Auf der Suche nach einem neuen Thermocycler? TPersonal ... · weit verbreitete Methode dafür ist die Turbidimetrie. Im folgenden Artikel beschreiben wir eine geeignete Methode der

OKTOBER 2012 GERÄTE .............................................. 1 ZELLKULTUR ...................................... 5 DIAGNOSTIK ....................................... 7 FORSCHUNGSREAGENZIEN .............. 11

Szabo-Scandic _______________________________________________________________________________________________________________________

1

GERÄTE

Auf der Suche nach einem neuen Thermocycler?

Thermocycler von BIOMETRA wurden entwickelt,

um einen weiten Bereich von Laborbedürfnissen ab-

zudecken – es ist somit einfach, das richtige System

für Sie zu finden.

Wählen Sie aus 4 Kategorien:

TProfessional

Die beste Block-Uniformität

Hohe Geschwindigkeiten und kurze PCR-Läufe

Einfache Programmierung und großes graphisches

Display

350 Programme

Gradienten PCR als Option

TProfessional TRIO

Drei unabhängige Cycler in einem Gerät

Großes Display für einfache Programmierung

Schnelle Aufheiz- und Kühlraten: 5°C/sec

USB-Port für Daten- und Programmaustausch

TPersonal

Kompakter und leistungsstarker Cycler

Kleine Stellfläche

48 Steckplätze

Drei Blockformate (inkl. Kombi-Block) erhältlich

TOptical

High-Speed Silber-Block

Schnelles Wechselblock-System

Einfaches Aufrüsten Ihres TProfessional mit dem

Real-Time PCR Blockmodul, wahlweise auch mit

Gradientenfunktion

Für weitere Informationen wenden Sie sich bitte an

Mag. Norbert Wahler

Tel.: 01/4893961-55

[email protected]

Research Product NEWS ______________________________________________________________________________________________ GERÄTE

2 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Zwei Patente, die BIOTEK einzigartig machen

Hybrid Technology™

Ultrasconic Advantage™

Multi-Mode-Reader von BIOTEK

Die Hybrid-Technologie von BIOTEK wurde im Juli

2012 offiziell patentiert (US patent 8,218,141).

Diese Technologie umfasst zwei alternierende

Lichtwege und ist in den Geräten Synergy NEO (HTS

Multi-Mode-Reader), Synergy H4 und H1 Hybrid-

Multi-Mode-Reader eingebaut. Mit Hilfe der Hybrid-

Technologie kann der Lichtweg durch ein Filter-

basiertes System oder durch ein Monochroma-

torensystem bei entsprechender Auswahl der Wel-

lenlänge gesteuert werden. Man erreicht somit opti-

male Performance und Flexibilität für einen weiten

Bereich von Applikationen an Fluoreszenzassays.

Die Multi-Mode-Reader von BIOTEK sind modulare

Plattformen und beinhalten Fluoreszenz Intensitäts-,

UV-VIS-Absorbanz, Lumineszenz-, TRF-, TRF-FRET-

und FP-Detektionsmöglichkeiten.

Mikrotiterplattenwaschgeräte von BIOTEK

Mit dem europäischen Patent (EP 2 093 572 B1),

das das im Plattenwaschgerät eingebaute Ultra-

schallbad für Reinigungs- und Wartungsvorgänge

umfasst, behält BIOTEK weiterhin den Technologie-

vorsprung im Bereich Mikrotiterplatten-Waschgeräte.

Diese Technologie, die unter dem Markennamen

Ultrasonic Advantage™ bekannt ist, wird in den Ge-

räten 405 Touch, 405 LS, ELx405 Select Deep

Well und EL406 (Washer/Dispenser) verwendet.

Ultrasonic Advantage übernimmt die Reinigung der

Waschnadeln. Spezielle Programme, die auch über

Nacht durchgeführt werden können, reinigen die

Nadeln in einem Ultraschallbad und durchspülen

diese mit Waschflüssigkeiten. Das Gerät wird somit

automatisch auf nachfolgende Assays vorbereitet.


Dipl.Ing. Danut Laes

Tel.: 01/4893961-43

[email protected]

oder an

Mag. Norbert Wahler

Tel.: 01/4893961-55

[email protected]

Zellwachstumsbestimmun-gen im 2µL-Volumen

Die Produktion ausreichender Biomasse oder Einhal-

tung optimaler Kulturbedingungen setzt eine genaue

Bestimmung des zellulären Wachstums voraus. Eine

weit verbreitete Methode dafür ist die Turbidimetrie.

Im folgenden Artikel beschreiben wir eine geeignete

Methode der Zellquantifizierung im 2µL-Volumen-

Format mit Hilfe eines Mikrotiterplatten-

Spektralphotometers für verschiedene Zelltypen.

GERÄTE ______________________________________________________________________________________________ Research Product NEWS

Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

3

Einleitung

Die Kultivierung von Zellen ist ein wichtiger Prozess

für die Anreicherung vieler Zelltypen, zu denen Bak-

terien, Hefen und tierische Zellen zählen. Diese stel-

len gewissermaßen das Ausgangsmaterial für diverse

biologische Prozesse dar: z.B. für die Produktion al-

koholischer Getränke, die Erstellung von in-vitro

Modellen für die Wirkstoffforschung und toxikologi-

sche Untersuchungen.

Während sich die verwendeten Zelltypen in ihrer

Art der Kultivierung stark unterscheiden, ist die Me-

thode der Quantifizierung einheitlich. Man verwen-

det in der Regel Küvetten und bestimmt die optische

Dichte bei 600 nm mittels Turbidimetrie. Diese Wel-

lenlänge wird fast immer bevorzugt, da die meisten

Bestandteile des Kultivierungsmediums in diesem

Bereich nicht absorbieren. Für die Analyse des Zell-

wachstums können die Messwerte der zu verschie-

denen Zeitpunkten entnommenen Proben mit Hilfe

von Wachstumskurven extrapoliert werden, da der

Anstieg des Absorptionssignals proportional zur Zu-

nahme der Zelldichte steht.

