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Dr. Max Müller-Mustermann

Src-pathway: eine neue therapeutische Option? 7. COMBATing Breast Cancer

22.11.2014

Dr. Beyhan Ataseven Oberärztin Kliniken Essen-Mitte

Klinik für Gynäkologie & gynäkologische Onkologie Klinikdirektor: Prof. A. du Bois



Src-family Kinase (SFK)

•  c-Src (cellular sarcoma) Tyrosinkinase (Protoonkogen SRC)

•  Familie der Nicht-Rezeptor-Tyrosinkinasen

•  c-Src (Prototyp) der SFK (Src-Familie) - Fyn, c-YES, Lyn, Lck, c-Fgr, Blk, Hck, Yrk

•  SFKs: regulatorische Proteine mit Schlüsselfunktion in Zellfunktionen (z.B. Differenzierung, Motilität, Invasion, Proliferation, Angiogenese, Apoptose)

SFK Expression SRC, FYN, YES Ubiquitous

HCK, LCK, BLK, FGR Hematopoietic LYN Hematopoietic, prostate, pancreatic YRK Hematopoietic, neural



Src-family Kinase (SFK)

§  Historisch:

§  1911 Peyton Rous: Entdeckung Rous-Sarkom-Virus („filtrierbares Agens“, welches Tumore verursacht)

§  1970 Entdeckung/Charakterisierung v-Src-Gen im Genom

§  1976 Entdeckung zellulären c-Src-Gen

§  1977 Identifizierung v-Src-Protein

§  1980 Identifizierung Tyrosinkinase-Aktivität



Struktureller Aufbau von SFKs

Elsberger 2014

Inaktiv Aktiv

4 Src- Homologiedomänen (SH1-4)

Aktivität von Src v.a. reguliert durch: •  Phosphorylierung/Dephosphorylierung

des C-terminalen Regulationsbereichs (Tyr 530)

•  Vorhandensein von SH2/3 Domäne und Interaktion mit heretologen SH2/3 Domäne-bindenden Proteinen (z.B. Fak, Cas)

•  Signaltransduktion im Bereich der SH2/3 Domäne durch Anbindung an Rezeptoren von EGFR, HER2, PDGFR, VEGFR, FGFR binden



Src-Familie Kinasen (SFK)

Le & Bast 2011

Transmembrane Signalwege: •  RTKs (VEGFR, PDGFR,

EGFR, IGF-1R, c-Met or HER2)

•  G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (z.B. Adrenozeptoren, Serotoninrezeptoren)

•  Integrine •  T-Zell-Rezeptoren •  Cadherine •  Caveoline Signalwege über zytosol. Rezeptoren (z.B. ER, NOS)



Src/SFK-Inhibition Zell-/molekularbiologische Bedeutung

•  SFK-Inhibition in in vitro/vivo-Studien zeigt signifikante Hemmung von Zellmigration, - invasion, -wachstum

•  SFK-Inhibition führt zur Downregulation von PI3K-AKT, STAT3/5, Bcl-2, Bcl-x und Apoptoseinduktion

Shor 2007, Summy & Gallick 2003Le & Bast 2011 * Horne 1992



Src-Inhibition – in vitro/vivo MDA-MB-231: Bosutinib (SKI-606)

Migration-Wound-healing assay

Jallal et al. Cancer Res 2007

*significant

Anti-invasiver Effekt durch Inhibierung der Phosphorylierung

Tumorwachstum Maus

Fernmetastasierung Maus



Src-Inhibition – in vitro/vivo

BT474-Zellen (HER2+/ER+):Behandlung mit Trastuzumab, Dasatinib od Kombination

*P < .001, trastuzumab vs drug comb. #P < .001, dasatinib vs drug comb.

Seoane et al. JNCI 2010



Src – Interaktion Knochen

•  Hohe Scr-Expression in reifen Osteoklasten1,2

§  Src Aktivität essentiell für normale RANKL-vermittelten Osteoklasten-Funktion3

§  Mäuse mit SRC-Gen-Defekt: Entwicklung Osteopetrosis (Hemmung des Knochenabbau)4

§  Src-Hemmung Steigerung der Osteoblast-Differenzierung, è Knochenformierung**

1.   Horne WC, et al. J Cell Biol. 1992;119(4):1003-‐1013; 2. Tanaka S, et al. FEBS LeR. 1992;313(1):85-‐89; 3. Boyce BF, et al. J Clin Invest. 1992;90(4):1622-‐1627; 4. Lowe C, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 1993;90(10):4485-‐4489; Shor 2007, Summy & Gallick 2003Le & Bast 2011 * Horne 1992 **Marzia 2000



Hemmung der Osteoklasten-Aktivität (in vitro/vivo) durch Dasatinib in Ratten

Behandlung von Osteoklasten mit Dasatinib -->

a.  Sig. Reduktion der Osteoklasten-Formation (therapeut. Konz. 20 nM)

b.  Sig. Reduktion der Kalziumresorption durch Osteoklasten1

•  Behandlung von Ratten mit Dasatinib --> Steigerung des trabekulären Knochenvolumens2

1.  Vandyke K, et al. Leukemia 2009;283:143–51 2.  Vandyke K, et al. J Bone Miner Res 2010;25:1759–70

DasaFnib (nM) 1.25 2.5 5 10 20

*P=0.0003

Lacunae area

(relaF

ve to

veh

icle, %

)

DasaFnib (nM)

*P<0.0001

150

100

50

0 1.25 2.5 5 10 20

Osteo

clasts/w

ell

(relaF

ve to

veh

icle, %

)

150

100

50

0 *

*

* * *

B

A

Vehicle DasaFnib



Src - Bedeutung

•  Src-Überexpression nachweislich in CRC, Prostata-Ca, Kopf-Hals-Tumoren, Mammakarzinom, Ovarialkarzinom, Lungenkarzinom u.a.

