3. Biochemische und klinische Analyse

Referate 3. Biochemische und klinische Analyse 325

war eine ges~ttlgte Kalomelelektrode, die fiber eine Brticke (1 M Na NO3) mit einem Platindraht als Gegenelektrode Verbunden war. Das Probenmaterial (0,1 - 0,3 g) wird im Sandbad bei 120~ 2 h erhitzt umi anschliet~end aufgeschlossen. Die auf pH 2.0 eingestellte L6sung wird irn Stickstoffstrom yon Luftblasen befreit. Im Voltam- mogramm ethalt man folgende Peaks:Zn -0.96, Cd -0,57, Pb -0,39, Cu +0,01 V. Nachweisgrenzen (ng/mi): Zn: 2,9, Cd: 0,2, Pb: 0,7, Cu: 1,4. Die yon C.E. Taft und W.J. Kishler (Ohio State Univ. Pep. No. 337 x, 339 x) durchgeftib_rten Untersuchungen geben vergleich- bare Konzentrationsfaktoren zwischen den in Cladophora ange- reicherten Metallen und den MetaUspuren im Wasser. Hierbei er- gaben sich folgende Faktoren: Cu: 2,2 x 103, 1,0 x 103 (Lake Erie) umi 2,5 x 103 (Spokane River). - Water Res. Vol. 10,981 - 984 (1977). Dept. of Chem. Queen's Univ. Kingston, Ontario (Canada) F. Knorr

3. BIOCHEMISCHE UND KLINISCHE A N A L Y S E

Performance studies on the technicon "SMAC" analyzer: precision and comparison of values with methods in routine laboratory service. J.O. Westgard, RaN. Caxey, D.H. Feldbruegge and L.M. Jenkins.

Autoanalysator; Erfahrungen mit SMAC (Technicon). - Die Autoren haben eine statistische Auswertung einer grot~en Anzahl yon Meger- gebnissen durchgefiihrt, welche mit den Ger~ten SMAC (Technicon) und SMA 12/60 (Technicon) aus klinischen Proben erhalten wurden. Zum Vergleich wurdan die Grenzwerte benutzt, die dutch den ,,er- laubten Fehler" gesetzt werden. R.N. Barnett (Am. J. Clin. Pathol. 50, 671 (1968)) und D.B. Tonks (Clin. Chem. 9, 217 (1963) und Can.l. IVied. Teetmol. 30, 38 (1968)) haben Empfehlungen fiir ,,er- laubte Fehler" herausgegeben. Die in Tabellen zusammengef~ten Ergebnisse werden ausfiihrlich diskutiert. - Clin. Chem.22, 489 - 496 (1976). Depts. Med. Pathol., Clin.Labs., Univ. Wisconsin-Center for Health Sciences, Madison Wise. (USA) A. Niemann

On the design of clinical chemistry quality-control sera. G.F. Gran- his and W.G. Miller.

Analyse von Serum; Autoanalysatoren/Qualit/itskontroUe. - Die Aus- wahl und Verwendung yon Kontrollseren, speziell ftir Autoanalysato- ren mit mehreren Kan~ilan, wird rechnerisch und experimentell sehr ausftihrlich behandelt. Wesentlich shad ein Serumpool mit niedrigen Konzentrationen der zu bestimmenden Bestandteile, ein Pool mit hohen und 3 unterschiedliche Mischungsverhiiltuisse dieser beiden. In 2 Appendices sind entsprechende Angaben fiir lyophilisierte Kon- trollseren gemacht. - Clin. Chem. 22, 500- 512 (1976). Div. Clin. Chem. Dept. Pathol., Ohio State Univ., Columbus, Ohio 43210 (USA) E. Miiller, Marburg

Immunofixation. I. General principles and application to agarose gel electrophoresis. R.F. Ritchie and R. Smith.

Analyse yon Serum durch Immunofixation; Elektrophorese; Agarose- gel. - U m Proteinfraktionen, die sieh aufgrund yon genetischen oder biochemischen Ver/inderungen nach der gebr~iuchiichen Elektropho- rese auf Agarosegel an ungew6hniichen Positionen befinden, zu er- kennen, wird eine modifizierte Immunofixationsmethode beschrieben. Dazu werden nach der Elektrophorese Celluloseacetatstreifan, die mit dem Antiserum getr'~rtkt sind, auf das Agarosegel aufgebracht und 1 h inknbiert. Darm pret~t man nach Entfernung der Celluloseacetatstrei- fen das Agarosegel und f~rbt nach Waschen und Trocknen mit Amido-

schwarz oder Coomassie Brillant Blau. In der Arbeit sind einige Bei- spiele zur Anwendung der Methode angeftihrt. - Clin. Chem. 22, 497 - 499 (1976). Rheumatic Disease Lab., Maine Medical Center, Portland, Maine 04102 (USA) W.H. Mennicke

Comparison of non-biospecific effects in immunoaffinity chromatography using cyanogen bromide and bifunctional oxirane as immobilis- ing agents. R.F. Murphy, J.M. Conlon, A. Imam and G.J.C. Kelly.

Chromatographic, Immunoaffmit~it; Bromcyan und Oxiran zur Im- mobilisierung. - Polypeptide antigen, ghicagon, antibodies to gluca- gon and non-immune globulins were immobilised on agarose using CNBr and a bifunctional oxirane. Irrespective of the ligand immobilised, positively charged groups introduced to conjugates by CNBr caused electrostatic interactions with impurities and soluble biospecific ligands. Solvents required for elution of bound antibodies and antigens were more strongly deforming when immunoaffmity conjugates were prepared with CNBr than with the oxirane. This is attributed to compound affinity resulting from reinforcement of biospecific by non-biospecific interactions. Strongly deforming solvents were still required for oxirane conjugates, however, when antibodies had high affinity for antigen. - J. Chromatogr. 135,427 - 433 (1977). Dept. Biochem., Queen's Univ., Belfast (Nord Irland)

Development of an aqueous temperature-indicating technique and its application to clinical laboratory instrumentation. L. Bowie, F. Esters, J. Bolin and N. Goehman.

Messung der Temperatur in der Klinischen Analyse; Spektralphoto- metrie; automatisierte Instmmentierung. - The accurate temperature measurement of aqueous solutions, contained in the cuvette of a spectrophotometric system, is described. The method is based on the application of two solutions of cresol red: (1) in tris(hydroxymethyl)- aminomethane buffer, which changes its absorbance as a function of temperature, and (2) in NaOH, the absorbance of which is inde- pendent of temperature. Solution (1) is used for the preparation of calibration curves of absorbance vs. temperature, and solution (2) for the optical calibration of the instrument. The temperature is determined by an absorbance measurement at 575 nm under the condi- tions used for the sample solution. The advantage of this technique, compared with temperature measurement by external probes, are demonstrated with several types of laboratory instruments. - Clin. Chem. 22,449 - 455 (1976). Lab. Service, VA Hospital, San Diego, Calif. 92161 (USA) H. Meyer

A new reference method for the determination of the oxygencontent of blood. P. Dijkhuizen, G. Kwant and W.G. Zijlstra.

Best. yon Sauerstoff in Blut; Volumetric; als CO2, Referenzmethode. - To be able to determine the slight differences between the theo- retical and the actual O2-binding capacity of human haemoglobin, a highly accurate method has been developed for measuring the O 2 content of blood samples. It is an adaptation of an established O 2 determination in organic microanalysis. The bound 02 of the blood is set free by conversion ofHbO 2 to Hi, and the 02 stripped from the blood is converted to CO by contact with granular carbon at 1120~ The CO is then converted to CO 2 using CuO at 300~ and the CO 2 titrated in a solution of BaCI 2, using NaOH of known strength. The measuring system was checked by analysis of 36 samples of air, yielding an 02 content of 20.93 + 0,06%. The coefficient of variation calculated from 62 duplicate determinations of samples of human blood was 0.65%. - Clin. Claim. Acta 68, 79 - 85 (1976). Lab. Chem., Physiol., Univ. Groningen (Niederlande)

326

Improved separation of 3H and 125j spectra in liquid scintillation counting by doping with thallium and lead. H. Lundqvist, K.J. Jo- hanson and G. Jonsson.

Trenn. yon Wasserstoff und Jod-125 in Biolog. Material; Szintilla- tionsmessung; Entzerrtmg der Spektren durch Zugabe yon Pb und T1. - Die beiden Radionuklide 3H sowie 125j besitzen grot~e Bedeu- tung in der biologischen und medizinischen Forschung. Trotz flares voneinander vtllig verschiedenen Zerfallmechanismus' (Beta-ZerfaU, bzw. Elektroneneinfang) sind die Spektren ihrer Pulshthen, die man in fliissigen Szintillationssystemen erh~ilt, sehr iiberlappend. Das macht flaren Gebrauch in Markierungsexperimenten problematisch. Da unge- ffihr die halbe Strahlungsenergie beim Zerfall yon 125j in Form you Photonen das Met~geffit~ verl/i~t, kann man durch Zugabe yon Schwer- metallen, die einen hohen Einfangquerschnitt fiir diese Photonen- energie besitzen, die Wahrscheinlichkeit yon Photoabsorption ver- grtl~em. Als Resultat wird die Pulsh6he des J-Spektrums zu htheren Energien verschoben und kann leichter yon dem des 3H getrennt wet- den. Die L6slichkeit der Blei- und Thalliumverbindungen limitiert die Zugabemenge. Die besten Resultate wurden bei der Zugabe yon 0,2 ml Clerici's L6sung erreicht, jedoch zeigten auch 0,5 - 1,0 molare Pb(NO3)2-L6stmgen sch6ne Effekte. Die htchste Effektivit/it wurde mat dem System 0,2 mA Clerici-Ltsung/1 nil Wasser/Instagel oder Tri- ton-X-100 erreicht. - Int. J. Appl. Rad. Isotopes 27, 233 - 237 (1976). Gustaf Werner Inst., Univ. Uppsala, Schweden H. Reif

Fresenius Z. Anal . Chem., Band 289 (1978)

20 /xg of sodium copper chlorphyUin (10/A of 0.2 w/v% aqueous solution), respectively. - Bunseki Kagaku 25, 476 - 478 (1976) (Japanisch, mit engl. Zus.fass.). Lab. Med. Plants, Nat. Inst. Hyg. Sci., Kasukabehigashl, Kasukabe-shl, Saitama (Japan)

Continuous-flow determination of dialyzable calcium in serum. J. Toffaletti, J. Savory and H.J. Gitelman.

Best. von Calcium in Serum; Autoanalysator; dialysiarbares. - We describe a procedure for measuring dialyzable calcium in 60 sera per hour with use of AutoAnalyzer (Tectmicon) modules. The serum is buffered, then dialyzed in a regular 6-inch (15-era) dialysis block. A constant proportion of the dialyzable calcium is fluorometrically measured. Analysis of samples containing protein, prepared by an equilibrium dialysis technique, shows that protein-bound calcium is not detected. The method requires less than 0.4 ml of serum, and is accurate, precise, and durable. No unusual care of special techniques are required during sample collection or analysis. - Clin. Chem. 23, 1258 - 1263 (1977). Dept. Biochem., Med. and Path., Univ., School Med., Chapel Hill, N.C. (USA)

New techniques for ion-selective measurements of ionized calcium in serum after pH adjustment of aerobically handled sera. H. Do- nald Schwartz.

A simple and precise method of determining true sodium, potassium, and chloride concentrations in hyperlipemia. M.W. Steffes and E.F. Freier.

Best. yon Natrium, Kalium, Chlorid in Serum; Korrekturfaktor bei HyperlipLrnie. - Die bei Hyperiip~mAe zu tiefen Elektrolytwerte (Natrium, Kalium und Chlorid) im Serum sind eine lineare Funktion der Triglyceridwerte, durch deren Bestimmung sich die Elektrolyt- konzentration korrigieren l ~ t . - J. Lab. Clin. Med. 88, 683 - 688 (1976). Dept. Lab. Med., Pathol., Univ. Minneapolis. Minn. (USA)

E. Miiller, Marburg

Best. yon Calcium in Serum; Electrion System. - Mit dem ,,Elec- trion System" yon H.D. Schwartz (Clin. Chlm. Acta 64, 227 (1975)) kann man das ionisierte Calcium im Serum direkt (aerobisch) routi- nemht~ig bestimmen, werm man den pH-Wert mAt CO 2 (CO2/O 2 : 10/90) auf 7,40 einstellt. - Clin. Chem. 22, 461 - 467 (1976). Div. Ontology, Ion-Specific Lab., Univ. Med. Center, Stanford, Calif. 94305 (USA) E. Miiller, Marburg

Concurrent determination of total serum calcium and magnesium by thermometric titration with ethylenediaminetetraaeetate. RJ-I. Calli- cott and P.W. Carr.

Direct measurement of serum non-coeruloplasanin copper in liver disease. D.J. Frommer.

