236 G. LOSSE, K.-H. HOFFMANN und G. HETZER Bd. 684

PEPTIDSYNTHESEN MIT 0-[CBO-AMINOACYLI-OXIMEN UND 0-[CBO-AMINOACYLI-PYRAZOLON-ENOLEN

von GUNTER LOSE *, KARL-HEINZ HOFFMANN und GUDRUN HETZER

Aus dem Institut fur Organische Chernie der Universitat Halle und dem Institut fur Organische Chemie der Technischen Universitat Dresden

Eingegangen am 13. November 1964

Mit 3-Nitro-acetophenonoxim und I-Phenyl-3-methyl-pyrazolon-(5) werden aktivierte Oxim- bzw. Enolester von N-geschutzten Aminosauren synthetisiert und Moglichkeiten zur selektiven Abspaltung der N-Schutzgruppe aus diesen aktivierten Produkten untersucht. Der Racemisierungsgrad fur beide Methoden wird nach dem ANDERSON-YOUNG-Test bestimmt und die allgemeinere Anwend-

barkeit der neuen Aktivierungsmethoden zur Peptidsynthese gezeigt.

Kiirzlich berichteten wir iiber neue aminolyseaktive Derivate N-geschutzter Amino- sauren 1). Wegen der leichten Zuganglichkeit und hohen Aminolysegeschwindigkeit haben wir uns besonders mit den 0-Aminoacyl-Derivaten des 3-Nitro-acetophenon- oxims und des l-Phenyl-3-methyl-pyrazolons-(5) beschaftigt und deren Anwendungs- moglichkeit fur peptidsynthetische Zwecke studiert. Die Umsetzung dieser Aktivie- rungsmittel mit der Carboxylgruppe N-geschiitzter Aminosauren gelingt nach der Carbodiimid-Methode2) (Methode A) oder nach der Chlorameisensaureester-Me- thode3) (Methode B) in 70-880-proz. Ausbeute:

R ? =IcH3 $ C b o - N H - d H - C O z g C H 3

I C6H5

p;T' Cbo-NH-CH-COZH + 0

CsH5

In Tabelle 1 ist eine Reihe dieser N-Cbo-Aminoacyl-Derivate aufgefiihrt.

Am N-Atom ungeschiitzte AminosSiure-Aktivierungsprodukte haben fur Peptid- synthesen besonderen Wert. Deshalb wurde die selektive Entfernung der Cbo-Gruppe an den Oxim- und Pyrazolonderivaten untersucht. Bei Umsetzung der 0-[N-Cbo- Aminoacyll-oxime rnit HBr/Eisessig trat Beckmann-Umlagerung ein rnit parallel

* ) Neue Anschrifr: Prof. Dr. G. LOSSE, Institut fur Organische Chemie der Technischen

1 ) G. LOSSE, A. BARTH und K. SCHATZ, Liebigs Ann. Chem. 677, 185 (1964). 2) J. C. SHEEHAN und G. P. HESS, J. Amer. chern. SOC. 77, 1067 (1955). 3) TH. WIELAND und B. HEINKE, Liebigs Ann. Chem. 615, 184 (1958); F. WEYCAND und

Universitat, Dresden, Mommsenstr. 6 .

W. STEGLICH, Chem. Ber. 93, 2983 (1960).

1965 Peptidsynthesen mit carboxylaktivierten Cbo-Aminosauren 237

Tabelle 1. Oxim- und Pyrazolon-Aktivierungsprodukte N-geschiitzter Aminosauren

N-Cbo-Derivat von

Gly-pyrf)

DL-Ala-ox g)

L- Ala-ox

vr-Ala-pyr

L- Ala-pyr

vL-Val-ox

L-Val-ox

DL-Val-pyr

L-Val-pyr

vL-Leu-pyr

vL-Phe-ox

L-Phe-ox

DL-Phe-pyr

L-Phe-pyr

L-S-BZ-CYS-OX

L-S-Bz-Cys-pyr

L-AsP-E-OBZ-

L-Glu-E-OBZ-

Di-cbo-L-Lys-ox

Di-cbo-r-Lys- pyr

Cbo-L-Phe- L- Ala-ox

Cbo-L-Val- L- Ala-pyr

p-ox

Y-PYr

Me- thode Schmp.

