinas esterodicas, a los pptidos(similares a la insulina) y a los alcaloides, pero se desconoce si la actividad se debeprincipalmente a uno de los grupos o al conjunto. Respecto al mecanismo de accin delfrmaco, todava no se conoce demasiado bien; algunos autores indican que la plantamomrdica incrementa el nmero de clulas beta en el pncreas, mientras que otros handemostrado una actividad semejante a la insulina o de incremento de su liberacin.

Hallazgo de Aminoacidos

Causantes de la actividad hipoglucemiante parece tener un papel importante el aminocidoaislado como mayoritario, 4-hidroxi-isoleucina.cste parece ejercer un efecto directo sobreislotes de Langerhans, incrementando la liberacin de insulina inducida por glucosa.

Hallazgo de Heterosido Cianogeneticos

Los extractos de diversas plantas pueden llegar a disminuir el nivel de glucosa como a laalholva (se le ha llegado a llamar popularmente insulina vegetal). Algunos autores

atribuyen esta actividad a los hetersidos cianogenticos.

Hallazgo de Heterosido, Alcaloides, Peptidos

La actividad hipoglucemiante: Heterosidos de fitosteroles, pptidos bioactivos entre los quedestaca el polipptido P (pptido con 166 residuos, insulinomimtico) y alcaloides como lamomordicina. No se sabe cul de los tres grupos de principios es ms efectivo comohipoglucemiante o si actan conjuntamente.

2. Especies vegetales ricas en polisacridosCASO GOMA GUAR (Cyamopsis tetragonolobus L.): El efecto hipoglucemiante se debeprincipalmente a la viscosidad que alcanza el muclago en contacto con el agua, capaz dedisminuir la velocidad de absorcin de los hidratos de carbono y de retrasar el vaciadogstrico, lo que conlleva una mejor utilizacin de la insulina endgena, disminuyendo lahiperglucemia y la insulinemia posprandial. Asimismo, tambin contribuye a disminuir lacolesterolemia, principalmente el cLDL, es un regulador intestinal, por lo que se puedeutilizar en algunos casos de diarreas. Adems, produce sensacin de saciedad, por lo quetambin se utiliza en dietas de adelgazamiento.

3. Plantas con otros componentes qumicosHallazgo de Saponinas, pptidos y alcaloides


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En un estudio realizado con animales, se ha demostrado que el jugo de los frutos aumenta elnmero de clulas beta en el pncreas de ratas diabticas

Hallazgo de Peptidoglicanos

Los principales componentes con actividad hipoglucemiante son los panaxanos. Se hademostrado que los panaxanos A y B estimulan el uso heptico de la glucosa al aumentar laactividad de la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, la fosforilasa A y la fosfofructoquinasa. Elpanaxano A no afecta a los niveles plasmticos de insulina ni a la sensibilidad a la mismamientras que el panaxano B incrementa los niveles sanguneos de insulina al aumentar laproduccin de la misma desde los islotes pancreticos y aumenta la sensibilidad a la insulinaal aumentar el nmero de receptores para la misma

II.4 FUNDAMENTOS DE LAS REACCIONES QUMICAS DE LAIDENTIFICACIN DE COMPONENTES QUMICOS

1.-Reconocimiento de carbohidratos: Entre las tcnicas de reconocimiento decarbohidratos tenemos:

PRUEBA DE MOLISH:Al haberse depositado en el fondo del recipiente el cido sulfrico esteacta sobre la glucosa arrancndole una molcula de agua y volviendo la molcula de glucosaun derivado del furfurral en este caso el hidroximetilenfurufural. Luego de esa reaccin semezcla con el alfa-naftol en presencia de cido sulfrico atacando la zona del doble enlacedel grupo carbonilo unindose en un compuesto mixto pues presenta sustituyentes cidos yfenolicos que toma una coloracin rojiza violeta en un anillo del tubo de ensayo.

PRUEBA DE FEHLING:Coloracin rojiza en el fondo del recipiente demostrando que la salcprica se redujo a una sal cuprosa en este caso el xido cuproso, volvindose a regenerar eltartrato de sodio, formndose el gluconato de sodio y el hidrxido de sodio.

2.-Reconocimiento de compuestos fenlicos:

Reaccin coloreada con el cloruro frrico:El fenol, as como otros compuestos que poseenestructura enlica, da con el cloruro frrico color rojo o purpura. La reaccin es compleja yno puede representarse por una ecuacin qumica simple; se cree que es debido a la formacinde un complejo del hierro con ndice de coordinacin seis acompaada de una oxidacin delfenol y reduccin por parte del frrico a ferroso. Reaccin muy sensible.

3.-Reconocimiento de taninos con gelatina: Los taninos precipitan las protenas ensolucin. Originan desde opalescencia blanca hasta precipitado. Tambin pueden hacerprecipitar alcaloides.

4.-Reaccin de Shinoda (Zn / HCl cc):El zinc en polvo reacciona con HClcc. El hidrgenogenerado produce por reduccin el in flavilio de color rojo escarlata (vara desde el rosa


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muydbil hasta rojo escarlata). Todos los flavonoides, excepto chalconas, auronas, eisoflavonas, dan positiva esta reaccin.

5.-Reaccin de Rosenheim:En la reaccin de Rosenheim, el cido clorhdrico produce unadeshidratacin del grupo hidroxilo de la posicin 3 de la leucoantocianidina y catequina, que

es favorecida por la temperatura (100C), adems se produce la ruptura del anilloheterocclico. La deslocalizacin de 12 e y 2 e n, por todo el metabolito, produce la coloracinroja de la leucoantocianidina y marrn de la catequina.

