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3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

HIV-1 NAT-Testversager durch Mutationen

Dr. B. Müller, NAT-Labor, Hagen

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Folie 2

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Aktueller Fall in Österreich vom 28.02.2013 „Diagnostische Fensterspende“

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Folie 3

Überblick

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Bundesgesundheitsbl. 2012, 55:907-913 Nübling et al., Transfusion 2009 Schmidt et al., Transfusion, 2009 Chudy et al., Transfusion, 2012

Prävalenz bei Neuspendern/100.000 Untersuchungen: 11,1 (m) bzw. 2,3 (w)

Sicherheitsgewinn durch NAT: Verkleinerung der diagn. Fensterphase (ca. 10 Tage)

Dokumentation von 23 HIV-1 NAT-only Fällen (NAT positiv, anti-HIV negativ) zwischen 2004 und 2010 (insges. 31 Mio. NAT-getestete Spenden)

Bislang 3 HIV-1 Übertragungsfälle trotz NAT dokumentiert:

a) 1998 (HIV-1 M, Subtyp A) (in-House-PCR, Primer-Mismatch)

b) 2007 (Roche CAP/CTM, anti-sense Primer, gag)

c) 2009 (Roche CTS/MPX, Primer, LTR)

Geschätztes Restrisiko für transfusionsassoziierte HIV-1 Infektionen 1 : 4,3 Mio.

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Folie 4

Falsch negative NAT-Resultate - Ursachenanalyse

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Sequenzierung und detaillierte Untersuchung mit weiteren 11 CE-zertifizierten Testsystemen

~3 Mio. untersuchte Spenden zwischen Januar 2010 und Februar 2013

4 Spenden mit falsch-negativen NAT-Ergebnissen (Routine-NAT: GFE-Blut, Virus Screening PCR Kit, VSPK)

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Folie 5

Spenderinformationen - Überblick

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

RD = Mehrfachspender

FTD = Erstspender

n.d. = nicht detektierbar

/ = nicht untersucht

Fall Spender Geschlecht Alter Spende-zeitpunkt

NAT- Assay

Screening Resultate

LIA HIV-1-Konz. (IU/ml)

1 RD F 57 Aug. 2012 Juli 2004

VSPK v1.2 In-House

Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg

pos /

n.d. n.d.

2 RD M 30 Sep. 2011 Mai 2011 Feb. 2011

VSPK v1.2 VSPK v1.2 VSPK v1.2

Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg

/ / /

541.200a

<33 n.d.

3 FTD F 31 Juli 2012 VSPK v1.2 Ab pos RNA neg pos 20.410b

4 FTD M 18 Okt. 2010 VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos 5.300a

Ab = anti-HIV-1/2 Assay

LIA = Line Immunoassay

a = Roche CAP/CTM v2.0 b = Abbott RT HIV

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Folie 6

Spenderinformationen (low viral load)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Fall Spender Geschlecht Alter Spende-zeitpunkt

NAT- Assay

Screening Resultate

LIA HIV-1-Konz. (IU/ml)

1 RD F 57 Aug. 2012 Juli 2004

VSPK v1.2 In-House

Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg

pos /

n.d. n.d.

2 RD M 30 Sep. 2011 Mai 2011 Feb. 2011

VSPK v1.2 VSPK v1.2 VSPK v1.2

Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg

/ / /

541.200a

<33 n.d.

3 FTD F 31 Juli 2012 VSPK v1.2 Ab pos RNA neg pos 20.410b

4 FTD M 18 Okt. 2010 VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos 5.300a

RD = Mehrfachspender

FTD = Erstspender

n.d. = nicht detektierbar

/ = nicht untersucht

Ab = anti-HIV-1/2 Assay

LIA = Line Immunoassay

a = Roche CAP/CTM v2.0 b = Abbott RT HIV

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Folie 7

Ergebnisse der Screening NAT-Teste (low viral load)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

*positiv in 2 von 6 Replikaten

Fall VSPK v1.2 (GFE Blut)

CTS/MPX (Roche)

CAS v1.5 (Roche)

Ultrio (Novartis)

Ultrio Plus (Novartis)

Ultrio Elite (Novartis)

1 neg neg neg (s) neg +* neg

2 neg + neg / + +

Screening NAT

anti-retrovirale Therapie

Diagnostische Fensterspende

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Folie 8

Ergebnisse der quantitativen NAT-Teste (low viral load)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Bestätigungstest/quantitative NAT

Fall CAP/CTM v2

(Roche) HPS/CTM v2

(Roche) AM v1.5 (Roche)

CAM v1.5 (Roche)

RT HIV (Abbott)

artus HIV (Qiagen)

1 neg neg neg (s) neg (us) neg neg

2 23 cp/ml <34 cp/ml neg (s) <400 cp/ml <70 IU/ml 240 IU/ml

s = Standard

us = Ultrasensitive

neg = negativ

anti-retrovirale Therapie

Diagnostische Fensterspende

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Folie 9

Spenderinformationen (Mutationen)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

RD = Mehrfachspender

FTD = Erstspender

n.d. = nicht detektierbar

/ = nicht untersucht

Fall Spender Geschlecht Alter Spende-zeitpunkt

NAT- Assay

Screening Resultate

LIA HIV-1-Konz. (IU/ml)

1 RD F 57 Aug. 2012 Juli 2004

VSPK v1.2 In-House

Ab pos RNA neg Ab neg RNA neg

pos /

n.d. n.d.

