Produkte und Anwendungen für die Molekulare Diagnostik und Forschung

Maxwell® Systeme

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Inhalt

Promega in Ihrem Labor 3

Service mit höchster Qualität 4

Maxwell® Geräte 6

Maxwell® RSC 8

Maxwell® RSC 48 10

MaxPrep™ 12

Hochdurchsatz-Automatisierung 14

Anwendungen 16Molekularpathologie 16

Liquid Biopsy 18

miRNA 19

Onkologie / Humangenetik 20

HLA / Immunologie 21

Virologie / Bakteriologie 22

Krankheitserreger aus Zecken 23

DNA und RNA aus Pflanzen 24

GMO in Lebensmitteln, Saatgut und Tierfutter 25

Maxwell® und RIDA®GENE 26

Übersicht Maxwell® Geräte und Kits 30

Amplifikation 32

Das Helix® System 38

Unsere Leistungen für Sie 39

3

Promega in Ihrem Labor

Unsere Innovation, Ihr Fortschritt

Seit 40 Jahren steht Promega als einer der größten Hersteller weltweit für Reagenzien, Kits und Gerätesysteme. Alle Maxwell® Geräte, sowie nahezu 90 % unserer Kits und Reagenzien stellen wir selbst her. Jeden Schritt, vom Einkauf der Rohstoffe bis zur Lieferung der Produkte ins Labor, kontrolliert und dokumentiert Promega als ISO-zertifiziertes Unternehmen. Alle Promega Produkte sind von sehr hoher sowie garantiert gleichbleibender Qualität. Das Qualitätsmanagement von Promega gewährleistet eine kontinuierliche Verbesserung von Produkten und Prozessen. Promega hält über 500 Patente für die Entwicklung von Reagenzien. Das alles macht Promega zu einem wichtigen Akteur in der Molekularbiologie.

Inhalt

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Spezialist und Partner

Produkte und Service mit höchster Qualität

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Unsere Expertise für Ihren Erfolg

Promega hat langjährige Expertise bei der Entwicklung von Produkten für die Grundlagen- forschung, für die klinische Biologie, zum Wirkstoff-Screening oder für die molekulare klinische Forschung. Die Anwendung dieser Produkte führte bereits zu tausenden von wissenschaftlichen und medizinischen Publikationen.

Für molekularbiologisch-klinische Labore hat Promega vielfältige Produkte, u.a. für die CE-IVD-zertifizierte Isolierung von Nukleinsäuren oder zur Amplifikation. Die Produkte werden nach höchsten Qualitätsmaßstäben gefertigt.

• Produktionsstätte nach GMP-Richtlinien

• Zertifiziert nach ISO 13485 und ISO 9001

• IVD-zertifizierte Produkte

Professionelle Unterstützung Ihrer Laborarbeit

Promega beantwortet nicht nur Ihre Detailfragen zu speziellen Produkten, sondern berät Sie auch umfangreich zum richtigen Einsatz und deren Anwendung im Labor – gerne durch unsere Verkaufsberater direkt bei Ihnen vor Ort oder durch das Promega Team in Mannheim.

Promega veranstaltet Schulungen zu verschiedensten Themen – in Ihrem Labor, in einem der Promega Schulungszentren oder online. Schauen Sie auf der Promega Website nach Veranstaltungen!

Promega Service-Leistungen für Sie

• Promega produziert selbst! Dadurch können Sonderabfüllungen und die Fertigung von Custom-Produkten nach Ihren Wünschen realisiert werden.

• Spezialanwendungen werden möglich! Mit dem Promega Service zur Optimierung von Protokollen für spezifische Applikationen oder Proben.

• Laborautomatisierung ist einfach! Mit professioneller Beratung und Implementierung einer Applikation auf Ihrer Laborplattform durch Promega.

Rundumservice für Ihre

Promega Geräte aus einer Hand!

Wartung, Reparatur und Inspektion direkt im Service-

Center in Mannheim oder bei Ihnen im Labor durch

einem Promega Techniker.

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Maxwell® GeräteSchnelle und zuverlässige DNA- oder RNA-Isolierung

Maxwell® Geräte isolieren aus einer Vielzahl von Probenmaterialien automatisiert und effizient DNA oder RNA. Das System führt alle Schritte des Aufreinigungsprozesses selbstständig durch: Aufschluss, Lyse, Reinigung und Elution in nur circa 30 Minuten.

Die Maxwell® Geräte transportieren im Gegensatz zu anderen Systemen keine Flüssigkeiten, sondern paramagnetische Partikel. Das verhindert mögliche Kontamination durch Aerosole oder Tröpfchenbildung und vermeidet Verstopfungsprobleme von Flüssigpipettiersystemen. Außerdem wird die Verwendung von Pipettenspitzen überflüssig – das spart zusätzlich Lagerplatz und schont die Umwelt.

Genomische DNA

• Vollblut / Buffy-Coat• Gewebe frisch / gefroren• Zellen aus Zellkultur• FFPE-Gewebe• Speichel• Abstriche• Stuhl• Weitere Körperflüssigkeiten• Pflanzen• Lebensmittel

Gesamt-RNA / miRNA

• Vollblut / Buffy-Coat• Zellen aus Zellkultur• Gewebe• Pflanzen

Virale und bakterielle DNA / RNA

• Plasma / Serum• Liquor• Stuhl• Tupfer / Abstrich• Zecken

ccfDNA

• PlasmaNeue

Applikation

7

Prinzip der Aufreinigung einer Probe in der Kartusche

Die Probe wird im Gerät durch schnelles Auf- und Abbewegen des Einwegstößels gemischt und aufgeschlossen.

Die aufgereinigte DNA oder RNA wird im Elutionsgefäß abgelöst.

Die paramagnetischen Partikel werden nach der Magnetisierung des Stößels festgehalten.

Die durch den Aufschluss freigesetzte Nukleinsäure wird durch die paramagnetischen Partikel gebunden.

Die DNA oder RNA wird durch wiederholtes Binden und Ablösen der Partikel in mehreren Waschschritten gereinigt.

Das Probenmaterial wird in die Kartusche mit vorgefüllten Reagenzien zugegeben.

1 2 3

4 5 6

Stößel

Probe

Magnet

Amplifikate von Blutproben weiblicher (F) und männlicher (M) Probanden. Die Proben wurden mit dem Maxwell® 16 System aufgereinigt. Im ersten und zweiten Lauf wechselten sich M- und F-Proben jeweils so ab, dass am selben Platz nacheinander eine M- und eine F-Probe extrahiert wurden. Das Gelbild zeigt das Ergebnis nach PCR-Amplifikation mit spezifischen Banden für das Y-Chromosom ausschließlich für M-Proben. Eine Kreuzkontamination ist weder innerhalb eines Laufs noch zwischen aufeinanderfolgenden Proben- durchläufen zu beobachten. C = Kontrollmaterial, L = Längenmarker

Keine Kreuzkontamination

Durch die besondere Technologie des Aufreinigungsverfahrens und die optimierte Auto- matisierung kann jegliche Kreuzkontamination ausgeschlossen werden. Der Anwender erhält robuste und reproduzierbare Ergebnisse.

• Keine Kontamination zwischen den Proben innerhalb eines Laufes

• Keine Kontamination zwischen aufeinanderfolgenden Probendurchläufen

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Isolierung und Aufreinigung von DNA und RNA aus verschiedensten Proben

Maxwell® RSC

Ihre Vorteile

Schnell: 1 – 16 Proben in ca. 30 Minuten

Sicher: Keine Kreuzkontamination, hohe Reproduzierbarkeit, integrierte UV-Lampe zur Dekontamination

Benutzerfreundlich: Vorgefüllte Einmal- kartuschen, einfache Bedienung mit vor- installierten Protokollen und Tablet-PC

Probennachverfolgung: Barcode-System und Barcode-Scanner zur sicheren Probennachverfolgung, Datenübertragung auf den PC oder Integration in LIMS

Inklusive Quantifizierung: Schnelle und einfache Probenquantifizierung mit dem integrierten QuantusTM Fluorometer

Spart Platz: Kleines Tischgerät – Platzbedarf eines Laptops

Video zum Gerät:

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Schnell, sicher und benutzerfreundlich – für reproduzierbare Ergebnisse und hohe Ausbeuten

EU 2017/746

Für CE-IVD-zertifizierte Prozesse in der Molekulardiagnostik

Maxwell® CSC

Das CSC-IVD-Gerät entspricht der CE-Zertifizierung für In-vitro-Diagnostika und ist unter GMP-Richtlinien produziert. Das Gerät extrahiert Nukleinsäuren in hoher Qualität mit reproduzierbaren Ergebnissen und hohen Ausbeuten.