6.-Reaccin de Ninhidrina para aminocidos:La ninhidrina descarboxila y desamina alaminocido gracias a su gran poder oxidante. La ninhidrina reducida reacciona con unamolcula de ninhidrina no reducida y con el amoniaco resultante de loa reaccin para formarun compuesto complejo que presenta coloracin violeta.

7. Reconocimiento de Alcaloides: Las tcnicas de reconocimiento son basadas en lacapacidad que tienen los alcaloides en estado de sal (extractos cidos), de combinarse con elyodo y metales pesados como bismuto, mercurio, tugsteno formando precipitados; estosensayos preliminares se pueden realizar en el laboratorio o en el campo.

Se utilizan reactivos generales para detectar alcaloides como: la solucin de yodo-yoduro depotasio (Reactivo de Wagner), mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer),tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff) la presencia de alcaloides se detectapor la formacin de un precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona esta reactivo a unasolucin cida de alcaloides. De los precipitados lavados se puede recuperar los alcaloidescon una solucin saturada de carbonato de sodio.Algunas sustancias oxigenadas con altadensidad electrnica como es el caso de las cumarinas, chalconas, maltol, acetogeninas, etc.

pueden dar falsos alcaloides con el reactivo de Dragendorff.,cido slico tngtico (reactivode Bertrand).6

8.- Reaccin de Borntrager: Pesamos unos gramos de droga en polvo, agregamos ml dehidrxido de sodio diluido, decoccin 15 min, decantacin, mezclamos con HCl diluido,adicionamos ter de petrleo, decantamos, fase no polar agregar hidrxido de amonio.Observamos Coloracin rosada perteneciente a la genina y una coloracin amarilloperteneciente al hetersido antroquinnico.7

9.- Reaccin de Lieberman-Burchard:En un tubo de ensayo colocar 2 ml de solucinclorofrmica de colesterol, aadir 10 gotas de anhdrido actico, y luego 3 gotas de cido

sulfrico concentrado.8

10.- ndice afrosimtrico: Son sustancias que por disminucin de la tensin superficialforman espuma (poder afrgeno) y forman emulsiones (emulgentes) Es la principalpropiedad fsica de las saponinas.9

11.- Reaccin de Baljet:Las sesquiterpenlactonas producen coloraciones naranja cuando setratan con picrato de sodio o potasio.10


19/49

12.- Ensayo de Legal: Las sesquiterpenlactonas con anillos g-lactona a,b-insaturadosproducen coloracin rosa cuando se disuelven en piridina, se aade nitroprusiato de sodio yun lcali. La prueba tambin la dan positiva las lactonas b,g-insaturadas cuando no secontrola el pH, ya que se isomerizan en medio alcalino. La prueba tambin la dan positivalas metilncetonas.11, 12

III. TAMIZAJE FITOQUMICO

Tabla N1: Tamizaje fitoqumico de pasuchaca

METABOLITO REACCIN PROCEDIMIENTO REACCIN POSITIV

CARBOHIDRATOS Molish X gotas de MP + III gotas deMolish agitar +III gotas deH2SO4CC

Anillo violeta

Antrona X gotas de MP + III gotas de

Antrona

Coloracion verde

Fehling X gotas de MP + III gotas deFehling A + III gotas de Fehling B +calentar en B.M.

Precipitado rojo ladri

COMPUESTOSFENLICOS

FeCl3 X gotas de MP + III gotas de FeCl310%

Taninos hidrolizablesazul negruzcoTaninos condensados(glicos y/o catquicoflavonoides: verde

TANINOS Gelatina en suerofisiolgico

X gotas de MP + III gotas degelatina

Precipitado densoblanco

FLAVONOIDES Shinoda X gotas de MP + 1-2 virutas demagnesio metlico + III gotas deHClcc

Chalconas, auronas,isoflavanonas:No hay coloracin.Isoflavanonas: amarirojizo.Flavonolones: rojo amagenta.

ANTOCIANINAS YFLAVONOIDESCATQUICOS

Rosenheim(sol. Yodo Yodurada)

X gotas de MP + III gotas deRosenheim

Coloracin rojo oscur

AMINOCIDOSLIBRES Y GRUPOSAMINO

Ninhidrina (0,1%enetanol)

X gotas de MP + III gotas deNinhidrina + calentar en B.M. 10minutos.

Coloracin violcea

METABOLITO REACCIN PROCEDIMIENTO REACCIN POSITIV


20/49

ALCALOIDES Dragendorff X gotas de MP + evaporar elsolvente B.M + V gotas de HCl10% +III gotas de Dragendorff

Precipitado naranja

Mayer X gotas de MP + evaporar elsolvente B.M + V gotas de HCl10% + III gotas de Mayer

Precipitado blanco

Bertrand X gotas de MP + evaporar elsolvente B.M + V gotas de HCl10% + III gotas de Bertrand

Precipitado blanco

Sonnenschein X gotas de MP + evaporar elsolvente B.M + V gotas de HCl10% + III gotas de Sonnenschein

Precipitado amarillo-verdoso

NAFTAQUINONAS,ANTRAQUINONAS YANTRONAS

Borntrager X gotas de MP + III gotas deBorntrager

Coloracin roja

TRITERPENOIDES YESTEROIDES

Lieberman-Burchard X gotas de MP + llevar asequedad en B.M + X gotas decloroformo + III gotas deanhdrdo actico + H2SO4CC enzona sin agitar

Esteroides: Verde azuTriterpenoides: Rojo-naranja

SAPONINANS Formacin de espuma 1mL de MP + 5mL de aguadestilada + agitar fuertementepor 1min.