132" -~

80-82"

100"

119- 120"

108 - 109"

79-81"

86 - 87"

94"

83 -- 84"

61 -62"

87"

1 lo0

114"

137- 138"

- e)

- e )

88-89"

85 -86"

- e )

100 -- 10 I"

154- 155"

I05 - 106"

Summenformel (Mol.-Gew.)

Analyse C H N

-27.6a)

-22.0b)

-15.5a)

-24.5C)

-5.0a)

-19.5C)

-20.8a)

- 13. I b)

- 18.2a)

-3.25")

--29.4a)

- 26.2d)

-4.60a)

-28.1C)

a) In Aceton. - b) In Eisessig. - c) In Athanol. - d) In Pyridin. - e) Amorph. - m C H 3 -

Ber. 65.74 5.24 Gef. 65.84 5.49 Ber. 59.27 4.94 Gef. 59.11 5.12 Ber. 59.27 4.94 Gef. 58.97 5.25 Ber. 66.48 5.58 Gef. 66.52 5.58 Ber. 66.48 5.58 Gef. 66.39 5.77 Ber. 61.10 5.57 Gef. 61.00 5.58 Ber. 61.10 5.57 Gef. 61.27 6.06 Ber. 67.79 6.18 Gef. 67.95 6.02 Ber. 67.79 6.18 Gef. 67.93 6.39 Ber. 68.39 6.46 Gef. 68.75 6.60 Ber. 65.15 4.59 Gef. 65.16 5.31 Ber. 65.15 4.59 Gef. 64.75 5.21 Ber. 71.19 5.53 Gef. 71.10 5.48 Ber. 71.19 5.53 Gef. 71.20 5.65 Ber. - - Gef. - - Ber. 67.05 5.53 Gef. 67.00 5.71 Ber. 62.39 4.82 Gef. 62.48 4.71 Ber. 68.10 5.84 Gef. 68.15 5.78 Ber. -- - Gef. - - Ber. 67.35 6.01 Gef. 67.07 5.96 Ber. 63.18 5.26 Gef. 63.06 5.36 Ber. 65.25 6.32 Gef. 64.95 7.08

11.50 11.70 10.91 11.00 10.91 10.93 11.08 11.16 11.08 11.41 10.80 10.55 10.80 10.71 10.31 10.36 10.31 10.36 9.97

10.05 9.11 8.77 9.11 9.21 9.23 9.48 9.23 9.45 8.03 8.16 - -

8.16 8.46 7.95 8.31 9.73 9.74 9.82 9.99

10.53 10.86 11.71 12.37

f ) pyr = Abk. fijr ,!J g) ox = Abk. f i ir - O - N = d / \=/ AH3 'NO1

N-CsHs

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laufender Entcarbobenzoylierung und weiteren Folgereaktionen. Diese Urnsetzung haben CHAPMAN und Howrs4) an den Oxim-0-sulfonsaure- und 0-pikrylestern aus- fuhrlicher untersucht.

Bei der katalytischen Hydrierung des 0-[N-Cbo-Glycyll- oder 0-[N-Cbo-Phenyl- alanyll-acetophenonoxirns rnit Palladium in Gegenwart von 1 Aquiv. Saure trat neben der Abspaltung der N-Schutzgruppe auch Reduktion der C =N-Bindung ein. Aminosaure und a-Phenyl-athylarnin IieRen sich quantitativ isolieren:

Zur Gewinnung ungeschutzter Aminoacyl-oxirne ist der Cbo-Rest ungeeignet. Besser geeignet war der von ZERVAS, BOROVAS und G ~ z r s s ) vorgeschlagene 2-Nitro- benzolsulfenyl-Rest (NPS-Rest). Die NPS-Aminosauren wurden nach der Carbodi- irnid-Methode in ihre Oxirnester iibergefuhrt. AnschlieRend wurde der NPS-Rest rnit 3 Aquivalenten HCl in Essigester unter Bildung des aktivierten Esters abgespalten :

R ? Ho 0 I NPS-NH-CH-CO-~.Y HBN-CH- CO-os

(Abk. , , o x " siehe Tab. 1)

Irn Gegensatz zu diesen Oxirnestern sind die 0-[N-Cbo-Aminoacyll-pyrazolon- enole ohne weiteres selektiv decarbobenzoylierbar. HBr/Eisessig wie auch die kata- lytische Hydrierung in Gegenwart von 4 Aquivalenten HBr liefert in 90-proz. Ausbeute den am N-Atom ungeschiitzten aktivierten Ester als Dihydrobrornid.

B H Br Y Cbo-NH-CH-CO-pyr - H3N-CH-CO-pyr. 2 H B r

Tabelle 2. 0-[Aminoacyll-pyrazolon-dihydrobromide durch Acidolyse oder Hydrogenolyse der N-Cbo-Verbindungen

Summenformel Analyse (Mo1.-Gew.) N Schmp. Dihydrobromid

von ____ ~ ~ ___ - .

G~Y-PY~ 157 - 159" C I ~ H I S B ~ Z N ~ ~ ~ Ber. 10.69 (393.1) Gef. 10.39

DL-Val-pyr 134-136" C I S H ~ I B ~ ~ N ~ O ~ Ber. 9.64 (435.2) Gef. 9.52

L-Val-pyr *) 196- 198" CI 5H21 Br2NKh Ber. 9.64 (435.2) Gef. 9.27

DL-Phe-pyr 140- 142" C I ~ H Z I B ~ Z N ~ ~ Z Ber. 8.69 (48 3.2) Gef. 8.30

*) [a]2,0 = +7.5" (in khanol).

4) A. W. CHAPMAN und G . C . HOWIS, J. chem. SOC. [London] 1936,448, und friihere Arbeiten. 5 ) L. ZERVAS, D. BOROVAS und E. GAZIS, J. Amer. chem. SOC. 85, 3660 (1963).

1965 Peptidsynthesen mit carboxylaktivierten Cbo-Aminosauren 239

Weiterhin haben wir zum Nachweis moglicher Racemisierung den ANDERSON- Youh'G-Test6) ausgefiihrt. Die Kupplung zum Tripeptidderivat erfolgte jeweils bei Raumtemperatur.

1 a : Cbo-Gly-L-Phe-ox + Gly-OEt - b: Cbo-Gly-ox + L-Phe-Gly-OEt -

2 a : Cbo-Gly-L-Phe-pyr + Gly-OEt -

b: Cbo-Gly-pyr + L-Phe-Gly-OEt -

+ Cbo-Gly-L-Phe-Gly-OEt

Tabelle 3. Nach der Oxim- und Pyrazolon-Methode dargestellte L-Peptidderivate

Peptidderivate [4&0 i n Summen-

formel Analyse (Die geknupfte Peptid- Aus- bindung wurde durch beute Schmp' Athano' (Mo1.-Gew.) -- gekennzeichnet.)

