Versuchsübersicht Mikrobiologische Wasseruntersuchungen › imperia › md › content › water...36 °C (2 d) b) 100/mLa) bzw. ohne anormale Veränderung _____ a) Die Angaben gelten

Versuchsübersicht

Mikrobiologische Wasseruntersuchungen

Tag Versuch 13

Bestimmung

der Kolonie-

zahl

Versuch 14

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Flüssigkeitsan-

reicherung

Versuch 15

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Membran-

filtrations-

verfahren

Versuch 16

Nachweis

E. coli und

Coliforme:

Colilert-

Verfahren

Versuch 17

Nachweis

E. coli:

Mikrotiter-

platten-

verfahren

Versuch 18

Identifizierung

mit API 20 E-

System

Montag Anlegen von

Gussplatten

Ansatz von

Flüssigkulturen

Membran-

filtration

Animpfen von

Quanti-Trays

Animpfen

von Mikro-

titerplatten

-

Dienstag - Subkulturen

Endo-Agar

Subkulturen

CASO-Agar

Auswertung - -

Mittwoch Auszählung Ansatz: kleine

Bunte Reihe

Oxidase-Test,

Auswertung

- Auswertung -

Donners-

tag

Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Ansetzen von

Teststreifen

Freitag Auszählung Auswertung

Bunte Reihe

- - - Auswertung

Versuch Nr. 13: Bestimmung der Koloniezahl

1. Tag (Montag)

Proben: Trinkwasser, Ruhrwasser.

Beschreibung der Wasserproben.

Ansatz: - Trinkwasser unverdünnt

- Ruhrwasser 1:10, 1:100

und 1:1000.

Anlegen von Gussplatten mit

Hefeextraktagar.

Bebrütung: 22 °C und 36 °C.

2. – 4. Tag (Mittwoch bis

Freitag)

Auszählung der Kolonien nach

2, 3 und 4 Tagen (Mittwoch bis

Freitag).

Berechnen der Koloniezahlen

pro mL.

Quelle: Madigan und Martinko, Brock Mikrobiologie, 2006.

Quelle: Süßmuth et al., 1999

Versuch Nr. 14: Nachweis von E. coli und coliformen

Bakterien mittels Flüssigkeitsanreicherung 4. und 5. Tag (Donnerstag und

Freitag) Ablesen der Reaktionen aller Bunten

Reihen (positive bzw. negative

Reaktionen)

1. Lactose-Bouillon ( 36 °C, 24 h - 48 h):

Gas- und Säurebildung

2. Glucose-Bouillon (44 °C, 24 h):

Gas- und Säurebildung

3. Tryptophan-Bouillon (36 °C, 24 h):

Indolbildung

4. Nähragar (36 °C 24 h): Oxidase-Test

5. Citratagar (36 °C, 24 h - 48 h): Wachstum

Angabe der Ergebnisse:

Nachweis von E. coli, coliformen

Bakterien bzw. Nicht-Coliformen in

100 mL Wasserprobe.

Versuch Nr. 19: Identifizierung coliformer und

anderer Bakterien mit einem standardisierten

Testsystem (api 20 E)

1. Tag (Donnerstag)

Identifizierung von 4 Reinkulturen

auf Nähragar mit api 20 E-System

(aus Ruhrwasser gewonnene Isolate).

Beimpfen von 4 Teststreifen mit

4 Reinkulturen auf Nähragar aus

Versuch Nr. 14.

Bebrütung der Streifen: 36 °C, 24 h.

2. Tag (Freitag)

Auswertung und Identifizierung.

Mikrobiologisches Praktikum WS 2009/10

3. Woche: Wasseruntersuchungen

Versuchsablauf

Auswertung und Identifizierung Ablesen der Reaktionen und Protokollierung in Auswertebogen

(21 Reaktionen: "ONPG" bis "OX")

Oxidase-Test: Ergebnisse der

Reinkulturen auf Nähragar aus

Versuch Nr. 14 (Flüssigkeitsan-

reicherung)

Auswertung und Identifizierung

Ermittlung eines 7-stelligen Zahlenprofils (numerisches Profil).