Kanomata et al. J Clin Pathol 2011

215 BC-Patient High expression of either Y416Src or Y527Src was significantly correlated with poor overall survival (p.0.0049 and p<0.0001, respectively).

Hohe Expression von c-SRC: DSS nach Ende der 5-jährigen Tamoxifen-Therapie sig. schlechter

2. Elsberger JCRCO 2012



Src-Inhibition

§  Die meisten Src-Inhibitoren sind nicht-selektive Multityrosinkinasen

§  Im klinischen Einsatz:

§  Dasatinib (Sprycel®): Multikinase-Inhibitor SFKs, c-kit, PDGFR, BCR-Abl; zugelassen CML u ALL (Philadelphia-Chr-pos)

§  Bosutinib (SKI-606): Inhibitor von Src, SFKs, BCR-Abl und AXL

§  Saracatinib (AZD0530): Inhibitor von Src, SFKs u. c-terminal SRC kinase (CSK)



Src-Inhibition in mBC-Monotherapie Dasatinib in m-TNBC -Phase-2 (Finn et al. CCR 2011)

•  42 Pat. TNBC; >2 palliative Therapien,

•  Monotherapie: Dasatinib 100mg/2xtgl; Dosisreduktion 70mg/2xtgl

•  ORR 4.7%; DCR* 9.3%; median PFS 8.3 Wo (95% CI: 7.3-15.3)

•  Toxizität: Therapieunterbrechung (83% mit 100mg; 52% mit 70mg); Pleuraerguss, Diarrhoe, Fatigue, Übelkeit, Erbrechen, Husten

Fazit: „Single-agent dasatinib has limited activity in unselected patients with TNBC“

Dasatinib in HER2-pos +/- ER-pos mBC-Phase 2 (Mayer et al. CCR 2011)

•  70 Pat. (24 HER2+; 46 ER+); ≤2 palliative Therapien,

•  Monotherapie: Dasatinib 100mg/2xtgl; Dosisreduktion 70mg/2xtgl

•  ORR 4.3%; DCR* 13.0%; median PFS 8.1 Wo (95% CI: 7.7-8.3)

•  DCR-HER2+: 8.3% (N=2, beide ER+); DCR-ER+: 15.6%

•  Toxizität: Therapieunterbrechung 43%; Pleuraerguss, Diarrhoe, Fatigue/Asthenie, Übelkeit, Erbrechen, Husten, Kopfschmerzen

Fazit: „...dasatinib as monotherapy resulted in very modest activity....“

*DCR disease control rate; Ansprechen >16 Wochen



Src-Inhibition in mBC- Kombination

Adapaert nach Johnston ASCO 2011

Therapie Setting Phase N Pat

Fulvestrant +/- Dasatinib MBC refräktar AI Phase II 100

Exemestan +/- Dasatinib MBC refräktar NSAI Phase II 157

Letrozol +/- Dasatinib MBC refräktar AI Phase II 120

AI +/- Saracatinib (ARISTACAT) MBC Phase II 140



Src-Inhibition / Mammakarzinom

Johnston ASCO 2011



Src-Inhibition in mBC

Paul, et al. SABCS 2013. Abstract S3-07

•  Postmenopausale Patientinnen, ECOG 0-1 •  ER + >10%, Her2-negativ •  0-1 palliative Chemotherapie •  Keine vorherige AI-Therapie im metastasierten Setting •  De Novo Stage IV: 42% L+D vs 32% L •  Primärer Endpunkt: Clinical benefit rate

N= 57

N= 63



Src-Inhibition + endokrine Therapie

% Patienten mit T-Score < -1.5 PFS

Bisphosphonat-Therapie: 32% L + D, 36% L

Letrozol + dasatinib (n=56) Letrozol (n=61) Clinical benefit rate* 71% (58-83) 66% (52-77)

*CBR= CR + PR + SD>6Mo In 26% Dosisreduktion Dasatinib

De novo metastasiert L+D 42% vs L 32%

Paul, et al. SABCS 2013. Abstract S3-07



Zusammenfassung

•  Src-Signalweg: Schlüsselfunktion in onkologisch bedeutenden Zellfunktionen (z.B. Differenzierung, Motilität, Invasion, Proliferation, Angiogenese, Apoptose)

•  Überexpression von Src: Prognosebeeinträchtigung

•  Inhibition von Src (in vitro/vivo): Unterdrückung von Zellwachstum, Migration, Invasivität

•  Im klinischen Einsatz bisher signifikanter Benefit (noch) nicht nachweisbar

•  Identifizierung von Biomarkern zur besseren Patientenselektion erforderlich



Vielen Dank

Dr. Beyhan Ataseven Oberärztin Kliniken Essen-Mitte

Klinik für Gynäkologie & gynäkologische Onkologie Klinikdirektor: Prof. A. du Bois

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