Formacin de 0.5 a 1de espuma estable po15min.

GLICSIDAS Baljet X gotas de MP + V gotas de cidopcrico 1% + V gotas de NaOH al5%

Coloracin anaranjad

Vainilln Clorhdrico X gotas de MP + V gotas de

Vainilln clorhdrico

Coloracin rojiza

LACTONAS Legal X gotas de MP + V gotas denitroprusiato de sodio 0.5% + Vgotas de KOH 2N

Coloracin rojo oscur

CUMARINAS NH4OHcc X gotas de MP + papelhumedecido con NH4OHccenboca de tubo + calentar por 5min

Fluorescencia celeste

IV. ENSAYO DE SOLUBILIDAD

En tubos de ensayo: mg del extracto seco en 1 mL de solvente.

Solvente

1.Agua

2.Metanol


21/49

3.Etanol

4.n-Butanol

5.Acetona

6.Acetato de etilo

7.Diclorometano

8.Cloroformo

IIV. Cromatografa

1. Cromatografa en capa fina

Preparacin de muestra: pesar 0,2 g de extracto seco y solubilizar en 1 ml de

agua destilada.

Fase estacionaria: cromatofolios de silicagel G 60F 254

Fase mvil: sistema de solventes diclorometano: metanol (1:1).

Deteccin: luz UV 254 nm y 365 nm.

Revelador: AlCl3.

2. Cromatografa preparativa

Preparacin de muestra: pesar 0,2 g de extracto seco y solubilizar en 1 ml de

agua destilada.

Fase estacionaria: cromatofolios de silicagel G 60F 254

Fase mvil: sistema de solventes diclorometano: metanol (1:1).



22/49

2. ETAPA FARMACOLOGICA:

I. FASE FARMACOLGICA

Los animales de experimentacin fueron ratas Rattus norvegicus" cepa "Holtzman 180g a

220g y de dos meses de edad obtenidas del Centro Nacional de Produccin de Biolgicos delInstituto Nacional de Salud. Las ratas fueron colocadas en jaulas con agua y alimento. La

alimentacin de estos animales fue con productos elaborados por la planta de alimentos del

Departamento de Nutricin de la Facultad de Zootecnia de la Universidad Nacional Agraria

La Molina.

II.1 INDUCCIN DE LA HIPERGLICEMIA EXPERIMENTAL

Se realiz con aloxano, producindose la necrosis de las clulas del pncreas. Se procedia seleccionar a las ratas en dosis 130 mg/kg de peso, va intraperitonial.

II.2 PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO FARMACOLGICO

Las ratas fueron agrupadas en cuatro grupos: el primero para recibir el tratamiento con el

extracto hidroalcohlico de la planta Geranium ruizii Hieron. El segundo grupo para ser

tratadas con glibenclamida, el tercer grupo no recibir tratamiento y el cuarto grupo sera el

grupo control.

Se midi a las ratas la glucemia basal con ayuda del glucmetro ACCU- CHEK,

posteriormente a los tres primeros grupos se les administr aloxano 130 mg/kg de peso va

intraperitonial, el cuarto grupo no se le administr aloxano, al ser control.

El primer grupo de ratas aloxanadas se le administr por va oral un tratamiento diario con el

extracto hidroalcohlico de la planta Geranium ruizii Hieron tres dosis diferentes a un

subgrupo 125 mg/kg, a otro subgrupo 150 mg/kg y al ltimo 175mg/kg de peso.

El segundo grupo se le administr por va oral diariamente el frmaco glibenclamida que es

usado como hipoglicemiante a una dosis de 5mg/kg de peso.

Al tercer grupo de ratas aloxanadas no recibi ningn tratamiento, para poder comparar el

efecto hipoglucemiente del extracto en estudio y del frmaco glibeclamida.


23/49

El cuarto grupo de ratas no aloxanadas no recibi ningn tratamiento.

TABLA N 2 : Distribucin de los grupos de tratamiento.

GRUPO TRATAMIENTO

1 DIABTICAS + EXTRACTO DE PASUCHACA

125 mg/kg 150 mg/kg 175 mg/kg

2 DIABTICAS + GLIBENCLAMIDA

3 DIABTICAS

4 SANAS

II. 3. DETERMINACIN DE LOS NIVELES DE GLUCOSA

A las ratas se les hizo tomas de sangre los das 1, 2, 3, 4, 10, 13 da, para determinar los

niveles de glicemia. La sangre de las ratas se obtuvo mediante el corte de cola y midindole

en el glucmetro ACCU-CHEK.

II.4 REACCIONES BIOQUMICAS

Al terminar el tratamiento con el extracto y el frmaco se realiz los ensayos de transaminasas

(GOT y GPT), ureasa y creatinina directa. Se utiliz el plasma de las ratas el cual se obtuvo

al sacrificar al animal.

Se utiliz el kit de transaminasas 200 Wiener lab, creatinina directa Wiener lab para

determinar el dao ocasionado al hgado y al corazn al analizar estas enzimas.

II. DETERMINACIN DEL EFECTO NORMOGLICEMIANTE DEL EXTRACTO

Se utilizar el extracto a una concentracin de 250mg/kg (dosis adecuada para evaluar elefecto hipoglucemiante segn el Instituto de Investigacin de la facultad de MedicinaUSMP).