2 RD M 30 Sep. 2011 Mai 2011 Feb. 2011

VSPK v1.2 VSPK v1.2 VSPK v1.2

Ab pos RNA pos Ab neg RNA neg Ab neg RNA neg

/ / /

541.200 <33 n.d.

3 FTD F 31 Juli 2012 VSPK v1.2 Ab pos RNA neg pos 20.410

4 FTD M 18 Okt. 2010 VSPK v1.1 Ab pos RNA neg pos 5.300

Ab = anti-HIV-1/2 Assay

LIA = Line Immunoassay

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Folie 10

NAT-Assay Target-Regionen (Mono Target)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

VSPK v1.2 (GFE Blut) CTS/MPX (Roche) artus HIV (Qiagen)

CAS v1.5 (Roche) AM v1.5 (Roche) CAM v1.5 (Roche)

RT HIV (Abbott)

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Folie 11

NAT-Assay Target-Regionen (Dual Target)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Ultrio (Novartis) Ultrio Plus (Novartis) Ultrio Elite (Novartis)

pol LTR LTR gag

CAP/CTM v2 (Roche) HPS/CTM v2 (Roche)

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Folie 12

Ergebnisse der Screening NAT-Teste (Mutationen)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Fall

VSPK v1.2 (GFE Blut)

LTR

CTS/MPX (Roche)

LTR

CAS v1.5 (Roche)

gag

Ultrio (Novartis) LTR + pol

Ultrio Plus (Novartis) LTR + pol

Ultrio Elite (Novartis) LTR + pol

1 neg neg neg (s) neg +* neg

2 neg + neg / + +

3 neg neg + (+) (+) (+)

4 + + + (+) / /

Screening NAT

(+) = Verringerte Detektion

+ = Konsistente Detektion

neg = negativ

s = Standard

/ = nicht untersucht

Vorversion VSPK v1.1 negativ

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Folie 13

Ergebnisse der quantitativen NAT-Teste (Mutationen)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Bestätigungstest/quantitative NAT

Fall CAP/CTM v2

(Roche) LTR + gag

HPS/CTM v2 (Roche)

LTR + gag

AM v1.5 (Roche)

gag

CAM v1.5 (Roche)

gag

RT HIV (Abbott)

pol

artus HIV (Qiagen)

LTR

1 neg 1 neg (s) neg (us) neg neg

2 23 cp/ml <34 cp/ml neg (s) <400 cp/ml <70 IU/ml 240 IU/ml

3 3.760 cp/ml 5.530 cp/ml 10.253 cp/ml / 19,387 IU/ml neg

4 3.294 cp/ml / / 1.750 cp/ml (s) 3.166 IU/ml 70 IU/ml

s = Standard

us = Ultrasensitive

neg = negativ

/ = nicht untersucht

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Folie 14

Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 3)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

56 bp Deletion

Primer 2

Primer 1

Müller et al., submitted

VSPK v1.2

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Folie 15

Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 3)

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

Müller et al., submitted

52 bp Insertion

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Folie 16

Sequenzanalyse LTR-Bereich (Fall Nr. 4)

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modifiziert nach Chudy et al., Transfusion, 2012

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Folie 17

3. Sitzung der DGTI-Sektion Sicherheit von Blutprodukten

§ Bekanntmachung über die Zulassung von Arzneimitteln

- Abwehr von Arzneimittelrisiken - Vom 15. Juni 2012

Anordnung von Maßnahmen zur Risikominimierung beim Einsatz von HIV-1 NAT-Testsystemen

Bescheid Bei der Herstellung von zellulären Blutkomponenten, therapeutischen Einzelplasmen und

Stammzellzubereitungen zur hämatopoetischen Rekonstitution, die nach dem 01.01.2015

für den Verkehr freigegeben werden, müssen bei dem Spender-Screening HIV-1 NAT (Nukleinsäure-Amplifikationstechnik) Testsysteme eingesetzt werden, die geeignet sind, die mögliche Unterbestimmung bzw. die Nichterkennung einer Zielregion auszugleichen oder auszuschließen. Ein möglicher Ansatz ist die Verwendung eines sogenannten

Dual-Target NAT-Tests, bei dem zwei (oder mehrere) verschiedene Abschnitte des

HIV-Genoms amplifiziert und nachgewiesen werden. Die Methode muss so ausgelegt sein, dass sie die Anforderung des PEI an die Mindestsensitivität für alle amplifizierten Genregionen erfüllt. Diese ist derzeit der verlässliche Nachweis einer HIV-1-RNA-Konzentration von mindestens 10.000 IU/mL, bezogen auf die Einzelspende.

BAnz AT 12.09.2012 B6

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Folie 18

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