Best. yon Kupfer in Serum; Spektralphotometrie, Atomabsorption; Nichtcoemloplasmin-Cu. - Verf. bestimmt das Nichtcoeruloplas- mankupfer im Serum mit der von tam leicht modifizierten atomab- sorptionsspektrometrischen Methode yon J. Blomfield und R. Macma- hon (J. Clin. Pathol. 22, 136 (1969)). Das direkte Verfahren liefert genauere Werte als das indirekte, bei dem man vom Gesamtkupfer das Coeruloplasminkupfer abzieht. - Clin. Ctfim. Acta 68, 303 - 307 (1976). Dept. Med., Royal Free Hospital, London NW3 2QG6 (Grot~- britannien) E. MiJller, Marburg

Best. yon Calcium und Magnesium in Serum mit ADTA; Thermome- trische Titration. - Ca und Mg ktnnen in 1 ml Serum nebeneinander bestimmt werden. Die Ergebnisse stimmen mit denen der Atomab- sorptionsmethode gut tiberein. Serum-Protein stOrt nicht. Variations- koeffizient bei Ca < 1,1%, bei Mg < 2,8%. -Arbeitsweise. Die Titra- tionen warden in 2 ml-Dewar-Flaschen bei 25 + - 0,005~ (Wasserbad) mit Hilfe einer Hamilton 50 ml Model 1705-Injekfionsspritze durchgefiihrt. Der Titrant wurde dutch ein Teflonrohr in die Dewar-Flasche gepumpt. 1 ml Serum wurde mat 1 ml 1 M pH 8,0 Tfis(hydroxymethyl)aminomethan-Puffer versetzt und mat 0,5 M XDTA titriert. Eich- kurven mat 2 mM Ca-und 10,37 mM Mg-StandardlOsungen sind erfor- derlich. - Clin. Chem. 22, 1084 - 1088 (1976). Dept. Chem., Univ. Georgia, Athens, Ga. (USA) K. Jeney

A simple limit test of free ionizable copper in copper chlorophyll and in sodium copper ehlorophyllin. K. Kojima and Y. Tsuchitani.

Nachw. yon Kupfer in Chlorophyll-Kupfersalzen; Chromatographic, D0masehicht. - A limit test method of free ionizable copper con- rained as an impurity in copper chlorophyll and in sodium copper chlorphyllin by TLC was established. The sample was developed by n- butanol-acetic acid-water mixture (4:1:2 in volume) on a silicagel plate on glass (Merk Co. Art. 5721), and the separated spot of Cu(II) was detected as a gray spot on a pale orange background when the plate was exposed to ammonia gas after spraying rubeanic acid ethanol solution. The minimum detectable limit of Cu(II) was 0.020 + 0.005 #g, and then good results of the test were obtained as follows: The detection limits of Cu(II) were 0.02% and 0.1% when used 100/xg of copper chlorphyll (10 gl of lw/v% acetone solution) and

Sample treatment to prevent calcium loss in saliva electrolyte analysis. P.A. Sebesta and L.A. Danzer.

Best. von Calcium in Speichel; Spektralphotometrie, Atomabsorption. - Um bei der Calciumbestimmung mittels Atomabsorpfion (Mel~wel- leul~uge 422,7 rim) Vefluste dutch Bfldung yon Calciumphosphat zu vermeiden, siiuert man 2 rnl Speichel mit 50/xl konz. HC1 an und zentrifugiert. Anschlief~end werden pro 0,25 rnl Speichel l0 ml einer Lan- thansalzl6sung (5 g La3+/1) zugefiigt und die Proben vermessen. - Clin. Claim. Acta 68, 309 - 311 (1976). Clin. Labs., Univ. Kansas, Med. Center, Kansas City, KA 66103 (USA) W.H. Mennieke


Improved eolotimetric determination of serum zinc. D.J. Johnson, Y.-Y. Djuh, J. Bruton and H.L. Williams.

Long-path photometry in clinical analysis. I. The determination of chromium using diphenylcarbazide. S. Yarbro and H.A. Flaschka.

Best. yon Zink in Serum mit PAR; Spektralphotometrie. - We show how zinc may easily be quantified in serum by first using an optimum concentration of guanidine hydrochloride to cause release of zinc from proteins, followed by complexation of released metals with cyanide. The cyanide complex of zinc is preferentially demasked with chloral hydrate, followed by a colorimetric reaction between zinc and 4-(2-pyridylazo)resorcinol. This is a sensitive water-soluble ligand; its complex with zinc has an absorption maximum at 497 nm. Values found by this technique compare favorable with those obtained by atomic absorption spectroscopy. - Clin. Chem. 23, 1321 - 1323 (1977). Dept. Hemat., Walter Reed Army Inst., Washington, D.C. (USA)

Measuring pieogram amounts of aluminum in biological tissue by tameless atomic absorption analysis of a chelate. G.L. LeGendre and A.C. Alfrey.

Best. yon Aluminium in Biolog. Gewebe; Spektralphotometrie, Atom- absorption, fiammenlos. - Eine flammenlose Atomabsorptionsme- thode zur Bestimmung yon A1 in mit Xthylendiamintetraacetat erhaltenen Extrakten aus biologischen Geweben wird beschrieben. Das durch Biopsie und Autopsie erhaltene Untersuchungsmaterial (Mus- kel, Knochen, Gehirn) wird nach Trocknung verascht (Gehim) bzw. mit Petrolfither entfettet (Knochen). -Arbeitsweise. Zu 10 bis 25 mg Untersuchungsmaterials werden 5 mg einer gesiittigten Na2-ADTA-Lsg. gegeben und 2 bis 4 h extrahiert. Das Atom-Absorptions-Spektrome- ter war ein Perkin.Elmer 305 B-Ger~tt mit einem HGA-2100-flammen- losen System. Standardl6sungen (0, 10, 20, 50 und 100 #g/l)werden aus einer Stamml6sung hergestellt, die 1 mg/1 A1 in gestittigter Na 2- ADTA-L6sung enths Die Standardkurve verltiuft yon 3 bis 100 #g/1 linear. Die Empfindiichkeit liegt bei 1,1 #g/1 A1 (27 pg[25/A). Die Nachweisgrenze liegt bei 6 #g/1 oder - fiir die 25 ol-Proben - bei 150 pg. Die A1-Bestimmungen werden nicht gestSrt dutch 1 g/1 Ca 2+, Sr 2+, Mg 2+, K +, La 3+, Na +, CI-, SO42- und PO43- nach Zusatz zu A1-L6sungen mit 100 #g/1. Die erhaltenen Befunde stimmen mit den yon D.R. Crapper et al. (Trans. Am. Neurol. Assoc. 98, 17 (1973)) durch Flammen-Atomabsorption ethaltenen Werten iiberein. Ur- ~mische Patienten, die A1-Salze oral erhalten, zeigen eine A1-Zu- nahme in Knochen, Muskeln und im Gehim. Die angegebene t~xtral~- tion ist zuvefl[issig, aueh im Hinblick auf die Tatsache, dat~ ADTA auch Spuren von Pb, Hg, Cd, Zn, Cu und Ni chelafisiert. - Clin. Chem. 22, 53 - 56 (1976). Renal Sect., Denver Vet. Admin. Hosp. and Div. Renal Med. Univ. Colorado Med Center, Denver, Colo. 80220 (USA) F. Knorr

Atomic absorption spectroscopy as a detector for the gas chromatographic study of volatile selenium alkanes from Astragalus raeemosns. B. Radziuk and J. van Loon.

Best. von Chrom in Blut; Spektralphotometrie; Mikroverfahren mit Diphenylcarbazid. - Verff. modiflzieren die photometrisehe Methode yon H.J. Chanmann und R. Bisen (Anal. Chem. 24, 1341 (1952)) zur Bestimmung yon Chrom im Blut mit Diphenylcarbazid zu einem Mi- kxoverfahren haupts~ichlich durch Verwendung einer 20 cm langen Mikrophotozelle. Bei der auch fur Routineuntersuchungen geeigneten Modifikation kommt man mit 0,2 ml Blut oder 0,2 g Gewebe aus. Die reproduzierbaren Werte s~nmen mit denen der Makromethode gut tiberein. - Microchem. J. 21,415 - 423 (1976). School Chem., Geor- gia Inst., Atlanta, Georgia 30332 (USA) E. Miiller, Marburg

The determination of fluorine in bones by non-destructive neutron activation analysis using 11.2 sec 20F. K. Tomura and N. Ohta.

Best. yon Fluor in Knochen; Aktivierungsanalyse. - A fast non- destructive determination of fluorine in bone samples by thermal neutron activation analysis using 19F(n,7)20F reaction was developed. About 0.1 - 1 g sample is irradiated for 15 see in TRIGA MARK II reactor at a thermal neutron flux of 5"1011 n-cm-2.sec -1. After 15 - 25 sec cooling, the 1633 KeV 20F activity (T = 11.2 see) is counted for 15 sec with a Ge(Li) spectrometer. A standard sample is prepared by mixing CaF3 and CaCO~ powders. The interference from 23Na(n,a)20F is corrected by employing 24Na 2754 KeV double escape peak activities in samples and the 20F/24Na peak area ratio observed previously for pure Na2CO 3 powder. The precision is 7% for a bone sample containing 1020 ppm F and the sensitivity is about 10 ppm F. - J. Radioanal. Chem. 34, 375 - 380 (1976). Inst. Atom. Energy, Rikkyo Univ., Tokyo (Japan)

A new colorimetric method for serum iron determination. A. Kyaw.

Best. yon Eisen in Serum; Spektralphotometrie. - Eisen im Serum wird nach Freisetzung aus der Proteinbindung mit 4-Aminophenazon in Gegenwart yon H20 2 (Oxidation yon Fe 2+ zu Fe 3+) komplexiert. Der purpurfarbene Komplex wird spektralphotometrisch bei 520 run vermessen. Es k6nnen Konzentrationen bis 600 #g Fe/100 ml Serum bestimmt werden. - Arbeitsweise. 0,5 ml Serum verdtinnt man lang- sam mit 1,0 ml Wasser und ftigt tropfenweise 1,0 m120%ige Trichlor- essigs~iure zu. Man l ~ t 45 min stehen und zentrifugiert 15 min bei 2500 U/rain. Vom (Yberstand wird 1,0 ml entnommen und mit 1,13 ml 0,5 M Acetatpuffer (pH 5,0), mit 1,0 ml Farbreagens (0,5 g 4-Amino- phenazon/100 ml Wasser) und mit 0,05 ml 0,3% H20 2 versetzt. Die Absorption vermiI~t man 5 - 6 rain nach der Zugabe yon H202 (die Farbe ist instabfl). Bei jeder Analysenserie nau~ ein Standard und ein Leerwert mitgefiihrt werden. - Clin. Claim. Acta 69, 351 - 354 (1976). Biochem. Res. Div., Dept. Medical Res., No.5, Zafar Shah Road, Rangoon (Burma) W.H. Mennicke

Best. von Selenalkanen aus Astragalus racemosus; Chromatographic, Gas; AAS-Detektor. - Verff. modiflzieren das gas-cliromatographi- sche Verfahren mit einem Atomabsorptionsspektrophotometer als De- tektor nach Y.K. Chau, P.T.S. Wong und P.D. Goulden (Anal. Chem. 47, 2279 (1975)) f ~ den Nachweis selenhaltiger Gase, die yon Astra- galus racemosus abgegeben werden. Der Aufbau der modifizierten Ap- parateteile ist beschrieben und mit 2 Abbfldungen und einer m~ge- rechten Schemazeiclmung versehen. Es gelingt der Nachweis yon Di- methylselenid und Dimethyldiselenid. - Sci. Total Environ. 6, 251 - 257 (1976). Dept. Chem., Univ. Toronto MSS IAI, Ontario (Kanada)

E. MiiUer, Marburg

Serum iron determination in patients receiving therapy with iron dex- tran ("Imferon"). M.E. McIntosh, J.K. Lynn, N. Meyerriecks and I. Contant.

Best. yon Eisen in Plasma; bei Imferon-Gaben. - Ethalten Patienten Imferon (Lakeside Labs., Inc.), einen Eisen-Dextrankomplex, i.v., ist das Gesmnteisen nut mit Atomabsorptionsspektroskopie im mit Was- set verdtinnten Plasma bestimmbar, da das Imferon hierbei nur wenig oder gar nicht photometrisch e r f ~ t wird. Analog verhtilt es sich mit der Ermittlung der Eisenbindungskapazit~t. Eine Methode, bei Anwe- senheit yon Imferon Transferineisen zu bestimmen, besteht bislang nicht. - Clin. Chem. 22, 524 - 527 (1976). Dept. Pathol., Univ. South Florida, School Med.; Lab Service, Veterans Admin. Hosp., Tampa, Fla. (USA) E. Mtiller, Marburg

328 Fresenius Z. Anal . Chem., Band 289 (1978)

A note on the determination of cobalt in animal liver. A.L. Gelman.

Best. von Kobalt in Leber; Spektralphotometile, Atomabsorption; CHC13-Extraktion des Fe. - 10 g getrocknete Leber werden nach den Angaben yon A.L. Gelman (J. Sci. Food Agile. 23,299 (1972)) verascht und geltst. Zu dieser Ltsung gibt man zur Entfermmg des Eisen- iibersehusses 1 ml Kupferron-Ltsung (6% in Wasser) und 10 ml CHC13 und extrahiert 2 real je 1 rain. Die Chloroformphase wird verworfen. Aus der w~i~rigen Phase verdampft man das resfliche Chloroform und ftilart die Kobaltbestimmung mittels Atomabsorptionsspektrophoto- metrie gem~it~ dem in der o.g. Literatur beschriebenen Verfahren dutch. - J. Sci. Food Agric. 27,520 (1976). School Agrieult., Aber- deen (GroSbritannien) W.H. Mennicke

Analysis for platinum in biological material by tameless atomic absorption spectrometry. M.F. Pera, Jr. and H.C. Harder.

