View
104
Download
1
Category
Preview:
Citation preview
„„Evaluierung und Validierung Evaluierung und Validierung
potenzieller molekulargenetischer potenzieller molekulargenetischer
Tumormarker in Urinproben von Tumormarker in Urinproben von
Patienten mit Verdacht auf Patienten mit Verdacht auf
Harnblasenkarzinom“Harnblasenkarzinom“
Labor-SeminarLabor-Seminar
07.02.200707.02.2007
Juliane SchmidtJuliane Schmidt
Und ganz viele Helfer!Und ganz viele Helfer!
EinführungEinführung
• Harnblasenkarzinom (BCa)Harnblasenkarzinom (BCa)
VierthäufigsterVierthäufigster Tumor beim Mann weltweit &Tumor beim Mann weltweit &
neunthäufigsteneunthäufigste Ursache eines tumorbedingten Ursache eines tumorbedingten
TodesTodes
• Zystoskopie (invasiv) & Urinzytologie:Zystoskopie (invasiv) & Urinzytologie:
Standardmethoden zur Diagnose und ÜberwachungStandardmethoden zur Diagnose und Überwachung
• kein idealer BCa-Tumormarkerkein idealer BCa-Tumormarker zur zur
nichtinvasiven Diangostiknichtinvasiven Diangostik
ZielstellungZielstellung
• EtablierungEtablierung standardisierter Methoden zur standardisierter Methoden zur
quantitativen Transkriptmessung in Geweben quantitativen Transkriptmessung in Geweben
(TUR-Späne) und Urinproben(TUR-Späne) und Urinproben
• TargetvalidierungTargetvalidierung an Gewebeproben (Tu-Tf)an Gewebeproben (Tu-Tf)
• EvaluierungEvaluierung verschiedener tumorassoziierter verschiedener tumorassoziierter
Faktoren (Survivin, XIAP, Ki67) als mögliche Faktoren (Survivin, XIAP, Ki67) als mögliche
diagnostische und prognostische BCa-Markerdiagnostische und prognostische BCa-Marker
BCa-assoziierte GeneBCa-assoziierte Gene
• Survivin & XIAP: Survivin & XIAP: “inhibitor of apoptosis proteins” (IAP)“inhibitor of apoptosis proteins” (IAP)
• Ki67: Ki67: Proliferationsmarker, essential für ZellzyklusProliferationsmarker, essential für Zellzyklus
• selektiv selektiv überexprimiertüberexprimiert in vielen Tumorarten inkl. in vielen Tumorarten inkl. BCaBCa
• AssoziationAssoziation zwischen Überexpression und höherem zwischen Überexpression und höherem Tumorstadium & Grad sowie mit Tumorstadium & Grad sowie mit ungünstiger Prognoseungünstiger Prognose
(( SVV SVV+Ki67 )+Ki67 )
• geeignete geeignete MarkerMarker (Literatur: Gewebe und Urin) und (Literatur: Gewebe und Urin) und therapeutische Targetstherapeutische Targets für Antitumortherapien (z.B. für Antitumortherapien (z.B. Antisense-Studie)Antisense-Studie)
Material & Methoden 1Material & Methoden 1• prospektive Studie:prospektive Studie: Februar 2006 – Januar 2007 Februar 2006 – Januar 2007
• Einschlusskriterien:Einschlusskriterien:– Patienten mit Verdacht auf ein BCa (Neudiagnose oder Patienten mit Verdacht auf ein BCa (Neudiagnose oder
Rezidiv) die sich einer transurethralen Resektion (TUR-BT) Rezidiv) die sich einer transurethralen Resektion (TUR-BT)
unterziehenunterziehen
• Ausschlusskriterien:Ausschlusskriterien:– Patienten mit zusätzlichem Prostata-CaPatienten mit zusätzlichem Prostata-Ca
– Patienten mit gutartigen Veränderungen ( z.B.Papillom )Patienten mit gutartigen Veränderungen ( z.B.Papillom )
– Patienten mit nicht-urothelialen Karzinomen (z.B.Adeno-Ca)Patienten mit nicht-urothelialen Karzinomen (z.B.Adeno-Ca)
Material & Methoden 2Material & Methoden 2
• Kontrollgruppen:Kontrollgruppen:– BPH-Patienten BPH-Patienten
– Cystitis-PatientenCystitis-Patienten
– GesundeGesunde
– Cystektomiepatienten ( Sammlung läuft noch )Cystektomiepatienten ( Sammlung läuft noch )
Material & Methoden 3Material & Methoden 3
• BCa-Patienten:BCa-Patienten:
– prä-operative Urinprobeprä-operative Urinprobe
– intra-operatives Gewebe (Tumor & scheinbar intra-operatives Gewebe (Tumor & scheinbar
normale Blasenmucosa)normale Blasenmucosa)
– post-operative Urinprobe (Sammlung ge-post-operative Urinprobe (Sammlung ge-
stoppt)stoppt)
für jede TUR-BT (prim./sek./tert., aller 4-6 Wo.)für jede TUR-BT (prim./sek./tert., aller 4-6 Wo.)