Merkmale

• Anwenderidentifizierung und Anwenderautorisierung am Gerät

• Datenintegrität und -Sicherheit durch elektronische Signatur

Video zum Gerät:

Gerätespezifikationen

Maxwell® RSC Maxwell® CSC (CE-IVD)

Dauer eines Laufs28 – 80 Minuten (je nach Probentyp und Methode)

28 – 80 Minuten (je nach Probentyp und Methode)

Proben (Kits) siehe Seite 6DNA Blut, RNA Blut,

DNA FFPE, RNA FFPE (weitere folgen)

Proben pro Lauf 1 –16 Proben 1 –16 Proben

Elutionsvolumen 50 – 100 µl 50 – 100 µl

UV-Lampe zur Dekontamination

ja ja

Barcode-Scanner optional ja

Integrierte Quantifizierung mit Fluorometer

ja nein

Gewicht 11 kg 11 kg

Größe33,0 x 34,5 x 29,9 cm

(B x L x H)33,0 x 34,5 x 29,9 cm

(B x L x H)

Stromanschluss100 – 240 V AC, 50/60 Hz, 2,5 A

100 – 240 V AC, 50/60 Hz, 2,5 A

IVD-zertifiziert nein ja

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Maxwell® RSC 48 Erhöhter Probendurchsatz mit bewährter Extraktionstechnologie

Das Maxwell® RSC 48 Gerät isoliert und reinigt Nukleinsäuren aus bis zu 48 Proben in einem Lauf. Dabei nutzt es die Extraktionstechnologie der bewährten Maxwell® Modelle für 16 Proben. Auch das Prinzip mit vorgefüllten Einmalkartuschen und die einfache Bedienung über ein Touchscreen-Tablet haben sich als sehr anwenderfreundlich erwiesen und wurden beibehalten. Trotz der Kapazität für 48 Proben ist das Gerät klein und braucht nur wenig Platz auf der Laborbank. Für den Auf- oder Abbau sind nur wenige Handgriffe erforderlich.

Ihre Vorteile

Verlässlich: Bewährtes Extraktionsprinzip mit vorgefüllten Probenkartuschen für reproduzier- bare Ergebnisse, automatische Selbstkontrolle für korrektes Beladen des Gerätes

Flexibel: Bis zu 48 Proben, für eine Vielzahl von Probentypen und Kits

Anwenderfreundlich: Intuitive Bedienung, schnelle Betriebsbereitschaft, wenig bis keine Probenvorbereitung

Kompatibel und per Software integrierbar: Mit MaxPrepTM Liquid Handling Station zur Probenvorbereitung und zum Pipettieren für nachfolgende Anwendungen

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Maxwell® RSC 48 Gerätespezifikationen

Dauer eines Laufs 22 – 68 Minuten (je nach Probentyp und Methode)

Proben pro Lauf 1 – 48 Proben

Elutionsvolumen 50 – 100 µl

UV-Lampe zur Dekontamination ja

Barcode-Scanner ja

Integrierte Quantifizierung mit Fluorometer optional

Gewicht 31 kg

Größe 53,0 x 50,8 x 21,7 cm (B x L x H)

Stromanschluss 100 – 240 V AC, 50 / 60 Hz, 4 A

Maxwell® Kit Ø Zeit / Lauf

Maxwell® RSC Whole Blood DNA Kit 37 Minuten

Maxwell® RSC Blood DNA Kit 36 Minuten

Maxwell® RSC Simply RNA Blood Kit 51 Minuten

Maxwell® RSC Simply RNA Cells Kit 53 Minuten

Maxwell® RSC Simply RNA Tissue Kit 52 Minuten

Maxwell® RSC DNA FFPE Kit 34 Minuten

Maxwell® RSC RNA FFPE Kit 34 Minuten

Maxwell® RSC ccfDNA Plasma Kit 68 Minuten

Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit 64 Minuten

Maxwell® RSC Viral Total Nucleic Acid Purification Kit 30 Minuten

Maxwell® FSC DNA IQ™ Case Work Kit 22 Minuten

Beispiel-Laufzeiten für die Aufreinigung von 1 bis 48 Proben

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MaxPrep™ Liquid Handling Workstation

Die MaxPrep™ Liquid Handling Workstation ist die ideale Ergänzung zu Ihrem Maxwell® System. Der Benchtop-Pipettierroboter übernimmt zum einen die Schritte der Probenbearbeitung, bevor die Proben im Maxwell® Gerät prozessiert werden: Vorbereitung der Proben und Transfer in die Kartuschen, Einsetzen der Einmalstößel in die Kartuschen und Zugabe des Elutionspuffers. Die manuellen Schritte entfallen – das vorbereitete Rack muss nur noch im Maxwell® Gerät platziert werden. Zum anderen kann Ihnen der Liquid Handler alle Handgriffe zur Bearbeitung des Eluats nach der Isolierung abnehmen – zum Beispiel das PCR-Setup oder die Probenvorbereitung zur Quantifizierung.

Die Bedienung ist flexibel und besonders auf einfache Anwendung (Plug-and-Play-Software) ausgelegt. Eine aufwändige Programmierung ist nicht notwendig.

Das Besondere: Durch Übertragung von Daten zwischen den Geräten erlaubt die mitgelieferte Portal-Software eine lückenlose Probenverfolgung beim Transfer zwischen Maxwell® RSC und MaxPrep™ Geräten. Somit bilden Probenvorbereitung, Extraktion und Vorbereitung zur Downstream-Applikation einen integrierten Prozess.

Flexible Probenverarbeitung für den mittleren Durchsatz

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Modulare Nukleinsäureaufreinigung

Ihre Proben werden beim Transfer von einem zum nächsten Modul durch die Portal-Software nachverfolgt, die Proben-ID wird übertragen und die Software gibt das passende Protokoll für die nächsten Schritte vor.

Video zum Gerät:

Probenvorbereitung mit dem MaxPrepTM Liquid Handler

für die Isolierung mit dem Maxwell® Gerät

• Zugabe von Reagenzien wie Puffern oder Proteinase K

• Inkubation• Platzierung der Stößel• Transfer der Proben in die Kartuschen

Maxwell® RSC (1–16 Proben) Maxwell® RSC 48 (1–48 Proben)

Probenverarbeitung für Down- stream-Applikation mit dem MaxPrepTM Liquid Handler

• Transfer der Eluate in 96-Well-Platten• Vorbereitung zur Quantifizierung mit Quantifluor®

• Proben-Normalisierung• qPCR- und RT-PCR-Vorbereitung mit

GoTaq® oder Plexor®

• Setup für weitere PCR-Anwendungen

Nukleinsäureaufreinigung mit einem Maxwell® RSC Gerät

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Hochdurchsatz-AufreinigungMaxwell® Kits auf Ihrer Automations-Plattform

Ob Aufreinigung über Säulen oder mit magnetischen Beads, 96-Well- oder 384-Well-Format: Promega Kits für den Hochdurchsatz sind mit allen marktüblichen Automationsplattformen kompatibel. Nutzen Sie daher die Promega DNA- und RNA-Extraktions-Kits für die Automatisierung in Ihrem Labor – wir unterstützen Sie dabei.

Bewährtes Prinzip mit Maxwell® HT-Kits

Die Maxwell® Hochdurchsatz-(HT-)Kits erweitern den Erfolg des Maxwell® 16 Systems, das für den mittleren Probendurchsatz vor über 10 Jahren von Promega auf den Markt gebracht wurde. Es basiert auf einer zuverlässigen Chemie zur Isolierung und Reinigung von Nukleinsäuren für ein breites Probenspektrum. Im Kartuschenformat sind diese Kits bereits bei zahlreichen Kunden im Einsatz und können jetzt im Hochdurchsatzformat genutzt werden. Die Technologie ist robust, liefert reproduzierbare Ergebnisse und erfüllt alle Anforderungen an die heutigen Ansprüche der DNA- und RNA-Aufreinigung. So erhalten Sie Material von gleichbleibend hoher Qualität für verlässliche Daten bei Ihren Downstream-Analysen.