Identifizierung anhand des Zahlenprofils im Analytischen-Profil-Index.

Ergebnisse in ausgehängte Tabelle eintragen.

Identifizierung von Kolonien mit dem API 20 E-System

(Beispiele aus früherem Praktikum)

Gruppe Identifizierte Spezies

1 Escherichia coli, Serratia liquefaciens, Kluyvera spp.

2 Aeromonas hydrophila, Aeromonas hydrophila-Vibrio fluvialis

3 Pseudomonas fluorescens-Pseudomonas aeruginosa

4 Kluyvera spp., Citrobacter koseri/farmeri, Aeromonas

hydrophila-Vibrio fluvialis

5 Isolate nicht identifizierbar

7 Escherichia coli, Citrobacter farmeri/koseri, Kluyvera

ascorbata/cryocrescens, Enterobacter cloacae, Klebsiella

planticola

8 Klebsiella oxytoca-Klebsiella planticola, Yersinia

enterocolitica, Enterobacter cloacae

9 Aeromonas hydrophila-Vibrio fluvialis, Citrobacter

koseri/farmeri-Kluyvera spp.

10 Aeromonas hydrophila-Vibrio fluvialis

Ergebnisse Praktikum-Mikrobiologie

Mikrobiologische

Wasseruntersuchungen

Bestimmung der Koloniezahl (Versuch Nr. 13)

Gruppe Koloniezahl (KBE/mL) nach

2, 3 und 4 Tagen bei 22 °C

Koloniezahl (KBE/mL) nach


Ruhr Trinkwasser Ruhr Trinkwasser

1 1923/2242/3500 0/0/11 605/1473/1705 0/0/3

2 2530/7650/9286 0/0/0 1770/2300/2620 0/0/0

3 2645/7500/9682 0/20/50 2036/2255/2586 0/11/28

4 2159/7700/6500 0/0/29 1209/1459/1696 0/0/15

5 1970/4100/7725 0/7/13 1840/2095/2665 1/29/41

6 2600/5450/7952 0/39/49 2100/2654/2750 0/49/36

7 2327/3383/6600 0/54/57 2050/1400/1400 1/50/25

8 2186/2818/4727 0/0/47 1422/1631/1878 0/0/20

9 2671/7600/9409 0/0/13 2027/2509/2609 0/0/0

10 2768/11800/15591 0/0/20 1591/3250/4100 0/0/14

Bestimmung der Koloniezahl (Versuch Nr. 13)

Gruppe Koloniezahl (KBE/mL) nach


Koloniezahl (KBE/mL) nach


Ruhr Trinkwasser Ruhr Trinkwasser

11 1500/4300/6600 0/19/52 830/1523/1773 0/0/20

12 2464/24950/29955 0/6/37 2185/2964/3392 0/6/19

13 1300/2300/5100 0/31/40 1700/2000/2200 0/2/6

14 2546/7100/10524 0/11/22 1236/1650/1852 1/5/18

15 1845/4810/7400 0/0/0 1880/2190/2500 0/0/23

16 1690/5727/9100 0/0/22 312/756/820 1/0(?)/11

17 1468/2391 0/0 545/850 0/0

18 1759/3190/8333 0/30/48 585/1319/1532 0/7/12

19 1600/6100/8363 0/39/42 475/650/1081 0/0/1

20 2300/2630/2300 0/38/18 1100/1245/2200 0/0/12

Anforderungen an Trinkwasser nach der TrinkwV

_________________________________________________________

Koloniezahl TrinkwV 2001

(KBE/mL) Grenzwert/Anforderung

_________________________________________________________

22 °C (2 da), 3 db)) 100/mLa) bzw. ohne anormale Veränderungb)

36 °C (2 d) 100/mLa) bzw. ohne anormale Veränderungb)

___________________________________________________________

a) Die Angaben gelten bei Anwendung des Verfahrens der Koloniezahlbestimmung nach der

TrinkwV 2001 (Anlage 5, Teil I, d. Verfahren bb).

b) Die Angaben gelten bei Anwendung des Verfahrens der Koloniezahlbestimmung nach der

DIN EN ISO 6222 (Anlage 5, Teil I, d. Verfahren aa) (Praktikumsversuch).

