Zwei Methoden zur Zellzahlbestimmung von

Bäckerhefe (Saccharomyces cerevisiae)

Andreas Tessarek, AG Meckenstock

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Ziel des Versuches

• Erlernen von zwei verschiedenen Methoden

der Zellzahlbestimmung und deren Vergleich

– Wie viele Hefezellen sind in 1 g handelsüblicher

Backhefe enthalten?

• Unterscheidung von Gesamtzellzahl und

Lebendzellzahl

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Bäckerhefe (Saccharomyces cerevisiae)

• Actinomycet

Eukaryoten

• Zelldurchmesser von

4-8 µm

• fakultativ anaerob

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http://www.pmbio.icbm.de/mikrobiologischer-garten/de/dehef01.htm (01.03.16)

Zellzahlbestimmung

Gesamtzellzahl (GZZ) :=

Anzahl der Mikroorganismen pro

Volumeneinheit (Zellen/mL); unabhängig davon,

ob sie vermehrungsfähig sind oder nicht

Thoma-Kammer

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Zellzahlbestimmung

Lebendzellzahl (LZZ) :=

Anzahl der vermehrungsfähigen Organismen pro

Volumeneinheit; wird in KBE angegeben

Plattengussverfahren

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Thoma-Kammer

(Aus: Bast, 2001)

Im Praktikum wird eine Thoma-Kammer mit einer Tiefe von 0.1 mm verwendet!

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Thoma-Kammer

(Aus: Bast, 2001)

http://vorsam.uni-ulm.de/vs/Versuche/O/Bilder/O_017B51.jpg (01.03.16)

Newton‘sche Ringe

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} a-Feld

{ b-Feld

c-Feld

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(Aus: Bast, 2001)

Hinweise und Anmerkungen

• Thomakammer und zugehöriges Deckglas sind KEIN Einwegmaterial (desinfizieren), spülen und abtrocknen vorsichtig handhaben nur an den Kanten anfassen

• Verdünnung 10-1 und 10-2 gut auswertbar

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Plattengussverfahren

• Mittel zur Bestimmung der Lebendzellzahl

1. Erstellen einer seriellen Verdünnungsreihe (bis einschließlich 10-8)

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Plattengussverfahren

• Je 1 mL der Verdünnungsstufen 4 bis 8 in je eine beschriftete Petrischale geben

• Agar hinzugeben, Platte verschließen und vorsichtig durch achtförmige Bewegung miteinander vermischen

• 20 bis 30 min erstarren lassen

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Hinweise und Anmerkungen

• zügig, aber dennoch steril arbeiten

• Reagenzgläser sofort ausspülen

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Mutationsfrequenz

Andreas Tessarek, AG Meckenstock

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Ziel des Versuches

Bestimmung, wie häufig Mutationen zu einer Antibiotikaresistenz führen, wenn sie durch ein Mutagen induziert werden Bestimmung der Mutationsfrequenz Allgemeine Formel: Mutationsfrequenz = Mutanten/mL : KBE/mL

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Definitionen

• Mutation :=

Vererbte Veränderung in der Basensequenz (der DNA) eines Organismus

(Madigan et al., 2006)

• Mutante :=

Stamm, der sich von seinen Eltern durch eine Mutation unterscheidet

(Madigan et al., 2006)

• Mutagen :=

Agens, das Mutationen auslöst, z.B. ionisierende Strahlung oder Chemikalien

(Madigan et al., 2006)

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Mutationen

• Letalmutation:

vermindert die Leistungsfähigkeit des Organismus

• Neutrale Mutationen:

treten phänotypisch nicht in Erscheinung

• Positive Mutationen:

stellen einen Selektionsvorteil dar

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Mutationstypen

• Mutationen, die einen größeren DNA-Bereich betreffen

• Punktmutationen:

– Substitution: ATG GCC ACT ATT GCC ACT

– Deletion: ATG GCC ACT ATT GCC AC

– Insertion: ATG GCC ACT ATT GCT CAC T

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Eigenschaften von Mutationen

• zufällig

• beruhen auf endogenen Faktoren, z.B. Fehlern

bei der DNA-Replikation, DNA-Reparatur oder

DNA-Rekombination

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Mutagene

• erhöhen die Rate von Zufallsmutationen

• stellen einen Selektionsdruck dar

• Beispiele:

– Nalidixinsäure

– UV-Strahlung

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Hinweise und Anmerkungen

• Versuch wird von je einer Laborbank gemeinsam

durchgeführt Zeitmanagement

• Zentrifuge wird ausschließlich von Betreuern bedient

• Ausplattieren wird vor Ort gezeigt

• Verdünnungsreihe:

0.5 mL Bakteriensuspension + 4.5 mL NaCl-Lösung

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