Material und Methoden

Daudi Zellen

Verwendet wurden humane periphäre Daudi Zellen,

ATCC (P/N CCL-213), kultiviert als Suspensionsform

in RPMI-Medium mit 10% FBS, 1x NEAA (non essi-

ential amino acids) und 1x P/S/G (Penicil-

lin/Streptomycin/Glutamin). Eine Aufteilung der kul-

tivierten Zellen wurde alle 2-3 Tage 1:10 (V/V) vor-

genommen und gegebenenfalls durch Zentrifugation

geerntet. Die Zellzahl wurde mittels Hämatozytome-

ter bestimmt. Für turbidimetrische Messungen wur-

den 1:2 (8 Punkt-Kurve) Verdünnungsstufen in

DPBS hergestellt. Die Proben wurden in Duplikaten

in die Microspots der Take3-Platte aufgetragen und

bei 600 nm mit Hilfe des EON Mikrotiterplatten

Readers gemessen (Datenauswertung mittels Gen5

Data-Analysis Software). Das Phasenkontrast-

Hellfeld-Bild von 2.000 Daudi Zellen in einem

Microspot wurde mit einem 4x Mikroskop-Objektiv

aufgenommen.

Hefezellen

Ein Hefestamm von Wyeast Laboratories wurde in

YPD-Medium kultiviert. Übernachtkulturen wurden

in 250 mL Erlenmeyerkolben bei 30°C bei orbitalem

Schütteln (125 rpm) weiterkultiviert. Die Zellzahl

der Übernachtkulturen wurde mit Hilfe eines Häma-

tozytometer quantifiziert und 1:2 (10 Punkt-Kurve)

Verdünnungsstufen in YPD-Medium für die turbidi-

metrische Messung hergestellt.

Bakterien

Der E.coli Stamm JM109 und E.Coli JM109 trans-

formiert mit dem Plasmid pTRACER-CMV2, wurden

in LB-Medium kultiviert, Übernachtkulturen in 15

mL Röhrchen bei 37°C weiterkultiviert. Die CFU-

Bestimmung (Bestimmung der colony forming units)

der Übernachtkulturen erfolgte nach Miles und Mis-

ra durch Ausplattieren von 50 µL Aliquots einer

1:100 Verdünnungreihe auf LB/Agarplatten. 1:2 (8

Punkt-Kurve) Verdünnungsstufen der Übernachtkul-

tur wurden für die turbidimetrische Messungen vor-

bereitet.

HepG2 Zellen

Die Zelllinie HepG2 (ATCC, P/N HB-8065) wurde in

DMEM (10% FBS und 1% P/S) kultiviert. Die Be-

stimmung der Zellzahl wurde mittels Hämatozyto-

meter nach Trypsinisierung und Resuspendierung in

DPBS-Puffer durchgeführt. 1:2 (8-Punkt-Kurve)

Verdünnungsstufen wurden für die turbidimetische

Messungen vorbereitet.

Ergebnis

Um eine genaue Bestimmung der Zelldichte zu er-

reichen, ist für jeden einzelnen Zelltyp eine eigene

Kalibrationskurve durch Messung der Verdünnungs-

stufen bei 600 nm notwendig. Aufgrund morpholo-

gischer Gegebenheiten des jeweiligen Zelltyps wird

das Licht unterschiedlich gestreut. Die Kalibrations-

kurven für Daudi Zellen, Hefe, Bakterien und HepG2

Zellen sind in Abb.1 abgebildet. Die angegebenen

Daten zeigen wie viele Zellen für eine genaue Mes-

sung in der Take3-Platte notwendig sind. Abb.2

zeigt ein Bild eines einzelnen Microspot der Take3-

Platte, der etwa 2.000 Daudi Zellen (pipettiertes

Volumen 2µL) enthält. Die Kalibrationskurven aus

Abb.1 können für die Bestimmung der Zelldichte in-

nerhalb der Kultur-Wachstumsphase verwendet

werden.

Research Product NEWS ______________________________________________________________________________________________ GERÄTE

4 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Abb.1: Kalibrationskurven der verschiedenen Zelltypen

Abb.2: Mikroskopische Phasenkontrastaufnahme von

Daudi Zellen von einem 2 mm Microspot bei einer opti-

schen Dichte von 4 mOD.

Die genaue Beobachtung des Zellwachstums ist

oftmals vor bestimmten experimentellen Eingriffen

notwendig, z.B. vor der Induktion einer Protein-

Überexpremierung bei Bakterien oder der Bestim-

mung von optimalen Wachstumsbedingungen wäh-

rend des Ablaufs eines Assays. In einem Zeitintervall

von 60 Minuten wurden 10 Stunden lang Proben

aus einer JM109 Kultur entnommen und die opti-

sche Dichte bei 600 nm einerseits in der Take3-

Platte und andererseits in einer Mikrovolumen-

Küvette gemessen (Abb. 3). Die Überlagerung der

Wachstumskurven zeigt eine hervorragende Korrela-

tion der zwei Methoden. Die typischen Phasen einer

Bakterienwachstumskurve können beobachtet wer-

den: lag-, log- und stationäre Phase bei frühen, mitt-

leren und späteren Zeitpunkten des Messintervalls.

Die Kurve zeigt die Möglichkeit der Konzentrations-

messung an Bakterien auf – und zwar im Bereich

von 2-3x109 Bakterien/mL (0,8-1,0 OD in einer

Küvette, 1 cm Pfadlänge, äquivalent zu 60-70 mOD

in der Take 3 Platte, 0,5 mm Pfadlänge), welcher

oft für die Induzierung bestimmter Proteinexpressi-

onssysteme verwendet wird.

Abb.3: Wachstumskurve von MJ109, Probenentnahme

nach jeder Stunde und Messung bei 600 nm in 500 µL-

Mikroküvette bzw. Take3-Platte

Zusammenfassung

Turbidimetrie ist eine gängige Methode zur Analyse

von Zellwachstum. Die Verwendung eines Mikrovo-

lumenformats bietet den Vorteil, die Messung

schnell und nahezu unter Bewahrung des gesamten

Kulturansatzes durchzuführen, da nur ein geringes

Aliquot benötigt wird. Die Take3-Platte in Verbin-

dung mit dem EON Mikrotitterplatten Spektralpho-

tometers (mit optionalen Küvetten-Port) ist ein fle-

xibles System, das Wachstumskurven verschiedener

Zelltypen messen kann.


