-4"". 1st. Super. Sanirù Vol. 21, S. 1 (1')85),pp 61-72

PROBLEMI ANALIT DEL CADMIO NEL

( 1 . Mino ia

' I C I ED EXTRANAL SANGUE

. I T I [ C I CONNESSI CON LA DETERMINAZIONE DEL PIOP IBO E

Fondazione C l i n i c a Lavoro , Cen t ro R i c e r c h e d i F i s i o p a t o l o g i a e S i c u r e z z a Lavoro, U n i v e r s i t à d i Pav ia , Pav ia .

d e l

K iassunto . - Vengono e v i d e n z i a t e l e p r o b l e m a t i c h e connesse a l l a de te rm inaz ione

de l piombo e d e l cadmio e m a t i c i p e r quan to concerne l a p o s s i b i l i t a d i con tami -

naz ione e/o l ' i n q u i n a m e n t o d e l campione s i a a l l ' a t t o d e l p r e l i e v o che d u r a n t e l a

conservaz ione e l ' a n a l i s i . Vengono i n 0 1 t r e esaminate l e moda l i t a e g l i a c c o r g i -

ment i a t t i a p r e v e n i r e t a l i r i s c h i e l ' i n f l u e n z a d i p a r t i c o l a r i c o n d i z i o n i d i

conservaz ione s u l l a m i s u r a d e g l i ana l i ti .

Summary ( P r e a n a l y t i c a l and a n a l y t i c a l problems i n t h e d e t e r m i n a t i o n of l e a d and

cadmium i n b lood) . - Some causes o f e r r o r s i n t h e d e t e r m i n a t i o n o f l e a d and

cadmium i n b lood a r e examined. P r e c a u t i o n a r y measures t o a v o i d c o n t a m i n a t i o n

r i s k s a r e suggested. The e f f e c t s o f p a r t i c u l a r s t o r a g e c o n d i t i o n s on t h e a n a l y -

t i c a l measurements a r e cons ide red .

La de te rm inaz ione d e l piombo e d e l cadmio i n campion i e m a t i c i i m p l i c a una

s e r i e d i d i f f i c o l t a a n a l i t i c h e che r i s u l t a n o s e n s i b i l m e n t e d i f f e r e n t i a causa

d e i d i v e r s i l i v e l l i d i c o n c e n t r a z i o n e a i q u a l i i due m e t a l l i sono p r e s e n t i n e l l e

m a t r i c i b i o l o g i c h e (1).

T a b e l l a 1. - L i v e l l i e m a t i c i d i Pb e Cd n e l l a popo laz ione genera le ( v a l o r i d i r i f e r i m e n t o ) .

I n d i c a t o r e b i o l o g i c o

N o (*l Concen t raz ione S o g g e t t i media - + d.s. i n t e r v a l l o

(pg/1)

Cadmiemia P i ombemi a

( * ) D a t i o t t e n u t i su p o p o l a z i o n e r e s i d e n t e i n p r o v i n c i a d i Pavia.

b2

Come e v i d e n z i a t o n e l l a T a b e l l a 1, n e l l a qualtt W I I , I ~ U I ~ , ~ I 1 1 p b i i , l i I i l i v e l l i

d i Pb-emia e Cd-emia d e t e r m i n a t i i n popolaz ione non cq l i r i c , i ,I ~ ~ I I I i t , , . . . i i ~ n a l mente e

r e s i d e n t e i n Lombardia, il Cd è p r e s e n t e i n concen t raz ic i i i i ~ i i i i i ~ v i i l ~ i i ~ ~ ~ i t e i n f e r i o -

r i r i s p e t t o a l piombo (il r a p p o r t o d i concen t raz ione t r ~ i i chic, r l m e n t i è d i

c i r c a 1/200).

Per quanto r i g u a r d a il dosaggio d e l Cd ne consegue che il r i s c h i o d i espor -

r e i campioni a c o n t a m i n a z i o n i è p i ù e l e v a t o , s i a i n f a s e d i p r e l i e v o che duran-

t e l a p reparaz ione a l l ' a n a l i s i , p r ima d e l l a r i l e v a z i o n e s t r u m e n t a l e .