Los animales de experimentacin sern sometidos a las pruebas 48 horas despus de laadministracin del aloxano, momento en el cual se les tomar una prueba basal de glicemia


24/49

para evaluar si el nivel de glucosa est por encima de 300mg/dL (valor mnimo paraconsiderar diabetes qumica)20 y todos los animales que cumplan este requisito se lesadministrar la sustancia en estudio, por va oral, mediante sonda rgida.

Los controles sucesivos se efectuarn a la hora, dos, cuatro y 24 horas posteriores.

La determinacin los niveles de glucosa se realizar por medio de tiras reactivas ACCU-CHEK y ledas mediante el glucmetro respectivo ROCHE. La sangre se obtendr de uncorte en la cola, que comprometer una vena marginal evitando la hemorragia.

III. DETERMINACIN DEL CIDO RICO EN SUERO

Se llevar a cabo mediante el mtodo cintico colorimtrico, utilizando kits Uricostat deLaboratorios Wiener, considerando como valor normal en ratas machos concentracionessricas de 1.28 hasta 3.71 mg/dL.

IV. DETERMINACIN DE TRANSAMINASAS

Las enzimas AST y ALT sern valoradas utilizando un equipo de espectrofotometra, modeloKonelab, se utilizar el kit comercial (Biosigma C.A). Se realizar el ensayo cintico basadoen las recomendaciones dictadas por la International Federation for Clinical Chemistry(IFCC) para la determinacin de cada enzima, considerando como valor normal en ratasmachos concentraciones sricas de 61.4 hasta 276.2UI/L para AST y 41 hasta 83.1UI/L.21

V. DETERMINACIN DEL MECANISMO DE ACCIN

De acuerdo con varias investigaciones sobre Geranium ru izii H ieron, esta plantaposiblemente aumenta la utilizacin perifrica de la glucosa o incrementa la captacin de lamisma por el msculo e inhibira la gluconeognesis heptica aumentada en los diabticoso aumenta la recepcin de la insulina a sus receptores, considerando que la insulina noejerce efecto, para el transporte de la glucosa sobre ciertas clulas. La enzima en estudiopara este proyecto de investigacin ser la alfa glucosidasa.

IX. RESULTADOS

1. RESULTADOS FARMACOGNOSTICOS:

I. CONSERVACIN DE LA DROGATAMIZADO: Se realizaron 10 tamizados en las que se obtuvo como peso total874,1902 gramos de la muestra.


25/49

Primera tamizada.

N de malla PesosMalla N10 0.7147gMalla N30 44.8811gMalla N40 21.3503gMalla N50 10.0483gMalla N80 9.1603g

Segunda tamizada.

N de malla PesosMalla N10 0.8102gMalla N30 45.8177gMalla N40 21.2354gMalla N50 10.1422g

Malla N80 9.3545g

Tercera tamizada.


Cuarta tamizada.


Quinta tamizada.



26/49

Sexta tamizada.


Sptima tamizada.

N de malla PesosMalla N10 0.9120gMalla N30 46.4041gMalla N40 21.1012gMalla N50 10.9351g

Malla N80 9.4003g

Octava tamizada.


Novena tamizada.


Decima tamizada.



27/49

II. ELABORACION DEL EXTRACTO

Con la cantidad obtenida en el proceso de tamizado, se procedi al macerado usndose 2

frascos con 437.0951 gramos de muestra cada una, en un medio (Agua: Alcohol 96)

(50:50). Posteriormente se filtr y luego se concentr (Estufa de aire circulante, bandeja

de vidrio) a temperatura de 40C por el tiempo de 2 das obtenindose un extracto seco

de 46.47 gramos.

III.TAMIZAJE FITOQUIMICO

DROGA: TODA LA PLANTA

Tabla N : Resultados de las pruebas cualitativas

METABOLITO REACCIN OBSERVACIN RESULTADOS

AGUA ALCOHOL

CARBOHIDRATOS

MolishFormacin de un anillo violeta

(abajo)++ ++

benedict Precipitado marrn +++ +++

FehlingPrecipitado rojo ladrillo muy

fino, se suspende rpido+++ ++

COMPUESTOS FENLICOS FeCl3

Precipitado verdeoscuro/coloracin verde con

poco pp+++ +

TANINOS

Gelatina Precipitado blanquecino +++ +

Agua deBromo

Precipitado rosado +++ -

TRITERPENOIDES YESTEROIDES

Lieberman-Burchard

Anillo rojizo en base ++ ++

FLAVONOIDES Shinoda Coloracin rosado naranja+++ ++

GLICSIDAS Baljet Coloracin anaranjada ++ -

NAFTAQUINONAS,ANTRAQUINONAS YANTRONAS

Borntrager Coloracin rojiza +++ +++

AMINOCIDOS LIBRES YGRUPOS AMINO

Ninhidrina No se observ nada - -

Popoff No se observ nada - -

ALCALOIDES DragendorffPrecipitado rojizo(casi

rosado)/solo coloracin++ -


28/49

Mayer Turbidez/nada ++ -

Bertrand Precipitado blanco ++ -

Sonnenschein Precipitado verde oscuro/solucinmostaza con verde al fondo +++ -

SAPONINAS saponinas Espuma (1,5 cm) que perdura porms de 10 minutos

++ No se hace

LEYENDA: (-) Negativo, (+)Trazas, (++)Moderado, (+++)Abundante

IV. Ensayo de solubilidad

Solvente Resultado

1.Agua +++2.Metanol ++

3.Etanol +++

4.n-Butanol -

5.Acetona -

6.Acetato de etilo -

7.Diclorometano -

8. Cloroformo -

Figura N5 Reconocimiento cualitativo de alcaloides


29/49

V. Cromatografa

Cromatografa en capa fina

Fase mvil: diclorometano: metanol (1:1).