Dipl.Ing. Danut Laes

Tel.: 01/4893961-43

[email protected]

oder an

Mag. Norbert Wahler

Tel.: 01/4893961-55

[email protected]

ZELLKULTUR __________________________________________________________________________________________ Research Product NEWS

Szabo-Scandic _______________________________________________________________________________________________________________________

5

ZELLKULTUR

GEN3 – neue self sealing Filterspitzen von AXYGEN

Unser Lieferant AXYGEN,

der zu CORNING gehört,

stellt mit der GEN3-Serie

eine Pipettenspitze mit

neuer Filtertechnologie

vor.

Die Spitzen verfügen über das einzigartige Multi-

Barrier Design des Filters. Das bedeutet, dass der

Filter aus drei Lagen aufgebaut ist. Der self-sealing-

Filter ist zwischen zwei Polyethylen Filtern eingebet-

tet. Dadurch werden Aerosole und Flüssigkeiten zu-

verlässig am Durchtritt gehindert und die Gefahr ei-

ner Kreuz-Kontamination reduziert. Durch den ein-

zigartigen Filteraufbau kann auch keine PCR-

Inhibierung mehr stattfinden. Darüber hinaus wer-

den die Spitzen mit der Maxymum Recovery Tech-

nologie hergestellt. Dadurch wird die Menge an Pro-

be oder Flüssigkeit, die in der Spitze haften bleibt,

auf ein Minimum reduziert. Diese Technologie redu-

ziert auch das Risiko einer DNA- Denaturierung.

Die Spitzen sind in folgenden Größen erhältlich:

10µL, 20µL, 200µl und 1000µL. Geliefert werden

die Spitzen steril in Racks, sie sind DNAse/RNAse-

und pyrogen-sicher.

Die Spitzen passen auf alle gängigen Pipetten, wir

informieren Sie gerne.

Nachfolgend die Bestellnummern:

Artikelnummer Beschreibung Menge

AXYGEN3-10-L-R-S GEN3 10µL Multi-Barrier Pipettenspitze

5x10 Racks zu je 96 Spitzen







Von den Spitzen sind unverbindliche Muster verfüg-

bar, bitte kontaktieren Sie uns.


Dr. Andreas Bergmann

Tel.: 01/4893961-40

[email protected]

GentleFit™ Filter Spitzen

Eine weitere Neuheit von AXYGEN sind die GentleFit

Filterspitzen. Das besondere an diesen Spitzen ist,

dass sie aus zwei unterschiedlichen Materialien ge-

fertigt werden. Die Spitze selbst wird aus glasklarem

Polypropylen erzeugt, es sind Graduierungen einge-

lassen. Oben, dort wo die Spitzen von der Pipette

aufgenommen werden, ist ein elastischer Kopf aus

TPE (thermoplastic elastomer) aufgesetzt. Durch

diesen einzigartigen Aufbau sitzen die Spitzen opti-

mal auf den Pipetten. Die notwendigen Kräfte zur

Aufnahme und zum Abwurf werden deutlich redu-

ziert. Ideal sind die Spitzen natürlich für Mehrkanal-

Pipetten.

Research Product NEWS __________________________________________________________________________________________ ZELLKULTUR

6 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Artikelnummer Beschreibung Menge

AXYTLF-10-R-S 10µL GentleFit Filter Tip

5x 10 Racks zu je 96 Spitzen





Wir stellen Ihnen gerne unverbindliche Muster zur

Verfügung.



Tel.: 01/4893961-40

[email protected]

AXYGEN – Roboter-Spitzen für Hamilton Microlab® STAR und Nimbus®

Unser zu CORNING gehörender Lieferant AXYGEN

komplettiert seine Produktpalette der Roboter-

Spitzen für Hamilton. Es sind nun auch Spitzen im

96well-Format verfügbar und die Volumensbereiche

10µL, 50µL, 300µL und 1000µL werden abge-

deckt. Zurzeit sind nicht-sterile, leitfähige Spitzen

verfügbar, das Sortiment wird noch um sterile leitfä-

hige und klare Spitzen erweitert. Ähnliches gilt für

die Verpackung. Begonnen wird mit den „hanging

racks“, später werden die „frame racks“ und die

„nested racks“ dazukommen.

Wenn Sie an einer Alternative

zu Ihren bisherigen Spitzen in-

teressiert sind oder ein zweiter

Anbieter als Risikominimierung

für Sie ein Thema ist kontaktie-

ren Sie uns bitte. Selbstver-

ständlich stellen wir unverbind-

liche Muster zum Testen zur

Verfügung.



Tel.: 01/4893961-40

[email protected]

DIAGNOSTIK __________________________________________________________________________________________ Research Product NEWS

Szabo-Scandic _______________________________________________________________________________________________________________________

7

DIAGNOSTIK

In unserer April-Ausgabe des Newsletters haben wir

den Quick FISH vorangekündigt - jetzt möchten wir

die Verfügbarkeit des ersten Produkts bekanntgeben.

Ab 01.10.2012 steht der Staphylococcus Quick

FISH BC-Kit zur Verfügung. Mit diesem Produkt

können Sie in 20 Minuten Staphylococcus aureus

und/oder die Koagulase-Negativen-Staphylokokken

(KNS) mit einer 100% Sensitivität aus positiven

Blutkulturen nachweisen.

Die Handhabung ist sehr einfach. Mit wenigen

schnellen Handgriffen erhält man Ergebnisse, die an

den Kliniker weitergeleitet werden.

Fixieren/Hybridisieren

Gerne organisieren wir bei Ihnen eine Produktprä-

sentation mit Demonstration zur Abarbeitung des

QuickFISH Kits.

Bestellinformationen:

Art-Nr: Bezeichnung: Verpackungs-einheit

ADXQF STABC1-50

Staphylococcus QuickFISH BC Kit

50 Tests (PNA-Probes)

ADXQF FIXBC1-50

QuickFISH Fixation Kit 50

50 Tests (Slides + Fixation Reagents)


Anna Ahlbom

Tel.: 01/4893961-58

[email protected]

Die neu entwickelten CoproStrip™ Testkassetten der

Firma SAVYON sind chromatographische Immun-

Assays zum qualitativen Nachweis von Cryptospori-

dium oder/und Giardia Antigenen direkt aus huma-

nen Stuhlproben als Hilfestellung zur Diagnostik von

cryptosporidiosis und giardiasis.