Best. von Platin in Biolog. Material; Spektralphotometrie, Atomab- sorption. - For pharmacological studies of platinum antitumor compounds tissue digests are analyzed in a heated graphite atomizer, with use of background correction and ramp temperature charring. We have overcome problems of apparent loss of platinum in Pt-supplemented tissue samples with time and of difficulty in analyzing tissue lipid. The validity of the assay was verified by injecting rats with radiolabeled cis-dichlorodiammineplatinum(II), then measuring platinum in tissues by gamma scintillation spectrometry and tameless atomic absorption spectrometry. Correlation between the two methods was exeeUent. The limit of the assay in its present form is about 0.1 #g/gram of wet tissue. - Clin. Chem. 23, 1245 - 1249 (1977). Dept. Pharmacol., George Washington Univ. Med. Ctr, Washington, D.C. (USA)

Gas-chromatographiseh-massenspektrometrische Identifizierung der dureh Umsetzung yon Aminen mit Isocyanaten gebildeten Harnstoff- derivate. J. Slemrova und I. Nitsche.

Nachw. von Aminen als Hamstoffderivate; Chromatographic, Gas / Massenspektrometrie. - Die von I. Nitsche et al. (J. Chromatogr. 94, 65 (1974)) beschriebene Methode zum Nachweis yon flOchtigen pil- m~iren und sekundiiren Aminen, die z.B. beim Abbau yon Bioziden zu erwarten sind, wird hier massenspektrometrisch in bezug auf seine Reaktionsprodukte abgesichert. Die Amine w.erden bei dem Verfah- ten mit geeigneten Isocyanaten wie tert.-Butylisocyanat oder 3-Tri- fluormethylphenylisocyanat zu den entsprechenden Hamstoffderiva- ten umgesetzt. Die entstehenden N,N'-di- bzw. N,N',N'-trialkylsubsti- tuierten Harnstoffe k6nnen bei Verwendung geeigneter Trennphasen (OV-17, SE-30 oder OV-101) gas-ehromatographiseh getrennt und nachgewiesen werden. Dur Einsatz gruppenspezifischer Detektoren wie Stickstoff- oder Elektroneneinfangdetektor ist ein Nachweis von Aminen als Harnstoffderivate his in den Picogrammbereich (500 pg) mtglich. Dutch Einsatz yon Massenspektrometrie und Massenfragmen- tometrie wird die Identit~t der Verbindungen tiberpriift. -- J. Chroma- togr. 135,401 - 409 (1977). Hygiene-Inst., Univ. Mainz R.H. Sterzel

A simple quantitative method to determine short chain fatty acid levels in biological fluids. J.S. Whitehead, J.S. Kim and R. Pilzont.

Best. von Fetts[iuren in Biolog. Fltissigkeiten;Chromatographie, Gas. - Fliissigkeiten werden mit Schwefels~iure anges~iuert und mit Di~ithyl- ~ither extrahiert, feste Proben vorher mit Natilumchloridl6sung aus- gezogen. Die freien Fetts~iuren werden dann gas-chromatographisch bestimmt (S~inle 5% FFAP, ein Reaktionsprodukt zwisehen Carbo- wax 20 M und 2-Nitroterephthals~inre, auf Chromosorb GAW, DMCS, 90 - 130~ bei 2,5~ Es ktnnen Essig-undPropions~iure sowie die i- und n-Isomeren yon Butter-, Valerian-, Capron- und Heptan- s~iure nebeneinander bestimmt werden. - Clinic. Chim. Acta 72, 315 - 318 (1976). V.A. Hospital, San Francisco, Calif. (USA)

H. Riissel

Automatic potentiometrie titration and gas-liquid chromatography of underivatised free fatty acids. A. Wirth, J. Eekhard and H. Weik- ker.

Best. von Fetts~iuren in Serum; Chromatographie, Gas, Potentiome- tile. - Zur Bestimmung von freien Fetts~uren in Serum werden die Ferts~inren durch ein Gemisch yon Isopropanol-Heptan-konz. Schwe- fels~iure (40 + 10 + 1) extrahiert. Die Gas-Chromatographie effolgt aus der Heptanphase durch direkte Einspitzung (S~iule 10% DEGS-PS auf Supelcoport, 200~ AuSerdem werden die Proben in der or- ganisehen Phase mit Tetrabutylammoniumhydroxid automatisch potentiometrisch mit der Glaselektrode titriert. Die Analysenwer- te beider Methoden stimmen tiberein. - Clinic. Chim. Acta 71, 47 - 54 (1976). Dept. Metabol. Athlet. Res., Univ. D-6900 Heidelberg

H. Rtissel

Gas chromatographic estimation of homovanillinic acid in serum of normals and psychotic patients. E. Markianos and E. Riither.

Best. yon Homovanlllins~iure in Serum und Cerebrospinalfltissig- keit; Chromatographie, Gas. - Mit der etwas modifizierten gas-chromatographischen Methode yon S.W. Dziedzic, L.M. Bertani, D.D. Clarke und S.E. Gitiow (Anal. Biochem. 47,592 (1972)) bestimmen Verff. im sauren .~thylaeetatextrakt von Serum und Liquor Homo- vanillinsaure als fluoriertes Deilvat. Andere saute Stoffwechselpro- dukte biogener Amine wie 5-Hydroxyindolessigs~ure und 3-Methoxy- 4-hydroxymandels~inre werden mit erfal~t. - L Clin. Chem. Biochem. 14,437- 441 (1976). Psych. Klinik, Univ. Miinchen

E. Mttller, Marburg

GC determination of hydroxyindole acetic acid, vanilmandelic and homovaniUie acids. H.U. Melchert and H. Hoffmeister.

Best. von Hydroxyinolessigs~iure, Vanillinmandels~iure und Homo- vanillin~ure in Ham; Chromatographie, Gas. - The above compounds are difficult to determine when met at low concentrations, mainly due to the simultaneous occurence of high concentrations ofhippuilc acid. Preconcentration of urine samples is achieved by gel chromatography with Sephadex LH 20 with elution with CHC13/EtOH 4 : 1, 40 ml/h, 254 run. After evaporation of the solvent, 250/11 MSTFA (N-methyl-N-trimethylsflyl-trifluoroacetamide) are added and heated at 60~ for 30 rain. GC: 10% UCW 982, 2 m, 1/8" steel, 155 - 6~ FID. The standard dev. was 1,29, 0,48 and 0,26 mg/l respectively, for the above mentioned acids. - M e d . Labor 29, 199 - 206 (1976). Inst. Sozialmedizin, Bundesgesundheitsamt, D-1000 Ber- lin 33 U. Anders

Simultaneous quantitation of 4-hydroxy-3-methoxymandelic (vanil- mandelie) and 4-hydroxy-3-methoxyphenylacetic(homovanillle)acids in human urine. S. Addanki, E.R. Hirmenkamp, and J.F. Sotos.

Best. von VaniUinmandels~iure und Homovanillins~iure in Ham; Chro- matographie, Gas. - Verff. modifizieren die gas-chromatographische Methode yon CNI. Williams und M. Greer (Methods in Med.Res., Year Book Med. Publ. p. 106, Chicago, Ill., 1970) zur gleiehzeitigen Bestimmung yon 4-Hydroxy-3-methoxymandels~iure und 4-Hydroxy- 3-methoxyphenylessigs[iure haupts~ichlich durch Einfiihrung einer Dreisehrittextraktion mit •thylacetat, die Verwendung eines ~iut~eren (Phenylpropions~inre) und irmeren (Resorcin) Standards, sowie Ver- gleich mit mitlaufender Hippurs~iure und p-Hydroxyphenylessigs~iure. Die sflylierten Produkte sind gut getrennt und eindeutig auswert- bar. Andere Hambestandteile sttren nicht, Medikamente kaum. - Clin. Chem. 22, 310 - 314 (1976). Div. Endociln., Metabol., Depts. Ped. Physiol. Chem., Ohio State Univ. College Med., Columbus, Ohio (USA) E. Miiller, Marburg


Colorimettic determination of hippuric acid in urine and liver ho- mogenate. S. Ohmori, M. Ikeda, S. Kira, and M. Ogata.

Best. yon Hippurs~iure in Ham, Lebergewebe; Spektralphotometrie. - To a dried extract containing hippuric acid (HA), 1.0 ml of acetic anhydride and 2.0 mi of 0.5% p-dimethylaminobenzaldehyde (DAB) solution in pyridine were added, and the solution was kept at 40~ for 1 h after thorough mixing. The absorbance was then determined at 458 against a blank containing acetic anhydride, DAB, and pyridi- he. This method was in good agreement with Beer's law within 1 to 100 pg and the mean +- SD absorbance for 20/ag HA was 0.939 + 0.013 (n = 5). The apparent molar absorptivity of 2.5 x 104/mol/ era, and the relative standard deviation of 1.4% was calculated. - Anal. Chem. 49, 1494 - 1496 (1977). Fac. Pharm. Sci., Okayama Univ., Okayama, Tsushima-Naka-1 (Japan)

Micro-determination of total phthalate esters in biological samples by gas-liquid chromatography. R. Takeshita, E. Takabatake, K. Mi- nagawe and Y. Takizawa.

Best. von Phthals~iureestern in Biolog. Material; Chromatographic, Gas; 63Ni-ECD. - Ein Verfahren zur Bestimmung aller Phthals~iureester in Form threr S~iure in biologischen Proben wird entwickelt. Dazu werden die Phthals~iureester aus der biologischen Probe mit n-Hexan extrahiert. Die Ester werden mit KOH (10 N) hydrolysiert, mit HC1 neutralisiert und mit Hexan die entstandene Phthal- s~inre extrahiert. Der Extrakt wird tiber eine Kieselgel-60-Saule gereinigt und mit Athylacetat/Ameisens~iure (150 : 1) eluiert. Das Effiuat wird eingedampft und mit BF3/2,2,2-Trifluodithanol (15%- ige L6sung) verestart. Die Reaktionsmischung wird mit Hexan ex- trahlert und der Extrakt gas-chromatographisch auf einer 2 m x 3 mm-Glass~iule mit 2% Silicon OV-225 auf Gas-Chrom Q (80 - 100 mesh) bei 180~ analysiert. Zum Nachweis wird ein 63Ni-ECD eingesetzt. Die Empf'mdlichkeit des Verfahrens liegt bei 0,1 pg. Bin- logische Proben konnten im Konzentrationsbereich von 5 - 100 ppb des Derivats mit Wiederfindungsraten yon 70 - 110% analysiert werden. - J. Chromatogr. 133,303 - 310 (1977). I)ept. Publ. Health Pharm., Inst. Publ. Health., Shirokanedai, Minato-ku, Tokyo (Japan)

R.H. Sterzel

The quantitative determination of metabolites of 6-mercaptopurine in biological materials. I. A separation method for purine and 6- thiopurine bases and nucleosides using high-pressure liquid cation- exchange chromatography. H.-J. Breter.

Best. von Purinen und Thiopurinen in Biolog. Material; Chromato- graphic, lonenaustausch. - Ein Verfahren zur quantitativen Bestim- mung yon Picomol-Mengen yon 15 Purinen, 6 Thiopurinen und 2 oxidierten 6-Thiopurinen durch Hochdruck-Kationenanstausch-Chroma- tographie wird beschrieben. Dazu wird eine 0,18 x 100 cm-Siinle mit stark saurem Beckman M71 Austauscherharz mit 0,4 M Ammonium- formiat (pH 4,6) bei einer Durchflut~geschwindigkeit yon 5,2 cm/ rain bei 50~ S~iulentemperatur eluiert. Nach 75 rain wird die Durch- flufigeschwindigkeit ~,erdoppelt. Eine Trermung dauert 140 rain. Men- gen yon 30 pMol 6-Mercaptopurin und 15 pMol 6-Thioguanosin konnten mit einem UV-Detektor mit einstellbarer WellenlLqge nachgewiesen werden. - Anal. Biochem. 80, 9 - 19 (1977). Physiol.-Chem. Inst., Univ. Mainz R.H. Sterzel

Determination of 6-mercaptopurine in plasma by mass spectrometry. J_M. Rosenfeld, V.Y. Tagnchi, B.L. Hillcoat, and M. Kawai.

Best. von 6-Mercaptopurin in Plasma; Massenspektrometrie. - A sensitive and specific method for the quantitative determination of 6-mercaptopurine in plasma is described. A variety of techniques was used to eliminate endogenous material which may interfere with

the assay. The limit of detection of the method is 20 ng/ml. - Anal. Chem. 49,725 - 727 (1977). Cent. Drug Anal. Lab., McMaster Univ., Med. Centre, Hamilton, Ontario (Canada)

Bonded peptide stationary phases for the separation of amino acids and peptides using liquid chromatography. E.J. Kikta, Jr. and E. Grushka.