Oxim- Methode: Cbo-Phe- Ala 54 "/, 158 - 160" - 10.6 C20H22N205

(370.4)

(552.7) Cbo-Ala--Phea) 50 I76 - 178" + 19.4 C32H46N305

Di-cbo-Lys-PheOEt 88 130- 131" -43.7 C33H39N307

Cbo-Gly-Phe-GlyOEt 89 1 17- 1 19" - 1 1.8 C23H27N306

Cbo-Ala--Phe-GlyOEt 84 184- 185" -35.0~) C24H29N306

Cbo-Phe-Ala-Phe- 60 187-189" -34.9d) C33H38N407

(589.7)

(44 I .5)

(445.5)

GlyOEt (602.7)

Ber. N 7.47 Gef. 7.70 Ber. N 7.61 Gef. 7.70 Ber. N 6.51 Gef. 6.90 Ber. N 7.13 Gef. 7.52 Ber. N 9.54 Gef. 9.76 Ber. N 9.23 Gef. 9.32 Ber. N 9.30 Gef. 9.10

Pyrazolon-Methode: Cbo-Val--Ala 60 179" -19.5 C16H22N205 Ber. N 8.69

(322.4) Gef. 8.75 Cbo-Phe--Val 60 145-146" -16.0 C22H26N205 Ber. N 6.58

(398.4) Gef. 6.58 Cbo-Gly--Phe 73 127-128" +38.2 C19H20N205 Ber. N 7.86

(356.4) Gef. 7.98 Cbo- Ala-Phe 64 121 -122" +66.7e) C20H22N205 Ber. C 64.85 H 5.99

(370.4) Gef. 64.72 5.99 Cbo-Cys-S-Bz--GlyOEt 72 99- 100" -26.9f) C22H26N205S Ber. C 61.38 H 6.09

(430.4) Gef. 61.38 6.13 a) Dicyclohexylarnrnoniumsalz. - b) In Methanol. - c) In Chloroform. - d) In Aceton. - e) In I n HCI. - f ) In Eisessig.

6) G . W. ANDERSON und R. W. YOUNG, J. Amer. chem. SOC. 74, 5307 (1952).

240 G. LOSSE, K.-H. HOFFMANN und G. HETZER Bd. 684

Fur 1 a ergab sich ein Racernisierungsgrad von 21 %, bei 2a trat 8-proz. Racerni- sierung ein. In beiden Fallen wurden die Cbo-Dipeptid-Aktivierungsprodukte ohne Reinigung zurn Tripeptidderivat urngesetzt, so daB in diesen Werten der Racerni- sierungsgrad der zur Einfiihrung der Aktivierungsrnittel vorgeschalteten und bei - 15" ausgefuhrten Carbodiirnid-Methode rnit enthalten ist. Dieser diirfte jedoch bei Ternperaturen unter 0" gering sein 7). Bei den Umsetzungen 1 b und 2 b trat erwartungs- gernaB keine Racernisierung ein, da hier bei Glycin carboxylseitig verlangert wird. Gegenuber den Methoden der aktivierten Ester, denen diese Verfahren bezuglich ihrer Arninolyseaktivitat etwa gleichzusetzen sind, ergeben sich hiernach in sterischer Hinsicht ungunstigere Resultate.

In Tabelle 3 sind Peptide aufgefuhrt, die wir zurn Studiurn der Kniipfungsrnoglich- keiten nach diesen Methoden aufgebaut haben. Als Kupplungskornponenten fur die carboxylaktive Verbindung dienten entweder die Triathylarnrnoniurnsalze freier Aminosauren in Dioxan/Wassers) oder ihre Ester in Tetrahydrofuran bzw. Acetonitril.

Herrn Dr. A. BARTH danken wir sehr fur seine Mitwirkung an dieser Untersuchung.

B E S C H R E I B U N G D E R V E R S U C H E

Darstellung der 0-[N-Cbo-Aminoacyll-oxime und -pyrazolon-enole (Allgemeine Vorschrift) : a) Mit Chlorameisensaureathylester: 0.02 Mol Cbo-Aminosaure in 30 ccm absol. Tetrahydro-

furan werden n i t 2.8 ccm (0.02 Mol) absol. Triiithylamin versetzt. Nach Zugabe von 1.8 ccm (0.02 Mol) Chlorameisensiiureester (bei -15") und 1/2stdg. Ruhren bei - 1 5 " fiigt man eine gesatt. Losung von 0.02 Mol3-Nitro-acetophenonoxim~~~~) (Schmp. 134- 135") bzw. I-Phenyl- 3-methyl-pyrazolon-(5) 11) (Schmp. 127") in absol. Tetrahydrofuran zu und riihrt 1 Stde. bei -15' und 12 Stdn. bei 18". Nach dem Abdestillieren wird der Ruckstand in Essigester auf- genommen und mit 5-proz. NaHC03-Losung und Wasser gewaschen, uber Na2S04 getrock- net und mit Petrolather gefallt.