D ' a l t r a p a r t e , anche p e r l e a n a l i s i d e l Pb non deve essere s o t t o v a l u t a t a l a

p o s s i b i l i t à d i inquinamento d e l campione b i o l o g i c o , p e r c u i l e o p e r a z i o n i p re -

a n a l i t i c h e devono essere accuratamente v e r i f i c a t e e s t a n d a r d i z z a t e .

Pur t roppo l a maggior p a r t e d e g l i a n a l i s t i c o n c e n t r a l ' a t t e n z i o n e s u l l e

p rob lemat i che connesse con il metodo d i dosaggio u t i l i z z a t o ment re p e r quanto

r i g u a r d a l e m o d a l i t h d i p r e l i e v o e/o conservaz ione l a tendenza è q u e l l a d i

a c q u i s i r e i d a t i d a l l a l e t t e r a t u r a .

I n r e a l t à l ' i n t r o d u z i o n e d i f a t t o r i o v a r i a b i l i a n a l i t i c h e d e t e r m i n a n t i a i

f i n i d e l l a a f f i d a b i l i t h d e l d a t o f i n a l e è spesso antecedente a l l e s t e s s e opera-

z i o n i ch im iche s u l campione. A l f i n e d i r i c h i a m a r e l ' i m p o r t a n z a d e i f a t t o r i

e x t r a - a n a l i t i c i n e l dosaggio d e l l a piombemia e d e l l a cadmiemia, sono r i p o r t a t i

d i s e g u i t o g l i e r r o r i che è p o s s i b i l e commettere e q u a l i a c c o r g i m e n t i sono

a d o t t a b i l i p e r il conten imento d e i fenomeni d i contaminaz ione.

P o s s i b i l i s o r g e n t i d i contaminaz ione da Cadmio e Piombo d u r a n t e il p r e l i e v o

emat i co

Impiego d i s i r i n g a i n grado d i "cedere" Cd o Pb ( e v i t a r e l ' i m p i e g o d i

s i r i n g h e d i v e t r o ) .

A n t i c o a g u l a n t e ( e p a r i n a , EDTA) contaminato .

P r o v e t t a d i r a c c o l t a o conservaz ione (e r e l a t i v o t a p p o ) c o n t a m i n a t i da Pb e

Cd . Contaminazione ambienta le i n sede d i p r e l i e v o ( p o l v e r e , fumo) o inquinamen-

t o a c c i d e n t a l e du ran te il t r a s f e r i m e n t o a l l a p r o v e t t a d i r a c c o l t a .

P o s s i b i l i m o t i v i d i a l t e r a z i o n e d e l campione b i o l o g i c o

Formazione d i micro/macro c o a g u l i , come conseguenza d i una i n a c c u r a t a

d i s p e r s i o n e d e l l ' a n t i c o a g u l a n t e .

h o l i s i p a r z i a l e d e l campione e/o adsorb imento d i Pb o Cd a l l e p a r e t i

i n t e r n e d e l l a p r o v e t t a d i conservaz ione.

M o d a l i t à d i conservaz ione inadeguate.

Come r i p o r t a t o durante il p r e l i e v o del campione ematico l' impiego d i s i r i n -

ghe i n ve t ro b o r o s i l i c a t o può determinare marcate "cess ion i " d i Pb o Cd con

conseguente contaminazione p o s i t i v a . Per ques t i m o t i v i sono p r e f e r i b i l i l e

s i r inghe a perdere i n ma te r i a le p l a s t i c o ( i n genere p o l i t e n e e/o p o l i s t i r e n e )

s u l l e q u a l i è comunque necessario e f f e t t u a r e t e s t s d i cessione con so luz ion i

acide prima de l l o r o impiego.

I 1 r i s c o n t r o d i un ant icoagulante contaminato da Cd non 6 f requente per c u i

esso rappresenta una p o s s i b i l i t a t eo r i ca . Occasionalmente, u t i l i z z a n d o s i r i n g h e

I n ma te r i a le p l a s t i c o g i a epa r in i zza te abbiamo r i s c o n t r a t o deadsorbimenti quan-

t i t a t i vamen te s i g n i f i c a t i v i d i Cd (12-18 y g / l ) per c u i è c o n s i g l i a b i l e u t i l i z -

zare s i r i n g h e non a d d i t i v a t e d i ant icoagulante.