Vorteile:

Neues Design beim

Kassettenformat

Deutliche visuelle

Ergebnisse;

grün/rot/blau-gefärbte

Test/Kontrolllinien

Hohe Sensitivität und

Spezifität

Inklusive Probenröhrchen

Ergebnisse in nur

wenigen Minuten

Ablesen

Research Product NEWS __________________________________________________________________________________________ DIAGNOSTIK

8 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Handhabung:

Interpretation:

Leistungsdaten:

Produktbezeichnung Sensitivität Spezifi-tät

CoproStripTM Giardia >99% >99%

CoproStripTM Cryptosporidium >99% >99%

CoproStripTM Giardia / Cryptosporidium

98% >99%



SAV41217 CoproStrip™ Giardia 20 Tests

SAV41218 CoproStrip™ Cryptos-poridium

20 Tests

SAV41219 CoproStrip™ Giardia / Cryptosporidium

20 Tests


Anna Ahlbom

Tel.: 01/4893961-58

[email protected]

Unsere Partner-Firma CLONIT – hauptsächlich be-

kannt für End-Point PCR-Reagenzien - verfügt über

einige interessante und ausgefallene Real-Time

PCR-Kits für Gentypisierung; einer davon ist:

Interleukin 28B

Ein Marker für Resistenz gegen Interferon (Lambda-

3) in der Behandlung von Hepatitis C Infektionen.

Hintergrund:

Einige Polymorphismen im IL28B-Gen, die für

Lambda-3 kodieren, scheinen wichtige Vorhersager

für den Therapieerfolg bei chronischer Hepatitis C

(HCV) Infektion zu sein. In der Genomweiten Asso-

ziations-Studie hat man zwei hauptverantwortliche

Polymorphismen, die im HCV Infektionsresponse in-

volviert sind nachgewiesen: rs8099917 Genotyp

(TT,GT,GG) und rs12979860 Genotyp (CC,TC,TT).

In der kaukasischen Population gibt es etwa 40%

Carrier des ungünstigen rs8099917 Genotyps.

Produkt:

IL-28B Real-Time-PCR-Kit, CE-IVD zugelassen, ist

ein qualitativer Test zur allelen Abgrenzung von

rs8099917 und rs12979860 Polymorphismen in

EDTA-Vollblut.

Das Prozedere ermöglicht die Amplifikation von

Wild-Typ- und Mutanten-Allelen von IL-28B für bei-

de Polymorphismen. Die Ergebnisse werden auf ei-

nen Scatterplott - die Fluoreszenz von Mutanten Al-

lelen wird auf der Y-Achse und die Fluoreszenz von

Wild-Typ Allelen auf der X-Achse aufgetragen. Drei

mögliche Genotypen; Homozygot Wild-Typ, Ho-

mozygot Mutant und Heterozygot Mutant werden für

beide Polymorphismen nachgewiesen.

Die Analyse kann mit den gängigsten Real-Time

PCR Analysatoren durchgeführt werden.

Analyse der Ergebnisse:

Der Assay ermöglicht die Verifizierung des Response

einer Interferon-Therapie bei HCV-Patienten nach

dem folgenden Schema:

DIAGNOSTIK __________________________________________________________________________________________ Research Product NEWS

Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

9

rs8099917 rs12979860 Therapie Response

Genotyp TT-Wild Typ CC-Wild Typ Hoher Therapieerfolg

Genotyp GT-Heterozygot CC-Wild Typ

Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp TT-Wild Typ CT-Heterozygot

Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp TT-Wild Typ TT-Mutant

Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp GG-Mutant CC-Wild Typ

Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp GT-Heterozygot CT-Heterozygot

Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp GT-Heterozygot TT-Mutant

Zunehmende Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp GG-Mutant TC-Heterozygot

Zunehmende Reduzierung

des Therapieerfolgs

Genotyp GG-Mutant TT-Mutant Niedriger Therapieerfolg

Studien über die genomischen Assoziationen zeigen,

dass TT Genotyp in rs8099917 Polymorphismus

und CC Genotyp in rs12979860 Polymorphismus,

zu einer besseren pharmakologischen Therapieant-

wort mit Interferon Lambda-3 bei HCV-Patienten as-

soziiert sind. Im Gegensatz dazu wirken GT oder GG

Genotypen in rs8099917 Polymorphismus und TC

oder TT Genotypen in rs12979860 Polymorphismus

als prädisponierende Faktoren für eine begrenzte

oder partielle Antwort in der pharmakologischen

Therapie.



CLPRT-56 Interleukin 28 B 48 Tests

Weitere Gentypisierung-Kits sind:

Follikel-Stimulierender Hormon Rezeptor

(FSH-R): Gentypisierung von A919/thr307ala

und A2030G/Asn680Se

Zöliakie: Gentypisierung von HLADQ2 und

HLADQ8

Über diese werden wir in der nächste Ausgabe des

Newsletters berichten.


Anna Ahlbom

Tel.: 01/4893961-58

[email protected]

ImmcoStripeTM hsp-70 Anti-körper Line Immunoassay (LIA)

Neuer Line Immunoassay zum Nachweis von Auto-

immunen Hearing Loss.

IMMCO DIAGNOSTICS hat einen neuen LIA ent-

wickelt, welcher dem hochspezifischen Nachweis

jener Antikörper dient, die mit dem Autoimmunen

Hearing Loss assoziiert sind.

Erläuterung

Ungefähr 15.000 Menschen pro Jahr sind von ei-

nem idiopathischen sensorineural hearing loss

(SNHL) betroffen. Die Ursache für SNHL kann durch

eine Vielzahl von Faktoren bedingt sein. Für die idi-

opathische SNHL wird der Einfluss von vaskulären,

viralen und autoimmunen Faktoren angenommen.