b) Mit Dicyclohexylcarbodiimid: 0.02 Mol Cbo-Aminosaure + 0.02 Mol 3-Nitro-aceto- phenonoxim bzw. I-Phenyl-3-methyl-pyrazolon- ( 5 ) in 50 ccm absol. Acetonitril werden bei - 15" mit 4.12 g (0.02 Mol) Dicyclohexylcarbodiimidl2) in 10 ccm absol. Acetonitril versetzt. Nach 3stdg. Stehenlassen bei - 15" und 12 Stdn. bei Raumtemperatur wird vom Harnstotf abfiltriert und die Losung i. Vak. eingedampft. Der Ruckstand wird in Essigester aufgenorn- men und mit I n HCl, Wasser und 5-proz. NaHC03-Losung gewaschen. Nach Trocknen uber Na2S04 und Einengen i. Vak. fallt man das Produkt mit Petrolather aus. Mitausgefal- lenes Oxim bzw. Pyrazolon wird durch mehrstundiges Erhitzen bei 60"/ 10-3 Torr abgetrennt.

7) G. W. ANDERSON und F. M. CALLAHAN, J. Amer. chem. SOC. 80, 2902 (1958). 8) K. NOVAK und J. Z . SIEMION, Roczniki Chem. [Ann. SOC. chim. Polonorum] 37, 693

9 ) ST. v. KOSTANECKI und J. TAMBOR, Ber. dtsch. chem. Ges. 34, 1690 (1901). (1963) [C. A. 60, 8128 (1964)l.

10) S. GABRIEL, Ber. dtsch. chem. Ges. 15, 3067 (1882), und zwar S. 3063. 11) L. KNORR, Liebigs Ann. Chem. 238, 137 (1887), und zwar S. 147. 12) P. SCHLACK und G. KEIL, Liebigs Ann. Chern. 661, 171 (1962).

1965 Peptidsynthesen rnit carboxylaktivierten Cbo-Aminosauren 24 1

Die Produkte werden gereinigt durch Losen in Essigester, Ather, Chloroform oder Benzol und Fallen rnit Petrolather.

Entcarbobenzoylierung der 0-[N-Cbo-Aminoacyll-pyrazolon-enole: a) Mit HBrlEisessig: 5 mMol 0-[Cbo-Aniinoacyll-pyrazolon-enol in 5 ccm Eisessig werden rnit 5 ccm 33-proz. HBrlEisessig 1 Stde. bei 18" stehengelassen. Dann wird bis zum Aufhoren der C02-Entwick- lung auf 40" erwarmt und rnit 80 ccm absol. k h e r gefallt. Das Rohprodukt wird 10 Stdn. bei 2 Torr und 60" iiber PzO5 aufbewahrt und anschlieaend aus absol. Alkohol/hher kristalli- siert. Ausbeute 90-95% d. Th.

b) Durch katnlytische Hydrierung: 5 mMol 0-[Cbo-AminoacylJ-pyrazolon-enol werden in 100 ccm absol. T H F + 10 ccm HBr-haltigem T H F (2n) rnit Pd-Mohr hydriert. Nach Abtren- nen des Katalysators und Abdampfen i. Vak. wird das Dihydrobromid rnit absol. k h e r gefallt und, wie oben beschrieben, aufgearbeitet. Ausbeute 90-95 % d. Th.