gleicher Zyklus auch bei Rezidivengleicher Zyklus auch bei Rezidiven
• KontrollenKontrollen:: 1 Urinprobe1 Urinprobe
Behandlungsverlauf eines Behandlungsverlauf eines BlasenkarzinompatientenBlasenkarzinompatienten
Primäre TURBT
CystektomieSekundäre TURBT
Tertiäre TURBT Cystektomie
ca. 6-8 Wochen
ca. 6-8 Wochen
Rezidiv
Rezidiv
Material & Methoden 4Material & Methoden 4
• Sedimentation der Zellen aus dem UrinSedimentation der Zellen aus dem Urin
• Gewebekryoschnitte (Tf = 0%, Tu = 70-100%)Gewebekryoschnitte (Tf = 0%, Tu = 70-100%)
• Isolation von total RNA und cDNA-SyntheseIsolation von total RNA und cDNA-Synthese
• quantitative PCR für Survivin, XIAP & Ki67 und quantitative PCR für Survivin, XIAP & Ki67 und
das Referenzgen TBP in Urin- & Gewebeprobendas Referenzgen TBP in Urin- & Gewebeproben
• Korrelation der relative Expressionsniveaus von Korrelation der relative Expressionsniveaus von
Survivin, XIAP & Ki76 (interne Normalisierung Survivin, XIAP & Ki76 (interne Normalisierung
auf TBP) mit klinisch-pathologischen Aspektenauf TBP) mit klinisch-pathologischen Aspekten
Bca-Patienten (N=106)Bca-Patienten (N=106)• BTBT= 89 ( 84% )= 89 ( 84% ) NT NT= 17 ( 16% )= 17 ( 16% )• Alter (median)Alter (median) = 70 Jahre (34 – 93)= 70 Jahre (34 – 93)• M:FM:F = 63 : 43 (59,4% : 40,6%)= 63 : 43 (59,4% : 40,6%)• Neudiagnose : RezidivNeudiagnose : Rezidiv = 92 : 14 (86,8% : 13,2%)= 92 : 14 (86,8% : 13,2%)• PSAPSA (median; 58 Pat.) = 1,195 (0,16 – 33,91)(median; 58 Pat.) = 1,195 (0,16 – 33,91)• TumorstadienTumorstadien:: NTNT= kein Tumor nachweisbar n=17 = kein Tumor nachweisbar n=17
pTa pTa n=56 n=56 pT1pT1 n=15 n=15 >PT1>PT1 n=17 n=17
NA n=1 NA n=1
ciscis:: 92 :14 (86,6% : 13,2%)92 :14 (86,6% : 13,2%)
• TumorgradeTumorgrade:: NT n=17NT n=17
LMP (low malignancy potential) n=6LMP (low malignancy potential) n=6
low grade n=17low grade n=17
high grade n=66high grade n=66
KontrollenKontrollen• BPH: n =34 n =34 67,5 Jahre (52-85J.)67,5 Jahre (52-85J.) PSA-Median 2,105ng/ml PSA-Median 2,105ng/ml
(0,28-21,58)(0,28-21,58)• Cystitis: n =6 Cystitis: n =6 49,5 Jahre (19-76J.)49,5 Jahre (19-76J.) M : F = 1:5 M : F = 1:5
• Gesunde: n =30 Gesunde: n =30 30 Jahre (18-59J.)30 Jahre (18-59J.) M : F=7:22M : F=7:22
Cytologie
36%92%75%78%
Negativ prädiktiver Wert
(npW)
Positiv prädiktiver Wert
(ppW)
SpezifitätSensitivität
Vergleich mit unseren Daten folgt
Ergebnisse 1Ergebnisse 1
• 2 Referenzgene getestet:2 Referenzgene getestet: TBPTBP besser als HPRTbesser als HPRT
• UrinprobenUrinproben: : negative Korrelation zw. Referenzgen-negative Korrelation zw. Referenzgen-Expression & Erythrozyten / Leukozyten Expression & Erythrozyten / Leukozyten
viele Proben mit Ref.gen unter Nachweisgrenzeviele Proben mit Ref.gen unter Nachweisgrenze
von 10 Transkriptmolekülenvon 10 Transkriptmolekülen
• GewebeprobenGewebeproben:: weniger Proben mit neg. Referenzgenweniger Proben mit neg. Referenzgen
• aufgrund technischer Probleme viele der ersten Proben aufgrund technischer Probleme viele der ersten Proben verworfen oder cDNA nicht mehr ausreichend für verworfen oder cDNA nicht mehr ausreichend für vollständige Messung aller Genevollständige Messung aller Gene