Beispiele für Maxwell® Hochdurchsatz-Kits

Protokolle getestet für:

Hamilton® Microlab

STAR

Thermo Scientific™

KingFisher™ Flex

Beckman Biomek®

4000/FX/NX

Eppendorf epMotion®

Serie

Tecan Freedom

EVO®

Maxwell® HT ccfDNA KitZur automatisierten Isolierung zellfreier DNA in einem Probenformat von bis zu 96 Proben. Es können 1–8 ml Plasma eingesetzt werden.

P P

Maxwell® HT Viral TNA KitFür die automatisierte Isolierung viraler Gesamt-DNA und -RNA. Geeignet für Serum, Plasma und andere Probenarten.

P P P P P

Maxwell® HT simplyRNA KitZur automatisierten Isolierung von RNA aus verschiedenen Proben wie Blut, Zellen oder Gewebe (frisch oder gefroren).

P P P P P

15

Promega unterstützt Sie bei der Automatisierung in Ihrem Labor

Kontaktieren Sie uns, wenn Sie

• einen Promega Hochdurchsatz-Kit auf einer bestehenden Liquid-Handling-Plattform in Ihrem Labor aufsetzen wollen.

• ein für Sie spezifisches Protokoll auf einem High-Throughput-System aufsetzen wollen.• Hilfe bei der Auswahl einer geeigneten Automationsplattform für den Einsatz der Promega

Kits benötigen.

Für die Implementierung unserer Kits auf Ihrer Plattform

• modifizieren wir das Promega Kitprotokoll so, dass es zu Ihren Anforderungen passt.• generiert Promega Daten für das „Proof of Principle“.• können wir unsere Reagenzien, angepasst an Ihre Automationsbedürfnisse, abfüllen

und verpacken.

Wir helfen Ihnen, die Promega Technologien mit Ihrer Laborausstattung effizient zu kombinieren. Automationsexperten von Promega unterstützen Sie bei der Implementierung unserer Protokolle auf Ihrer Plattform.

1.Beratung durchAutomations-spezialisten

2.Aufsetzen

eines „Statementof Work“

3.Vor-Ort-

Implementierung

Unser Automationsspezialist wird ein „Statement of Work“ aufsetzen, um Ihre Anforderungen festzuhalten.

Wir planen im nächsten Schritt einen Termin zur Implementierung vor Ort bei Ihnen im Labor.

Damit wir Ihre Anforderungen an ein System genau

verstehen, sprechen Sie mit einem unserer Berater.

16

Molekularpathologie Aufreinigung von DNA und / oder RNA aus FFPE-Schnitten

Formalin-fixiertes Paraffin-eingebettetes (FFPE) Gewebe ist eine wichtige Probenquelle für die Diagnostik. Allerdings ist die Isolation und Reinigung von Nukleinsäuren aus FFPE-Gewebe nicht trivial. Oft stehen nur kleine Mengen des Materials zur Verfügung, außerdem liegen die Nukleinsäuren in FFPE-Schnitten aufgrund des speziellen Fixierungsverfahrens häufig quervernetzt und chemisch verändert vor. Für die spätere PCR-Analyse ist es notwendig, aus diesen komplexen Proben eine möglichst hohe Ausbeute an qualitativ hochwertiger DNA oder RNA zu gewinnen. Das Maxwell® System bietet eine zeitgemäße Alternative zu den herkömmlichen Verfahren: Das System extrahiert Nukleinsäuren mithilfe paramagnetischer Partikel. Zudem verzichtet es vollständig auf gesundheitsschädliche Lösungsmittel wie Toluol oder Xylol.

Einfache Isolierung von DNA und / oder RNA aus FFPE-Schnitten mit dem Maxwell® System ohne gesundheitsschädliche Lösungsmittel

Kartusche vorbereiten

• Probe in Kartusche pipettieren• Elutionspuffer zugeben: variables

Volumen 50–100 µl• Kartusche in Gerät platzieren

Maxwell® Aufreinigung

1 2 3

Probe vorbereiten

• Programm starten• Ergebnis: hohe Ausbeute, sehr

reine DNA / RNA

Maxwell® Anwendung

• Paraffinschnitte + Puffer + Proteinase K

• Inkubation 8 Std. bei 70°C• Kein Toluol, kein Xylol, kein EtOH

17

Maxwell® Anwendung

Bestimmung des MSI-Status von Tumorzellen als prädiktiver Biomarker für zielgerichtete Immuntherapien

Anwendungen

In der prädiktiven Diagnostik werden wie bei allen zielgerichteten Therapien geeignete Biomarker benötigt, die das Therapieansprechen eines Patienten voraussagen können. Die Mikrosatelliten-Instabilitätsanalyse (MSI) stellt solch einen prädiktiven Biomarker dar und wird z. B. vor Verschreibung von Immun-Checkpoint-Inhibitoren getestet. Ein derartiges Vor-Screening hilft dem Mediziner bei der Einschätzung der Funktionalität der konstitutionellen “Mismatch repair (MMR)-Gene”. Es kann einen frühen Hinweis auf das Vorliegen einer Mutation liefern und damit eine entsprechende Behandlung des Patienten ermöglichen.

Vorteile des MSI-Analyse-System-Kits

• Sie erhalten eine verlässliche Aussage über den MSI-Phänotyp. Bei der Genotypisierung des MSI-H-Status amplifiziert eine einzige Multiplex-PCR fünf unterschiedliche Marker.

• Probenverfolgung: Die Co-Amplifikation zweier Pentanukleotide polymorpher hoch-repetitiver Sequenzen ermöglicht die eindeutige Zuordnung der Proben und detektiert mögliche Kontaminationen mit anderer Patienten-DNA.

• Das MSI-Analyse-System erfüllt die Empfehlungen des 2003 NCI Workshop, Bethesda.

Mikrosatelliten-Instabilität – nachgewiesen mit dem MSI-Analyse- System-Kit (Elektropherogramm). Obere Grafik: gesundes Gewebe Untere Grafik: potenzielles Tumorgewebe

Mononukleotid-Marker für den MSI-Status

Pentanukleotid-Referenz

BAT-25 Penta C

BAT-26 Penta D

MONO-27

NR-21

NR-24

Produkt Größe

MSI Analysis System, Version 1.2

100 Reaktionen (50 Reaktionspaare)

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Liquid Biopsy Automatisierte ccfDNA-Aufreinigung aus Plasma – in nur drei Schritten

Patientenschonende Liquid Biopsies in der Onkologie und Pränataldiagnostik

Neueste wissenschaftliche Erkenntnisse und die daraus entwickelten, immer sensitiveren diagnostischen Verfahren machen es möglich: Die für Patienten belastende und risikoreiche Entnahme von Tumorbiopsien oder eine Fruchtwasserpunktion bei Schwangeren kann durch einfache Blutentnahmen (Liquid Biopsies) ersetzt werden. Dabei wird die von Tumor oder Fötus in den Blutkreislauf entlassene zirkulierende zellfreie DNA (ccfDNA, circulating cell free DNA) aus dem Plasma isoliert. Spezifische Marker werden durch Real-Time PCR oder Next-Generation Sequencing (NGS) nachgewiesen.

Mit dem Maxwell® RSC ccfDNA Plasma Kit bietet Promega eine zuverlässige Methode, in einem einfachen Drei-Schritt-Protokoll amplifizierbare ccfDNA aus 0,2 – 1 ml Plasma ohne manuelle Probenvorbehandlung aufzureinigen. Für größere Probenvolumina (bis 4 ml) ist eine Custom-Version des Kits für das Maxwell® RSC Gerät erhältlich. Für die automatisierte Isolierung im 96-Well-Format ist ein Hochdurchsatz-Kit verfügbar. Damit kann ccfDNA aus 1 – 8 ml Plasma isoliert und gereinigt werden.

