‐ Grundlagen
‐ Antikörperdiagnostik
‐ Begriffe (NAHA, (v/c)PRA, Virtuelles Crossmatch, Full House, Mismatch)
‐ Ausblick
Übersicht
HLA Klasse I
Grafik: Sander
Alle kernhaltige Zellen: HLA-A, -B, -Cz. B. A1,2; B7,8; Cw1 oder A*01,*02; B*07, *08; C*01;*04:09N
HLA Klasse II
Grafik: Sander
Antigenpräsentierende Zellen: HLA-DR, -DQ, -DPz. B. DR1,7; DR53; DQ5,2; DPw1,2 oder DRB1*01,*07; DRB4*01; DQB1*05, *02; DQA1*01; DPB1*01; *02; DPA1*01; *02
Serologische HLA-Merkmale(mit Antikörpern bestimmt)
‐Broads / Splits
‐Bw4/Bw6
‐Kopplungsungleichgewicht(v. a. DR‐DQ)
‐DRB‐Polygenie
‐ Grundlagen
‐ Antikörperdiagnostik
‐ Begriffe (NAHA, (v/c)PRA, Virtuelles Crossmatch, Full House, Mismatch)
‐ Ausblick
Übersicht
ELISA
Festphasentest, mit gereinigten HLA Antigenen beschichtete Platten(Bis zu 6 Klasse I- oder Klasse II-Merkmale je well)
Festphasentest
Beschichtung mit-Gereinigten HLA-Merkmalen menschlicher Zellen-Rekombinanten MHC-Komplexen (Single antigen)
Bead Array („Luminex“)
1) Suchtest mit gepoolten Merkmalen (Klasse I und II)(sensitiv, teils falsch positiv, keine eindeutigen Spezifitäten)
Stufendiagnostik
1) Suchtest mit gepoolten Merkmalen (Klasse I und II)(sensitiv, teils falsch positiv, keine eindeutigen Spezifitäten)
2) Differenzierungstest mit aufgereinigten HLA-Merkmalen von z. B. 50 Personen(bis zu 6 Klasse I- oder Klasse II-Merkmale je bead)
Stufendiagnostik
1) Suchtest mit gepoolten Merkmalen (Klasse I und II)(sensitiv, teils falsch positiv, keine eindeutigen Spezifitäten)
2) Differenzierungstest mit aufgereinigten HLA-Merkmalen von z. B. 50 Personen(bis zu 6 Klasse I- oder Klasse II-Merkmale je bead) Bei hohem PRA keine Differenzierung möglich
Stufendiagnostik
PRA= Panel Reactive Antibodies = Anteil positiver Zellen/wells/beadsz. B. 12 positive wells von 50 getesteten PRA = 24 % Bedeutung: Anteil Spender, gegen die ein Patient Antikörper aufweist
Abhängig vom Testverfahren!
Hoher PRA:‐ Antikörper gegen wenige häufige Merkmale oder viele seltene Merkmale‐ KEIN Maß für Stärke der Antikörper!
1) Suchtest mit gepoolten Merkmalen (Klasse I und II)(sensitiv, teils falsch positiv, keine eindeutigen Spezifitäten)
2) Differenzierungstest mit aufgereinigten HLA-Merkmalen von z. B. 50 Personen(bis zu 6 Klasse I- oder Klasse II-Merkmale je bead) Bei hohem PRA keine Differenzierung möglich
3) Single Antigen Testung
Stufendiagnostik
Complement-bindende AntikörperEinflussfaktoren bei Messung- Complement-Bindungsfähigkeit (IgG1/IgG3 ++, IgG2/IgG4 -)
- Antikörperkonzentration (1 IgG-Antikörper bindet kein Complement!)
- Verhältnis IgG1/3 zu IgG2/4 (zumindest in vitro)
Erst C1q+, dann C3d+?
Comoli, Am J Transpl 2016
7323 MFI
14.000 MFI
DSA‐Monitoring bei pädiatrischen Patienten ohne präformierte AK, EDTA‐Prophylaxe
Complement-bindende AntikörperEinflussfaktoren bei Messung- Complement-Bindungsfähigkeit (IgG1/IgG3 ++, IgG2/IgG4 -)
- Antikörperkonzentration (1 IgG-Antikörper bindet kein Complement!)
- Verhältnis IgG1/3 zu IgG2/4 (zumindest in vitro)
Offene Fragen:- Unterschied zwischen Testung von C1q-/C3d-/C4d-Bindung- Zusatznutzen im Vergleich zu MFI
(nach Prozonenprophylaxe!)