Beide Verfahren sind nach der aktuell gültigen Trinkwasserverordnung zulässig.

E.coli und coliforme Bakterien: Flüssigkeitsanreicherung

(Versuch Nr. 14)

Gruppe E. coli und coliforme Bakterien in 100 mL Ruhrwasser

E. coli Coliforme Nicht-Coliforme

1 + -

2 +

3 - - +

4 - + -

5 + + -

6 + +

7 - - +

8 - + -

9 - + +

10 - + + (Mischkultur?)

E.coli und coliforme Bakterien: Flüssigkeitsanreicherung

(Versuch Nr. 14)

Gruppe E. coli und coliforme Bakterien in 100 mL Ruhrwasser

E. coli Coliforme Nicht-Coliforme

11 + + +

12 + + +

13 + - +

14 - + +

15 - + -

16 + - +

17 + + -

18 - + +

19 + + -

20 - + +

Trinkwasserbefunde bei allen Gruppen: coliforme Bakterien und

E. coli negativ in 100 mL

Coliforme Bakterien und E. coli in Ruhrwasser:

Membranfiltration (Versuch Nr. 15)

Gruppe Trinkwasser

(KBE/100 mL)

Ruhrwasser (KBE/100 mL)

Coliforme E. coli Coliforme E. coli

1 0 0 11500 3400

2 0 0 16000 3500

3 0 0 9475 3000

4 0 0 13250 3900

5 0 0 4500 3100

6 0 0 8375 3800

7 0 0 15075 4500

8 0 0 11550 2900

9 0 0 9300 4100

10 0 0 10500 5640

Coliforme Bakterien und E. coli in Ruhrwasser:

Membranfiltration (Versuch Nr. 15)

Gruppe Trinkwasser

(KBE/100 mL)

Ruhrwasser (KBE/100 mL)


11 0 0 9900 4840

12 0 0 8700 3700

13 0 0 2575 1867

14 0 0 10600 3100

15 0 0 9675 2700

16 0 0 10200 3200

17 0 0 3800 2800

18 0 0 10675 2500

19 0 0 7700 3000

20 0 0 6800 3400

Coliforme Bakterien und E.coli: Colilert

(Versuch Nr. 16)

Gruppe Trinkwasser

(MPN/100 mL)

Ruhrwasser

(MPN/100 mL)


1 0 0 > 2419 2419

2 0 0 > 2419 > 2419

3 0 0 > 2419 > 2419

4 0 0 > 2419 > 2419

5 0 0 > 2419 > 2419

6 0 0 > 2419 2419

7 0 0 > 2419 > 2419

8 0 0 > 2419 > 2419

9 0 0 > 2419 > 2419

10 0 0 > 2419 > 2419

11 0 0 > 2419 > 2419

Gruppe Trinkwasser

(MPN/100 mL)

Ruhrwasser

(MPN/100 mL)


12 0 0 > 2419 > 2419

13 0 0 > 2419 > 2419

14 0 0 > 2419 > 2419

15 0 0 > 2419 2419

16 0 0 > 2419 1986

17 0 0 > 2419 > 2419

18 0 0 > 2419 > 2419

19 0 0 > 2419 > 2419

20 0 0 > 2419 > 2419

Coliforme Bakterien und E.coli: Colilert

(Versuch Nr. 16)

E.coli in Ruhrwasser: Mikrotiterplattenverfahren

(Versuch Nr. 17)

Gruppe E. coli

(MPN/100 mL)

Gruppe E. coli

(MPN/100 mL)

