Antigene Natürliche Antigene Proteine, Enzyme, Kohlehydrate, Nucleinsäuren, Membranen, Zell-...

Antigene

Natürliche AntigeneProteine, Enzyme, Kohlehydrate,

Nucleinsäuren, Membranen, Zell- wände, Viren etc.

Synthetische Antigenemodifizierte Proteine, künstliche

Polypeptide, spezielle Reagentien

ImmunisierungenVoraussetzungen und Anforderungen (1)

Auswahl der Tiere

Größe und SpeziesJe größer das Tier, umso mehr Antigen erforderlich.Je größer das Tier, umso mehr Antiserum produziert

BeispieleKaninchen, Schaf, Ziege, PferdMaus, Meerschweinchen, RatteHuhn

WichtigPhylogenetischer Abstand vom Versuchstier zum Antigen soll möglichst groß sein

Genetische FaktorenAuswahl geeigneter Stämme, reinrassige Tiere bevorzugt

ImmunisierungenVoraussetzungen und Anforderungen (2)

Eigenschaften des Antigens

Prinzip: je komplexer, desto stärker antigen

AggregationDenaturierungsterische Erreichbarkeitstrukturelle KomplexizitätMolekulargewichtSalzkonzentration

Präparation von Antigenen

Natürliche AntigeneIsolierung nach Regeln der ProteinchemieReinheitskriterienVerwendung vonDetergentien für unlösliche Antigene, z.B. Membranproteine (Probleme)

Künstliche AntigenePolypeptidyl-Proteine: lineare, verzweigte, homopolymere, heteropolymere

Konjugate (Hapten-Carrier)Haptene sind niedermolekulare Substanzen, die für sich

allein nur schwach oder gar nicht antigen wirken, z.B. Carbonsäuren, Steroide, Phenole, DNP-Lysyl-Derivate, TNP-Derivate. Als Carrier werden schwach immunogene Polypeptide gewählt.

Hapten-Carrier

Durch die Verknüpfung des Haptens mit dem Carrier werden neue antigene Determinanten geschaffen.

Adjuvantien

Mittel zur Hebung der allgemeinen Immunantwort

Wirkungsweise:1) Depotwirkung2) Senkung toxischer Effekte3) Aggregation von Antigenen4) Stimulation der Lymphozyten-Zirkulation

Wichtigstes Adjuvans:Freund's Complete Adjuvans

9 Teile Mineralöl1 Teil Detergens (Artacel)0.5 mg/ml hitzedenat. Bakterien (Mycobacterium tuberculosis oder butyricum)

Alternativen:Aluminiumhydroxid-Gele; Bentonit-Gele

Wirkungsweise von Adjuvantien

Injektionsmethoden

intradermal: in die Hautsubcutant: unter die Hautintramuskulär: in den Muskelintravenös: in die Veneintraperitoneal: in die Bauchhöhlein die Lymphknotenin die Fußballen (Kaninchen)

Immunisierungsprogramm

1. Injektion: mit Freund's Complete Adjuvans

2. Injektion (= 1. Boost): nach ca. 4 Wochen

Blutabnahme: 1 Woche darauf

3. Injektion (= 2. Boost): 2-3 Wochen darauf

Blutabnahme: 1 Woche darauf

usw.

1o Ag 2o Ag

Total Ab

IgM Ab

IgG Ab

5 10 15»» 30 35 40

A b

T

i t

e r

Tage nach Immunisierung

Verlauf der Immunantwort