Revelador: FeCl3.

Placa cromatogrfica sembrada

Revelado con luz UV 254 nm Revelado con luz UV 365 nm

1

3

4

5


30/49

Revelado con tricloruro frrico (FeCl3)

Cromatografa preparativa

Fase mvil: diclorometano: metanol (1:1).


Placa cromatografica sembrada

1

2

3


31/49

Revelado con luz UV 254 nm Revelado con luz UV 365 nm

2. RESULTADOS FARMACOLGICOS:

Grupos Media Desv . Est . Prueba de Normalidad pBlanco 108,7 11,02 0,463

Aloxano 130 mg/Kg 468,3 63,01 0,204

Glibenclamida 5 mg/Kg 475,2 51,45 0,246

Pasuchaca 125 mg/Kg 411,0 140,00.150

Pasuchaca 150 mg/Kg 527,0 37,48

Pasuchaca 175 mg /Kg 542,0 31,11

Tabla 1: Concentracin inicial de glucosa en sangre para cada grupo tratado, su Media y DesviacinEstndar respectivamente, y la prueba de normalidad.

1

2

3

4

5


32/49

1401301201101009080

99

95

90

80

70

60

50

40

30

20

10

5

1

blanco

Porcentaje

Media 108.7

Desv.Est. 11.02

N 3KS 0.191

Valor P >0.150

Grfica de probabilidad de BlancoNormal

650600550500450400350300

99

95

90

80

70

60

50

40

30

20

10

5

1

Aloxano

Porcentaje

Media 468.3Desv.Est. 63.01

N 6

KS 0.264

Valor P >0.150

Grfica de probabilidad de AloxanoNormal

Figura 6: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo blanco con un p0,05

Figura 7: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo Aloxano con un p0,05


33/49

600550500450400350

99

95

90

80

70

60

50

40

30

20

10

5

1

Glibenclamida 5 mg /Kg

Porcenta

je

Media 475.2Desv.Est. 51.45

N 5

KS 0.243

Valor P >0.150

Grfica de probabilidad de Glibenclamida 5 mg /KgNormal

8007006005004003002001000

99

95

90

80

70

60

50

40

30

20

10

5

1

Pasuchaca 125 mg / Kg

Porcentaje

Media 411

Desv.Est. 140.0

N 2

KS 0.260

Valor P >0.150

Grfica de probabilidad de Pasuchaca 125 mg/KgNormal

Figura 8: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo Glibenclamida con un p0,05

Figura 9: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo Pasuchaca 125 mg/Kg con

un p0,05.


34/49

625600575550525500475450

99

95

90

80

70

60

50

40

30

20

10

5

1

Pasuchaca 150 mg / Kg

Porcenta

je

Media 527.5

Desv.Est. 37.48

N 2

KS 0.260Valor P >0.150

Grfica de probabilidad de Pasuchaca 150 mg / KgNormal

625600575550525500475450

99

95

90

80

70

60

50

40

30

20

10

5

1

Pasuchaca 175 mg /Kg

Porcentaje

Media 542Desv.Est. 31.11

N 2

KS 0.260

Valor P >0.150

Grfica de probabilidad de Pasuchaca 175 mg / KgNormal

Figura 10: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo Pasuchaca 150 mg/Kg

con un p0,05.

Figura 11: Grafica de probabilidad o curva de normalidad del grupo Pasuchaca 175 mg/Kg con

un p0,05.


35/49

1814108420

600

500

400

300

200

100

Glucosa

Aloxano 130 mg/Kg

Blanco

Glibenclamida 5 mg/Kg

Pasuchaca 125 mg/KgPasuchaca 150 mg/Kg

Pasuchaca 175 mg/Kg

Tratamiento

Grfica Lineal Comparativa de Tratamientos

Figura 12: Grafica comparativa del efecto hipoglicemiantes de los grupos tratados a partir de

ratas diabticas.


36/49


37/49

Grupos Eficacia %

Blanco +7,38 %

Aloxano 130 mg/Kg -28,12 %

Glibenclamida 5 mg/Kg +65,03 %

Pasuchaca 125 mg/Kg +14,84 %

Pasuchaca 150 mg/Kg +20,97 %

Pasuchaca 175 mg /Kg +44,83 %

Grupos Pre Tratamiento

(Induccin)

Post Tratamiento

(Da 18)

p

Blanco 108,7 11,02 100,67 2,31 0,055

Aloxano 130 mg/Kg 468,3 63,01 600,00,0 0,000

Glibenclamida 5 mg/Kg 475,2 51,45 166,240,0 0,000

Pasuchaca 125 mg/Kg 411,0 140,0 350,0135,8 0,702

Pasuchaca 150 mg/Kg 527,0 37,48 416,534,6 0,091

Pasuchaca 175 mg /Kg 542,0 31,11 299,032,5 0,017

Tabla 3: Comparacin de las concentraciones de glucosa antes y despus de cada tratamiento utilizando la prueba

estadstica T de Student con 0,05.

Tabla 4: Porcentaje de eficacia en el efecto hipoglicemiante de cada grupo tratado


38/49

Pasucha

ca175

mg/Kg

Pasucha

ca150

mg/Kg

Pasucha

ca125

mg/Kg

Glibe

nclamida

5mg/Kg

Blanco

Aloxan

o

60

40

20

0

-20

-40

Grupos

Porcentaje

Grfica Comparativa de Eficacia

Figura 13: Grafica comparativa de eficacia en el efecto hipoglicemiante.