Maxwell® Anwendung

Hohe Ausbeute an ccfDNA quantifiziert mittels unterschiedlicher Methoden. Die Isolierung von ccfDNA mit dem Maxwell® RSC ccfDNA Plasma Kit von Promega liefert eine sehr gute Ausbeute an amplifizierbarer DNA. Bei der Quantifizierung mittels Fluoreszenzfarbstoffen (z. B. Quantifluor) tragen nicht-amplifizierbare DNA und in Mitbewerber-Kits verwendete Carrier-RNA zum Messergebnis bei. Dadurch wird im Gegensatz zur Quantifizierung mittels qPCR die Ausbeute an tatsächlich amplifizierbarer DNA überschätzt.

DN

A-A

usbe

ute

(ng)

Quantifluor qPCR

anderer Hersteller

Maxwell®

35

30

25

20

15

10

5

0

19

miRNAGenexpression und Biomarker – erfolgreiche Extraktion von miRNA

Automatisierte RNA-Extraktion inklusive miRNA-Fraktion

Die Bedeutung von Mikro-RNA (miRNA) in der Regulation der Genexpression wurde in den letzten Jahren in einer Vielzahl von Studien bestätigt. Inzwischen gibt es zunehmend Belege dafür, dass eine veränderte miRNA-Expression mit unterschiedlichen Entwicklungsstörungen und Krankheiten wie Krebs, Diabetes, aber auch viralen Infektionen assoziiert ist. Daher werden verschiedene miRNA-Spezies auch als Biomarker diskutiert.

Mit dem Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit bietet Promega eine Lösung zur automatisierten Extraktion reinster RNA inklusive miRNA-Fraktion aus Säugetiergewebe. Dies funktioniert ohne die Verwendung organischer Lösungsmittel.

Maxwell® Anwendung

RNA-Ausbeute

1600

1400

1200

1000

800

600

400

200

0

Ges

amt-

RN

A-K

onze

ntra

tion

(ng/

µl)

Leber Niere Pankreas

(a)

2,3

2,2

2,1

2,0

1,9

1,8

1,7

1,6

1,5

RNA-Reinheit

Leber Niere Pankreas

(b)

Typische Ausbeuten für verschiedene Gewebe aus der Maus sowie hohe Reinheit der RNA nach Extraktion mit dem Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit.

Abs

orpt

ions

verh

ältn

is

A260/A280

A260/A230

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Onkologie / Humangenetik Zuverlässige Extraktion für genetische Analysen

Das Maxwell® System zur Untersuchung genetischer Anomalien oder Krebs

Im Zusammenhang mit Krebs oder anderen Erkrankungen genetischen Ursprungs werden häufig Mutationsanalysen durchgeführt. Zahlreiche genetische Kliniklabore verlassen sich hierbei auf Maxwell®. Das System erlaubt, DNA mit hoher Qualität und Ausbeute aufzureinigen – DNA, die frei von PCR-inhibierenden Substanzen ist, und das selbst bei besonders empfindlichen Ausgangsmaterialien wie FFPE-Schnitten (mit Formalin fixiertes und in Paraffin eingebettetes Gewebe).

Maxwell® Anwendung

300

250

200

150

100

50

0

Kon

zent

ratio

n (n

g/µl

)

1 2 3

Blutproben verschiedener Spender (n = 3, 300 µl Vollblut, Elution in 50 µl)

16

14

12

10

8

6

4

2

0

Aus

beut

e (µ

g)

Der Maxwell® 16 LEV Blood DNA Kit liefert DNA mit hohen Ausbeuten bei Aufreinigungen aus Gesamtblut. Die in der Grafik gezeigten Proben wurden aus je 300 µl Vollblut von drei verschiedenen Spendern (1 – 3) gewonnen. Pro Person wurden drei Replikate angefertigt. Im Diagramm dargestellt sind die relativen und absoluten DNA-Erträge nach Aufreinigung mit dem Maxwell® 16 LEV Blood DNA Kit.

Konzentration (ng/µl)Ausbeute (µg)

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HLA / ImmunologieSchnelle Ergebnisse bei der HLA-Typisierung

Das Maxwell® System ist die ideale Lösung für HLA-Labore

Die Zahl der Organ- und Knochenmark-Transplantationen steigt ständig. HLA-Labore sind darauf angewiesen, schnell zu handeln, um auf der Suche nach geeigneten Spendern nicht unnötig Zeit zu verlieren. Eine automatisierte Möglichkeit zur DNA-Extraktion, die herkömmliche Säulenverfahren zur Aufreinigung überflüssig macht, spart Zeit. Für HLA- Labore bedeutet Maxwell® einen erheblichen Zeitgewinn bei der Typisierung mit repro- duzierbaren Ergebnissen und hohen Ausbeuten. Gleichzeitig ist die Fehleranfälligkeit bei der Handhabung gering. Die mit dem Maxwell® System extrahierte DNA kann für alle gängigen Nachweissysteme wie SSO, SSP oder SBT eingesetzt werden.

Maxwell® Anwendung

Maxwell® ist für uns die ideale Ergänzung zu unserem Großgerät, mit dem wir im Hochdurchsatz DNA und RNA isolieren. Wegen seines geringen Platzbedarfs und der schnellen Abarbeitungszeit erlaubt uns das Maxwell® System, auch bei geringerem Probendurchsatz automatisiert zu arbeiten.

Prof. Dr. Tobias LeglerAbt. Transfusionsmedizin

Universitätsmedizin Göttingen

50

40

30

20

10

0

Aus

beut

e (µ

g)

1 3 4 5Proben

2

BlutBuffy-Coat

Vergleich der DNA-Ausbeuten nach Extraktion mit dem Maxwell® 16 Blood DNA Aufreinigungs-Kit. Die Proben (Vollblut: 400 µl und Buffy-Coat: 250 µl aus 2,5 ml Blut) wurden von fünf unabhängigen Spendern gewonnen. Die Isolierung von gDNA wurde neben EDTA-Blut auch für Heparin- und Citrat-Blut sowie für Nabelschnurblut und Blut- karten erfolgreich getestet.

„

“

22

Virologie / Bakteriologie Sichere Extraktion für die Infektionsdiagnostik

Das Maxwell® System garantiert, selbst wenn es schnell gehen muss oder nur einzelne Proben dringend zu verarbeiten sind, DNA- und RNA-Isolierungen von höchster Qualität. Das Gerät wird erfolgreich für die Nukleinsäure-Extraktion aus verschiedenen Krankheitserregern eingesetzt (siehe Tabelle). Mit großer Zuverlässigkeit erzeugt es reproduzierbare Ergebnisse. Durch die integrierte UV-Lampe und die spezielle Aufreinigungstechnik über paramagnetische Partikel können Kreuzkontaminationen ausgeschlossen und die Sicherheit des Anwenders gewährleistet werden.

Maxwell® Anwendung

Nukleinsäure-Extraktion mit dem Maxwell® System aus diesen Erregern:

Der ausschlaggebende Grund für die vier Maxwell® Geräte im Labor war deren Flexibilität beim Einsatz in der Virus-Diagnostik. Die Proben treffen schubweise Tag und Nacht als Eilproben aus den Krankenhäusern ein. Eine schnelle Bearbeitung muss also selbst bei wenigen Proben möglich sein.

Marion Steinmetz Laborleiterin im Diagnostiklabor der Dres. med. Wisplinghoff, Köln

Krankheitserreger Nukleinsäure Probentyp

HCV RNA Plasma / Serum

Influenza (z. B. H1N1) RNA Tupfer

Norovirus, Rotavirus RNA Stuhl

CMV DNA Plasma / Serum

Adenovirus DNA Stuhl

EHEC DNA Stuhl

HPV DNA Tupfer

Herpesviren DNA Liquor

EBV DNA Blut

MRSA DNA Blut / Abstrich

„ “

23

Krankheitserreger aus ZeckenEffizientes Extrahieren von Erreger-Nukleinsäuren aus Ixodida

Zecken sind als Überträger bakterieller und viraler Infektionen zunehmend von Bedeutung. Die Labordiagnostik dieser Pathogene aus Zecken erfolgt im Allgemeinen mittels PCR. Hierbei ist die Probenvorbereitung zur Isolierung des genetischen Materials aus der Zecke ein kritischer und aufwändiger Schritt. Die automatisierte DNA-Isolierung mit dem Maxwell® System ist eine schnelle, flexible und günstige Möglichkeit, den Extraktionsprozess effizienter zu gestalten.