1 2994 11 2929

2 3197 12 2444

3 2715 13 3114

4 2843 14 4796

5 3421 15 3306

6 2715 16 2809

7 4005 17 2604

8 3092 18 3093

9 5035 19 3564

10 3093 20 2678

Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer

gemäß der EU-Badegewässerrichtlinie (2006)

Mikrobiologische Anforderungen an Badegewässer

Bewertung der Qualität eines Badegewässers anhand

Mikrobiologischer Befunde

Nach EU-Badegewässerrichtlinie:

Die Bewertung der Qualität eines Badegewässers erfolgt auf Basis von

Daten über vier Jahre (vier abgelaufene Badesaisons).

Maßnahmen nach hohen Einzelwerten - nach Badegewässerverordnung

NRW:

Wird bei der Badegewässerüberwachung für den Parameter

Escherichia coli ein Einzelwert von mehr als 1800 KBE/100 ml oder für

den Parameter Intestinale Enterokokken ein Einzelwert von mehr als

700 KBE/100 ml festgestellt, so ist eine sofortige Nachkontrolle durch-

zuführen. Liegen bei dieser Nachkontrolle die Messergebnisse wieder

über diesen Werten, ist ein zeitweiliges Badeverbot zu erlassen.

Badegewässer und Trinkwasser für das Ruhrgebiet

Verbund-Forschungsprojekt im Rahmen der BMBF-Initiative Risikomanagement von neuen Schadstoffen und Krankheitserregern

im Wasserkreislauf (RiSKWa)

Bakteriologische Untersuchungen an der Ruhr

Untersuchungsgebiet „Untere Ruhr“ (Baldeneysee/Ruhr),

8 Probenahmestellen

Boxplot-Diagram: mikrobiologische Parameter, 8 Probenahmestellen, Entnahme alle 2 Wochen,

maximal 184 Proben, Untersuchungszeitraum 13 Monate (April 2010 – Mai 2013). Medianwerte mit

Grenzen der 25. und 75. Perzentile. Striche nach oben und unten: Minimal- bzw. Maximalwerte.

Nachweishäufigkeiten (%) oben angegeben.

Location

Intestinal

enterococci E. coli

E. coli

(without rainfall

events)

RWW Styrum-Ost Excellent Poor Good quality

Löwental Sufficient Poor Good quality

Seaside Beach Good Sufficient Excellent

Polderpumpwerk Excellent Poor Excellent

Fischereiverein Good Poor Sufficient

Rote Mühle Good Poor Good

Zornige Ameise Sufficient Poor Poor

BarCelona Good Poor Sufficient

Klassifizierung der Badegwässerqualität nach

der EU Badegwässerrichtlinie.

Badesaison von Mai bis September 2012.

www.sichere-ruhr.de

Identifizierung von Kolonien mit dem api 20 E-System

(Versuch Nr. 18)


1 Enterobacter cloacae, Klebesiella oxytoca, Klebsiella

pneumoniae

2 Enterobacter cloacae/Serratia liquefaciens

3 Citrobacter freundii, Vibrio fluvialis

4 Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii

5 Klebsiella terrigena, Klebsiella pneumoniae

6 Enterobacter cloacae

7 Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis

8 Enterobacter cloacae, Enterobacter cloacae/Enterobacter

sakazakii

9 Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae, Klebsiella

oxytoca/ornithinolytica, Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis

10 Klebsiella oxytoca/ornithinolytica, Aeromonas hydrophila

Identifizierung von Kolonien mit dem api 20 E-System

(Versuch Nr. 18)


11 Escherichia coli, Enterobacter cloacae

12 Enterobacter cloacae/Enterobacter sakazakii


14 Klebsiella ornithinolytica, Enterobacter cloacae

15 Enterobacter cloacae/Serratia liquefaciens/Enterobacter

sakazakii

16 Klebsiella pneumoniae, Citrobacter youngae, Escherichia

coli

17

18 Enterobacter cloacae, Aeromonas hydrophila/Vibrio fluvialis


20 Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Serratia

liquefaciens

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