Tabla 5: Pruebas Bioqumicas de Transaminasas, Creatinina y BUN.


39/49

Pasuchac

a175

mg/Kg

Pasuchac

a15

0mg/Kg

Pasuchac

a125

mg/Kg

Norm

al

G

libencla

mid

a

Alox

ano

35

30

25

20

15

10

5

0

Grupos

ValordeTransaminasas

Grfica de GPT (U/L)

Pasuchaca1

75mg/Kg

Pasuchaca1

50mg/Kg

Pasuchaca1

25mg/Kg

N

ormal

Glibenc

lamid

a

Alo

xano

60

50

40

30

20

10

0

Grupos

ValordeTransaminasa

s

Grfica GOT (U/L)

Figura 14: Grfica comparativa en barras de las transaminasas GPT

Figura 15: Grfica comparativa en barras de las transaminasas GOT


40/49

Pasucha

ca175

mg/Kg

Pasucha

ca150

mg/Kg

Pasucha

ca125

mg/Kg

Norm

al

Glib

enclam

ida

Alox

ano

12

10

8

6

4

2

0

Grupo

ValordeCreatin

ina

Grfica Creatinina (mg/L)

Pasuchac

a175

mg/Kg

Pasuchaca150

mg/Kg

Pasuch

aca125

mg/Kg

N

ormal

Glibenc

lami

da

Alo

xano

3.0

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

0.0

Grupos

ValordeNitrogenoUreico

Grfica de BUN (g/L)

Figura 16: Grfica comparativa en barras de Creatinina

Figura 12: Grfica comparativa en barras de la nitrgeno rico en sangre.


41/49

X. DISCUSION:

DISCUSION FARMACOGNOSTICA:

El proceso de conservacin de la droga es de suma importancia ya que depende mucho deello para obtener un resultado confiable en cualquier investigacin. Por ejemplo laidentificacin me evita las adulteraciones y sustituciones de la muestra y se debe realizar encentros de referencia como herbarios nacionales. En cuanto a la seleccin y lavado de ladroga, me permite trabajar con muestras en buen estado y retirar tierra adheridarespectivamente. En cuanto al secado, este proceso es importante ya que interrumpe losprocesos de degradacin enzimtica y fermentacin, impide el desarrollo demicroorganismos y las reacciones de oxidacin e hidrolisis. En lo que respecta a la reduccindel tamao de partculas, las drogas reducidas poseen membranas celulares parcialmentereducidas que facilitan la disolucin de los constituyentes celulares en el lquido externo. Eltamizado es necesario para evitar reducir el rendimiento de la extraccin debido a lacompactacin de los polvos que dificultan el paso del solvente en el proceso de maceracin.Y finalmente el almacenamiento de la droga que me permitir realizar posteriormente el

macerado.1

En proceso de elaboracin del extracto, la maceracin me permitir la extraccin de losprincipios activos de la planta y para esto debemos tener en cuenta al momento de elegir elsolvente la cantidad de metabolitos a extraer, la velocidad de extraccin, diversidad demetabolitos en la droga y no debe ser toxico ni interferir con el bioensayo.2

Algunas sustancias oxigenadas con alta densidad electrnica como es el caso de lascumarinas, chalconas, maltol, acetogeninas, etc. pueden dar falsos alcaloides con el reactivode Dragendorff.

En trabajos anteriores el pool de alcaloides puede ser perjudicial para la salud debido a sutoxicidad, sin embargo la asociacin de este y flavonoides puede es buena debido a quecontrarresta la toxicidad.

La planta poseen gran cantidad de saponinas, alcaloides y flavonoides uno de estoscompuestos puede dar la actividad normoglicemiante o la actividad puede deberse enconjunto. Para determinar si una molcula posee actividad ser necesario que se encuentresu mecanismo, entre estos mecanismos sobre la normoglucemia destacan:

Antagonismo directo competitivo con la insulina, estimulacin de la secrecin de insulina,estimulacin de la glucognesis y gluclisis heptica, adrenomimeticismo, bloqueo de loscanales de potasio de las clulas beta pancreticas, estimulacin del AMPc (segundo

mensajero) y modulacin de la absorcin de glucosa desde el intestino, entre otros.El proceso de conservacin de la droga es de suma importancia ya que depende mucho deello para obtener un resultado confiable en cualquier investigacin. Por ejemplo laidentificacin me evita las adulteraciones y sustituciones de la muestra y se debe realizar encentros de referencia como herbarios nacionales. En cuanto a la seleccin y lavado de ladroga, me permite trabajar con muestras en buen estado y retirar tierra adheridarespectivamente. En cuanto al secado, este proceso es importante ya que interrumpe losprocesos de degradacin enzimtica y fermentacin, impide el desarrollo de


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microorganismos y las reacciones de oxidacin e hidrolisis. En lo que respecta a la reduccindel tamao de partculas, las drogas reducidas poseen membranas celulares parcialmentereducidas que facilitan la disolucin de los constituyentes celulares en el lquido externo. Eltamizado es necesario para evitar reducir el rendimiento de la extraccin debido a lacompactacin de los polvos que dificultan el paso del solvente en el proceso de maceracin.

