Gemeinsame Jahrestagung der Südostdeutschen Gesellschaft für Urologie e.V. und der Vereinigung der...

Gemeinsame Jahrestagung der Südostdeutschen Gesellschaft für Urologie e.V. und der Vereinigung der Mitteldeutschen Urologen sowie der Sächsischen Gesellschaft für Urologie, Dresden, 09. -11. Juni 2005

Die 5HT1a/b-Rezeptor-mRNA-Expression korrespondiert mit dem

Zellwachstum unter hormoneller Manipulation in LNCaP-Zelllinien

Igor Pirozhok* , Axel Meye , Susanne Füssel , Oliver W. Hakenberg , Manfred P. Wirth

 * Diese Arbeit wurde unterstützt durch das „European Urology Scholarship Programme (EUSP-EAU) Stipendium S-02-2004 für I.P.

Klinik und Poliklinik für Urologie am Universitätsklinikum Carl Gustav Carus der Technischen Universität Dresden

Material und Methoden

• Zelllinien LNCaP, PC3, DU145, 22RV1, BPH-1, Fibroblasten

• CLSM-Fluorovert (Leica, Heidelberg) 79-fach bzw. 125-fach vergrös.

• 1nM/10nM – R1881, 10µM Bicalutamid (Casodex)

• QPCR (quantitative real-time PCR) für 5HTR1a/b relative Expression. Referenzgen HPRT (Hypoxanthin-Phosphoribosyltransferase)

• Die Isolation von Total-RNA, cDNA-Synthese, Agarose-Gelelectrophoresis (Standardprotokollen)

Ergebnisse

Basalen Relativen Expression

0,000

0,100

0,200

0,300

0,400

0,500

0,600

0,700

Fibroblasten BPH-1 22 RV1 LNCaP DU145 PC-3

Zell Linien

Rel

ativ

e E

inh

eite

n

LD (<50%)

HD (>75%)

Relative Expressionsraten der 5HTR1a- bzw. 5HTR1b-mRNA nach Normierung auf das Referenzgen HPRT (Hypoxanthin-Phosphoribosyl-Transferase) in PCa- und anderen Zelllinien.

Zelinien LD (<50%) HD (>75%)

Fibroblasten 0,556 0,136

BPH-1 0,017 0,035

22 RV1 0,085 0,128

LNCaP 0,009 0,061

DU145 0,123 0,213

PC-3 0,011 0,072

QPCR Kurven 5HTR1a/b mRNA relative Expression nach Stimulation/Inhibition.

1nM/10nM – R1881, 10µM CasodexCas +10µM Casodex3,6,12,24,48 St. – Zeit nach Stimulation/Inhibition (Stunden)

DNS 100bp

*LNCaP-HD

22RV1-HD

22RV1-LD

*DU 145-HD

*PC-3-HD

LNCaP-LD

*LNCaP-HD

*DU 145-HD

DU 145-LD

Fibrobl -LD

PC-3 -LD

BPH1-LD

*BPH1-HD

Fibroblast -HD

*Fibroblast-LD

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3h 6h 12h 24h 48h

Stunden

Rel

ativ

e Ei

nhei

ten

1nM R1881

1nM R1881+ 1µMCasodex

10nM R1881

Die relative 5HTR1a/b mRNA Expression nach 3-48 h. der Stimulation (R1881) und Inhibition (Casodex) im LNCaP

Zellinien

QPCR Ergebnisse nach Stimulation/Inhibition

Schlussfolgerung

• Die 5HTR1a/b-Basalexpression ist abhängig von der Zellwachstumsdichte verschiedener PCa-Linien.

• Die Effekte einer Androgenstimulation sowie deren Hemmung sind

zeit- und konzentrationsabhängig. • Die Daten unterlegen eine mögliche Korrelation der 5HTR1a/b-

Expression mit Effekten der AR-Stimulation bzw.–Hemmung. • Die Transformation zum HRPC könnte möglicherweise mit dem 5-

HT-Signalweg verbunden sein, was in Folgestudien analysiert werden sollte.

Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!