Trenn. yon Aminos~iuren und Peptiden; Chromatographic, S~iulen; an gebund. Tripeptidphasen. - Bonded optically active tripeptides have been applied as stationary phases for liquid chromatography. Significant retention variations are shown for some UV absorbing amino acids when compared to a silica gel column using the same mobile phase. The separation of certain isomeric dipeptides has been accomplished using the bonded optically active tripeptide stationary phases. It is shown that these separations are superior to those possible on silica gel, although the efficiencies of the column are low. Phenylthiohydantoin (PTH)-amino acids have also been analyzed using the bonded tripeptide L-Val-L-Ala-L-Ser on silica gel CT and 1% citric acid-water as the mobile phase. No two PTH- amino acids showed the same capacity ratio out of 25 tested and the separation of 15 in one isocratic run is presented. The implica- tions and future for the use of bonded optically active peptides as stationary phases for liquid chromatography are discussed. - J. Chro- matogr. 135, 367 - 376 (1977). Dept. Chem., State Univ., Buffalo N.Y. (USA)

Studies on indirect determination of amino acids by atomic absorption spectrophotometry (1). Y. Kidani, S. Uno and K. Inagaki.

Best. von Aminos~iumn; Spektralphotometrie, Atomabsorption; als Cu(II)-Chelate threr Schiffschen Basen. - Amino acids react with salicylaldehyde to yield their Schlff's bases in alkaline solution, and the Schiff's bases-Cu(II) chelates formed by the addition of Cu(II) ion are extractable with MIBK in the presence of bathophenanthroline. Therefore, amino acids can be determined indirectly by the estimation of copper in the organic phase by atomic absorption spectrophotometry. Two ml of (2.0 x 10 -5 ~ 2.0 x 10 -4) M amino acid solution, 2.0 ml of 1.0 x 10 -2 M sallicylaldehyde solution, 1.0 ml of 1.0 x 10 -3 M cupric acetate solution and 5 ml of boric buffer solution of pH 10.0 were mixed sufficiently. After the solution was allowed to stand for 5 min, 10.0 ml of chloroform was added. After separation, to 5.0 ml of the upper aqueous phase 10.0 ml of 1.0 x 10-4 M bathophenanthroline MIBK solution was added. Being shaken well for 5 rain, it was centrifuged and the copper in organic phase was determined by atomic absorption spectrophotometry. The optimum pH range was found to be 9.5 ~ 11.5. On the determination of glycine, the linear relationship was found between the absorbance and the concentration in the range of (1.5 ~ 15.0) #g/ml and the standard deviation and the coefficient of the variation were 0.71 and 1.45% respectively and the recovery was 99.8%. This method is applicable to the quantitative determination of amino acids such as glycine, valine, phenylalanine, tyrosinejtryptophan and methiouine. - Bunseki Kagaku (Japan Analst) 25, 514-518 (1976)(Japanisch, mit engl. Zus.fass.). Fac. Pharm. SCI., Nagoya City Univ., Tanabe- dori, Mizuho-ku, Nagoya-shi, Aichi (Japan)

The determination of 5-hydroxytryptophan and its metabolites in plasma following administration to man. M.H. Joseph and H.F. Baker.

Best. yon 5-Hydroxytryptophan, 5-Hydroxytryptamin und 5-Hy- droxyindolessigsiinre in Plasma; Extraktion/Fluorimetrie. - Es wird die Trennung yon 5-Hydroxytryptophan (SHTP) und seinen Metaboliten 5-Hydroxytryptamin (5HT) und 5-Hydroxyindolessig- saure (5HIAA) im Plasma beschrieben. Die quant. Best. erfolgt fluo-

330 Fresenius Z. Anal. Chem., Band 289 (1978)

rimetriseh. - Arbeitsweise. Man versetzt O) ml Plasma mit 9 ml Bu- tanol/HC1 (0,85 ml konz. HC1/1 Butanol), versetzt nach Zentrifu- gation (2500 g, 10 rain) 8 ml des l)berstandes mit 10 ml Heptan und extrahiert mit 0,5 ml 0,1 N HC1 zurtick. Die saure Phase ent- h~lt 5HT und 5HTP. 16 ml der org. Phase werden mit 0,5 ml 0,1 N HC1 gewaschen, 14 ml der gewaschenen org. Phase werden dann mit 0,5 ml 0,5 M K-Phosphatpuffer (pH 7,0) zur0ckextrahiert. Die w~igr. Phase enthiilt 5HIAA. - Zur Trennung yon 5HT und 5HTP btingt man die HCl-saure w~il~rige Phase mit 0,15 ml 0,5 M K2HPO 4 auf pH 7,0 und extrahiert mit 1,0 ml 0,1 M Di~ithylhexylphosphor- s~iure in CHC13. 5HTP bleibt in der w ~ r . Phase. Die org. Phase wird mit 0,5 ml 0,1 N HC1 zuriickextrahiert, wobei dann 5HT in der w~igr. Phase gel6st ist. Zur Fluorescenzmessung erhitzt man 0,3 ml der jewefls die 5-Hydroxyindolderivate enthaltenden w ~ r . Phasen mit 0,05 ml Cysteinhydrochlorid (10 g/1 H20 ) und 0,65 mi o-Phthalaldehyd in konz. HC1 (40 mg/1) 10 min bei 100~ l~it~t ab- k'dhlen und migt die Fluoreseenz der 3 Verhindungen bei 470 ran (Anregung: 360 rim). 5HTP kann auch direkt vermessen werden, wenn 0,3 ml der w~i~r. Phase mit 0,1 ml konz. HC1 vermischt werden (Anregung: 310 nm, Emission: 540 tun). - Clin. Claim. Acta 72, 125 - 131 (1976). Div. Psychiatry, Clin. Res. Centre, Harrow, Middlesex (Grot~britannien) W.H. Mennicke

Molecular sieving by glomendar basement membrane isolated from normal and nephrotic rabbits. S. Igarashi, M. Nagase, T. Oda and N. Honda.

Trenn. von Proteinen an Molekularsieben; glomernl~ire Basismem- branch. - Aus der Nierenrinde yon normalen und nephrotisehen Kaninchen wurde nach der Methode von C.A. Krakowa und S.A. Greenspon (Arch. Pathol. 51, 629 (1951), modifiziert yon R.G. Spiro (J. Biol. Chem. 242, 1915 (1967)), die glomerul~en Basis- membranen (GBM) gewonnen. Sic wurden in physiologischer Kochsalzl6sung suspendiert und in Glass~iulen (3 mm 0, 40 mm hoch) eingefitllt. Parallel dazu wurden Sephadex G 25 und G 100 in S~iulan (3 ram, 60 mm hoch) gefitUt. Als Testsubstanzen for die Trennleistung l~5rden !25J-Humanserum~obulin, 131J-Humanse- rumalbumin, J-Schweineinsulin und H20 getrennt auf die S~iulen gebracht. Aus normalen GBM wurden Albumin und Glo- bulin an der gleichen Stelle des Chromatogramms eluiert, w~rend bei nephrotischen GBM Albumin nach Globulin eluiert wurde. Auch bei Sephadex G 100 erschien Albumin an spiiterer Stelle als bei Sephadex G 25. - Clin. Claim. Acta 68, 255 - 258 (1976). First Dept. Internal Med., Fac. Med., Univ. Tokyo, und Hamamatsu Univ. School Med., Hamamatsu (Japan) A. Niemann

Profde analysis of blood proteins with a centrifugal analyzer. M. Blom and N. HjC~ne.

Profilanalyse von Proteinen in Blut; Zentdfugalanalysator. - Es werden Einzelheiten fiir die Durchfiihrung yon Immunoreaktionen in einem GEMSAEC Centrifugal Analyzer zur Erstellung eines Pro- ffls tiber 8 Proteinfraktionen im Serum beschrieben. Die Ergebnis- se zeigen, daf~ ftir Albumin, Orosomucoid, al-Antitrypsin und Trans- ferrin gute Korrelation mit Elektroimmunoassay, for Haptoglobin und die Immunoglobuline. eine 12bereinstimmung mit der continuous flow-Tectmik besteht. FOr IgM ist die Prazision bei beiden Methoden getinger. - Clin. Chem. 22, 657 - 662 (1976).-Dept. Clin. Chemistry, Aalborg Hospital (D~inemark) A. Niemann

schem Medium, dessert Absorption bei 510 ran mit dem Spektralpho- tometer bestimmt wird. Die Met~ergebnisse shad durch den Gehalt an Biilmbin bzw. dem Antibioticum Cephalotin beeintr~ichtigt. Aut~erdem treten Nebenreaktionen yon Pikrat mit Serumalbumin auf. Aus diesem Grunde liegen die Werte bei Gelbsuchtkranken oft zu niedrig. - Mikrochem. J. 21,370 - 384 (1976). Dept. Path., Way- ne State Univ., School Med., Gen. Hospital, Detroit, Mich. 48201 (USA) A.E. Btihler

Modification of a spectrophotofluorometrie method of analyzing serotonin, norepinephrine, and dopamine in one brain sample. A.E. Ciarlone.

Best. yon Serotonin, Norepinephrin, Dopamin in Gehimgewebe; Fluorimettie. - Das Verfahren zur Analyse yon Serotonin, Nore- pinephrin lind Dopamin in Himproben berttht auf der Herstellung salzsaurer Extrakte (Serotonin) bzw. essigsaurer Extrakte (Norepin- ephrin, Dopamin) sowie der spektrofluorimetrischen Untersuchung, Excitation 355 nm, Emission 470 nm (Serotonin) bzw. Excitation 380 nan, Emission 480 nm (Norepinephrin, Dopamin). - Arbeits- weise. 280 nag Hirnprobe werdan homogenisiert. Interne Standards enthalten drei Konzentrationen der drei Amine in 0,1 N Salzs~ure. Nach Zentrifugieren werden 2,5 ml Proben des tJberstandes yon Ho- mogenaten und intemen Standards in 1,6 ml 0,1 N HC1 und 5 ml Heptan tibertragen. 0,2 ml interne Standardl6sung und Probenl6sung kommen zur Serotonin-, 1 ml zur Norepinephrin- und Dopaminana- lyse. Zu allen Proben, intemen Standards, externen Standards und Blutproben werden 1,2 ml o-Phthalaldehyd bzw. Alkalisulfit (0,2 ml) und 0,1 mi 0,1 N Jod hinzugeftigt. Nach Kochen und Abkiahlen ar- folgt die Messung des Gehaltes. Zur Bereclmung werden sowohl Met~- werte der interuen als auch externen Standards grapliisch ausgewertet. Mit diesem Veffahren konnten 96% des Serotonins, 88% des Norepinephrins und 92% des Dopamins wiedergefunden warden. - Microchem. J. 21, 349 - 354 (1976). Dept. Oral Biol. Pliarm., Schools Dent. and Med., Med. Coll. of Georgia, Augusta, Ga. 30902 (USA) A.E. Btihler

Radioimmunoassay for human plasma apoliprotein B. D.K. Bed- ford, J. Shepherd and H.G. Morgan.

Best. yon Apolipoproteid B in Plasma; Radioimmunologie. - We have developed a simplified double antibody radioimmunoassay for human apolipoprotein B. The purified antigen, a narrow den- sity subclass of [3 lipoprotein (d 1.030 - 1.050 g/ml), was isolated by a combination of gel filtration and ultracenttifugation. This material gave a single immunoprecipitin arc on crossed immunoelectropho- resis into an antibody to whole human serum. The antigen was ra- diolabelled using iodine monochloride at pH 10. The iodinated antigen was indistinguishable immunochemically from native material and eluted as a single radioactive peak from a Sephadex G-200 column. The lower limit of sensitivity of the assay was 15 ng protein, and the working range, 15 - 200 ng. The mean apolipoprotein B level (+ 1 S.D.) in 128 healthy control subjects was 86.6 + 29.6 mg/100 rnl and is in agreement with the values publishedby other wor- kers using unmodified assays. - Clin. Chim. Acta 70,267- 276 (1976). Univ. Dept. Path. Biochem., Roy. Infirm., Glasgow (Grot~britannien)

A method for the quantitative determination of urinary glycosamino- glyeans. R.E. Hurst, J.M. Settine, A.E. Lorincz.

Interesting interferences in a direct serum creatinine reaction. R.E. Watkins, C.S. Feldkamp, R.J. Thibert, and B. Zak.

Best. von Kreatinin in Serum; Spektralphotometrie; St6rung durch Bilirubin und Cephalotin. - Das Verfahxen zur Bestimmung yon Kreatinin beruht auf der Bildung eines Pikratkomplexes in alkali-

Best. von Glykosaminogtykanen in Ham; Chromatographic, Gel. - Versuche wurden angestellt, die klinischen Mukopolysaccharidosen auf Basis der spezifischen Ausscheidungsmuster von Glykoaminogly- kanen zu diagnostizieren. Die Interpretation yon solchen Messungen war sehr gest6rt durch die Schwietigkeit, die GAG-Fraktion yon den vielen niedrigmolekularen Verbindungan, die im Ham in sehr weir


streuenden Konzentrationen vorlagen, abzutrennen. Die Isolation der makromolekularen Fraktion geschah durch Gelffltration auf einer Siiule mit 27 cm Betth6he, gefiiUt mit Biogel P 4, 100/200 mesh, Elutionsmittel war 0,01 M NaC1. In der makromolekularen Fraktion wurde die Uronsiiure mit Glucuronolactonstandard nach der Borat/Carbazolmethode bestimmt. Die Sulfaminhexosen wurden naeh Lagunoff et al. (Prec. Soc. Exp. Biol. Med. 126, 34) mit Glucosamin als Standard bestimmt. Die Recovery dieser Methode wurde durch Zugaben von Heparansulfat und Dermatansulfat zu normalem Urin geprtift (105% flit Uronsiiuren bzw. 102% f0r Sul- faminhexosen). M6glichkeiten der St6rung dieser Methode sowie die Anwendung auf Diagnostizierung yon Mukopolysaccharidosen der Typen I, II, III aus weniger als 5 ml Hamprobe werden diskutiert. - Clin. Chim. Acta 70, 427 (1976). Dept. Eng. Biophys. Bio- chem. and Pediatrics, Center Developm. and Learning Disorders, Univ. Alabama, Birmingham 35294 (USA) H. Reif

A simple and rapid determination of the lecithin/sphingomyelin (LS) ratio in anmiotie fluids and in pharyngeal aspirates of new- born infants. A. Stuber, J. AdOrn and G. Sz6nyi.