Y finalmente el almacenamiento de la droga que me permitir realizar posteriormente elmacerado.1

En proceso de elaboracin del extracto, la maceracin me permitir la extraccin de losprincipios activos de la planta y para esto debemos tener en cuenta al momento de elegir elsolvente la cantidad de metabolitos a extraer, la velocidad de extraccin, diversidad demetabolitos en la droga y no debe ser toxico ni interferir con el bioensayo.2

DISCUSION FARMACOLOGICA:

En la presente investigacin se ha determinado la actividad hipoglicemiante empleando el

extracto hidroalcohlico de (planta) en ratas aloxanadas.

La diabetes experimental fue inducida con aloxano (130mg/Kg) el cual produce la toxicidad

selectiva de las clulas pancreticas, gran parte de estas clulas estn daadas pero no el

100% de ellas, quedando una pequea cantidad no necrosada, producindose una diabetes

tipo 2. El mecanismo del dao pancretico por el aloxano se justifica debido a su similitud

molecular con la estructura de la glucosa, por ello el aloxano debe ser recaptado por la clula,

va transportador de glucosa GLUT-2 de baja afinidad en la membrana plasmtica. El

aloxano pude generar especies reactivas de oxgeno (ROS), produciendo el cido dialrico,

por lo tando se asume que la accin txica del aloxano producida en las clulas es iniciadapor la formacin intracelular de radicales libres.

Los estudios realizados de la accin normoglicemiante de la pasuchaca tenemos al realizado

por Lara (2000)1, en su estudio determin el Efecto Hipoglucemiante y DL 50 del extracto

acuoso de hojas y flores de Geranium sessiliflorum Cav. "Pasuchaca" en animales de

experimentacin, no se encontr mortalidad en la dosis de 200,300 y 400 mg/Kg p.c. de los

extractos acuosos de dicha droga en estudio en las ratones; la dosis mnima efectiva del

extracto acuoso fue de 6.25 mg/Kg p.c en ratas normoglucmicas.

Chvez y Espinoza (1998)2, investigaron la Actividad biolgica de Geranium lechleri Knuth

(Pasuchaca) sobre la glucemia en animales de experimentacin cuyo extracto fue acuoso

atomizado de hojas; donde se hall la dosis media letal que es mayor a 12,5 g/kg de peso

corporal en ratas.


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En este trabajo de investigacin se estudi la especie Geranium ruizii Hieron a dosis de 125

mg/kg, 150mg/kg y 175 mg/kg.

Antes de realizar el tratamiento se hizo la prueba de normalidad Tabla 1, con ello se verific

que los grupos tratados poseen una distribucin normal. Se puede observar en la figura

1,2,3,4,5,6 que los datos para cada grupo tratado ( Blanco, Aloxano, Pasuchaca,

Glibenclamida) presenta una curva casi lineal lo que nos indica que los datos no estn muy

dispersos y por lo tanto cumple con una distribucin normal. Una vez con ello se procedi al

anlisis de verificacin de hiptesis, la cual fue que el extracto hidroalcoholico de Geranium

ruizii Hieron tiene efecto hipoglicemiante en Rattus norvegicus de cepa Holtzman con

Diabetes Mellitus Tipo 2, para ello se utiliz la prueba estadstica T- Student con = 0,05,

se compar el estado inicial de las concentraciones de glucosa de las ratas diabticas con el

estado final despus de todo el tratamiento que fue por dieciocho das. En la Tabla 3 seobserva que el grupo tratado con pasuchaca a 125 mg/Kg su pes mayor que 0,05 lo cual

quiere decir que no hay una diferencia significatica, rechazando la hiptesis de su efecto

hipoglicemiante, lo mismo ocurre en el grupo tratado con pasuchaca a 150 mg/Kg. Sin

embargo, el grupo tratado con pasuchaca a 175 mg/Kg su p fue menor que 0,05, lo que quiere

decir que hay una diferencia significativa , aceptndose la hiptesis del efecto

hipoglicemiante de Geranium ruizii Hieron a esa concentracin. Paralelamente se realiz

esta prueba en un grupo tratado con un medicamento antihiperglicemiante Glibenclamida

que tambin mostr una diferencia significativa entre el estado inicial y final. En la Figura 7

se ve claramente las comparaciones del efecto hipoglicemiante en cada grupo, el grupo

Blanco que no fue inducido a la diabetes sus valores se mantienen constantes dentro del rango

normal, el grupo de ratas aloxanadas que no tuvieron algn tipo de tratamiento su glucosa se

elev al mximo HI, el grupo con Glibenclamida tuvo un buen efecto como era de esperar

por ser un medicamento seleccionado para esta enfermedad, el grupo con Pasuchaca mostr

su efecto a una concentracin de 175 mg/Kg .Una vez comprobado esto ,se realiz una

comparacin de eficacia entre el grupo tratado con Glibenclamida a 5 mg/Kg y la Pasuchaca

a 175 mg/Kg, y se observ Tabla 4 que la Glibenclamida es eficaz en un 65,03 % y la

Pasuchaca a 175 mg/Kg en un 44,83 % . Este resultado puede cambiar si se realiza estudios

complementarios trabajando con una mayor concentracin del extracto de pasuchaca, sin

embargo, a pesar de ello la planta presenta un efecto hipoglicemiante.


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La dosis con mayor eficacia fue entonces de 175 mg/kg con 44,83 % de eficacia la dosis ms

alta presenta un mayor descenso de los niveles de glucosa.

El frmaco glibenclamida presenta mayor eficacia 65,03 % como en el estudio de Solgorr

(2005)4 sobre el efecto del extracto hidroalcohlico de hojas y flores de Otholobium

pubescens culn la efecicaica de la glibenclamida es 74.44% y la planta 42.64%.

