Laborkurs 6. FS

Zytologie

Punktate,Bronchoalveoläre Lavage

TÄ Julia BreuerMedizinische Tierklinik

Untersuchungsmedien

• Abstriche: Haut, Maulhöhle, Auge

• Oesophagus, Magen, Darm

• Harnblase• Knochenmark

• Blut

• Harn• Liquor cerebrospinalis

• Bauchhöhlenpunktat• Pleurapunktat

• TTL: Trans-TrachealeLavage

• BAL: Broncho-Alveoläre Lavage

Aufarbeitung der Proben

• Ausstrich (direkt / nach Zentrifugation)oder Zytozentrifugation

• Trocknung– Lufttrocknung– Hitzefixation– Fixierspray

• Färbung– Pappenheim, Quick-Diff– Gramfärbung– …..

Beurteilungskriterien Zelle

• Zellzahl• Zelltyp• Zellgröße und –form• Einheitlichkeit• Zelluläre Variationen• Nukleäre Variationen• Nukleus/Zytoplasma-Verhältnis• Verteilung (einzeln / in Haufen)

Beurteilungskriterien Zelle

• Zellzahl

hgr.

ggr.

mgr.

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Becherzellen

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Neutrophile Granulozyten

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Eosinophiler Granulozyt

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Mitose, Makrophagen, Lymphozyten, rötliche Zellkerne mit Plasma

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Flimmerepithelzellen

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Mehrkernige Riesenzelle

Beurteilungskriterien Zelle

• Zelltyp

Schaumiger Makrophage

Beurteilungskriterien Zelle

• Nukleäre Variationen

Mitose

Beurteilungskriterien Zytoplasma

• Volumen• Form• Struktur• Färbung

• Organellen• Einschlüsse• Zellmembran• Funktionelle

Anpassung

Beurteilungskriterien Zytoplasma

• Einschlüsse

Beurteilungskriterien Zytoplasma

• Einschlüsse

Beurteilungskriterien Zytoplasma

• Einschlüsse

Hämosiderophage

Beurteilungskriterien Nukleus

• Zahl• Größe• Form• Lage

• Membran• Einschlüsse• Kernplasma,

Chromatin• Färbung• Nucleoli

Beurteilungskriterien Nukleus

• Zahl

Beurteilungskriterien Nukleus

• Zahl, Form,Größe, Lage

Weitere Beurteilungskriterien

• Fibrin• Blut• Schleim• Exsudat /

Transsudat

• Bakterien• Pilze• Schmutz• Detritus• Nekrose

Weitere Beurteilungskriterien

• Bakterien

Weitere Beurteilungskriterien

• Schleim / Curschmann-Spiralen

Weitere Beurteilungskriterien

• Pilze

Liquor cerebrospinalis

Liquor cerebrospinalis

• Zentralnervöse Erkrankungen– Viral

– Bakteriell– Parasitär

– Traumatisch– Raumgreifende Prozesse

– Gehirnferne Prozesse

Liquorgewinnung (Pferd)

• Postoccipitalpunktion im Foramenatlantooccipitale6 – 8 – 10 cm tief

• Lumbalpunktion auf dem Niveau des Foramen lumbosacrale, Ø ca. 2,5 cm, Nadellänge 15 – 20 cm

Liquorbeurteilung

• Liquordruck• Farbe, Aussehen• Zellzahl• Zelldifferenzierung• Chemische Untersuchung

Liquorbeurteilung: Farbe

• Physiologisch: klar, farblos

• Rotfärbung, die nach Zentrifugation nicht mehr besteht: iatrogen oder sehr geringe Blutung

• Gelbfärbung = Xanthochromie– Freies Bilirubin 48 h nach einer Blutung in den LCS– Konjugiertes Bilirubin kann die Blut-Hirn-Schranke

überwinden (starker Ikterus)– Proteinkonzentration > 1,0 g/l

LCS: Zellzahlbestimmung

• im Zellcounter: Leukozyten / µ l≤ 7 = Referenzwert

• Fuchs-Rosenthal-Zählkammer

LCS: Zellzahlbestimmung

• Fuchs-Rosenthal-Zählkammerwird mit 3 µl beschickt

≤ 20/3 Zellen = Referenzwertmononukleäre Zellen ↑ => Virusinfektionpolymorphkernige Zellen ↑ => bakterielle Infektion

x/3 Zellen = x Zellen in 3 µl Kammerinhalt→ 3/3 Zellen = 1 Zelle / µl

LCS: Zelldifferenzierung

• Zytozentrifuge• Färbung nach Pappenheim• Zellbild:

gesund: v.a. Lymphozyten und Monozyten

LCS: Zelldifferenzierung

• Bakterielle Prozesse: Anstieg der Neutrophilen und des Totalproteins

• Virale Infekte: Anstieg der Lymphozyten und des Totalproteins

LCS: Chemische Untersuchung

• Protein: ↑ bei Veränderung der Blut-Hirn-Schranke, ↑ lokale Synthese

• Protein und Zellzahl ↑: Entzündung / (Blutung)