Best. yon Lecithin neben Sphingomyelin in Amnionfltissigkeit; Chromatographic, Diinnschicht. - Das LS-VerNiltnis im Frucht- wasser Schwangerer bzw. in RachenhONenaspiraten yon Neugebo- renen lii~t Rtickschliisse anf die Leistungsfmhigkeit des Atmungssy- stems des Kindes zu. Ein Unterschreiten des Wertes yon 2,5 wird fiir bedenklich gehalten. - Arbeitsweise. 1 ml Probe wird mit 1 ml CH3OH und 2 ml CHC13 geschtittelt, zentrifugiert und die untere Phase eingedampft. Den Rtickstand nimmt man 2 mal in CH3OH / CHC13 (20 gl) auf und chromatographiert an Kieselgel-Fertigplat- ten (CHC13/CH3OH/H20 = 8/3/0,5). Detektion yon L u n d S mit Bromthymolblau. Eine Bestimmung dauert 1 h bei visueller Auswer- tung. - Clin. China. Acta 70, 221 - 226 (1976). central Lab. and II. Dept. of Obstetrics and Gynecol., Sch6pf-Merei Hosp. Buda- pest (Ungarn) F. Kreuzig

Determination of serum retinol (Vitamin A) by high-speed liquid chromatography. M.G.M. De Ruyter and A.P. De Leenheer.

Best. yon Vitamin A in Serum; Chromatographic, Siinlen. - Arbeits- weise. Man gibt 100 gl Serum, 15 gl inneren Standard und 100/A Methanol in ein konisches Zentdfugierglas, durchmischt uud versetzt mit 200/11 Petroliither/Dichlormethan/Isopropanol (80 : 19,3 : 0,7). Nach dem Zentrifugieren werden 100 gl des Oberstandes auf die Siiule gebracht (Siinlenpackung: 10 van mikrofeines Silicagel. Durchmesser 15 cm x 0,2 cm). Als Geriite dienen der Fltissigkeits- Chromatograph Varian 4100 und der Variscan WellenlLugendetek- tor (Varian Benelux Brussels). Die untere Analysengrenze ist 50 #g/1. Linearit~it besteht bis zur Konzentration yon 1,5 mg/l. Varia- tionskoeffmient bei achtfacher Priifung 2,5%. - Clin. Chem. 22, 1593 - 1595 (1976). Lab. Med. Biochem. Klin. Anal., Fak. Farm., Akad. Ziekerdlus Gent (Belgien) A.E. Biihler

The use of linear regression analysis in the isotope dilution assay of biotin. R.L. Hood.

Best. yon Biotin mit Avidin; Isotopenverdiinnungsanalyse; lineare Regression. - Am Beispiel dar Biotinbestimmung mit Avidin dutch Isotopenverdtinnungsanalyse wird gezeigt, dag die lineare Regres- sionsaualyse eine brauchbare und vefliit~liehe Methode zur Berech- nung yon Ergebnissen aus Isotopenverdiilmungsanalysen ist. Glei- chungen zur Bestimmung des Biotins aus der Neigung der Konzen- trationskurve an Avitin und aus der Ziihlrate im I3berstand der Reak- tionsmischung werden angegeben. Quenchingeffekte in Fliissigszin- tillationssystemen werden durch die Regressionsanalyse ausgegli- then. - Anal. Biochem. 79,635 - 638 (1977). SCIRO Div. Food Res., North Ryde, New South Wales (Australien) R.H. Sterzel

Vitamin B12 - klinisehe Bedeutung und Bestimmungsmethoden. E. Neumann.

Best. yon Vitamin B12 in Serum; Radio-Siittigungsmethode. - Verf. diskutiert die mikrobiologische Methode und die Siittigungsanalyse zur quant. Best. yon Vitamin B12 im Serum. Die mikrobiologische Methode basiert auf der Messung der Wachstumsrate bestimmter Mikroorganismen, die zum Wachstum Vit. B12 ben6tigen. Das Ver- fahren ist aufwendig, st6ranfallig und verlangt steriles Arbeiten, so dafS es flit die Routine nicht geeignet ist. - Bei der Siittigungs- analyse konkurriert nutoxliches Vit. B12 mit 57Co-markiertem Vit. B12 um die Bindungsstellen an einem Rezeptorprotein. Zur Best. im Serum wird Vit. B12 aus seiner Tragerproteinbindung in Frei- heir gesetzt und abgetrennt. Dann setzt man eine bekannte Menge 57Co-marldertes Vit. B12 und ein Rezeptorprotein (Intrinsicfaetor bzw. Transcobalamin) zu. Das nichtgebundene Vit. B12 wird abgetrennt und die Radioaktivitiit des Vit. B12-Rezeptorkomplexes gemessen. Je geringer die Radioaktivit~it des Rezeptorkomplexes, desto h6her ist der Gehalt an Vit. BI2 im Serum (Normalbereich: 250 - 1000 pg/ml). Die Durchfiihrung tier Best. ist relativ einfach, da entsprechende Kits yon Duphar, Pharmacia und Schwarz/Mann im Handel sind. - Med. Lab. 29, 184 - 188 (1976). I. Med. Univ.- Klinik, Wien (Osterreich) W.H. Mennicke

Microdetermination of (-)carnitine and carnitine aeetyltransfera- se activity. R. Parvin and S.V. Pande.

Best. yon Carnitin und Carnitin-acetyltransferase; Radiometrie; 14C- und 3H-Marlderung. - A method for the determination of picomole amounts of total (-)carnitine and free (-)camitine in the presence of short-chain acyl(-)carnitines is described. The method is based on the conversion of radioactive acetyl-CoA to acetyl(-)- camitine in the presence of camitine acetyltransferase and oxidiz- ed glutathione or N-ethylmaleimide to pull the reaction to near completion, so that linear standard curves are obtained over a wide range. The rapid separation of acetyl(-)camitine from acetyl-CoA is accomplished by the selective adsorption of the latter on char- coal in the presence of acid and ethanol. - Anal. Biochem. 79,190- 201 (1977). Lab. Metabolism., Clin. Res. Montreal, Montreal, Que- bec (Kanada)

High performance liquid chromatographic method for the determination of 25-hydroxycholecaleiferol in human serum. K.T. Koshy and A.L. VanDerSlik

Best. yon 25-Hydroxycholecalciferol in Serum; Chromatographic, HPLC. - Zur Bestimmung yon 25-Hydroxycholecalciferol (25-OH- D3) und Gesamt-25-Hydroxyvitamin D (D 2 + D3) (25-OH-D) in Humanserum wird das Serum mit Athanol extrahiert, mit Methy- lenchlorid ausgeschtittelt und der im Vakuum zur Trockne gebrach- te und mit Hexan-Di~thyl~ither (1 : 1) aufgenommene Trockenrtick- stand nacheinander an Silicagel (Adsorption) und Celite 545/Metha- nol-Wasser (Verteihmg) saulenchromatographisch gereinigt. Die Bestimmung erfolgt in _getrennten Aliquots durch HPLC an einer 5 - 8 /~ Sflica-Siiule (25-OH.D3) bzw. an einer 5 - 8 # Silica-C18- Siiule (25-OH-D) und Messung im UV-Detektor bei 254 nm. Es wurden Wiederfmdensraten yon 87% bzz. 83% erzielt. - Anal. Lett. 10, 523 - 537 (1977). Upjohn Co., Kalamazoo, Mich. 49001 (USA)

W. Czysz

A simple radioassay for 25-hydroxyeholo=alciferol without chromatography. V. Justov~, L. St~rka, H. Wilczek and V. Pacovslo).

Best. yon 25-Hydroxycholecalciferol in Plasma; Proteinbindungs- methode. - A simple method to assay 25-hydroxycholecalciferol in human plasma without chromatography is described. The method

332

includes ammonium sulphate precipitation of 25-hydroxycholecalciferol bound to plasma-transport globulins as a purification step, extraction with toluene and saturation analysis utilizing human os- teomalacic plasma for competitive protein-binding assay. The criteria of reliability of the method are reported. - Clin. Chim. Acta 70, 97 - 102 (1976). Fac. Med., llI. Med. Clin., Labor. Endocr., Meta- bol., Univ., Praha (CSSR)

A simplified competitive protein-binding assay for 25-hydroxycalciferol. B. Garcia-Pascual, A. Peytremann, B. Courvoisier and D.E. M, Lawson.

Best. von 25-Hydmxycalciferol in Plasma; Kompetitive Proteinbin- dung. - A single and reliable, competitive, protein-binding assay for plasma 25-hydroxycalciferol (25-OH-D), based on a previously described method which omits the chromatographic step, has been tested without the use of beta-lipoproteins. The accuracy is similar in the absence of beta-lipoproteins and in their presence, the re- coveries being respectively 110 - 136% and 74 - 85%. The intraassay coefficient of variation is 7.23% in the absence versus 12.56% in the presence of beta-lipoproteins. The sensitivity of the described assay is 0.01 ng per assay tube and 1 pg/1 plasma. This precise and accurate method is convenient for clinical studies since both chromatographic and beta-lipoproteins steps are avoided. - Clin. China. Acta 68, 99 - 105 (1976). Ctre Etude Mal. Osteo-Articul., Dept. Med., H~p. Cant., Geneva (Sehweiz) a. Dunn Nutr. Lab., MRC, Cambridge

A liquid chromatographic method for quantitative determination of a-tocopherol in rat brain. G.T. Vatassery and D.F. Hagen.

Best. yon a-Tocopherol in Himgewebe; Chromatographic, Fliissig; Rattenhim. - Ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung yon a-Tocopherol in Rattenhim wird beschrieben. Dazu wird die Gewe- beprobe in Gegenwart yon Ascorbins~iure, :~thanol und Hexan homogenisiert. Der Hexanextrakt wird direkt in einem F18ssigkeits- Chromatographen auf einer Corasfl lI-S~iule mit 0,6% Methanol in Hexan als mobiler Phase analysiert. Das Effluat wird in einer Durchflufizelle eines Fhiorimeters registriert. Der Variationskoeffi- zient des Verfahrens llegt bei 7%. Die WiederFmdungsrate ist nahe- zu quantitativ. - Anal. Biochem. 79, 129 - 134 (1977). Neurol. Res., Veterans Adm. Hosp., Minneapolis, Minn. (USA) R.H. Sterzel


formed is a measure of the amount of orotate in 'the sample. The assay method described is sensitive to concentrations of orotate down to 0.5 pM in extracts from Escherichia coli. - Anal. Biochem. 80, 159 - 167 (1977). Russell Grimwade School Biochem., Univ. Melbourne, ParkvSlle, Victoria (Australien)

Extraction of ubiquinone from mitochondria and bacteria. V. Dad~k and L. ICl'iv~nkovL

Extraktion von Ubichinon aus Mitochondrien und Baktetien. - Far eine quantitative Extraktion yon Ubichinon Q10 (Coenzym Q10) aus Mitochondrien und Bakterien bewLhrte sich yon insgesamt acht unter- suchten Verfahren das yon A. Kr6ger und M. Klingenberg in Biochem. Z. 344, 317 (1966) beschriebene. Danach werden 0,5 ml des zu extrahierenden Materials mit 3 ml Methanol/Petrol~ither (3:2, v/v) 1 min kr~iftig gesehiittelt. Das Ubichinon wird dutch drei sukzessive Zugaben yon je 1 ml Petroliither abgetrennt und nach Eindampfen unter reduziertem Druek in ~thanol gel6st. Die quantitative Bestim- mung erfolgt spektralphotometrisch durch Differenzbildung der Ex- tinkfionen der oxidierten und reduzierten Form (274 nm und 297 nm). Bei dem Extraktionsverfahren lagen die Standardfehler yon vier Ans~itzen mit durchschnittlichen Ausbeuten yon 1,9 #Mol QlO/g Trockengewicht bei weniger als 3%. - Scripta Fac. Sci. Nat. UJEP Brun., Chemia, 6, 57 - 60 (1976). Dept. Biochem., Purkyne Univ., Brno (CSSR) W. Czysz

Vitamin K 2 determination from the spectral difference between oxid- ized and reduced forms. L. Kfivgnkov~ and V. Dadak.