E ' comunque opportuno e f f e t t u a r e c o n t r o l l i a n a l i t i c i p e r i o d i c i s u l l ' a n t i -

coagulante (generalmente preparato i n so luz ione acquosa) a l f i n e d i escludere

una sua contaminazione d i Pb e Cd. Prove r i p e t u t e su so luz ion i d i eparina (ana-

l i s i i n f o r n e t t o d i g r a f i t e ) hanno permesso d i c a l c o l a r e una concentrazione d i

Cd t r a s c u r a b i l e ( i n f e r i o r e a 0,l ppb) mentre i n a l cun i cas i il l i v e l l o d i Pb

o s c i l l a v a t r a 1 e 2 ppb.

Nel caso del Pb va comunque r i l e v a t o che l ' i nc idenza d i questo inquinamento

e t r a s c u r a b i l e se r i f e r i t o a l va lo re medio d i piombemia d i un soggetto normale

non professionalmente esposto.

Di f requente r i s c o n t r o , e i n misura maggiore per il Cd, un inquinamento

d e l l e p rove t te d i racco l ta e conservazione del campione ematico.

I 1 t e s t d i cessione per va lu ta re l ' i d o e n i t a d i questo ma te r ia le è fac i lmen-

t e e f f e t t u a b i l e , mediante incubazione con so luz ion i d i l u i t e d i HN03, che dopo

d i f f e r e n t i tempi d i conta t to , sono a n a l i z z a b i l i d i re t tamente i n f o r n e t t o d i

g r a f i t e .

Un accorgimento ind ispensab i le l a non u t i l i z z a z i o n e d i p rove t te i n v e t r o

b o r o s i l i c a t o i n quanto possono determinare cess ion i d i Pb e Cd par t i co la rmente

r i l e v a n t i . Anche un disinquinamento p re l im ina re d i questo ma te r ia le non produce

r i s u l t a t i a c c e t t a b i l i , o l t r e a r i s u l t a r e par t i co la rmente dispendioso ne l tempo.

Una tendenza recente è q u e l l a d i u t i l i z z a r e p rove t te so t tovuoto de l t i p o

Vacutainer o Monoject con l e q u a l i 6 p o s s i b i l e e f f e t t u a r e d i ret tamente il pre-

l i e v o ematico, evi tandone i n t a l modo il tras fer imento a l l a p rove t ta d i racco l -

ta .

Anche i n questo caso è necessaria un 'accurata v e r i f i c a a n a l i t i c a del mate-

r i a l e u t i l i z z a t o valutando contemporaneamente il rappor to costo/vantaggi r i s p e t -

t o a i s is temi d i p r e l i e v o p i ù t r a d i z i o n a l i .

I n genere una contaminazione ambientale dei campioni emat ic i i2 t r a s c u r a b i l e

q u a l o r a i p r e l i e v i vengano e f f e t t u a t i i n ambiente ospedal i e r o . Non può i n v e c e

essere e s c l u s a a p r i o r i s t i c a m e n t e q u a l o r a i campionamenti vengano e f f e t t u a t i i n

f a b b r i c a , anche se i n a p p o s i t o l o c a l e - i n f e r m i e r i a .

I 1 r i s c o n t r o può assumere p a r t i c o l a r e s i g n i f i c a t i v i t a n e l caso i n c u i

vengano imp iega te t e c n i c h e a n a l i t i c h e d i r e t t a m e n t e s u l campo ( d e l t i p o voltamme-

t r i a p e r r i d i s s o l u z i o n e anod ica ) p e r c u i l a f a s e p r e p a r a t i v a ( d i g e s t i o n e con

metexchange) può r i s u l t a r e esposta o i n f l u e n z a t a anche da basse c o n c e n t r a z i o n i

a m b i e n t a l i d i Pb e Cd.

Re la t i vamente a l p r e l i e v o emat i co due f a t t o r i i n grado d i i n c i d e r e s u l l a

r a p p r e s e n t a t i v i t a de l campionamento sono l a fo rmaz ione d i m i c r o c o a g u l i o un'emo-

l i s i p a r z i a l e . Per e l i m i n a r e q u e s t i i n c o n v e n i e n t i è generalmente s u f f i c i e n t e

capovo lge re r i p e t u t a m e n t e , senza a g i t a r e , l a p r o v e t t a d i r a c c o l t a p e r 30 sec.,

onde f a v o r i r e l a massima d i s p e r s i o n e d e l l ' a n t i c o a g u l a n t e .