Ki67/TBP in ungepaarten GewebeprobenKi67/TBP in ungepaarten Gewebeproben
Tf Tu
Gewebe
0
5
10
15
20
Ki6
7/T
BP
64.0
35.0
59
55
33
30
71
97
66
42
68
83
53
XIAP/TBP in ungepaarten XIAP/TBP in ungepaarten GewebeprobenGewebeproben
Tf Tu
Gewebe
0
10
20
30
40
50
60X
IAP
/TB
P
64.035.0
55
97
4319
50
70
53
68
10
SVV/TBP in ungepaarten GewebeprobenSVV/TBP in ungepaarten Gewebeproben
Tf Tu
Gewebe
0
2
4
6
8
SV
V/T
BP
64.0
35.0
59
97
68
10
53
33
Ki67/TBP in Urinen von BCa-Patienten und Ki67/TBP in Urinen von BCa-Patienten und KontrollenKontrollen
BT NT BPH Csytitis Gesunde
Urine
0
2
4
6
8
10
12
Ki6
7/T
BP
5.030.0
73.0
14.026.0
41
75
4
38
84
80
21
95
122
143
156
150
148
149
Verarbeitete Fälle
73 82,0% 16 18,0% 89 100,0%
14 82,4% 3 17,6% 17 100,0%
26 76,5% 8 23,5% 34 100,0%
5 83,3% 1 16,7% 6 100,0%
30 100,0% 0 ,0% 30 100,0%
UrineBT
NT
BPH
Cystitis
Gesunde
Ki67/TBP
N Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
Gesunde:
fehlende Werte Null
gesetzt
XIAP/TBP in Urinen von BCa-Patienten und XIAP/TBP in Urinen von BCa-Patienten und KontrollenKontrollen
BT NT BPH Cystitis Gesunde
Urine
0
100
200
300
400
XIA
P/T
BP
5.0
30.0
73.014.0
26.0
45
35
148
77
3
24
18
47
70
71
73
106
102
103
136
121
119
120
163
Verarbeitete Fälle
73 82,0% 16 18,0% 89 100,0%
14 82,4% 3 17,6% 17 100,0%
26 76,5% 8 23,5% 34 100,0%
5 83,3% 1 16,7% 6 100,0%
30 100,0% 0 ,0% 30 100,0%
UrineBT
NT
BPH
Cystitis
Gesunde
XIAP/TBP
N Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
SVV/TBP in Urinen von BCa-Patienten und SVV/TBP in Urinen von BCa-Patienten und KontrollenKontrollen
BT NT BPH Cystitis Gesunde
Urine
0
10
20
30
SV
V/T
BP
3.030.0
65.013.0
16.0
39
4
154
56
70
40
34
47
31
71
73
103
155
Verarbeitete Fälle
65 73,0% 24 27,0% 89 100,0%
13 76,5% 4 23,5% 17 100,0%
16 47,1% 18 52,9% 34 100,0%
3 50,0% 3 50,0% 6 100,0%
30 100,0% 0 ,0% 30 100,0%
UrineBT
NT
BPH
Cystitis
Gesunde
SVV/TBP
N Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
Ki67/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Ki67/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom TumorstadiumTumorstadium
NT pTa pT1 >pT1
Stage
0
5
10
15
20K
i67
/TB
P
16.0
14.0
44.0 10.0
63
40
84
6
38
68
64
92
Verarbeitete Fälle
14 82,4% 3 17,6% 17 100,0%
44 81,5% 10 18,5% 54 100,0%
10 66,7% 5 33,3% 15 100,0%
16 94,1% 1 5,9% 17 100,0%
StageNT
pTa
pT1
>pT1
Ki67/TBPN Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
XIAP/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom XIAP/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom TumorstadiumTumorstadium
NT pTa pT1 >pT1
Stage
0
100
200
300
400
500
600
700
XIA
P/T
BP
16.014.043.0
10.0
34
67
58
17
13
14
37
36
60
18
43
59
80
102
Verarbeitete Fälle
14 82,4% 3 17,6% 17 100,0%
43 81,1% 10 18,9% 53 100,0%
10 66,7% 5 33,3% 15 100,0%
16 94,1% 1 5,9% 17 100,0%
StageNT
pTa
pT1
>pT1
XIAP/TBP
N Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
SVV/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom SVV/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom TumorstadiumTumorstadium
NT pTa pT1 >pT1
Stage
0
10
20
30
40
SV
V/T
BP
13.0
13.039.0
9.0
64
79
86
14
38
48
35
43
59
80
99
102
Verarbeitete Fälle
13 76,5% 4 23,5% 17 100,0%
39 73,6% 14 26,4% 53 100,0%
9 60,0% 6 40,0% 15 100,0%
13 76,5% 4 23,5% 17 100,0%