Testprinzip

Der neue ImmcoStripeTMhsp-70 LIA ist unkompli-

ziert in der Anwendung und erlaubt eine einfache vi-

suelle Interpretation. ImmcoStripeTMhsp-70 basiert

auf gereinigtem, rekombinanten und induzierbaren

hsp-70 Antigen. Das hsp-70 Antigen ist, wie auch

das Konjugat, Serum und die Cut-off Kontrolllinien,

auf Nitrozellulosemembranstreifen immobilisiert. Zur

Testdurchführung werden die Streifen mit verdünn-

tem Patientenserum inkubiert. In positiven Seren

binden die Antikörper spezifisch an das rshp-70 Pro-

tein auf dem Streifen. Die Streifen werden gewa-

schen und das rekonstituierte Konjugat wird hinzu-

gefügt. Nach der Inkubation und den Waschschrit-

ten wird das gebrauchsfertige Substrat hinzugefügt.

Während der Inkubation (Konjugat/Substrat Bin-

dung), ruft eine chromogene Reaktion eine sichtbare

violette Linie hervor (Serum, Konjugat und cut-off

Linie). Ist die Probe positiv für anti-hsp70-

Antikörper, zeigt die Reaktion eine intensivere Linie

als die cut-off Linie. Die Reaktionsergebnisse können

einfach visuell interpretiert werden.

Research Product NEWS __________________________________________________________________________________________ DIAGNOSTIK

10 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Abb.: Schema des hsp70 LIA

Produktinformation

Produktbeschreibung Kat.Nr.

ImmcoStripeTM hsp-70 LIA ICO6001


Dr. Grazia Kocian

Tel.: 01/4893961-32

[email protected]

Exklusiv bei ONELambda, AT1R bietet einen neuen Ansatz des Transplantations Monitoring

AT1R

ELISA zur quantitativen Bestimmung von Antikör-

pern gegen den Angiotensin-II-Rezeptor-Subtyp1

(AT1R) in Serum und Plasma.

Die Bestimmung von Biomarker Antikörpern, wel-

che sich gegen Angiotensin II Typ I Rezeptor (AT1R)

bilden, ermöglicht einen neuen Ansatz einer HLA-

unabhängigen transplantationsdiagnostischen Tes-

tung.

Zusammenfassung und Erläuterung

AT1R dient der routinemäßigen Überwachung von

AT1 und ist als Marker zur Differentialdiagnostik der

Sklerodermie und zur Vorhersage vaskulärer Absto-

ßungsreaktionen bei Organtransplantationen nicht

mehr wegzudenken. Die Bedeutung zeigt sich durch

das Vorkommen in Hauptorganen wie Herz, Niere

Leber und dem Gefäßsystem. Angiotensin II ist ein

Peptidhormon, das zu Vasokonstriktion, erhöhtem

Blutdruck und Freisetzung von Aldosteron aus der

Nebennierenrinde führt. Dadurch, dass AT1R in den

meisten Organen nachweisbar ist, lässt dies einen

möglichen Rückschluss auf die Bedeutung von Anti-

AT1R-Antikörpern als ein Biomarker für Organtrans-

plantationen und eine Antikörper-induzierte Absto-

ßung zu.

Eigenschaften des Tests

Detektion von anti-AT1R Antikörpern

ELISA-basierter Test

Standards und Kontrollen für reproduzierbare und

zuverlässige Aussage sind inkludiert

Einfache Ergebnisinterpretation

Testprinzip

Der Anti-Angiotensin-Rezeptor-EIA-Test ist ein Anti-

körper-Screening Test. Die Autoantikörper werden

mit einem POD markierten Anti-Human IgG-

Antikörper nachgewiesen. Bei der folgenden en-

zymatischen Substratreaktion korreliert die Intensität

der Farbe mit der Konzentration und/oder Avidität

des Anti-Angiotensin-II-Rezeptor-1- Antikörpers.

Produktinformation

Produktbeschreibung Kat.Nr.

EIA for quantitative determination of anti-AT1R antibodies

ONEEIA-AT1R

FORSCHUNGSREAGENZIEN _____________________________________________________________________________ Research Product NEWS

Szabo-Scandic _______________________________________________________________________________________________________________________

11

Referenzen

Dragun D. Humoral responses directed against non-

human leukocyte antigens in solid-organ transplanta-

tion.Transplantation. 2008;86(8):1019-25

Dragun D. The role of angiotensin II type 1 receptor-

activating antibodies in renal allograft vascular rejec-

tion. Pediatric nephrology (Berlin, Germany).

2007;22(7):911-4.

Dragun D, Müller DN, Bräsen JH, et al. Angiotensin II

type 1-receptor activating antibodies in renal-allograft

rejection. The New England journal of medicine.

2005;352(6):558-69.

Reinsmoen NL, Lai C-H, Heidecke H, et al. Anti-

angiotensin type 1 receptor antibodies associated with

antibody mediated rejection in donor HLA antibody

negative patients. Transplantation.

2010;90(12):1473-7.


Dr. Grazia Kocian

Tel.: 01/4893961-32

[email protected]

FORSCHUNGSREAGENZIEN

RTP® Technology – Ready to Prep, von STRATEC MOLECULAR

RTP Technologie: die einfachste Methode für DNA/RNA Aufbereitung von pathogenen Proben

Der RTP Produkt Bereich basiert auf einer einzigar-

tigen nicht-chaotropen Chemie, die von Stratec

Molecular entwickelt worden ist. Er führt zu einer

deutlichen Erleichterung der DNA/RNA Aufreinigung

von pathogenen Proben.

Alles für DNA/RNA Aufbereitung – Lysis Puffer,

Proteinase K und/oder Lysozym, Carrier Nukleinsäu-

ren (für die Verbesserung der Ausbeute bei geringen

Target-Mengen) und interne DNA Extraktionskontrol-

le (für die Überwachung der Extraktionseffizienz und

PCR-Amplifikation) ist in einem einzigen Extrakti-

onsröhrchen enthalten. Lyophilisiert, ready-to-use

und stabil bei Raumtemparatur.