HLA-Antikörperteste
LCT Festphasen‐teste
(ELISA, Luminex)
C‐bindende AK
(C1q, C3d, C4d)
Sensitivität IgG + ++; SA +++ IgG1/3 ++
Sensitivität IgM + ‐ +
Nicht Complement‐bindende AK ‐ + ‐
Differenzierung bei hohem PRA ‐ SA: ++ SA: ++
Falsch positive ReaktionenNon‐HLA‐AKRituximab
Unspezif. Reaktionen„Natural Antibodies“
„Natural Antibodies“
Prognostische Bedeutung +++ + + bis ++
Kontraindikation für OrganTx + ‐ ‐
‐ Grundlagen
‐ Antikörperdiagnostik
‐ Begriffe (NAHA, (v/c)PRA, Virtuelles Crossmatch, Full House, Mismatch)
‐ Ausblick
Übersicht
virtueller PRA (vPRA) = Häufigkeit „verbotener“ Spender= calculated PRA (CPRA)
Quantifizierung von NAHA
PRA = Panel-Reactive Antibodies = Anteil positiver Tests
- A25 + A34 + A66 vPRA 6 %
- Bw6 + DQ1 vPRA 95 %
- A1 vPRA 28 %
Beispiele- B13 vPRA 6 %
NAHA und Wartezeit
Je %-Punkt vPRA sind als zusätzliche Wartezeit erforderlich
- 1,3 Wochen für “Standard”-ETKAS-Patienten(erwachsene “T”-Dialysepatienten ohne Tx anderer Organe)
Ziemann et al., NDT 2017
0123456789
10
0% 20% 40% 60% 80% 100%
Add
ition
al w
aitin
gtim
e, y
ears
vPRA due to unacceptable antigens
NAHA und Wartezeit
Je %-Punkt vPRA sind als zusätzliche Wartezeit erforderlich
- 1,3 Wochen für “Standard”-ETKAS-Patienten(erwachsene “T”-Dialysepatienten ohne Tx anderer Organe)
- 2,5 Wochen für ETKAS-Patienten inkl. aller Sonderfälle(z.B. Pankreas-Nieren-Tx, Niere nach Leber, ...)
Ziemann et al., NDT 2017
0123456789
10
0% 20% 40% 60% 80% 100%
Add
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e, y
ears
vPRA due to unacceptable antigens
ETKAS
ETKAS "standard risk"
NAHA und Wartezeit
Je %-Punkt vPRA sind als zusätzliche Wartezeit erforderlich
- 1,3 Wochen für “Standard”-ETKAS-Patienten(erwachsene “T”-Dialysepatienten ohne Tx anderer Organe)
- 2,5 Wochen für ETKAS-Patienten inkl. aller Sonderfälle(z.B. Pankreas-Nieren-Tx, Niere nach Leber, ...)
- 5 Wochen für ESP-Patienten
Ziemann et al., NDT 2017
0123456789
10
0% 20% 40% 60% 80% 100%
Add
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al w
aitin
gtim
e, y
ears
vPRA due to unacceptable antigens
ESPETKASETKAS "standard risk"
NAHA und Wartezeit - Konsequenzen
1) Abwägung zwischen längerer Wartezeit und imm. Risiko(ETKAS 1,3 Wochen je %-Punkt, ESP 5 Wochen)
2) Abwägung zwischen ETKAS und ESP je nach Wartezeit + vPRA
3) Verbesserte Kompensationfür NAHA(gerade Nicht-AM-Patienten, siehe z. B. Schweiz)
0123456789
10
0% 20% 40% 60% 80% 100%
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gtim
e, y
ears
vPRA due to unacceptable antigens
ESPETKASETKAS "standard risk"
Ziemann et al., NDT 2017
Virtuelles Crossmatch
Berücksichtigung aller NAHA bei der Spenderauswahl “Negativ”, falls der Spender kein Merkmal aufweist, das als NAHA eingetragen ist.
Vorteile:‐ Direkt nach HLA‐Typisierung des Organspenders fertig‐ Kein Serumversand erforderlich
Nachteile:‐ NAHA müssen genau (und richtig) definiert sein Evtl. schwierig bei
hochimmunisierten Patienten.
Wird vermutlich 2018 das LCT‐Allokations‐Crossmatch ersetzen. Transplantations‐Crossmatch mit LCT bleibt (ggf. teilweise parallel oder retrospektiv).
Full‐House‐Transplantation
Full-House: Kein Mismatch nach Definition von Eurotransplant
(Breite Spezifitäten für HLA-A und –B, Splits für HLA-DR)
Abstossung durch HLA-Antikörper nach Full-House-TX?
Mismatche möglich für
Cw, DQ, DP
Splits von A und B (z. B. A25 versus A26)
Allelspezifisch (z. B. A*66:02 versus A*66:01)
‐ Grundlagen
‐ Antikörperdiagnostik
‐ Begriffe (NAHA, (v/c)PRA, Virtuelles Crossmatch, Full House, Mismatch)
‐ Ausblick (Epitope, PIRCHES)
Übersicht
Epitope
Polymorphic Residues on
B51
“Seen” byA2,A68;B35,B44
“Seen” byA2,A24;B7,B8
“Seen” byA2,A68;B27,B44
© Luis G. Hidalgo, Alberta, Canada
‐ Grundlagen
‐ Antikörperdiagnostik
‐ Begriffe (NAHA, (v/c)PRA, Virtuelles Crossmatch, Full House, Mismatch)
‐ Ausblick (Epitope, PIRCHES)
Übersicht