E ' e v i d e n t e che l ' a l t e r a z i o n e d e i campion i e m a t i c i può essere conseguente

a l l 'adoz ione d i moda1 i t à d i conservaz ione inadegua te ( a d es. conservaz ione a

tempera tu ra ambiente pe r p e r i o d i p r o l u n g a t i o congelamento a -20°C d e l sangue

i n t e r o ) . S u l l e p rob lemat i che connesse a l l a conservaz ione d e l campione r i f e r i r e m o

p i u a v a n t i , r i p o r t a n d o d a t i d i p rove e f f e t t u a t e p e r s t a b i l i r e i l i m i t i a f f i d a b i -

l i d i c o n s e r v a b i l i t à .

I n questa p r ima p a r t e d e l l a r e l a z i o n e abbiamo t r a t t a t o l e p o s s i b i l i sorgen-

t i d i contaminaz ione r e l a t i v e a l p r e l i e v o d e i campion i b i o l o g i c i . D i s e g u i t o ,

p u r senza a d d e n t r a r c i n e l l a me todo log ia a n a l i t i c a , vog l i amo p u n t u a l i z z a r e incon-

v e n i e n t i che c a r a t t e r i z z a n o l a f a s e p r e p a r a t i v a , s i a essa una semp l i ce d i l u i z i o -

ne acquosa che una procedura p i ù complessa (che laz ione-es t raz ione) .

Le p o s s i b i l i s o r g e n t i d i contaminaz ione d u r a n t e l a p r e p a r a z i o n e a l l ' a n a l i s i

d e l campione b i o l o g i c o r i guardano :

a - impiego d i m i c r o p u n t a l i, pr.ovette, d e l l ' autocampionatore c o n t a m i n a t i

da Cd e Pb;

b - u t i l i z z a z i o n e d i m a t e r i a l i i n a d e g u a t i n e l l e v a r i e o p e r a z i o n i a n a l i t i c h e

(es . p r o v e t t e o p i p e t t e i n v e t r o b o r o s i l i c a t o , p a l l o n i t a r a t i non d e c o n t a m i n a t i ,

ecc.) ;

C - r e a t t i v i o s o l u z i o n i i n q u i n a t e da Pb e Cd;

d - contaminaz ione d e l 1 ' a tmos fe ra d e l l a b o r a t o r i o (fumo, p o l v e r e ) .

Un r u o l o d e t e r m i n a n t e n e l l ' i n v a l i d a r e i dosaggi d e l Cd emat i co 6 cer tament r

da a t t r i b u i r e a l l ' i m p i e g o d i m i c r o p u n t a l i c o n t a m i n a t i . Po iche n e l l ' a n a l i s i i l .

t r a c c e l e m i c r o p i p e t t e t a r a t e hanno s o s t i t u i t o l e c l a s s i c h e p i p e t t e i n v e t r o i

s u p e r f l u o e n f a t i z z a r e il numero d i passaggi a n a l i t i c i che vengono r o u t i n a r i a m e n -

t e e f f e t t u a t i impiegando m i c r o p u n t a l i i n m a t e r i a l e p l a s t i c o . A n o s t r o a v v i s o i

necessario d i f f e r e n z i a r e un potenz ia le inquinamento da Cd a t t r i b u i b i l e a cessio-

n i del l 'elemento da l l e p a r e t i i n t e r n e de l micropunta le da una contaminazione

d a l l a s u p e r f i c i e esterna del medesimo.

I 1 primo fenomeno e certamente prevalente i n quanto è a t t rave rso il conta t -

to con il l i q u i d o b i o l o g i c o che avviene il deadsorbimento d i Cd. La seconda

p o s s i b i l i t h (contaminazione esterna) non deve comunque essere so t tova lu ta ta , i n

p a r t i c o l a r modo quando vengono campionati volumi app rezzab i l i ( - l m l ) d a l l a

p rovet ta d i conservazione de l sangue. I n t a l u n i cas i l ' immers ione del punta le

per 1-2 cm- può provocare una s i g n i f i c a t i v a contaminazione p o s i t i v a del campione

ematico, come conseguenza d e l l a cessione d i t racce d i Cd d a l l e p a r e t i esterne

del micropunta le.