Best. yon Vitamin K2, Menachinon; Spektralphotometrie. - Zur Be- stimmung yon Vitamin K 2 (Menaehinon MK-6, MK) dutch Spektral- photometric und Messung der oxidierten und reduzierten Form wurden die Bedingungen einer quantitativen und schnellen Reduktion ge- priift. Es wurde festgestellt, daft man die besten Ergebnisse bei Reduk- tion mit Natriumbothydrid im schwach alkalischen Medium (pH 9,0, Tris-HC1-Puffer) erh~ilt. Als LSsungsmittel bew~hrte sich 50%iges Propanol. Die Reduktion verl~iuft quantitativ unter dreimaliger Zu- gabe yon je 10 pl 0,1 M NaBH4-LSsung. Far die Berechnung der Ex- tinktionsdifferenz werden Formeln angegeben. - Scripta Fac. Sci. Nat. UJEP Brun., Chemia, 6, 67 - 78 (1976). Dept. Bioehem., Pur- kyne Univ., Brno (CSSR) W. Czysz

Decreased radioassay values for folate after serum extraction when pteroylglutamlc acid standards are used. G.A. Mitchell, $2. Pochron, P.V. Smutny, and R. Guity.

Best. von Fotat in Serum; Radiometrie; Methyltetrahydrofols~,iure als Standard. - Bei der radiologischen Bestimmung yon Folat im Serum mit Pteroylglutamins~iure als Standard erhiilt man zu niedrige Werte, gleichgiiltig ob bei pH 1,3; 7,6; 10,5 oder 12,4, mit oder ohne Ascor- binsa'urezusatz extrahiert wird. Mit N-5-Methyltetrahydrofol~ure als Standard tritt der Fehler nicht auf. - Clin. Chem. 22, 647 - 649 (1976). DADE Div., American Hosp. Supply Corp., Miami, Fla. (USA) E. Mtiller, Marburg

The assay of orotate by an isotope dilution procedure. R.I. Christo- pherson and L.R. Finch.

Best. von Orotat in Biolog. Material; Isotopenverdiinnung. - Orotate has been estimated by an isotope dilution procedure in which the sample of unlabeled orotate is competed with a known amount of (14C)orotate for enzymatic reaction with a limiting amount of 5- phosphoribosyl-l-pyrophosphate. The dilution of the specifc activity of the 14C radioactivity in the orotidine-5'-monophosphate and UMP

An improved extraction method of MK from cells of Staphylococcus epidermidis. L. Kfivgnkov~ and V. Dad~k.

Extrakfion yon Menachinon aus Bakterien. - In Anlehnung bzw. Fortfiihrung der beiden vorstehend referierten Arbeiten derselben Autoren wurde ein Verfahren zur Extraktion yon Menachinonen (MK) aus Bakterienmaterial ausgearbeitet. Dabei werden 0,5 ml der Bakte- riensuspension 1 rain mit 4 ml eines Gemischs aus Methanol/Petrol- tither (3:2, v/v) kr~iftig geschiittelt. Dann versetzt man re_it 0,1 ml 70%iger Perchlors~iure und l~ifit mindestens 6 h stehen. Dann schiit- telt man dreimal mit je 1 ml Petroliither, trennt ab und verwendet die MK-haltige organische Phase zur weiteren Analyse. Der Standard- fehler bei verschiedenen Ans~itzen lag immer iunerhalb 3%, die Re- produzierbarkeit betrug + 1%. - Scripta Fac. Sci. Nat. UJEP Brun., Chemia, 6, 79 - 88 (1976). Dept. Biochem., Purkyne Univ., Brno (CSSR) W. Czysz

Determination of disulfiram and its metabolites in human blood. A.M. Sauter, W. Wiegrebe and J.P. yon Wartburg.

Best. von Disulfiram trod Metaboliten in Blut; Spektralphotometrie. - Analytical assay procedure has been developed for determination


of disulflram and its metabolites (CS2, free diethyldithiocarbamate (DDTC) and protein-S-mixed disulfides (DS)) in 10 ml of blood, serum or urine. The method is based on a colour reaction of CS 2 with the modified Viles reagent composed of Cu(II)-acetate (0.1 g), diethylamine (35 g), triethanoloamine (10 g), demineralised water (75 ml) and ethanol abs. (ad 1000 ml). A simple apparatus has been employed for this purpose making possible flushing the CS 2 evolved with N 2 and then its trapping in a test tube containing 6 ml of the reagent. The trap was successively rinsed with 3 ml of ethanol and 5 ml of benzene. After evaporation at 50~ and 15 Torr the residue was dissolved in 2 ml of a mixture of methylacetate/acetone (7:3), faltered and absorbance was measured at 426 nm in 4 cm cuvettes. To determine free DDTC and DS a new trap was used with fresh reagent and 5 ml of formic acid and 0.1 g of cystein x HC1 was added. The sample was heated to 50~ In an acidic solution DDTC decomposes quantitatively to CS 2 and diethylamine. The addition of cystein leads to the reduction of DS and makes possible the determination of their

,like DDTC. To differentiate between free DDTC and DS only formic acid was added at first liberating of CS 2 and subsequently cystein was added to liberate DDTC from DS. The method was applied for determination of CS 2 and DDTC in the blood of patients receiving daily doses of 200 nag of disulfiram. - Arzneim.-Forsch. (Drug Res.) 26, 173 - 177 (1976). Med.-Chem. Inst., Univ. Bern, Bern (Switzer- land) R. Kaliszan

Dfinnsehieht- und gas-chromatographische Untersuchungen zum Nach- weis und zur Stabilit/it des Morazons. G. Bohn, G. Riicker und H. Kr6ger.

tiflcation of ketamine and its metabolites from biological fluids have been developed. - Res. Commun. Chem. Path. Pharmacol. 14, 367 - 376 (1976). Drug Abuse Screening Labor., School Pharmacy, Auburn Univ., Auburn, Ala. (USA)

Gas chromatographic determination of hydrocodone in serum. J.W. Barnhart and W.J. Caldwell.

Best. yon Hydrocodon in Serum; Chromatographie, Gas. - A procedure for the determination of hydrocodone (dihydrocodeinone) in serum has been developed. Hydrocodone and N-isobutyldihydro- norcodeinone, the internal standard, are extracted from serum by chioroform-isopropyl alcohol (9:1, v/v). The extracts are purified by back-extraction into 0.1 N sulfuric acid and a final basic extraction into benzene. The pentafluorophenythydrazone derivatives are formed and determined using.electron capture gas chromatography. A column with 3% OV-7 on Supelcoport at 265~ was used. The carrier gas (5% methan in argon) flow-rate was 40 ml/min. As little as 1 ng/ml of hydrocodone in serum can be determined. A closely related compound and potential metabolite, dihydronoreodeinone, does not interfere. Serum hydrocodone levels were determined in dogs after oral and intravenous doses of 0.5 mg/kg, and in humans after a lO-mg oral dose of the bitartrate. A mean peak serum drug concentration of 23.6 ng/ml and a terminal half-life of 3.8 h resulted from the human study. The terminal half-life in serum was 1.8 h after the intravenous dose in dogs. - J. Chromatogr. 130, 243 - 249 (1977). Health & Con- sumer Products, The Dew Chem. Comp., Indianapolis, Ind. (USA)

Best. von Morazon in Biolog. Material; Chromatographie, Diirm- schicht. - Zum Nachweis des Analgeticums und Antiphlogisticums Morazon in Organen und Mageninhalt wird aus saurem Milieu mit Ace- ton bzw. Athanol extrahiert und naeh Abdampfen des L6sungsmittels der Rtickstand ftir die extraktive Aufarbeitung nach Stas-Otto in heit~em Wasser aufgenommen. Diinnschicht-chromatographisch (Kie- selgel GF 254 (Merck), Fliet~mittel: Dioxan) lassen sich ansehliet~end nach Behandeln der Chromatogramme mit 5% FeCt3-L6sung uud nachfolgend mit Kaliumjodplateat neben der Ausgangsverbindung drei Zersetzungsprodukte nachweisen, die man aueh durch Kochen (15 min) bei pH 4,5 - 5,0 erhglt. Mittels IR-, Massen-und 1H-KMR-Spek- troskopie werden diese Substanzen als Phenmetrazin, das auch als Metabolit auftritt, als 4-Hydroxymethylantipyrin (wahrscheinlich ebenfaUs ein Metabolit) und Bisantipyrylmethan identifiziert. Bei An- wesanheit yon Aminophenazon wird in der 2. Dimension mit Benzol/ Aceton/Xther/12%NH 3 (40:60:10:3) getrennt. Die Empfindlichkeit des Nachweises flit Morazon und seine Metaboliten kann dureh Ko- ehen (1 11) bei pH 1 eth6ht werden, da darm diese in Phenmetrazin und Bisantipyrylmethan als einzige Komponenten umgewandelt wet- den. Die Nachweisgrenze liegt bei 5/sg. - Arch. Toxicol. 35, 213 - 220 (1976). Inst. Gerichtl. Med., Univ. M~aster W.H. Mennicke

Thin-layer and gas chromatographic determination of ketamine and its biotransformed products in biological fluids. M.M. Kochhar, L.T. Bavda and R.S. Bhushan.

Best. yon Ketamin in Biolog. Fltissigkeitan; Chromatographic; DC und GC. - Ketamine, (2-(o-chlorophenyl)-2-methylamine cyclohexanone) and its in vivo metabolite I (2(o-chlorophenyl)-2-aminocyclohex- anone) and metabolite II (2-(o-cblorophenyl).2-amino-5-cyclohexene- 1-one) were determined by thin-layer (TLC) and gas chromatography (GC). In vivo studies include intraperitoneal injection of ketamine in rats. Urine and blood samples were collected at regular intervals. The unreacted ketamine and its biotransformed products were extracted from urine and blood and subjected to TLC and GC analysis. 1% Car- bowax-20M on Gas-Chrom G-AW-DMCS and precoated LQ6D TLC plates were used in this study. In conclusion a rapid, simple, accurate, and sensitive thin-layer and gas chromatographic method for the iden-

Fully automated analysis of phenylbutazon in plasma and urine. G. Lukas, C.B. Borman and S.B. Zak.

Best. yon Phenylbutazon in Plasma und Ham; Spektralphotometrie; automatisiertes Verfahren. - Die automatische Bestimmung des Phe- nylbutazons in Plasma und Urin wird durch Extraktion mit Heptan- Isopentylalkohol 98 - 1,5 und Reextraktion in 2,5 N Natronlauge und Photometrie bei 265 urn ausgeftihrt. Wiederfindungsrate und Spezifi- tilt gegeniiber Oxyphenylbutazon sind gut. - J. Pharmaceut. Sci. 65, 86 - 88 (1976). Ciba-Geigy Corp., Ardsley, N.Y. (USA) H. Riissel

Simultaneous gas-chromatographic analysis for phenobarbital, diphenylhydantoin, carbamazepin, and primidone in serum. C.V. Abraham and H.D. Joslin.

Best. von Phenobarbital, Diphenylhydantoin, Carbamazepin und Pri- midon in Serum; Chromatographie, Gas. - Eine empfindliche GLC- Bestimmung yon Phenobarbital, Diphenylhydantoin, Carbamazepin und Primidon als Methylderivate im Serum wird beschrieben. - Arbeitsweise. Zu 1 ml Serum oder Plasma werden 0,5 ml 0,25 M HC1 im teflonverschraubbaren Reagensglas hinzugefiigt, sowie 5 ml CHC13, welches 90 ttg des inneren Standards (5-p-Methyl-phenyl-5-phenylhy. dantoin) enth/flt, trod 1 rain im Vortex extrahiert. Die w/igrige Phase wird abgesaugt und die organische Phase durch Papier gefiltert. CHC13 wird im spitzen Reagensglas bei 40oc unter N 2 eingeengt. Der Rtickstand wird mit je 100 #I Trimethylphenylammoniumhydroxid. 16sung (0,2 M in MeOH) aufgeuommen und 1 his 2/A in die GLC. Apparatur eingespritzt. GLC-Bedingungen: FID-Detektor, Borsili. catglass/iule (200 cm x 2 mm i.D.) mit 3% SP 2250 auf Supelcoport Typ 50-50 Me-Ph 100 - 120 mesh; Triigergas N 2 50 ml/min; Ofen- temperatur 190 bis _3_0_0~ mit Programm 15O/min. Die Methode be- n6tigt nut 20 gl Serum und ca. 30 rain Zeit. Die untere Nachweis- grenze tier einzelnen Anticonv-tdsiva liegt bei 0,5 mg/1. Ausbeuten: 90 - 104%. - Clin. Chem. 22,769 - 771 (1976). Lynchburg Training School and Hosp., Lynehburg, Va. (USA) R. Wennig

334

Simplified fluorometrie assay for diphenylhydantoin in plasma. WA. Dill, A. Leung, A.W. Kinkel and A.J. Glazko.