Cataeda (2011) demuestra que el extracto atomizado de Calophyllum brasiliense present

un buen efecto hipoglicemiante las tres dosis utilizadas de los extractos de Lagarto caspi

mostraron efecto hipoglicemiante, y fue mayor el efecto a la dosis de 1000 mg/kg de peso,

que super al efecto de la glibenclamida.

Es importante recalcar que nuestra biodiversidad es una importante fuente de productos

naturales para el mundo, es de vital importancia la identificacin de los principios activos

naturales, teniendo en cuenta que es necesario efectuar su caracterizacin completa y, se haceimprescindible conseguir el establecimiento completo y correcto de su estructura. Sin

conocer la estructura correcta del compuesto no se puede progresar en la propuesta ni en la

realizacin de transformaciones que puedan servir para corregir algn efecto indeseable del

producto o para disminuir su toxicidad o para mejorar sus cualidades frmaco-teraputicas.

Teniendo en cuenta las limitaciones y los resultados obtenidos se recomienda realizar

estudios de mayor duracin por ser la diabetes mellitus una patologa crnica, as como

separar los metabolitos secundarios para verificar los posibles responsables de la actividad

farmacolgica, profundizar los estudios de seguridad con la finalidad de proyectar ensayos

clnicos controlados.

Las pruebas bioqumicas fueron realizadas para determinar si la enfermedad o el resultado

del tratamiento influyen en el equilibrio normal del buen funcionamiento de nuestro

organismo. En la Tabla 5 se observa los niveles de Creatinina, BUN, Transaminasas GOT y

GPT.

Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo conelevada concentracin en corazn, hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos.

La actividad srica en condiciones normales es baja o nula. Un dao o enfermedad en

cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles sricos. As, luego de un

infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT

(abundante en msculo cardaco). En hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica


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que involucren necrosis tisular, predominar la actividad srica de GPT (abundante en tejido

heptico). 26

En la Figura 9 se observa que el grupo tratado con Pasuchaca 175 mg/Kg y Glibenclamida

presenta mayor concentracin de GTP lo cual se sigue evidenciando problemas en el hgado,

en figura 10 las ratas diabticas del grupo aloxanado presenta mayor concentracin de GOT

lo que quiere decir que al no ser tratadas presentan problemas en el corazn, sin embargo, las

que presentan menor concentracin de estas son las que han sido tratadas con Glibenclamida

y Pasuchaca 175 mg/Kg.

La Creatinina producida diariamente est relacionada con la masa muscular. La creatinina

filtra libremente por el glomrulo (pequeas cantidades son reabsorbidas y tambin

secretadas por los tbulos renales).

La medicin de creatinina tiene utilidad casi exclusivamente para la evaluacin de la funcinrenal (perfusin renal alterada, prdida de la funcin de las nefronas) y en la monitorizacin

de la dilisis renal 3,5.

En la Figura 10 se observa que el grupo tratado con Pasuchaca a concentraciones menores de

125 mg/Kg presenta concentraciones elevadas de creatinina, presentando este grupo

problemas renales, esto puede deberse a la concentracin insuficiente del extracto lo cual no

ayuda a contrarrestar esta patologa. El grupo tratado con Glibenclamida y Pasuchaca 175

mg/Kg presentan menores niveles de creatinina, favoreciendo el tratamiento.27

BUN corresponde a nitrgeno ureico en la sangre. El nitrgeno ureico es lo que se forma

cuando la protena se descompone. Los niveles superiores a lo normal pueden deberse a:

Insuficiencia cardaca congestiva, Niveles excesivos de protenas en el tubo digestivo,

Sangrado gastrointestinal, Hipovolemia (deshidratacin), Ataque cardaco, Enfermedad

renal, inclusoglomerulonefritis,pielonefritis ynecrosis tubular aguda, Insuficiencia renal.

Los niveles inferiores a lo normal pueden deberse a: Insuficiencia heptica, Dieta baja en

protena, Desnutricin, Sobrehidratacin. En la Figura 11 se observa que el grupo tratado conPasuchaca 150 mg/Kg presenta una mayor concentracin de UN, lo que significa que hay

problemas a nivel heptico, pancretico y renal, sin embargo, los que han sido tratados con

Glibenclamida y Pasuchaca 175 mg/Kg presentan niveles cercanos a lo normal, no se analiz

el grupo de ratas diabticas por la ausencia de datos. 28
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XI. CONCLUSINES:

El extracto de pasuchaca presento actividad hipoglucemiante a dosis dadas, sin embargo sepodria extrapolar que a una mayor dosis la glicemia se normalizaria.

En cromatografia en capa fina y en preparativa con sistema de solventesdiclorometano:metanol (1:1) se obtuvo 5 manchas diferentes que se detecto con luz UV 254nm y 365 nm.

En cromatografia en capa fina con el revelador tricloruro ferrico (FeCl3) se detectocompuestos fenolicos en la 3 primeras manchas.

El extracto hidroalcohlicos de Geranium ruizii Hieron posee actividad hipoglicemiante,pero no se lleg a demostrar que logre llegar a ndices normales de glucosa en sangre(Normoglicemiante).

Se elabor el extracto estandarizado sin dificultades.

-Se determin constituyentes qumicos importantes como saponinas, alcaloides y flavonoideslos cuales podran dar el efecto hipoglicemiante.

-La accin del frmaco a dosis de 175mg/Kg es menos eficaz que la accin de laglibenclamida, sin embargo esto podra variar si se aumenta la dosis de la planta.


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IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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