Un accorgimento u t i l e è d i l i m i t a r e l ' immers ione del punta le a pochi m durante l a fase d i aspi raz ione con mic rop ipe t te . E ' necessario comunque operare

con accuratezza per e v i t a r e aspi raz ione d i b o l l e d i a r i a che a l te rerebbero il

v01 u m campionato.

I n mer i t o a l l a decontaminazione de i m ic ropun ta l i h p r a t i c a d i a l cun i a n a l i -

s t i d i f a r e r i c o r s o ad a s p i r a z i o n i r i p e t u t e del campione anat ico, u t i l i z z a n d o il

l i q u i d o b i o l o g i c o come soluzione d i lavaggio. Per m o t i v i i n precedenza espost i e

a causa d e l l ' e f f i c a c i a p a r z i a l e d i questo sistema i? s c o n s i g l i a b i l e adot ta re

questa tecn ica d i decontaminazione.

Una procedura notevolmente p i ù semplice e d i decontaminare il micropunta le

con soluz ione d i ac ido n i t r i c o d i l u i t o aspirando po i r ipetutamente H20 b i d i s t i l -

l a t a .

U t i l i z z a n d o un campionatore automatico per f o rno d i g r a f i t e anche i cups d e l l a p i a s t r a d i campionamento devono essere so t topos t i a pret rat tamento con

HN03 d i l u i t o e a lavaggi con H20 b i d i s t i l l a t a (o p u r i f i c a t a su colonne M i l l i p o -

re). Anche i n questo caso l a v e r i f i c a d e l l ' e f f i c a c i a de l t rat tamento d i deconta- - minazione deve essere a n a l i t i c a , ad esempio i n i e t t a n d o n e l l a fornace microvolumi

del l ' u l t i m a soluz ione acquosa d i lavaggio.

Una p a r t i c o l a r e sorgente d i contaminazione da Cd può essere conseguente

a l l ' a b i t u d i n e a l fumo ne i l o c a l i d i preparazione dei campioni o d i ubicazione

d e l l a strumentazione. E ' noto i n f a t t i che il fumo d i s i g a r e t t e cont iene apprez-

z a b i l i quan t i t a d i Cd ( i l 20% del Cd contenuto nel tabacco 5 presente n e l l ' a r i a

e s p i r a t a ) per cu i possono produrs i contaminazioni d i f f u s e , par t i co la rmente

i n s i d i o s e i n quanto determinano scostamenti app rezzab i l i ma non r i l e v a n t i de i

v a l o r i d i Cd-emia.

Questo inconveniente non c a r a t t e r i z z a invece il dosaggio del Pb ematico,

per il quale l ' i n f l u e n z a del fumo e t r a s c u r a b i l e a f i n i q u a n t i t a t i v i .

Una s e r i e d i i n c o n v e n i e n t i che i n v e c e c a r a t t e r i z z a n o s i a il dosaggio d e l l a

Pb-emia che d e l l a Cd-emia f a r i f e r i m e n t o a l l a scarsa a t t e n z i o n e con l a q u a l e

v i e n e e f f e t t u a t a l a s c e l t a d e i r e a t t i v i c h i m i c i da impiegare n e l l a fase prepara-

t i v a .

Prima d i e f f e t t u a r e l e o p e r a z i o n i ch imiche s u l campione b i o l o g i c o o c c o r r e

v e r i f i c a r e il bianco r e a t t i v i mediante:

a) e f f e t t u a z i o n e d i t e s t s d i cess ione ed even tua le decomposizione p r e v e n t i v a

d e i m a t e r i a 1 i i m p i e g a t i n e l p r e l i e v o e n e l l a preparaz ione a l 1 ' a n a l i s i (micropun-

t a l i d i p01 i t e n e , p r o v e t t e d i r a c c o l t a , ~ p s campionatore au tomat i co ) ;

b ) v a l u t a z i o n e a n a l i t i c a de l b ianco d e l l e s o l u z i o n i o d e i r e a t t i v i u t i l i z z a t i

n e l l a p reparaz ione d e l campione;

C ) de te rm inaz ione p e r i o d i c a d e i l i v e l l i a e r o d i s p e r s i d i Cd e Pb n e l l ' a t m o s f e r a

d e l l a b o r a t o r i o , i n p a r t i c o l a r modo se:

- l o s p e t t r o m e t r o A.A. è imp iega to s i a p e r a t o m i z z a z i o n i i n fiamma che senza

f iamma;

- vengono a n a l i z z a t e s i a m a t r i c i d i o r i g i n e b i o l o g i c a che ambientale;

- sono p r e s e n t i a l t r e s o r g e n t i d i a tomizzaz ione (ad es. ICP-AES).