Best. von Diphenylhydantoin in Plasma; Fluorimetrie; ohne Extrak- tion. - Wesenfliches Kennzeiehen der Methode ist der Wegfall der Extraktion des Diphenylhydantoins (DPH) aus der Plasmaprobe, wie im Verfahren yon W.A. Dill mad A.J. Glazko (Clin. Chem. 18,675 (1972)) noch vorgesehen. Die Plasmaprobe wird jetzt direkt mit alka- lischem Permanganat oxidiert. - Ausfiihrung. Je 0,2 ml Plasma wet- den mit 2 ml Wasser verdiinnt und mit ca. 0,5 g krist. Kaliumper- manganat und 0,5 ml 40%iger Natrontauge gemischt und 10 min erhltzt. Nach Abktihlung wird mit 3 ml s~iuregewaschenem Heptan 30 sec gesehtittelt und zentrifugiert. 2 ml Heptan werden mit 1,2 ml konz. H2SO 4 30 see gemiseht und zentrifugiert. Dann wird bei 485 nm (Anregung 355 rim) gemessen. - Die Plasmaproben wurden gleichzeitig aueh gas-chromatographisch untersucht. Die ~bereinstimmung zwischen beiden Methoden ist gut. - Clin. Chem. 22, 908 - 911 (1976). Res. Med. Affairs Div., Parke-Davis & Co., Ann Arbor, Mich. (USA) A. Niemann


Best. yon Amitriptylin und Nortriptylin in Plasma; Chromatogra- phie, Gas. - Die simultane gas-chromatographische Bestimmung mit Hilfe eines spez. N-Detektors yon Amitriptylin und seinem Metaboli- ten Nortriptylin therapeutischer Konzentrationen in Humanplasma wird beschrieben. - Arbeitsweise. Beide Substanzen bei pH 10,5 (0.5 ml ges/itt. Na2CO3) aus 3 ml Plasma mittels n-Hexan/isAmOH (98:2) extrahieren; mit HC1 riickextrahleren und nach Alkalisierung wieder mat n-Hexan/isAmOH extrahieren. Nach Eindanapfen des L6sungsmittels Riickstand in 20 pl MeOH aufnehmen und 4/A un- tersuchen. S/iule: 3% OV-17 auf GasChrom Q 100 - 120 mesh; 1,8 m x 2 mm i.D.; He-Tr~gergas 30 ml/min; S~tulentemperatur 235~ isotherm. Die eventuelle St6rung. von 47 lga'ufig verwendeten basisehen Therapeutica wurde untersucht (screening). Protriptylin wurde als innerer Standard benutzt. Nachweisgrenze: 5 #g/1 Plasma. Der Va- riationskoeffizient lag bei einer Konzentration yon 200 ttg/1 am sel- ben Tag bei 4,6 und 4,3% sowie bei 8,6 und 3,4 von Tag zu Tag ftir Amittiptylin bzw. Nortriptylin. Die Methode konnte auch bei Ober- dosierungen angewandt werden. - Clin. Chem. 22, 777 - 781 (1976). Dept. Lab. Med., Yale Univ., New Haven, Conn. (USA) R. Wennig

Simultaneous measurement of phenobarbital, diphenylhydantoin and primidone in blood by high-pressure fiqnid chromatography. P.M. Kabra, G. Gotelli, R. Stanfill and L.J. Marton.

Best. yon Diphenyllaydantoin, Phenobarbital und Primidon in Blut; Chromatographie, S~iulen. - Mit Hilfe der HPTLC lassen sich Di- phenylhydantoin (I), Phenobarbital (II) und Primidon (III) im Blut und Plasma gleichzeitig bestimmen. Die Nachweisgrenze ftir III liegt bei 100 ng, f'tir Dilantin bei 200 ng und flit II bei 300 ng. Die Ab- sorption wird bei 254 nm gemessen. Der Korrelationskoefflzient liegt > 098. Als Chromatograph fand ein Perkin-Elmer Model 601 Verwen- dung, der mit einem UV-Detektor, a 1 - mV Honeywell Electronic 194 Rekorder ausgestattet war. -Arbeitsweise. Eine intemale Stamm- 16sung enthiilt 250 rag/1 Methanol mad ist bei 4~ einen Monat halt- bar. Mit 2 ml dieser Standardl6sung werden 2 ml unver~indertes Blut oder Plasma vermischt. Nach Zusatz yon 10 ml Chloroform wird 5 min bei 210 xg (2000 rpm) zentrifugiert. Nach Verdampfung des Chloroforms wird der Riickstand in 50/zl Xthanol aufgenommen. Von dieser L6sung werden 2 - 5 gl in den Chromatograph injiziert. Lineari- tat liegt vet yon 2 rag/1 bis 50 rag/1 f ~ III mad yon 2 mg/1 bis 100 rag/1 ftir II. Die HPTLC-Methode fiihrt scimeller zu Befunden als die spek- trophotometrische und gas-ehromatographische Methode. - Clin. Chem. 22, 824 - 827 (1976). Div. Clln. Chem. Dept. Lab. Med., School Med., Univ. Calif., San Francisco, Calif. (USA) F. Knott

Rapid radioisotopic procedure for determination of nortriptyline in plasma. K.P. Maguire, G.D. Burrows, J.P. Coghlan and B.A. Scoggins.

Best. yon Nortriptylin inPlasma; Isotopenverdiinnung; mit 14C und 3H. - Zur kllnischen Routinebestimmung der Nortriptylinplasmakon- zentration beim Menschen wird eine doppelte IsotopenverdOnnungs- methode angewandt, welche schon friiher beschrieben wurde (J. Clin. Endocrinol. Metab. 27, 1470 (1967)). 14C-Nortriptylin wurde zur Ausbeutebestimmung benutzt mad 3H-Aeetanhydrid zur Derivatbil- dung. Die Methode wurde bei Personen zur Bestimmmag der Varia- tion der steady-state Drogenkonzentration angewandt, welche unter einer 150 mg-Tagesdosis standen. Die intra-individuelle Variation lag bei 10 - 14%. Bei 19 Patienten dieser Dosis betrug die mitflere Plasmakonzentration 181 -+ 22 SE ttg/1. - Clin. Chem. 22, 761 - 764 (1976). Dept. Psychiatry, Univ. Melbourne, Parkville, Victoria (Austratien) R. Wennig

Gas-chromatographic analysis for therapeutic concentrations of ami- triptyline and nortriptyline in plasma, with use of a nitrogen detector. D.N. Bailey and P.I. Jatlow.

Determination of (+)-(3R), (4S)-3-[(4-methoxyphenoxy)methyl]-l- methyl-4-phenylpiperidine hydroehloride (FG 4963) in biological fluids using competition for adsorption to glass. E. Bechgaard and J. Lund.

Best. von FG 4963 in Biolog. Fliissigkeiten; Chromatographie, G a s . - A procedure has been developed for the gas chromatographic determination of a structurally new 5HT-uptake inhibitor with antide- pressant properties (FG 4963) in plasma and urine. The method involves an extraction from alkaline solution with n-pentane, and a quantitative determination by gas chromatography using an internal standard and a nitrogen-sensitive detector. The binding of FG 4963 to glass during storage and evaporation necessitates the addition of a structurally similar compound to the vials used for collection of the blood and urine, in order to compete for the binding sites of the glass. The method is suitable for pharmacokinetic and clinical studies, the sensitivity being ca. 5 ng/ml in plasma and 1 ng/ml in urine and the precision being 10 - 15% for concentrations greater than 10 ng/ rnl. - J. Chromatogr. 133, 147 - 152 (1977). Res. Lab. A/S Ferro- san, Sydmarken, Soeborg (D~inemark)

GLC determination of nylidrin in human urine samples. H. Li and P. Cervoni.

Best. yon Nylidrin in Urin; Chromatographic, Gas. - U m Gesamt- Nylidrin im Ham zu erfassen, erfolgt Hydrolyse mit 13-Glucuronidase, Extraktion des alkalisch gemachten Hams mit Chloroform, nach eini- gen weiteren Schritten Silyllerung zum Trimethylsilylderivat, das mit Docosan als innerem Standard gas-ehromatographisch nach einer ein- zigen oralen therapeutischen Dosis bestimmt werden kann. - J. Phar- maceut. Sci. 65, 1352 - 1356 (1976). Biol. Res., Develop. Labs., USV Pharmaceut. Corp. Tuckahoe, NY (USA) E. Mtiller, Marburg

Rapid radioimmunoassay for methotrexate in biological fluids. J. Hendel, L.J. Sarek and E ~ . Hvidberg.

Best. von Methotrexat in Biolog. Fltissigkeiten; Radioimmunologie. - Es wird eine Radioimmunitats-Bestimmung Ftir Methotrexat (Mtx) (cytostatischer Folsaure-Antagonist) beschrieben. Das Antiserum wurde yon Kaninchen gewonnen, die mit Methotrexat und methyliertem Rinderserum-Albumin immunisiert waren. Die Eichkurve l~uft yon 1 - 100 ng Methotrexat in 100/xl linear. Der Variationskoeffizient liegt zwisehen 4,04% und 11,58%. Die meisten kinetisehen Untersuchungen wurden bisher mit radioaktiv markiertem Mtx durchgeftihrt. - Ar- beitsweise. Es wurden drei verschiedene Immunogene synthetisiert. Insbesondere ist darauf zu aehten, daft die Bindung zwischen Mtx-


COOH-Gruppen und den freien NH2-Gruppen des Proteins vollst~indig vefliinft. S~mtliche Proben wurden in einem Szintillations-Spektro- meter (Packard Tri Carb Model 8 2450) gemessen. In 4 ml-Polypropy- lenflaschen warden gemischt: 500 01 Kaninchen-Antiserum (Verd0n- nung 1:1000), 100 ~1 Patientenserum oder Standard-Mtx und 100 gl Tr~igersubstanz z.B. 9 ng (3H)-Mts. Eine Konzentration yon 2 ng Mtx/l ml Plasma kanla nach der beschriebenen Methode festgestellt werden Gegenfiber dem Antik6rper haben Fols~inre, Leucovorin und Tetrahy- drofolsiiure eine geringere Affinit~t als Mtx. Als Vergleichsmethoden warden die fluorimetrische, die enzymatische und die mikrobiologische Methode erwgimt. - Clin. Chem. 22, 813 - 816 (1976). Clin. Pharmacol. Res. Unit, Dept. Pharmacol. and Rigshosp., Univ. Kopen- hagen (Dfinemark) F. Knorr

Enzymatic assay for methotrexate in serum and cerebrospinal fluid. L.C. Falk, D.R. Clark, S.M. Kalman and T.F. Long.

Best. yon Methotrexat in Serum, Cerebrospinalfliissigkeit; Enzymati- sche Analyse. - Bei dieser Bestimmungsmethode wird die Hemmung der Dihydrofolatreduktase aus Lactobacillus easei durch Methotrexat ermittelt. Die untere Bestimmungsgrenze liegt bei 2-10 -8 M Metho- trexat pro Liter Serum mit einem Fehler yon + 5%. Zur Reaktions- pufferlOsung, die ans fl-Marcapto~ithanol, Trispuffer pH 7,5 und ?ithy- lendiaminessigs~ure besteht, werden NADPH und Enzyml6sung zuge- geben. Die Extinktionsmessung wird zeiflich nach Zugabe des Probe- materials gemessen und an Hand yon Standardkurven ausgewertet. - Clin. Chem. 22,785 - 788 (1976). Dept. Pharmacol., Univ. Stanford, Calif. (USA) U. Gerhardt

Gas chromatographic determination of dimethophrine in biological specimens of rabbit. C. Pantarotto, G. Belvedere and A. Frigerio.

Best. von Dimethophrin in Biolog. Material; Chromatographie, Gas. - Das a-sympathicomimetische Amin Dimetofrin (DMP) (1-(3,5-Di- methoxy-4-hydrophenyl)-2-monomethyl-amino~ithanol) kann aus biologischen Proben nach Extraktion mit Athytacetat mad nach Umwand- lung in das Trifluoracetyl-Derivat gas-chromatographisch auf einer OV-1-S~ule (3% an Chromosorb Q) isoliert und bestimmt werden. Bei direkter Gas-Chromatographic yon DMP tritt Abbau ein. - Die nach der Gas-Chromatographic aufgenommenen Massenspektren, insbesondere yon nicht tfifluoracetyliertem Produkt, warden ausftthr- lich diskutiert, ebenso die Verbreitung und Ausscheidung nach intra- muskulfirer Applikation an Kaninchen. Nach 36 h sind ca ~. 80% unver~indertes DMP im Ham wieder ausgeschieden worden. - Arznei- mittelforsch. 26, 1857 - 1860 (1976). ,,Marie Negri"-Inst., Pharma- col. Res., Mailand (Italien) A. Niemann

Estimation of plasma cateeholamines in man. E.J. Moerman, M.G. Bogaert and A.F. de Schaepdryver.

Best. von Catechinaminen in Plasma; Radiometrie. - Verff. bestimmen beim Menschen in verschiedenen Lagen und nach Muskelarbeit Noradrenalin und Adrenalin im Plasma mit der yon ilmen leicht modifizierten radiometrischen Methode yon Ph. Passon und J. Peuler (Anal. Biochem. 51,618 (1973)). Die Methode beruht auf der Ober- ftLhrung der Catecholamine durch O-Methyltransferase mit S-Adeno- syl-L-methionin als (3H)-Methytdonator in ihre O-Methylderivate, die mit NaJO 4 in (3H)-Vanillin umgewandelt und bestimmt werden. Das ebenfaUs O-methylierte Dopamin liefert kein Vanillin. - Clin. Chim. Acta 72, 89 - 96 (1976). Heymans Inst. Pharmaco., Univ., Med. School, Ghent (Belgien) E. MOiler, Marburg

Gas-chromatographic micro-scale procedure for theophylline, with use of a nitrogen-sensitive detector. C.J. Least, G.F. Johnson and H.M. Solomon.

