Gemeinsame Jahrestagung der Südostdeutschen Gesellschaft für Urologie e.V. und der Vereinigung der Mitteldeutschen Urologen sowie der Sächsischen Gesellschaft für Urologie, Dresden, 09. -11. Juni 2005

Die 5HT1a/b-Rezeptor-mRNA-Expression korrespondiert mit dem

Zellwachstum unter hormoneller Manipulation in LNCaP-Zelllinien

Igor Pirozhok* , Axel Meye , Susanne Füssel , Oliver W. Hakenberg , Manfred P. Wirth

 * Diese Arbeit wurde unterstützt durch das „European Urology Scholarship Programme (EUSP-EAU) Stipendium S-02-2004 für I.P.

Klinik und Poliklinik für Urologie am Universitätsklinikum Carl Gustav Carus der Technischen Universität Dresden

Material und Methoden

• Zelllinien LNCaP, PC3, DU145, 22RV1, BPH-1, Fibroblasten

• CLSM-Fluorovert (Leica, Heidelberg) 79-fach bzw. 125-fach vergrös.

• 1nM/10nM – R1881, 10µM Bicalutamid (Casodex)

• QPCR (quantitative real-time PCR) für 5HTR1a/b relative Expression. Referenzgen HPRT (Hypoxanthin-Phosphoribosyltransferase)

• Die Isolation von Total-RNA, cDNA-Synthese, Agarose-Gelelectrophoresis (Standardprotokollen)

Ergebnisse

Basalen Relativen Expression

0,000

0,100

0,200

0,300

0,400

0,500

0,600

0,700

Fibroblasten BPH-1 22 RV1 LNCaP DU145 PC-3

Zell Linien

Rel

ativ

e E

inh

eite

n

LD (<50%)

HD (>75%)

Relative Expressionsraten der 5HTR1a- bzw. 5HTR1b-mRNA nach Normierung auf das Referenzgen HPRT (Hypoxanthin-Phosphoribosyl-Transferase) in PCa- und anderen Zelllinien.

Zelinien LD (<50%) HD (>75%)

Fibroblasten 0,556 0,136

BPH-1 0,017 0,035

22 RV1 0,085 0,128

LNCaP 0,009 0,061

DU145 0,123 0,213

PC-3 0,011 0,072

QPCR Kurven 5HTR1a/b mRNA relative Expression nach Stimulation/Inhibition.

1nM/10nM – R1881, 10µM CasodexCas +10µM Casodex3,6,12,24,48 St. – Zeit nach Stimulation/Inhibition (Stunden)

DNS 100bp

*LNCaP-HD

22RV1-HD

22RV1-LD

*DU 145-HD

*PC-3-HD

LNCaP-LD

*LNCaP-HD

*DU 145-HD

DU 145-LD

Fibrobl -LD

PC-3 -LD

BPH1-LD

*BPH1-HD

Fibroblast -HD

*Fibroblast-LD

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3h 6h 12h 24h 48h

Stunden

Rel

ativ

e Ei

nhei

ten

1nM R1881

1nM R1881+ 1µMCasodex

10nM R1881

Die relative 5HTR1a/b mRNA Expression nach 3-48 h. der Stimulation (R1881) und Inhibition (Casodex) im LNCaP

Zellinien

QPCR Ergebnisse nach Stimulation/Inhibition

Schlussfolgerung

• Die 5HTR1a/b-Basalexpression ist abhängig von der Zellwachstumsdichte verschiedener PCa-Linien.

• Die Effekte einer Androgenstimulation sowie deren Hemmung sind

zeit- und konzentrationsabhängig. • Die Daten unterlegen eine mögliche Korrelation der 5HTR1a/b-

Expression mit Effekten der AR-Stimulation bzw.–Hemmung. • Die Transformation zum HRPC könnte möglicherweise mit dem 5-

HT-Signalweg verbunden sein, was in Folgestudien analysiert werden sollte.

Vielen Dank für Ihre Aufmerksamkeit!