I n p a r t i c o l a r e v i e n e e v i d e n z i a t a l ' i n f l u e n z a che una contaminaz ione ambien-

t a l e da Cd pub de te rm inare s u l l a procedura d i a n a l i s i .

A t a l e r i g u a r d o , mediante campionamenti a m b i e n t a l i con p o s t a z i o n i f i s s e d e l

t i p o Zaiiibel li, impiegando membrane Mi11 i p o r e i n a c e t a t o d i c e l l u l o s a come sub-

s t r a t o d i r a c c o l t a , abbiamo de te rm ina to i l i v e l l i d i Cd e Pb a e r o d i s p e r s i , s i a

i n c o n d i z i o n i b a s a l i che d i a t t i v i t a d e l l a b o r a t o r i o .

I n c o n d i z i o n i b a s a l i l e c o n c e n t r a z i o n i a m b i e n t a l i medie d i Pb e Cd sono 3 r i s u l t a t e r i s p e t t i v a m e n t e d i 0,8 pg/m3 e 0,4 pg/m . Quando r i s u l t a v a n o f u n z i o -

n a n t i i s i s t e m i d i automizzaz ione a fiamma ( p e r a n a l i s i d i m a t r i c i a m b i e n t a l i ) o

l a s p e t t r o m e t r i a d i emiss ione a l plasma (ICP-AES) i v a l o r i a m b i e n t a l i d i Cd e Pb

sub ivano marcate v a r i a z i o n i , raggiungendo c o n c e n t r a z i o n i massime d i 28 j g l m 3

(Pb) e d i 8 pg/m3 (Cd).

Q u e s t i d a t i confermano l a n e c e s s i t a d i provvedere ad una p e r i o d i c a v e r i f i c a

d e l grado d i contaminaz ione a t m o s f e r i c a da Pb e Cd e s o p r a t t u t t o f o r n i s c o n o

p r e z i o s e i n d i c a z i o n i che o g n i l a b o r a t o r i o dovrebbe eventua lmente m e t t e r e i n

a t t o . D i s e g u i t o l e c i t i a m o brevemente:

a - n e l caso i n c u i l ' a s s o r b i m e n t o a tomico con a tomizzaz ione e l e t t r o t e r m i c a

(ETA-AAS) c o s t i t u i s c a l a t e c n i c a d i a n a l i s i , essa deve essere imp iega ta e s c l u s i -

vamente p e r d e t e r m i n a z i o n i a l i v e l l o d i t r a c c e ed u l t r a t r a c c e . E' p e r t a n t o

s c o n s i g l i a b i l e a l t e r n a r e l ' i m p i e g o d e l l e fiamma alllETA-AAS i n quanto s i posSon0

p r o d u r r e inqu inament i r i l e v a n t i e d i f f i c i l m e n t e c o n t r o l l a b i l i ;

b - l a d i s p o n i b i l i t a d i un ETA-ASS c o n v e r t i b i l e i n ICP-AES o l a presenza d e l l e

due st rumentazioni i n un unico l o c a l e male concorda con l a necessi ta d i contene-

r e l ' i nqu inamento ambientale da Pb e Cd. Anche i n questo caso l ' u s o de l l l ICP

dovrebbe essere l i m i t a t o a l l ' a n a l i s i d i m a t r i c i b io log iche provvedendo ad i n -

sta1 l a r e s is temi d i asp i raz ione l o c a l i z z a t i su l l a t o r c i a del plasma p a r t i c o l a r -

mente e f f i c a c i ;

C - poiche l a prevalenza de i l a b o r a t o r i non opera i n atmosfera clean né dispone

d i cappe a f l u s s o laminare, è necessario che l a fase prepara t iva dei campioni - venga e f f e t t u a t a i n l o c a l e da a d i b i r e esclusivamente a questo scopo.