Maxwell® Anwendung

DNA und RNA für den Nachweis von Borrelien und FSME schnell und einfach extrahieren

• Die unbehandelte Zecke kann direkt als Probenmaterial eingesetzt werden: Die Larve, Nymphe oder Zecke wird einfach in die Kammer gegeben und das Aufreinigungsprotokoll wird gestartet. Dank der Kombination eines äußerst effektiven Lysepuffers mit der speziellen Mechanik des Maxwell® Geräts können auch schwierige Proben wie kleine Zecken oder Larven optimal homogenisiert und aufgeschlossen werden.

• Außerdem haben Sie die Möglichkeit, die Nukleinsäuren der Erreger für den Nachweis oder Ausschluss einer Neuroborreliose direkt aus Liquorproben zu isolieren.

Wir konnten mit dem Maxwell® System sogar einen sehr geringen Infektionsgrad (102 Borrelia burgdorferi-Zellen) nachweisen. Deshalb können wir das System zur Routineaufreinigung von Ixodes-Zecken bei der Diagnose von Borrelia burgdorferi nur empfehlen.

Dr. Rainer OehmeBaden-Württembergisches Landesgesundheitsamt, Stuttgart„ “

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DNA und RNA aus Pflanzen Automatisierte Extraktion ohne PCR-Inhibitoren

PCR-Nachweise bei pflanzlichen Proben sind oft eine Herausforderung. In Pflanzen häufig vorkommende Substanzen wie z. B. Polyphenole können bei der DNA- oder RNA-Extraktion oft nur unzureichend abgetrennt werden. Diese wirken als Inhibitoren in der nachfolgenden PCR. Die von Promega entwickelten Maxwell® Kits zur Nukleinsäure-Extraktion speziell aus Pflanzen beugen diesem unerwünschten Effekt vor. Bei der automatisierten Extraktion werden die inhi- bierenden Substanzen je nach Probe weitgehend bis vollständig abgetrennt. Das Ergebnis ist sehr reine DNA oder RNA. Das erspart eine aufwändige Nachreinigung und verhindert die Wiederholung der PCR oder anderer nachfolgender Anwendungen. Die Maxwell® DNA- und RNA-Pflanzen-Kits sind für eine Vielzahl von Pflanzenarten und Pflanzenteilen getestet.

Beispiele mit ausführlichen Informationen im Promega Protocol Selector: Plant and Food DNA/RNA Purification auf www.promega.de: https://goo.gl/Qkoz8X

Maxwell® Anwendung

(a) DNA

4,0

3,5

3,0

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0ΔC

q zw

isch

en 1

0-fa

ch V

erdü

nnun

g

(b) RNA

DNA (a) und RNA (b) wurden aus 20 bzw. 40 mg Pflanzenmaterial mit dem Maxwell® RSC Plant DNA bzw. RNA Kit extrahiert. Die RNA wurde in cDNA umgeschrieben. DNA (unverdünnt 10 µl) bzw. cDNA (Volumen probenspezifisch) wurden in verschiedenen Verdünnungen (unverdünnt vs. 1:10 und 1:100 verdünnt) in der qPCR eingesetzt. Dargestellt ist die Differenz der Cq-Werte aufeinanderfolgender Zehnerverdünnungen derselben Probe, für die ohne Inhibition der PCR idealerweise ein Wert von ΔCq = 3,3 zu erwarten ist.

Arabidopsis Mais Sojabohne

Minimale Hemmung von Downstream-Anwendungen

unverdünnt vs. 1:10-Verdünnung1:10- vs. 1:100-Verdünnung

4,0

3,5

3,0

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0ΔC

q zw

isch

en 1

0-fa

ch V

erdü

nnun

g

Arabidopsisunverdünnt

5 µl

Maisunverdünnt

2,5 µl

Sojabohneunverdünnt

2,0 µl

unverdünnt vs. 1:10-Verdünnung1:10- vs. 1:100-Verdünnung

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GMO in Lebensmitteln, Saatgut und TierfutterEinfachste Extraktion zum GMO-Nachweis aus einer Vielzahl an Probentypen

Für die DNA-Gewinnung konnten prozessierte Lebensmittelproben bisher nur sehr aufwändig manuell bearbeitet werden. Promega bietet mit dem „Maxwell® RSC PureFood GMO and Authentication Kit“ eine automatisierte Lösung. Zur Extraktion von DNA sind Saatgut, Tierfutter und wenig bis hochprozessierte Lebensmittel geeignet, für welche bei der manuellen DNA-Extraktion die CTAB-Methode verwendet wird. Zu den Probentypen gehören u. a. Rapssamen, Sojabohnen, Maiskörner, Reis, Schokoladenriegel, Milchpulver, Fisch-, Fleisch- und Wurst- waren (roh und gekocht, z. B. Pökelwaren, Konserven, Teilfertiggerichte, Hamburger, Döner). Für alle Materialien sind deutsche Kurzprotokolle erhältlich.

Durch die Kombination aus bewährter Aufreinigungschemie und der automatisierten Technik wird mit dem Promega Kit die DNA in gleichbleibend hoher Qualität isoliert.

Maxwell® Anwendung

2,4

2,0

1,6

1,2

0,8

0,4

0,0

Abs

orpt

ions

verh

ältn

is

Soja Mais Raps Dorsch Schwein Rind

Typische Reinheit der DNA aus verschiedenen Proben. DNA wurde aus 200 mg gemahlenen Soja-, Mais- und Rapsproben extrahiert und aus Dorsch, Schwein und Rind aus 50 mg rohen, zerkleinerten Proben gewonnen. Der Reinheitsgrad wurde mittels Spektroskopie bestimmt.

A260/A280

A260/A230

Gewinnung hochreiner DNA zur direkten Anwendung in nachfolgenden Assays

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Maxwell® und RIDA®GENEEin unschlagbares Team aus Extraktionssystem und Multiplex Real-Time PCR-Kits

Kombination aus automatisierter Aufreinigung von DNA / RNA und optimiertem Multiplex RT-PCR-Errergernachweis

Beim Nachweis von Pathogenen bilden das Maxwell® RSC System von Promega und die RIDA®GENE Kits von R-Biopharm für die Multiplex Real-Time PCR ein perfekt aufeinander abgestimmtes Team. Die Automatisierung der Extraktion mithilfe des Maxwell® RSC Systems erspart dem Anwender zeitaufwändige und unangenehme Arbeitsschritte. Das Probenhandling ist unkompliziert und Zentrifugationsschritte während der Aufreinigung sind überflüssig. Die Kombination des Maxwell® RSC Systems mit der hochsensitiven und spezifischen Multiplex Real-Time PCR-Methode liefert schnell und einfach zuverlässige Ergebnisse bei der Diagnostik.

• In nur 3 Schritten von der Probe zum Resultat

• Gesamte Versuchsdauer weniger als 90 Minuten

• Eindeutige, zuverlässige Ergebnisse durch Ausschluss von PCR-Inhibition

Maxwell® Anwendungen mit Partner-Produkten

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Schnelle und einfache Diagnostik pathogener Erreger

RIDA®GENE Kits von der R-Biopharm AG sind Multiplex Real-Time PCR-Kits für den qualitativen Nachweis viraler bzw. bakterieller Pathogene und Parasiten für gastrointestinale, nosokomiale, respiratorische und andere Infektionen. Die Kits enthalten alle erforderlichen PCR-Komponenten für den spezifischen Erregernachweis und können auf gängigen Real-Time PCR-Instrumenten eingesetzt werden.

So einfach kommen Sie zu Ihrem Ergebnis:

Isolierung und Aufreinigung der Nukleinsäuren durch Maxwell® Systeme

Erregernachweis mit RIDA®GENE Kit

1

2

3

Vorbereitung der Proben

• Probe in Kartusche geben

• Elutionspuffer vorlegen

• Kartusche(n) in Gerät platzieren

• Programm starten

• Ergebnis: reine und hochwertige DNA / RNA

• Bereitstellung aller Komponenten für die PCR

• Hohe Sensitivität und Spezifität

• Verwendung auf den gängigen Real-Time PCR-Instrumenten

• Extraktions- und Inhibitionskontrolle

• CE-Zertifizierung und Ringversuchteilnahme

Maxwell® Anwendung mit Partner-Produkten

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RIDA®GENE Real-Time PCR KitsFür den Nachweis gastrointestinaler, nosokomialer, respiratorischer und anderer Infektionen

Produkt Probentyp Art.-Nr.