StageNT
pTa
pT1
>pT1
SVV/TBPN Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
Ki67/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom Ki67/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom TumorgradTumorgrad
NT LMP low high
Grade
0
3
6
9
12
15K
i67
/TB
P
55.0
14.0
5.010.0
55
40
84
87
6
38
68
64
92
Verarbeitete Fälle
14 82,4% 3 17,6% 17 100,0%
5 83,3% 1 16,7% 6 100,0%
10 66,7% 5 33,3% 15 100,0%
55 84,6% 10 15,4% 65 100,0%
GradeNT
LMP
low grade
high grade
Ki67/TBPN Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
XIAP/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom XIAP/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom TumorgradTumorgrad
NT LMP low high
Grade
0
100
200
300
400
500
600
XIA
P/T
BP
55.014.05.0
10.0
35
17
13
14
61
18
76
74
44
103
81
60
Verarbeitete Fälle
14 82,4% 3 17,6% 17 100,0%
5 83,3% 1 16,7% 6 100,0%
10 66,7% 5 33,3% 15 100,0%
55 84,6% 10 15,4% 65 100,0%
GradeNT
LMP
low grade
high grade
XIAP/TBP
N Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
SVV/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom SVV/TBP in Urinen in Abhängigkeit vom TumorgradTumorgrad
NT LMP low high
Grade
0
10
20
30
40
50S
VV
/TB
P
51.0
13.0
3.0
8.0
87
14
36
100
103
80
44
34
81
60
Verarbeitete Fälle
13 76,5% 4 23,5% 17 100,0%
3 50,0% 3 50,0% 6 100,0%
8 53,3% 7 46,7% 15 100,0%
51 78,5% 14 21,5% 65 100,0%
GradeNT
LMP
low grade
highgrade
SVV/TBPN Prozent N Prozent N Prozent
Gültig Fehlend Gesamt
Fälle
SchlussfolgerungenSchlussfolgerungen
• Eignung als TumormarkerEignung als Tumormarker: : Ki67,(SVV)Ki67,(SVV)
• Abhängigkeit vom TumorstadiumAbhängigkeit vom Tumorstadium: : Ki67,SVVKi67,SVV
• Abhängigkeit vom TumorgradAbhängigkeit vom Tumorgrad: : Ki67,(SVV)Ki67,(SVV)
• XIAPXIAP ungeeignet: Expression im Prostata-ungeeignet: Expression im Prostata-
gewebe => bei BPHgewebe => bei BPH
Expression in LeukozytenExpression in Leukozyten
=> bei Cystitis=> bei Cystitis
Ausblick 1Ausblick 1
• gezielte Nachbeobachtung von Patienten ohne gezielte Nachbeobachtung von Patienten ohne
histologischen Tumornachweis (NT)histologischen Tumornachweis (NT)
• Abfall der Tumormarker nach der primären TUR-BT?Abfall der Tumormarker nach der primären TUR-BT?
• Statistische Signifikanz: möglich durch Kombination Statistische Signifikanz: möglich durch Kombination
der Tumormarker ? der Tumormarker ? (Verweis auf Prostata-Krebs-(Verweis auf Prostata-Krebs-
Studie)Studie)
• Ausweitung der Tumorgene ( z.B. hTERT,CK20 )Ausweitung der Tumorgene ( z.B. hTERT,CK20 )
• Vergleich mit Urinzytologie (Cutt-offs?)Vergleich mit Urinzytologie (Cutt-offs?)
Ausblick 2Ausblick 2
• Geschlechtsspezifischer Test ( Probleme durch Geschlechtsspezifischer Test ( Probleme durch Einfluss von BPH )Einfluss von BPH )
• Korrelation Tumormarker im Urin und Korrelation Tumormarker im Urin und korrespondierenden Gewebekorrespondierenden Gewebe
• Ausschlusskriterium Harnwegsinfekt:Ausschlusskriterium Harnwegsinfekt:
Bakterienzahl oder positive Urinkultur?Bakterienzahl oder positive Urinkultur?• Sammlung BPH- ,Cystitis-und Cystektomie-Sammlung BPH- ,Cystitis-und Cystektomie-
PatientenPatienten• Abschätzung der Rezidivhäufigkeit?Abschätzung der Rezidivhäufigkeit?
Recommended