Ne l l a pa r te f i n a l e d i questa r e l a z i o n e s i r i t i e n e opportuno s o t t o l i n e a r e

l 'importanza del l e moda1 i t a d i conservazione de i campioni b i o l o g i c i . Relat iva-

mente a i metodi a n a l i t i c i u t i l i z z a t i ogni l a b o r a t o r i o dovrebbe provvedere ad

e f f e t t u a r e sistematicamente t e s t s d i conservazione per v e r i f i c a r e e n t r o q u a l i

l i m i t i d i tempo l ' a n a l i s i de l campione garant isce un a c c e t t a b i l e l i v e l l o d i

a f f i d a b i l i t a .

A t i t o l o puramente esemp l i f i ca t i vo r i po r t i amo i r i s u l t a t i d i t e s t s d i

conservazione t e s i a v e r i f i c a r e l ' in f l uenza de l metodo d i a n a l i s i , del l a tempe-

r a t u r a e del tempo d i conservazione, del t i p o d i con ten i to re sul dosaggio del Pb

ematico.

I r i s u l t a t i o t t e n u t i sono r i p o r t a t i n e l l e Figg. 1, 2 e 3.

I n m e r i t o a i fenomeni d i contaminazione p o s i t i v a (cessione d i Pb d a l l e

p a r e t i i n t e r n e d e l l a p rovet ta d i conservazione) sono s t a t e v e r i f i c a t e r i l e v a n t i

cess ion i de l me ta l l o dopo impiego d i p rove t te i n ve t robo ros i l i ca to .

I meccanismi d i contaminazione non sono r i s u l t a t i c o s t a n t i ne l tempo e

l ' e n t i t a de l l ' i nqu inamento apparsa r i l e v a n t e per alcune s e r i e d i campioni

(F ig. l), contenuta ed a l t e r n a per a l t r e (F ig . 2 ) o a d d i r i t t u r a assente (F ig .

3) I 1 c a r a t t e r e cont ras tan te d i ques t i d a t i non permette d i i p o t i z z a r e q u a l i

meccanismi regolano l a cessione d i Pb da i c o n t e n i t o r i ed ev idenziare una l i m i t a -

t a azione prevent iva de l t rat tamento d i decontaminazione d e l l e p rove t te i n v e t r o

b o r o s i l i c a t o .

L 'uso d i questo ma te r ia le è per tan to s c o n s i g l i a b i l e n e l l a conservazione del

campione ematico, anche per b r e v i p e r i o d i , per l a determinazione d e l l a piombe-

mia. L ' impiego d i p rove t te i n moplen e pol icarbonato non ha invece ev idenz ia to

s i g n i f i c a t i v i fenomeni d i contaminazione p o s i t i v a , anche dopo p e r i o d i d i conser-

vazione p ro lunga t i d e i campioni b i o l o g i c i ( f i n o a 60 gg).

I 1 t i p o d i an t icoagu lan te e l a temperatura d i conservazione sono r i s u l t a t i

de i parametr i i n grado d i i n f l u i r e s ign i f i ca t i vamen te e i n misura d iversa sui

metodi a n a l i t i c i u t i l i z z a t i (Figg. 1, 2, 3).

l 7 i /-W

J 1 2 3 4 5 I 5 3 ) 4 5 W

Durata conscrvazionc a 20'4.C

+E--rF- Durata conservazione a 5 'C

lb CAMPIONI TRATTATI CON K3EDTA

Fig. 1. - A n a l i s i d i r e t t a del piombo ematico i n fo rno d i g r a f i t e : i n f l uenza d e l l e cond iz ion i d i conservazione (durata, temperatura, t i p o d i ant icoagu- l a n t e e conten i to re) . Le l i n e e t r a t t e g g i a t e ind icano i l i m i t i d i p r e c i s i o - ne. Provet te d i conservazione r ispet t i vamente i n moplen ( t r i a n g o l i p i e n i ) , po l icarbonato ( c e r c h i e t t i p i e n i ) , v e t r o b o r o s i l i c a t o ( c e r c h i e t t i v u o t i ).