Gastrointestinale Infektionen

Viren

RIDA®GENE Viral Stool Panel I Stuhl PG1315

RIDA®GENE Viral Stool Panel II Stuhl PG1325

RIDA®GENE Norovirus Stuhl PG1405

RIDA®GENE Norovirus I & II Stuhl PG1415

RIDA®GENE Sapovirus Stuhl PG1605

RIDA®GENE Enterovirus Stuhl / Liquor PG4705

Bakterien

RIDA®GENE Bacterial Stool Panel Stuhl PG2405

RIDA®GENE Bacterial Stool Panel I Stuhl PG2415

RIDA®GENE EHEC/EPEC Stuhl / Kultur PG2205

RIDA®GENE EAEC Stuhl / Kultur PG2215

RIDA®GENE ETEC/EIEC Stuhl / Kultur PG2225

RIDA®GENE STEC Stuhl / Kultur PG2255

RIDA®GENE E. coli Stool Panel I Stuhl / Kultur PG2285

RIDA®GENE Helicobacter pylori Biopsie PG2305

Parasiten

RIDA®GENE Parasitic Stool Panel Stuhl PG1705

RIDA®GENE Parasitic Stool Panel I Stuhl PG1715

RIDA®GENE Parasitic Stool Panel II Stuhl PG1725

RIDA®GENE Dientamoeba fragilis Stuhl PG1745

RIDA®GENE Entamoeba histolytica Stuhl / Leberabszesspunktat PG1735

Nosokomiale Infektionen

Viren & Bakterien

RIDA®GENE Hospital Stool Panel Stuhl PG0705

RIDA®GENE CD Toxin A/B Stuhl / Kultur PG0825

RIDA®GENE Clostridium difficile Stuhl / Kultur PG0835

RIDA®GENE MRSA Nasen- / Rachenabstrich, Kulturproben, Wund- / Leistenabstrich, Achsel- / Perianalabstrich

PG0605

RIDA®GENE MRSA LC2.0 Nasen- / Rachenabstrich, Kulturproben, Wund- / Leistenabstrich, Achsel- / Perianalabstrich

PG0625

Alle Kits enthalten PCR-Komponenten ausreichend für 100 Reaktionen. Für Extraktionsprotokolle der Maxwell® Systeme in Kombination mit RIDA®GENE Kits kontaktieren Sie bitte mdx@r-biopharm.de.

Maxwell® Anwendungen mit Partner-Produkten

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RIDA®GENE Real-Time PCR Kits Produkt Probentyp Art.-Nr.

Respiratorische Infektionen

Viren

RIDA®GENE Adenovirus Nasen- / Rachenabstrich / Nasopharyngeal-Abstrich / Rachenspülwasser / BAL

PG1005

RIDA®GENE Flu Nasen- / Rachenabstrich PG0505

RIDA®GENE Flu LC2.0 Nasen- / Rachenabstrich PG0525

RIDA®GENE Flu & RSV Nasen- / Rachenabstrich / BAL PG0545

RIDA®GENE Parainfluenza Nasen- / Rachenabstrich / Nasopharyngeal-Abstrich PG5805

RIDA®GENE RSV & hMPV Nasen- / Rachenabstrich / Nasopharyngeal-Abstrich/ Rachenspülwasser / BAL

PG5905

RIDA®GENE Coronavirus Nasen / Rachenabstrich / Rachenspülwasser PG6805

Bakterien

RIDA®GENE Bordetella Nasopharyngeal-Abstrich / Nasopharyngeal-Aspirat PG2505

RIDA®GENE Mycoplasma pneumoniae Rachenabstrich / BAL / Trachealsekret PG4305

RIDA®GENE Legionella Rachenabstrich / BAL / Trachealsekret PG8005

Pilze

RIDA®GENE Pneumocystis jirovecii BAL PG1905

Sexuell übertragbare Infektionen

Parasiten

RIDA®GENE Trichomonas vaginalis Abstrich / Urin PG4975

RIDA®GENE STI Mycoplasma Panel Abstrich / Urin PG4905

Haut- und Weichteilinfektionen

Bakterien

RIDA®GENE PVL Abstrich (Nase, Wunde) und Kultur PG0645

Bakterielle Imbalance

Bakterien

RIDA®GENE Gut Balance Stuhl PG0105

RIDA®GENE Akkermansia muciniphila Stuhl PG0145

RIDA®GENE Faecalibacterium prausnitzii Stuhl PG0155

Maxwell® Anwendung mit Partner-Produkten

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Maxwell® Geräte

Bestellnummer AS4500 AS6000 AS4060 AS8500

Modell Maxwell® RSC Instrument (Rapid Sample Concentrator)

Maxwell® 16 CSC (CE-IVD)

Maxwell® FSC Instrument (Forensic Sample Concentrator)

Maxwell® RSC 48 Instrument (Rapid Sample Concentrator)

Beschreibung Extraktionsgerät für bis zu 16 Proben für alle Anwendungen

CE-IVD-zertifiziertes Exktraktionsgerät für die Anwendung von CE-IVD Maxwell® Kits

Extraktionsgerät speziell für die Forensik für bis zu 16 Proben

Extraktionsgerät für bis zu 48 Proben für alle Anwendungen

Quantus™ Fluorometer zur Quantifizierung

inklusive – optional optional

Barcode-Scanner optional inklusive inklusive inklusive

Barcode-Tracking-System

inklusive inklusive inklusive inklusive

Bedienung Tablet-PC Tablet-PC Tablet-PC Tablet-PC

UV-Lampe zur Dekontamination

inklusive inklusive inklusive inklusive

Optimiertes Kartuschen- und Gerätedesign gegenüber Vorgängermodellen

ja ja ja ja

Zusatzfunktionen Kompatibel mit MaxPrep™ Liquid Handler*

– – Visuelles Prüfsystem verhindert manuelle Setup-Fehler, kompatibel mit MaxPrep™ Liquid Handler*

* Ergänzend unterstützt der MaxPrep® Liquid Handler (AS9201) als Bench-Top-Pipettierroboter bei der Probenvor- und -nachbereitung (weitere Infos dazu auf Seite 12).

Maxwell® Produktübersicht

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Maxwell® Kits

Weitere Kits für Maxwell® FSC (für Forensik) und Maxwell® HT (High Throughput) erhältlich. Alle Kits unter www.promega.com.

Maxwell® Produktübersicht

Best.Nr. Maxwell® RSC und CSC Kits (jeweils 48 Präparationen)

AS1520 Maxwell® RSC Whole Blood DNA Kit

AS1400 Maxwell® RSC Blood DNA Kit

AS1540 Maxwell® RSC Buffy Coat DNA Kit

AS1380 Maxwell® RSC SimplyRNA Blood Kit

AS1480 Maxwell® RSC Circulating Cell Free Plasma Kit

AX1115 Maxwell® RSC LV (large volume) Circulating Cell Free Plasma Kit

AS1630 Maxwell® RSC Stabilized Saliva DNA Kit

AS1640 Maxwell® RSC Buccal Swab DNA Kit

AS1620 Maxwell® RSC Cultured Cells DNA Kit

AS1370 Maxwell® RSC Cell DNA Kit

AS1390 Maxwell® RSC SimplyRNA Cells Kit

AS1610 Maxwell® RSC Tissue DNA Kit

AS1340 Maxwell® RSC SimplyRNA Tissue Kit

AS1460 Maxwell® RSC miRNA Tissue Kit

AS1450 Maxwell® RSC DNA FFPE Kit

AS1440 Maxwell® RSC RNA FFPE Kit

AS1490 Maxwell® RSC Plant DNA Kit

AS1500 Maxwell® RSC Plant RNA Kit

AS1600 Maxwell® RSC Pure Food GMO and Authentication Kit

AS1660 Maxwell® RSC Pure Food Pathogen Kit

AS1330 Maxwell® RSC Viral TNA Kit

Maxwell® IVD-Kits (nur für die Anwendung mit dem Maxwell® CSC Gerät)

AS1350 Maxwell® CSC DNA FFPE Kit (CE-IVD-zertifiziert)

AS1360 Maxwell® CSC RNA FFPE Kit (CE-IVD-zertifiziert)

AS1321 Maxwell® CSC DNA Blood Kit (CE-IVD-zertifiziert)

AS1410 Maxwell® CSC RNA Blood Kit (CE-IVD-zertifiziert)

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PCR-Reagenzien von Promega arbeiten zuverlässig und sichern optimale Amplifikations- ergebnisse. Sie sind erhältlich in vielen Formulierungen: einfache Taq- und Hot-Start-Taq-Polymerasen, Master-Mixe für Endpunkt- und Real-Time PCR und dNTPs für die Forschung (RUO = Research Use Only).