Best. yon Theophyllin in Biolog. Fliissigkeiten; Chromatographic, Gas. - Zur Mikrobest. yon Theophyllin in Serum, Plasma und Speichel (jeweils 20 /al) wird insbesonderr zur Reihenuntersuchung in der P~idiatrie eine GLC-Methode mit N-spez. Detektor vorgeschlagen. 0,5 mg/1 k6nnen noch bequem bestimmt werden (St6rung dutch background erst ungefahr bei 0,1 mg/l). - Arbeitsweise. 20 01 Probe zu 100 01 1 M HCI geben. 3 ml irmere Standardl6sung (3-Isobutyl-l-me- thylxanthin 0,1 /~g/ml in CHC13/isPrOH , 20:1) hinzuftigen; 5 rain auf Schfittelmaschine extrahieren und w~rige Phase absaugen. Die organische Phase unter N 2 bei 50~ einengen. Dem Riickstand 100 01 N ,N-Dimethylacet amid/Tetr amethylammoninmhydroxid (24 g/l) (8:1) zuftigen und 10 sec im Vortex mischen, dann 50 gl Jodpentan zugeben, 10 sec mischen und 10 rain bei Zimmertemperatur stelien lassen. 5 min mit 2500 U/rain zentrifugieren. Den Oberstand bei 50~ unter N 2 einengen. 20 01 n-Hexan dem Rfickstand zugeben, 10 sec rnischen und den Gehalt an TheophyLlin mittels Eichkurve im GLC- Ger~it bestimmen: 3% OV-17 auf GasChrom Q 100 - 120 mesh; Ofen- temperatur 180 his 260~ mit Programm 8O/min; Tr~igergas N2, 35 ml/min. Vafiationskoeffizient 2,8% bei einer Konzentration yon 14,8 mg/1. - Clin. Chem. 22, 765 - 768 (1976). Therap. Drug Monitor. Lab. Dept. Lab. Med., J. Hopkins Hosp., Baltimore, Md. (USA)

R. Wennlg

Serumdigoxinbestimmung mit EIA mad IliA. H. Mttller, H. Briiner, M. Reinhardt und G. Ffrster.

Best. yon Digoxin in Serum; Enzymimmunoassay, Radioimmunoas- say. - Es wurden 104 Patientenseren parallel mit einem Radioimmu- noassay (mit 125J-Markiemng) und mit einem in der Entwickiung befindlichen Enzymimmunoassay far Digoxin verghchen. Dabei wurden signifxkante Abweichungen sowohi zu h0heren als auch zu niedri- geren Werten festgestellt, im Durchsctmitt mit dem Enzymimmuno- assay zu niedtige Werte erhalten. Eine Erkl~rung hierfar kann noch nicht gegeben werden. Der Enzymimmunoassay der Fa. Syva, USA (Vertrieb fiber Gilford Instruments, Dtisseldor0 beruht darauf, dag Glucose-6-phosphatdehydroganase an Digoxin ohne Aktivit~tsverlust gebunden werden kann. Der von immunisierten Schafen gewonnene Digoxin-Antik6rper inaktiviert die Dehydrogenase anteilsm~ig je nach der Menge des im Patientenserum vorhandenen Digoxins, wobei eine direkte Proportionalitgt zwischen der Enzymaktivit~it und der Di- goxinkonzentration im Serum besteht. - Der Testablauf wurde nach den Vorschriften der Hersteller durchgeftihrt. Einzelheiten dartiber werden nicht mitgeteilt. - Xrztl. Lab. 22, 399 - 402 (1976). Klinik und Poliklinik far Nuklearmedizin, Radiologiezentmm Univ., D-3550 Marburg/Lahn A. Niemann

Gas-liquid chromatography determination of pilocarpine. S.W. Dziedzic, S.E. Gitlow and D.L. Krohn.

Best. von Pilocarpin in Biolog. Fltissigkeiten; Chromatographie, Gas. - Pilocarpin im ng-Bereich in biologischen Fltissigkeiten kann mit GLC und Elektroneneinfang-Detektor nachgewiesen werden. Die Pro- be wird mit Heptafluorbutters~ureardiydrid und Trimethylamin in Benzol derivatisiert, 1,2 m x 4 rnm-Kolonne mit 2% XF-1105 auf GasChrom Q (80 - 100 mesh), 190oc, N 2 70 ml/min. - J. Pharm. Sci. 65, 1262 - 1263 (1976). Dept. Ophthalmology, Univ. Med. C., New York, NY (USA) C. Martin

High-speed liquid chromatographic determination of antiepileptic drugs in human plasma. S. Kitazawa and T. Komuro.

Best. von Drogen in Plasma; Chromatographie, S~tulen. - A high- speed liquid chromatographic method for the simultaneous determinations of diphenylhydantoin, phenobarbital and earbamazepine in human blood plasma is presented. This method involves two step extraction procedures with chloroform and uses 2 x 50 crn long stainless steel columns packed with a anion exchange resin, with a

336

mobile phase of 4 mM ammonium phosphate buffer solution, pH 6.2 at a flow rate of 0.40 ml/min. The results presented show linear calibration curves and quantitative determinations as low as 1.0 ~g of each drug added to 0.5 mA plasma. This method has a sensitivity sufficient to detect human plasma levels after therapeutic clinical doses. - Clin. Chim. Acta 73, 31 - 38 (1976). Dept. Pharm. Kyoto Univ. Hosp., Kyoto (Japan)

Tabulation of therapeutic, toxic and lethal concentrations of drugs and chemicals In blood. C.L. Winek.

Konz. yon Pharmazeut. Produkten in Blut; Tabellen; normale, toxische und letale. - In einer Tabelle stellt Verf. in alphabetiseher Reihenfolge die therapeutische oder normale, die toxische und die letale Konzentration im Blut yon 123 ArzneimAtteln bzw. Chemika- lien zusammen. Faktoren, die die Konzentration beeinflussen, sind in einer weiteren TabeUe aufgefiihrt. - Clin. Chem. 22, 832 - 836 (1976). Toxico. Depts., Allegheny Coroner's Office, Duquesne Univ. Pittsburgh, Pa. (USA) E. Mitiler, Marburg

Assessment of interference by aspirin with some assays commonly done in the clinical laboratory. J.I. Routh and W.D. Paul.

Einwirkung yon Aspirin auf Blutbestandteile; klinische Analyse. - In 4 Versuchsreihen: 650 nag Aspirin, 60 rain; 650 nag alle 4 Stunden, 3 Tage; 2600 nag alle 4 Stunden, 5 Tage; 650 mg alle 4 Stunden, 2 Wochen, priifen Verff. die Einwirktmg yon Aspirin auf 20 normale Blutbestandteile. Die statistische Auswerttmg ergibt einen Anstieg yon Chlorid und einen AbfaU yon Gesamtprotein, Calcium, Chole- sterol, Hamsaure, Bilirubin und Thyroxin. Nach Absetzen der Gaben kehren die Werte zur Norm zuriick. Eine St6mng dutch Salicylat mit den Analysenreagentien liegt nicht vor. - Clin. Chem. 22, 837 - 842 (1976). Depts. Biochem., Orthoped. Surgery, Univ., Iowa City, Iowa (USA) E. Mtiller, Marburg

1-Nitroso-2-naphthnl as a spray reagent for the detection of cannabis on thin-layer plates. N.V.R. Ran.

Nachw. yon Cannabis mat 1-Nitroso-2-naphthol; Chromatographic, Dimnschlcht; Spriihreagens. - 1-Nitroso-2-naphthol has been used as a spray reagent for the detection of the separated phenolic constituents of cannabis. The Rf values of the five constituents are 0.24, 0.51, 0.67, 0.91 and 0.94. - Procedure. Extract the sample with benzene, evaporate to a small volume and spot on thin-layer plates of silica gel G. Develop the plates in a solvent mixture of benzene/ chloroform (3:7). Dry the chromatograms in air, spray with 1-nitroso-2-naphthol (in conc. H2SO4) and heat at 100~ to obtain intense blue (or greyish blue) spots. - Curt. Sci. 46, 140 (1977). Central Forensic Sci. Lab., Govt. India, Hyderabad (India) M. Katyal

Direct use of ion-exchange papers in hemagglutination-inhibition tests for drug abuse. G.J. Alexander.

Nachw. yon Morphin, Codein, Methadon, Phenobarbital; HLmagglu- tinations-Hemmtest. - Wird Kationenaustauscherpapier (SA-2, Reeve Angel, 6 x 6 cm) in Ham getaucht, welcher Morphin, Codein, Metha- don oder Phenobarbital enth~ilt und 50 p.l eines spezifischen Antise- rums (Technam Inc.) aufgebracht, so wird dieses gebunden. Die posi- tive Reaktion ist nach 1-2 h erkennbar. Die Nachweisgrenze liegt bei ca. 0,5 rag/l, die Handhabung ist sehr einfach. - Clin. Chem. 22, 1105 - 1106 (1976). Neurotoxieol. Res. Unit, New York State Dept. o f Mental Hyg., Bronx, NY (USA) F. Kreuzig

Fresenius Z. Anal. Chem. , Band 289 (1978)

General procedure for the isolation and identification of 6-a- and 6-fl- hydroxy metabolites of narcotic agonists and. antagonists with a hy- dromorphone structure. E.J. Cone.

Best. yon Hydronaorphonverbindungen, Narcotica in Ham; Chromate- graphic; Metabolite. - Ina Verlauf yon Stoffwechseluntersuchungen yon Wirkstoffen mat Hydromorphonstruktur (z.B. Naloxon) wird ein Verfahren zur Trennung, Identifizierung und Isoliemng yon 6-a- und 6~-Hydroxymetaboliten ans Urin entwickelt. Die Proben werden saner hydrolysiert, mit Chloroform extrahiert und diinnschicht-chromatographiseh auf Gelman SG oder SA-Platten mit Chloroform, welches mat Ammoniak ges~ittigt ist, getrennt oder gas-chromatographisch auf S~iulen mat 3% OV-17 oder 3% OV-225 auf GasChrona Q analysiert. Die S~iulen werden isotherm bei 250~ betrieben. Zur gas- chromatographischen Analyse werden am besten die Silylderivate der Epimeren eingesetzt. - J. Chromatogr. 129, 355 - 361 (1976). Nat. Inst. Drug Abuse,Div., Res., Addict. Res. Center, Lexington, Ky. (USA) R.H. Sterzel

A method for the rapid determination of trace organic halogens in lipids. R.H. White and LJP. Hager.

Best. yon Halogenorganoverbindungen in Lipiden; Spektralphoto- metric; nach Verbrennung. - Biologische Substanzen werden aufihre lipid-16slichen, halogenierten organischen Verbindungen untersucht. Dazu werden die biologischen Proben mAt einer Methanol/Toluol- Misehung extrahiert; nach Verteilung mit Wasser zur Entfemung der anorganischen Halogenide wird die Toluolschicht auf ihren Halogenge- halt untersucht. Das geschieht in einem Quarzverbrennungsrohr, in dem die Substanz in einer Sauerstoff/Wasserstoff-Flamme verbrannt wird; die entstehenden Reaktionsgase werden in Form eines dtinnen Films kondensiert. Der Film wird durch Zusatz yon Natriumdodecyl- sulfat stabilisiert, eine passende colorimetrische Reagensl6stmg zuge- setzt, der Film blasenfrei gesammelt und der colorimetrischen Aus- wertung zugefdart. Die lipid-16slichen Halogene k6nnen mAt diesem Verfahren bis hinunter zu 1 #g/g nassen Gewebes bestimmt werden. - Anal. Biochem. 78, 52 - 56 (1977). Dept. Biochem., Univ. II1., Urba- na, Ill. (USA) R.H. Sterzel

Detection and determination of organophosphoms insecticides in tissues by thln-layer chromatography. S.N. Tewari and S.P. Harpa- lani.

Best. yon Pesticiden, phosphorhaltig in Biolog. Gewebe; Chromatogra- phic, Diinnschicht. - Die toxikologische Analyse 12 gebr~iuchlicher phosphororganischer Insecticide wird beschrieben. Diese werden aus den Geweben extrahiert. Die Diinnschicht-Chromatographie wixd auf Silicagel-Platten in 25 verschiedenen Fliet~mittelsystenaen durchgeftihrt. Die Flecken werden entweder im UV-Lieht oder nach Sprikhen mAt AgNO3 oder PdC12 sichtbar gemacht; aut~erdem werden noch eine Reihe anderer chromogener Spriibxeagentien eingesetzt. Die ethalte- hen Rf-Werte sind tabelliert. Die Verteflung yon Insecticiden in menschlichem KOrpergewebe wird in 5 Vergiftungsfallen dutch Xthylparathion, Malathion, Dimethoat, Sumithion und Phosphami- don untersucht. - J. Chromatogr. 130, 229 - 236 (1977). Toxieol. Div., Chem. Examiner's Lab., Agra (Indien) R.H. Sterzel

Documents

3. Biochemische und klinische Analyse