Vorteile

Schnellere und viel einfachere DNA und/oder

RNA Probenaufbereitung

Ready-to-use, alle Komponenten liegen

lyophilisiert im Extraktionsröhrchen vor:

Lysis Puffer

Lytische Enzyme

Carrier Nukleinsäuren

Interne Extraktions/PCR Kontrolle

Lagerung bei Raumtemperatur

Sicheres Probenhandling aufgrund weniger

Hands-On-Schritte

Folgende Kits, basierend auf der RTP Technologie,

sind erhältlich:

RTP Pathogen Kit

RTP Bacteria DNA Mini Kit

RTP Mycobacteria Kit

RTP Virus DNA/RNA Mini Kit

RTP Virus DNA/RNA Supersense Kit

InviMag Bacteria DNA Mini Kit

InviMag Bacteria DNA Mini Kit/ KFmL

InviMag Virus DNA/RNA Mini Kit

InviMag Virus DNA/RNA Mini Kit/ KFmL

InviMag Virus DNA/RNA Mini Kit/ KF96


Mag. Norbert Wahler

Tel.: 01/4893961-55

[email protected]

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18946337













http://www.invitek.de/e1531/e1658/e2414/e2678/e6976/index_eng.html





http://www.invitek.de/e1531/e1658/e3410/e4791/e4960/e4961/index_eng.html

http://www.invitek.de/e1531/e1658/e3410/e7041/e5209/e5596/e5597/index_eng.html

http://www.invitek.de/e1531/e1658/e3410/e4791/e4960/e4990/index_eng.html



Research Product NEWS _____________________________________________________________________________ FORSCHUNGSREAGENZIEN

12 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Als österreichischer Handelspartner der Firma

LONZA möchten wir Ihnen gerne folgendes Angebot

unterbreiten:

LONZA SeaKem® LE Agarose - Der Standard für Routine-Analysen

Vorteile:

Großer Einsatzbereich: 100bp bis 23kb

Hohe Gelfestigkeit, ideal zum Blotten

Absolute Lot-zu-Lot Konsistenz

Anwendungsbereiche:

Fragment-Auftrennung in einem weiten

Größenbereich

Southern- und Northern-Blotting

PCR - größer als 1 kb

Immunpräzipitation

Baculovirus-Screening und Colony Lifts

Bestelldaten:

LON50004, SeaKem® LE Agarose, 500g

Sonderpreis: pro Stück €129. Ab 5 Stück in einer

Bestellung: Sonderpreis pro Stück €119.

Nutzen Sie diese Gelegenheit!

Es sind auch unverbindliche Muster verfügbar!

Angebot gültig bis 15.12.2012; die angegebenen

Sonderpreise verstehen sich netto, keine weiteren

Rabatte möglich. Bei LONZA-Bestellungen unter

€350 netto werden €28 Versandkosten berechnet.



Tel.: 01/4893961-40

[email protected]

LONZA Nucleofector™ PLUS

Frisch geerntete oder isolierte Zellen können im Nu-

cleofector Plus Reagenz kryokonserviert werden.

Durch das Entkoppeln der Methoden “Bereitstellen

von Zellen” und “Nucleofection” wird der experimen-

telle Ablauf vereinfacht. Die Zellen werden gewon-

nen, gelagert und für einen späteren Zeitpunkt der

Transfektion ready-to-use vorbereitet. Größere Bat-

ches an Zellen können mit Nucleofector Plus kryo-

konserviert werden, sodass der Anwender Variatio-

nen im Transfektionsergebnis aufgrund Batch-zu-

Batch-Unterschiede eliminiert.

Nucleofector Plus kann in Verbindung mit nahezu

allen erhältlichen Nucleofector Kits für Primärzellen

und Zelllinien verwendet werden. Gleichgültig mit

welchem Kit Sie arbeiten, geben Sie anstelle des

Standard-Supplements (Bestandteil des Nucleofector

Kits) Nucleofector Plus zu den Nucleofector Reagen-

zien dazu und stellen Sie kryokonservierte ready-to-

transfect kompetente Zellen her.

Minimierung von Variationen, verursacht durch

Donor-Variationen, Isolationsprozess oder Zell-

kultur

Vereinfachung des Arbeitsprozesses

Ständige Verfügbarkeit von kompetenten Zellen

Vergleichbare Nucleofection-Performance bei

frischen und kryokonservierten Zellen

Abb.: Das Diagramm zeigt die Performance der Transfek-

tion im Vergleich von frischen und gefrorenen Zellen,

kryokonserviert im Nucleofector-Reagenz, ergänzt mit

Nucleofector Plus.

LONZA bietet 4 verschiedene Nucleofector Plus

Supplements in unterschiedlichen Abfüllgrößen an.


Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

13

LONZA MycoAlert™ PLUS Mycoplasma Detektionskit

MycoAlert Plus ist die nächste Generation des

MycoAlert Kits und bietet ein stärkeres Lichtsignal

bei der Detektion.

Verwendung von weniger sensitiven Plattenlumi-

nometern oder Multi-Mode-Readern ist möglich

Überprüfung von ungebrauchten Medien, Medien

Supplements oder Wasser

Der MycoAlert Plus Assay ist ein selektiver bioche-

mischer Test, der das Vorhandensein aktiver myko-

plasmatischer Enzyme detektiert. Lebensfähige My-

koplasmen in einer Probe (Zellüberstand, frisches

Medium oder Supplement) werden lysiert, deren En-

zyme reagieren mit dem MycoAlert Plus Substrat.

Durch die Umwandlung von ADP zu ATP wird über

Luziferase ein Lichtsignal generiert. Indem eine

Messung vor und nach Zugabe des MycoAlert Plus

Substrates vorgenommen wird, erhält man einen

Quotienten des ATP-Gehalts, der das Vorhandensein

einer Mykoplasma-Kontamination angibt.

Einfach und schnell

Einfache Zugabe von Reagenzien in einen

Zellkulturüberstand

Messung von zwei Lumineszenzsignalen

Ergebnis in weniger als 20 Minuten

Einfache Interpretation der Ergebnisse

Universell

Detektion aller bekannten Mollicute-

Kontaminationen (Mycoplasma, Acholeplasma,

Entomoplasma und Spiroplasma; Ausnahme:

Ureaplasma)

Geeignet für Röhrchenluminometer, Plattenlumi-

nometer und Multi-Mode-Reader

Tab.: Vergleich von zwei Methoden (MycoAlert Plus und

PCR) bei mit A.laidlawii sp. infizierten HepG2 Zellen.

MycoAlert Assay Kontrollen

(separat erhältlich)

Das Kontroll-Set beinhaltet eine lyophilisierte positi-

ve Kontrolle und Rekonstitutionspuffer. Der Puffer

selbst dient dabei auch als negative Kontrolle.