I I I v a l o r i p i ù " s t a b i l i " d i piombemie sono s t a t i o t t e n u t i r i spe t t i vamente con

i il metodo d i r e t t o i n fo rne t to d i g r a f i t e (K3EDTA, temperatura d i conservazione + I

i 5'C) mentre r i s u l t a t i qua l i ta t i vamente i n f e r i o r i sono s t a t i o t t e n u t i dopo a n a l i -

t s i i n s t r i ppagg io anodico (K3EDTA, temperatura d i conservazione + 5°C).

! Ut i l i zzando il metodo e s t r a t t i v o ammoniopirrol i d i n d i t iocarbammato/meti l i s o -

b u t i lchetone (APDC/MIBK) è s t a t o osservato un decremento progressivo de i v a l o r i

d i piombemia indipendentemente dal t i p o d i ant icoagulante e provet ta d i conser-

vazione imp iegat i , che i? r i s u l t a t o con p e r d i t e d i Pb-ematico p i o marcate dopo

conservazione a temperatura ambiente (20°C 2 4OC).

Va pera r i l e v a t o che durante l a conservazione s i v e r i f i c a n o a l t e r a z i o n i del

Pb-ematico che possono r i f l e t t e r s i s u l l a formazione q u a n t i t a t i v a del che la to l

Pb-APDC che è pH dipendente.

f o r n e t t o e f i n o a 6 mesi per il metodo i n s t r i ppagg io anodico adottando una

temperatura d i conservazione d i 5OC. I l i m i t i i n d i c a t i sono d i massima s icurez-

za, l i m i t i ne i q u a l i , c i o6 , il r i s c o n t r o d i a l t e raz ione de i v a l o r i d i Pb-emia è

sporadico o occasionale. Cib non esclude che l a conse rvab i l i t a dei campioni

emat ic i possa essere estesa a tempi s u p e r i o r i , ma dovendo f o r n i r e i n d i c a z i o n i a

l a b o r a t o r i che eseguono rout inar iamente l a piombemia il problema d i conservazio-

ne a lungo termine non appare per t inente .

3a CAMPIONI TRATTATI CON Na-FPARINA 3b CAMPIONI TRATTATI CON K f 014

l . .'-m 1 2 3 1 5 1 5 3 3 1 5 W

Durata conscrvazionc e 20' 4.C

I

F ig. 3. - A n a l i s i del piombo ematico con s t r i ppagg io anodico: i n f l uenza d e l l e cond iz ion i d i conservazione (durata, temperatura, t i p o d i ant icoagulante e conten i to re) . Le l i n e e t r a t t e g g i a t e ind icano i l i m i t i d i prec is ione. Pro- v e t t e d i conservazione r ispet t i vamente i n moplen ( t r i a n g o l i p i e n i ) , p o l i - carbonato ( c e r c h i e t t i v u o t i ) e v e t r o b o r o s i l i c a t o ( c e r c h i e t t i p i e n i ) .

Per quanto r iguarda il metodo e s t r a t t i v o con APDC/MIBK il tamponamento del

campione con tris(idrossimeti1aminometano) immediatamente dopo il p r e l i e v o (1 m1

d i tampone per 1 m1 d i sangue) non e l im ina completamente g l i inconven ien t i sopra

c i t a t i per c u i i2 c o n s i g l i a b i l e f a r e r i f e r i m e n t o a i l i m i t i d i conservazione

i n d i c a t i i n precedenza.

E ' comunque i n d i s c u t i b i l e che i v a r i procedimenti d i conservazione del

campione d i sangue per l a determinazione d e l l a piombemia (ma anche d e l l a cadmie-

a ) possono i n t r o d u r r e r i l e v a n t i v a r i a z i o n i d e l d a t o a n a l i t i c o e che non t u t t i

I f a t t o r i sono i n d i v i d u a b i l i o c o n t r o l l a b i l i . Ne d iscende che una a c c u r a t a

iandard izzaz ione i n t r a ed i n t e r l a b o r a t o r i a l e è u n p r e r e q u i s i t o e s s e n z i a l e p e r

j l i ' a n a l i s i a f f i d a b i l e .

B I B L I O G R A F I A

. M I N O I A , C. & C A V A L L E R I , A. 1983. Determinazioni d e i m e t a l l i i n t r a c c e n e l

l a b o r a t o r i o c l i n i c o e t o s s i c o l o g i c o . La G o l i a r d i c a Pavese. Pavia.