Für die Diagnostik bieten wir Ihnen die bewährten PCR-Reagenzien produziert unter GMP-Bedingungen und für GPR (General Purpose Reagents)-Einsatz an.

Amplifikation Hochqualitative PCR-Reagenzien für sorgenfreie Amplifikation

Weiterführende Produkte

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Sie benötigen einen PCR-Master-Mix für diagnostische Anwendungen oder die Herstellung eines diagnostischen Assays, aber die auf dem Markt erhältlichen fertigen Master-Mixe sind für Ihre Anwendung nicht optimal? Promega hat die Lösung für Sie:

Made-To-Order 2x PCR-Master-MixDer Made-To-Order 2x PCR-Master-Mix ist ein von Promega unter GMP-Bedingungen herge- stellter Master-Mix, dessen Formulierung Sie mithilfe des PCR Optimization Kits bestimmen und festlegen.

PCR Optimization KitDas PCR Optimization Kit enthält eine Auswahl von acht vorformulierten Puffern (A–H) höchster Qualität, welche zusammen ein breites Spektrum geeigneter Bedingungen für Endpunkt-, Multiplex- und Real-Time PCR sowie die Amplifikation GC-reicher Sequenzen oder in der Anwesenheit von Inhibitoren abdecken und bereits dNTPs enthalten. Das Kit enthält außerdem GoTaq® MDx Hot Start Polymerase sowie Magnesiumchlorid.

Finden Sie mit diesem System durch wenige einfache Experimente den maßgeschneiderten Amplifikations-Mix für Ihre Anwendung.

Legen Sie Ihre optimalen Reaktionsbedingungen fest

Ihr PCR-Master-Mix wird von Promega produziert

1 2 3

Bestimmen Sie Ihren Puffer

A B C D

E F G H -6°C -4°C -2°C +2°C +4°C +6°Cberechnete Tm

- Konzentration an MgCl2 [0,5–5 mM] - Enzymmenge [1–7,5 Units]

Made-to-Order2x PCR-Master-Mix

In drei Schritten zum optimalen PCR-Master-Mix

Konstante Qualität und Performance jeder Zeit wiederSobald Sie Ihre optimale PCR-Formulierung bestimmt haben, ist es ganz einfach. Teilen Sie uns hierzu Ihre Formulierung (Puffer-Sorte, sowie die Konzentration von MgCl2 und GoTaq® MDx Hot Start Polymerase) mit und wir produzieren Ihren persönlichen 2x PCR-Master-Mix nach Ihren Vorgaben unter GMP-Bedingungen. Die Abfüllung erfolgt in 1-ml-Röhrchen oder 25-ml-Flaschen, die Lieferzeit beträgt 3–4 Wochen nach Bestelleingang. Ihr Master-Mix kann in identischer Zusammensetzung immer wieder nachbestellt werden und ist für den GPR-Einsatz geeignet.

Weitere Informationen auf www.promega.com/pcroptimize

Weiterführende Produkte

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GoTaq® MDx DNA-PolymerasenDie GoTaq® MDx DNA Polymerasen enthalten full-length Taq-DNA-Polymerase mit 5’ -> 3’ Exonuklease-Aktivität. Die MgCl2-Konzentration kann flexibel angepasst werden. Die Produkte enthalten sowohl 5x Green GoTaq® Flexi Buffer für direktes Auftragen auf das Agarosegel als auch 5x Colorless GoTaq® Flexi Buffer für alle Anwendungen, die Absorptions- oder Fluoreszenzmessungen von PCR-Fragmenten im nächsten Schritt erfordern. Die GoTaq® MDx Hot Start Polymerase ist an einen patentierten Antikörper gebunden, welcher die Polymerase-Aktivität bei Raumtemperatur blockiert. Diese wird beim ersten Denaturierungsschritt wieder hergestellt. Die Glycerol-freien Produktformulierungen sind hochrein und damit für nachfolgende Produktionsschritte und zur Lyophilisierung geeignet. Alle GoTaq® MDx DNA Polymerasen sind auf Bakterien-, Pilz- und Säugetier-DNA getestet.

Produkt Größe Best.-Nr.

GoTaq® MDx DNA Polymerase (≥ 5 U/µl) 100 U D4001

500 U D4005

2.500 U D4006

GoTaq® MDx Glycerol-Free DNA Polymerase (≥ 5 U/µl) 500 U D4101

GoTaq® MDx Hot Start Polymerase (≥ 5 U/µl) 100 U D6001

500 U D6005

2.500 U D6006

10.000 U D6008

GoTaq® MDx High Concentration Hot Start Polymerase (≥ 50 U/µl) 1.000 U D6101

GoTaq® MDx Glycerol-Free Hot Start Polymerase (≥ 5 U/µl) 500 U D6201

PCR-Reagenzien für die Diagnostik und den Einsatz in diagnostischen Assays

• Zusätzliche QC-Tests

• Analysezertifikate mit chargenspezifischen QC-Daten

• Produziert unter GMP-Bedingungen mit validierten Prozessen, Methoden und Aus- stattung, um konstante Produkt-Performance von Charge zu Charge zu gewährleisten

• Sonderabfüllungen und -formulierungen möglich

• GPR (General Purpose Reagents)-Einsatz

dNTPsZuverlässiger, in der PCR getesteter, gebrauchsfertiger Mix* aus dATP, dCTP, dGTP und dTTP in Wasser mit einem pH-Wert von 7,5. Der dNTP-Mix überzeugt besonders durch seinen hohen Reinheitsgrad: ≥ 99 % Triphosphate (HPLC), ≤ 0,9 % Di-/Monophosphate (HPLC), nicht-nachweisbare Nuklease-Kontamination. Das Produkt ist für 36 Monate stabil.

Produkt Größe Best.-Nr.

PCR Nucleotide Mix je 10 mM / 200 µl C1141

je 10 mM / 1.000 µl C1145

je 25 mM / 200 µl U1431

je 25 mM / 1.000 µl U1432

* Die Einzelnukleotide dATP, dCTP, dGTP und dTTP, produziert unter GMP-Bedingungen, sind als Sonderabfüllungen erhältlich.

Weiterführende Produkte

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5x PCR-PufferGeschützte 5-fach-konzentrierte PCR-Puffer-Formulierungen, die dNTPs (A, G, C, T) enthalten. Im Lieferumfang enthalten sind außerdem 500 U GoTaq® MDx Hot Start Polymerase (≥ 5 U/µl) und 1,2 ml 25 mM MgCl2.

Produkt Größe Best.-Nr.

5x PCR Buffer A 1 ml D2301

5x PCR Buffer B 1 ml D2311

5x PCR Buffer C 1 ml D2321

5x PCR Buffer D 1 ml D2331

5x PCR Buffer E 1 ml D2341

5x PCR Buffer F 1 ml D2351

5x PCR Buffer G 1 ml D2361

5x PCR Buffer H 1 ml D2371

Weiterführende Produkte

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dNTPsGebrauchsfertige Mixe aus dATP, dCTP, dGTP und dTTP. Hoher Reinheitsgrad (> 99 % Triphosphate) und pH-Wert von 7,5 in Wasser.