Beide Kontrollen sind für die Verwendung des

MycoAlert Plus vorgesehen. Es wird empfohlen,

dass der Anwender Kontrollen experimentell mitführt

um die positive Performance des Assays zu gewähr-

leisten. Die positive Kontrolle enthält KEINE Myko-

plasmen und ergibt ein Signalverhältnis > 1, die

negative Kontrolle < 1.



01/489 3961-40

[email protected]

oder

Mag. Norbert Wahler

01/489 3961-55

[email protected]


14 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

Cystatin C von DAKO – jetzt auch standardisiert nach IFCC erhältlich

Cystatin C ist ein Cystein Protease Inhibitor (13

kDa), der von allen kernhaltigen Zelltypen in einer

konstanten Rate gebildet wird. Cystatin C wird

durch die Glomerulusmembran filtriert und an-

schließend durch die proximalen Tubuluszellen re-

sorbiert. Das im Serum enthaltene Cystatin C hat

sich als ein hervorragender Marker für die Nieren-

funktion etabliert und erleichtert die Bestimmung

der glomerulären Filtrationsrate (GFR).

Trotz der im Normalbereich befindlichen Serum-

Kreatininkonzentration kann die GFR bis zu 50%

reduziert sein. Cystatin C ist in diesem "Kreatinin-

blinden" Bereich äußerst verlässlich und erlaubt so-

mit eine frühere Indikationsstellung einer veränder-

ten Nierenfunktion und die Möglichkeit einer frühe-

ren präventiven Behandlung.

DAKO hat die letzten 10-15 Jahre in diesem Be-

reich eine Schlüsselrolle bei der Etablierung von

Cystatin C als Marker der Nierenfunktion einge-

nommen. DAKO setzt aber auch auf Verbesserungen

von bereits etablierten Produkten, um den Anforde-

rungen eines sich verändernden Marktes gerecht zu

werden. Deshalb reagierte DAKO auch auf die Ent-

scheidung der IFCC Working Group on Standardiza-

tion of Cystatin C, die es sich zur Aufgabe gemacht

hat, neues internationales Referenzmaterial von

Cystatin C, genannt ERM-DA471/IFCC, zu entwi-

ckeln. Das neue Referenzmaterial wurde im Juni

2010 veröffentlicht. Ziel ist es alle Cystatin C Assays

nach einer einzigen Referenz zu kalibrieren. Dabei

könnten Cystatin C Ergebnisse standardisiert und die

Berechnung der geschätzten glomerulären Filtrati-

onsraten (eGFR) weltweit harmonisiert werden.

Akutes Nierenversagen

Cystatin C erlaubt eine 1-2 Tage frühere Diagnose

eines akuten Nierenversagens im Vergleich zu einer

herkömmlichen Kreatininbestimmung.

Dosierung nierengängiger Medikamente

Die Bestimmung der GFR in der klinischen Therapie

erlaubt eine genauere Dosierung von Medikamenten,

die über die glomeruläre Filtration ausgeschieden

werden. Damit können potentielle toxische Medika-

mentendosierungen vermieden werden. Cystatin C

liefert schnell, einfach und verlässlich die GFR eines

Patienten großteils bereits bei der Erstuntersuchung.

Erwachsene

GFR und Muskelmasse nehmen mit dem Alter ab.

Cystatin C ist ein hervorragender Marker zur Frühbe-

stimmung der Nierenfunktion bei älteren Patienten.

Kinder

Cystatin C ermöglicht eine verlässliche Bestimmung

der GFR bei Kindern, da dieser Parameter im Ge-

gensatz zu Kreatinin unabhängig von Alter und Mus-

kelmasse ist.

Schwangere mit Verdacht auf Präclampsie

Präclampsie, die schwerste hypertensive Erkrankung

während der Schwangerschaft, ist charakterisiert

durch eine Abnahme der GFR. Deshalb bedarf es ei-

ner zeitnahen Überwachung der Nierenfunktion, um

rechtzeitig die Entwicklung einer Toxemie und

schweren Nierengewebsschädigung zu erkennen.

Cystatin C ist im Vergleich zu Serum-Urat und Krea-

tinin ein besserer Marker.

Diabetes

Bei jüngeren Patienten ist Diabetes weltweit die

häufigste Ursache für Nierenversagen. Zur Erfassung

leichter diabetischer Nephropathie ist Cystatin C vor-

teilhafter als Kreatinin.

Erkrankung der Skelettmuskulatur,

Paraplegia oder Quadriplegia

Cystatin C liefert eine verlässliche Bestimmung der

GFR bei diesen Patienten, da es, im Gegensatz zu

Kreatinin, unabhängig von der Muskelmasse ist.

Empfänger von Nierentransplantaten

Bestimmung der GFR ist für die Überwachung von

nierentransplantierten Patienten wichtig. Cystatin C

liefert eine frühere Indikation einer akuten Absto-

ßung als Kreatinin und somit die Möglichkeit eines

früheren Eingreifens um eine schwerwiegende Ab-

stoßungsreaktion zu verhindern.


Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

15

Anleitung zur Bestimmung der GFR aus

Cystatin C

Die Serum/Plasma Cystatin C Konzentration von

536 Patienten, die sich einer Iohexol-

Clearancebestimmung unterzogen, wurde mit einem

Cystatin C Immunoassay gemessen. Die Patienten

waren zwischen 4 Monaten und 93 Jahren alt.

Folgende Gleichung zur GFR Bestimmung hat sich

dabei etabliert: GFR (ml/min/1,73 m²) = [84,69 x

Cystatin C (mg/l)-1,680]

Die Gleichungsergebnisse die sich in der Relation

Cystatin C und GFR ergaben werden im untenste-

henden Diagramm gezeigt.

Bild 1: Gleichungsergebnisse der Relation Cystatin C und

GFR.

Die Gleichung und ihre Ergebnisse liefern eine Ab-

schätzung der GFR standardisiert für die Körperober-

fläche (ml/min/1,73 m²). Für die Abschätzung der

GFR, die nicht für die Körperoberfläche (ml/min)

standardisiert ist, multipliziert man das Ergebnis aus

der Gleichung mit der geschätzten Körperoberfläche

des Patienten (=1,73).