• Protein ↑, Zellzahl nicht: degenerative Erkrankung, Virus

LCS: Chemische Untersuchung

• Albumin: wird nicht lokal produziert→ Hinweis auf Durchlässigkeit der BHS

• Bei intakter BHS entsprechend der Albuminkonzentration im Blut

• Albumin-Quotient (AQ): Albumin (LCS) mg/l x 10-3

Albumin (Serum) g/l• Erhöht, wenn > 6,15

LCS: Chemische Untersuchung

• Glukose - Konzentration im LCS:60 – 80 % der Blut-Glukose-Konzentrationist physiologisch

• Verhältnis ist vermindert bei bakteriellen Infektionen des LCS und evtl. bei Blutungen

• Normal bei hypo- und hyperglykämischenZuständen

LCS: Chemische Untersuchung

Enzyme (AST, LDH, CK) können bei verschiedenen Erkrankungen erhöht sein

• ↑ Durchlässigkeit der BHS• Freisetzung durch Entzündungszellen,

neoplastische Zellen, oder Mikroorganismen

• CK: verschiedene Isoenzyme beachten(BB, MB, MM)

• CK ↑ infolge Zytolyse der Neuronen

Bauchhöhlenpunktion

Bauchhöhlenpunktion

Bauchhöhlenpunktion

Bauchhöhlenpunktion

Bauchhöhlenflüssigkeit: Normalbefund

• Farblos bis gelblich• Klar• Wässrig• < 5 G Zellen /l• Vorwiegend Neutrophile (bis 90 %)• Mesothelzellen, Lymphozyten• Wenig Eosinophile (bis 2%)• Gesamteiweiß < 25 g/l

Mesothelzellen

Tumorzellen

Bauchhöhlenflüssigkeit

• Trübung bei erhöhter Zellzahl• Protein ↑ bei Entzündung oder

exsudativen Prozessen (Herzinsuffizienz)• Bilirubin, Kreatinin, Harnstoff, Triglyceride:

höhere Konzentration als im Serum = Zeichen für erhöhte Durchlässigkeit von Gallenblase /-gängen, Harnblase, Ductusthoracicus, Lymphbahnen; Pankreas (Amylase)

Bauchhöhlenflüssigkeit

• Transsudat• Exsudat• Hämorrhagisch• Hämolytisch

Bauchhöhlenflüssigkeit

Transsudat: • Klar, farblos• Protein < 25 g/l• Zellzahl < 5 G / l

Bauchhöhlenflüssigkeit

Transsudat – Ursachen: • Hypoproteinämie (↓ kolloidosmotischer

Druck)• Herzinsuffizienz (↑ hydrostatischer Druck

führt zu Rückstau in der Leber)• Chronische Lebererkrankungen

Bauchhöhlenflüssigkeit

Exsudat: • Folge erhöhter vaskulärer Permeabilität

bei Entzündung• Protein > 25 g/l• Zellzahl: > 5 G / l

Bauchhöhlenflüssigkeit

Exsudat – Ursachen:

Aseptisch: • nichtmikrobielle Irritation, z.B. durch sterile

Fremdkörper• Postoperativ (Trauma durch Manipulation der

Organe)

Septisch:• Mikroorganismen

• z.B. bei FIP

BAL

Bronchoalveoläre Lavage

BAL

Normalbefund: • Je > 40 % Lymphozyten und

Makrophagen• 2 – 9 % Neutrophile• 0 – 1 % Eosinophile• Rötliche Zellkerne mit / ohne Plasma

BAL

• RAO (Recurrent airway obstruction): Anteil der neutrophilen Granulozyten ist erhöht auf bis zu 90 %

• Anteil der Lymphozyten und Makrophagen sinkt entsprechend

• Pilzsporen, Curschmann-Spiralen, Schmutzpartikel

BAL

• Eosinophile, Mastzellen: Allergosen(Parasitenbefall)

• Makrophagen: Alveolarmakrophagen; vermindert bei Entzündungen

• Riesenzellen: Zeichen für gesteigerte Phagozytose

• Epithelzellen: bei akuter Bronchitis bzw. Exazerbation bei chron. Bronchitis

BAL

• Creola-Körperchen: Flimmerepithelzellverbände mit oder ohne Zilien, Störung der Regeneration; ↑ bei akuter Bronchitis

• Becherzellen: Zeichen für ZellmetaplasieVorkommen entsprechend Dyskrinie

• Curschmann Spiralen: Zeichen für zeitweilige Verstopfung; small airwaydisease

Einen schönen Nachmittag!