Produkt Größe Best.-Nr.

dNTP Mix 10 mM / 200 µl U1511

10 mM / 1.000 µl U1515

PCR-Reagenzien für die Forschung

• Optimale Ergebnisse bei einer großen Bandbreite von Applikationen

• Kauf ohne Risiko mit der PCR Satisfaction Guarantee

• RUO (Research Use Only)-Einsatz

GoTaq® G2 DNA-Polymerasen und Master-MixeDie GoTaq® G2 DNA Polymerasen enthalten full-length Taq DNA Polymerase mit 5’ -> 3’ Exonuklease-Aktivität. Die Produkte enthalten einen 5x Green GoTaq® Puffer für direktes Auftragen auf das Agarosegel und / oder einen 5x Colorless GoTaq® Puffer für alle Anwendungen, die Absorptions- oder Fluoreszenzmessungen von PCR-Fragmenten vor der Aufreinigung erfordern. Die GoTaq® G2 Hot Start Polymerase ist an einen patentierten Antikörper gebunden, welcher die Polymerase-Aktivität bei Raumtemperatur blockiert. Diese wird beim ersten Denaturierungs-Schritt innerhalb von nur 2 Minuten wieder hergestellt.

ProduktMgCl2-Konz. dNTPs

Hot Start Polymerase

5x Green GoTaq® Puffer

5x Colorless GoTaq® Puffer Größe Best.-Nr.

GoTaq® G2 DNA Polymerase

1,5 mM ü ü 100 U M7841

500 U M7845

2.500 U M7848

GoTaq® G2 Flexi DNA Polymerase

separat (variabel)

ü ü 100 U M7801

500 U M7805

2.500 U M7806

10.000 U M7808

GoTaq® G2 Hot Start Polymerase

separat (variabel)

ü ü ü 100 U M7401

500 U M7405

2.500 U M7406

10.000 U M7408

GoTaq® G2 Green Master Mix

1,5 mM im Mix im Mix 100 Reak. M7822

1.000 Reak. M7823

GoTaq® G2 Colorless Master Mix

1,5 mM im Mix im Mix 100 Reak. M7832

1.000 Reak. M7833

GoTaq® G2 Hot Start Green Master Mix

2 mM im Mix im Mix im Mix 100 Reak. M7422

1.000 Reak. M7423

GoTaq® G2 Hot Start Colorless Master Mix

2 mM im Mix im Mix im Mix 100 Reak. M7432

1.000 Reak. M7433

Weiterführende Produkte

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Farbstoffbasierte Real-Time PCRProdukt Größe Best.-Nr.

GoTaq® qPCR Master MixDer Farbstoff BRYT Green® zeigt eine höhere dsDNA-abhängige Fluoreszenzzunahme und weniger PCR-Inhibierung als SYBR® Green I. 2x GoTaq® qPCR Master Mix mit GoTaq® G2 Hot Start Polymerase, BRYT Green®, MgCl2, dNTPs und Puffer. Kompatibel mit allen gängigen Thermocyclern. CXR-Referenzfarbstoff ist bereits im Mix enthalten. Für Thermocycler, die eine größere Menge CXR-Referenzfarbstoff benötigen (High ROX-Geräte), liegt ein Extra-Röhrchen CXR der Verpackung bei.

5 x 1 ml A6001

25 x 1 ml A6002

GoTaq® 2-Step RT-qPCR System2-Step RT-qPCR-System zur Quantifizierung von RNA. cDNA-Synthese mit dem GoScript™ Reverse Transcription System und Quantifizierung mit dem GoTaq® qPCR Master Mix. Alle Reagenzien in einem Kit: 2x GoTaq® qPCR Master Mix, GoScript™ Reverse Transcriptase, 5x GoScript™ Reaktionspuffer, PCR Nucleotide Mix, Oligo(dT)15 Primer, Random Primers, Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor, CXR Reference Dye, MgCl2 und nukleasefreies Wasser.

50 RT-Reaktionen + 5 ml qPCR Master Mix

A6010

GoTaq® 1-Step RT-qPCR SystemSystem zur Analyse von RNA durch quantitative 1-Step Reverse Transcription PCR.

200 Reaktionen à 50 µl A6020

Sondenbasierte Real-Time PCRProdukt Größe Best.-Nr.

GoTaq® Probe qPCR Master Mix2x GoTaq® Probe qPCR Master Mix mit GoTaq® G2 Hot Start Polymerase, MgCl2, dNTPs und Puffer. Kompatibel mit allen gängigen Thermocyclern. CXR-Referenzfarbstoff liegt separat bei.

2 x 1 ml A6101

10 x 1 ml A6102

GoTaq® Probe 2-Step RT-qPCR System2-Step RT-qPCR System zur Quantifizierung von RNA. cDNA-Synthese mit dem GoScript™ Reverse Transcription System und Quantifizierung mit dem GoTaq® Probe qPCR Master Mix. Alle Reagenzien in einem Kit: 2x GoTaq® Probe qPCR Master Mix, GoScript™ Reverse Transcriptase, 5x GoScript™ Reaktionspuffer, PCR Nucleotide Mix, Oligo(dT)15 Primer, Random Primers, Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor, CXR Reference Dye, MgCl2 und nukleasefreies Wasser.

50 RT-Reaktionen+ 2 ml qPCR Master Mix

A6110

GoTaq® Probe 1-Step RT-qPCR SystemSystem zur quantitativen Analyse von RNA durch quantitative 1-Step Reverse Transcription PCR (RT-qPCR). Formulierung mit dUTP, Verschleppung von DNA-Kontamination kontrollierbar durch Uracil-DNA-Glycosylase (UNG).

200 Reaktionen à 20 µl A6120

GoTaq® qPCR-Produkte für jede Forschungsanwendung

Nutzen Sie bei der farbstoffbasierten Real-Time PCR die Kombination aus robuster Amplifikation und hoher Sensitivität durch den besonders hellen Farbstoff BRYT Green® beim GoTaq® qPCR Master Mix. Der GoTaq® Probe qPCR Master Mix für die sondenbasierte qPCR zeichnet sich durch seine besondere Resistenz gebenüber PCR-Inhibitoren aus und ist damit ein hocheffizientes Produkt in der Expressionsanalyse.

Weiterführende Produkte

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• 24/7 Verfügbarkeit und Zugang zu Promega Produkten

• Intelligente Bevorratungs- und Abrechnungstechnologie übernimmt Bestellungen von regelmäßig benötigten Produkten

• Ständige Überprüfung des Lagerbestandes und der Temperatur – zur Dokumentation bei Bedarf abrufbar

• Für zugelassene Kunden mit der Helix® App auch von außerhalb Einsicht in den aktuellen Lagerbestand sowie die Möglich- keit, technische Manuals einzusehen und zu versenden

Weitere Informationen unter www.promega.com/helix

Das Helix® SystemPromega Produkte zu jeder Zeit

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Hilfreiche Information auf www.promega.com

• BioMath Calculators für schnelle molekularbiologische Berechnungen

• „DNA and RNA Purification Product Selector“ zur Auswahl des für Ihre Probe und Applikation geeigneten Kits

• Promega-App zum automatischen Kolonien-Zählen auf einer Platte

• Promega-App zur Arbeit mit Restriktionsenzymen

• Webinare und deren Aufzeichnungen zu aktuellen Themen

• Produktzitierungen, Zertifikate und Anwenderartikel

Flexibel für Sie erreichbarDie Promega GmbH in Mannheim

Wir sind per Telefon, E-Mail oder Fax werktags von 8 – 18 Uhr für Sie da.

Kundenservice/Bestellung

Bei Bestellungen, Fragen zu Preisen, bestehenden Angeboten, Lieferterminen, oder Rechnungen.

Tel.: +49 621 8501-291 Fax: +49 621 8501-222 E-Mail: de_custserv@promega.com

Bei Bestellung von Raumtemperatur-Ware bis 15:00 Uhr erfolgt der Versand in der Regel noch am selben Tag.

Vereinfachen Sie Ihre interne Rechnungs- abwicklung: e-Procurement und elektro- nische Rechnungsstellung möglich!

Technische Beratung

Bei wissenschaftlich-technischen Fragen, zum Beispiel bei der Auswahl des richtigen Produkts, dessen Anwendung oder Fragen zum Protokoll.

Tel.: +49 621 8501-290 E-Mail: de_techserv@promega.com

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