Cystatin C Immunoassay

Partikelverstärkter Immunoassay

Turbidimetrischer / nephelometrischer Nachweis

Standardisiert nach ERM-DA471/IFCC erhältlich

Messbereich: 0,4 - 7,5 mg/l

Proben: Serum oder Plasma

Ergebnis in 10 Minuten

Validierte Arbeitsanleitungen für die Geräte

COBAS MIRA Plus, Hitachi 911, 917, Modular

Ausgezeichnete Präzision

Keine Interferenz bei Hämoglobin (≤10 g/l), Bili-

rubin (≤600 mg/l), Triglyzeride (≤15 g/l),

Rheumafaktor (≤1200 IU/l)

Referenzintervall

Patienten von 1-50 Jahren: 0,55 - 1,15 mg/l

Patienten > 50 Jahre: 0,63 - 1,44 mg/l

Bezeichnung Art-Nr: Verpackungs-einheit

Cystatin C Immunoparticles DAKLX002 200 Tests, 10 mL

Cystatin C Immunoparticles (ERM-DA471/IFCC Standardized)

DAKLX004 10 mL

Cystatin C Calibrator DAKX0974 1 mL

Cystatin C Calibrator (ERM-DA471/IFCC Standardized)

DAKX7912 1 mL

Cystatin C Control Set DAKX0973 6 x 1 mL

Cystatin C Control Set (ERM-DA471/IFCC Standardized)

DAKX7913 6 x 1 mL


DI (FH) Manuel Rauner

Tel.: 01/4893961-30

[email protected]

Aktion! -25% auf alle ELISA und ELISPOT Kits der Firma CEDARLANE!

Szabo-Scandic möchte Sie bis 09. November 2012

mit -25% Rabatt auf alle ELISA und ELISPOT Kits

der Firma Cedarlane unterstützen. Anwender wissen

dabei um die hohe Qualität dieser Produkte, die di-

verse Interleukine (IL-1 beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6,

IL-8, IL-10,…), C3a, sCD163, TAFI Antigen, 8-

hydroxy2-deoxy Guanosin (DNA-Damage) Kits und

viele mehr umfassen. Das Hauptaugenmerk liegt

dabei eindeutig auf den Spezies Mensch, Maus und

Ratte. Die Größen umfassen sowohl die 48 als auch

die 96 well Platten. Weitere Rabatte oder Sonder-

preise sind auf diese Aktion nicht anwendbar.

Vorstellung anhand des IFN-gamma ELISA

Kit (pre-coated):

Der humane IFN-gamma ELISA Kit (pre-coated)

(Kat.Nr: CEDCL76120K-48 bzw. -96) wird für die

quantitative in vitro Bestimmung von IFN-gamma im


16 ________________________________________________________________________________________________________________________ Szabo-Scandic

menschlichen Serum, Plasma, gepufferten Lösungen

oder in Zellkulturmedien verwendet. Der Assay er-

kennt dabei sowohl natürliches als auch rekombi-

nantes, humanes IFN-gamma. Die Sensitivität des

Kits liegt dabei bei 5 pg/ml und der CV-Wert als

Ausdruck der Reproduzierbarkeit liegt sowohl bei der

Anwendung als Intra- wie auch als Inter-Assay unter

10%.

Die Kits sind dabei generell für den Forschungs-

bereich und nicht für diagnostische oder therapeuti-

sche Zwecke ausgelegt.

Abb. 1: Typische IFN-gamma Standardkurve (12,5 bis

400 pg/ml).

Vorstellung des humanen IFN-gamma

ELISpot Kits (pre-coated):

Dieser ELISpot Assays (enzyme-linked immuno-spot

assay) wird verwendet um Zytokin-produzierende

Zellen in Einzelzellsuspensionen auszuzählen. Der

Vorteil dieser Methode ist dabei der geringe in-vitro

Eingriff und bringt das Ergebnis damit sehr nahe an

die physiologische in-vitro Zytokinproduktion.

Der Assay ist ausgelegt um die Frequenz der Zy-

tokin-produzierenden Zellen durch einen oder meh-

rere definierte Induktionsreize zu bestimmen. ELI-

Spot Assays sind ein ideales Werkzeug in den Berei-

chen der TH1/TH2 Antwort, Impfstoffentwicklung,

beim Beobachten von viralen Infektionen und deren

Behandlung, in der Onkologie, infektiösen Erkran-

kungen, Autoimmunerkrankungen und Transplanta-

tionen.

Der Quick Spot Kit kombiniert dabei stabile Per-

formance und einen praktischen Ablauf durch Ein-

satz der modernsten pre-coating Technik. Der Kit

beinhaltet den Detektionsantikörper, HRP konjugier-

tes Streptavidin, AEC Färbesystem, Verdünnungs-

und Waschpuffer und Multifilterplatte mit vor-

gecoatetem Detektionsantikörper. Der Kit ist ein

ready-to-use Produkt und bietet höchste Qualität für

alle Ansprüche von ELISpot Assays. Zusätzlich wur-

de die Performance der ELISpot Kits mit anderen

weltweit vergleichbaren ELISpot Kits untersucht, um

eine gleichwertige Sensitivität, Stabilität und Repro-

duzierbarkeit gewährleisten.

Abb. 2: Zusammenfassung des ELISpot Ablaufes

A: Inkubation der vor-gecoateten Mikroplatte bei RT mit

Zellkulturmedium

B: Vorbereitung der Zellsuspension

C: Inkubation der Zellen mit Stimulanz

D: Entfernung der Zellen. Inkubation mit dem Detekti-

onsantikörper (biotinyliert)

E: Inkubation mit HRP gelabelten Streptavidin. Anschlie-

ßende AEC Substratzugabe.

F: Auszählen der Spots

Falls Sie noch keine Produktliste bekommmen

haben sollten, schicken wir Ihnen auf Anfrage gerne

eine komplette Liste der für diese Aktion

angebotenen ELISA und ELISpot Kits zu.


DI (FH) Manuel Rauner

Tel.: 01/4893961-30

[email protected]


Szabo-Scandic ______________________________________________________________________________________________________________________

17

Documents

Auf der Suche nach einem neuen Thermocycler? TPersonal ... · weit verbreitete Methode dafür ist die Turbidimetrie. Im folgenden Artikel beschreiben wir eine geeignete Methode der