NPS-~-Phenylalanins,13). - 20 mMol L-Phenylalanin in 10 ccm 2n NaOH + 25 ccm Dioxan werden innerhalb 1 5 Min. gleichzeitig tropfenweise rnit 2.2 mMol 2-Nitro-benzol- sulfensaurechloridl4) (dargestellt aus Bis-[2-nitro-phenyl]-disulfid, Schmp. 193 - 195") und 12 ccm 2n NaOH unter kraftigem Riihren versetzt. AnschlieDend fiigt man 200 ccm Wasser hinzu, filtriert und sauert rnit 1 n H2S04 an. Nach dem Erstarren des ausgeschiedenen dles wird aus Essigester/Petrolather umkristallisiert. Ausbeute 90% d. Th. ; Schmp. 134- 135"; [a]$' = -47.7" (c = 4.0, in Tetrahydrofuran).

O-[NPS-~-Phenylalanyll-3-nitro-acetophenonoxim. - Die Verbindung wurde entsprechend wie die 0-[Cbo-Aminoacyll-oxime nach der Carbodiimid-Methode gewonnen. Ausbeute 62 % d. Th.; Schmp. 123-124'; [a]$' = -80.6" (c = 0.5, in Aceton).

C23H20N406S (480.5) Ber. C 57.48 H 4.17 N 11.46 Gef. C 57.51 H 4.34 N 11.53

O-~~-PhenylalanylJ-3-nitro-acetophenonoxim-hydrochlorid. - 2.5m Mol voranstehender Ver- bindung in 25 ccm Essigester werden rnit 4ccm NCI-haltigem T H F (1.9n) 1 Stde. bei 18' stehengelassen. Man saugt ab, wascht rnit Ather und kristallisiert aus Athanol/kher um. Ausbeute 45% d. Th.; Schmp. 170". [a];' = +33.8" (c = 0.5, in khanol) .

C17H18CIN304 (363.8) Ber. C 56.18 H 4.96 N 11.56 Gef. C 55.75 H 5.25 N 11.98

A. Prufung der Oxim-Methode mittels des Anderson-Tests Cbo-Gly-L-Phe-ox. - Cbo-Gly-~-Phels) (Schmp. 125-126"; [a]$' = +38.5", in khano l )

wurde entsprechend der allgemeinen Vorschrift nach der Carbodiimid-Methode rnit 3-Nitro- acetophenonoxim aktiviert und durch Hochvakuumbehandlung von fliichtigen Bestandteilen befreit. [a];' = -1.53" (c = 1.0, in Aceton).

C27H26N407 (518.5) Ber. C 62.50 H 5.02 N 10.81 Gef. C 62.77 H 5.76 N 10.82

5 mMol aktiviertes Peptid in 100 ccm Acetonitril + 5 mMol Glycinathylester-hydrochlorid (Schmp. 144") und 5 mMol Triuthylamin werden 30 Min. bei Raumtemperatur geruhrt und iiber Nacht stehengelassen. Nach Abdampfen, Aufnehmen in Essigester und Abtrennen des

13) H. GOERDELER und A. HOLST, Angew. Chem. 71, 775 (1959). 14) M. H. HUBACHER, Org. Syntheses 2, 455 (1950). 15) K . HOFMANN und M. BERGMANN, J. biol. Chemistry 134, 225 (1940).

Liebigs Ann. Chem. Bd. 684 16

242 G. LOSSE, K.-H. HOFFMANN und G. HETZER Bd. 684

Triathylamin-hydrochlorids wird die Losung nacheinander rnit 1 n HCl, gesatt. NaHC03- Losung und Wasser gewaschen, getrocknet und i. Vak. eingeengt. Das Tripeptidderivat wird rnit Petrolather gefallt. Ausbeute 81 %. Die Behandlung nach ANDERSON und YOUNG^) in 2-proz. bithano1 liefert 0.189 g (21 %) Racemat vom Schmp. 128-130". AuRerdem wurden 0.63 g (70%) L-Verbindung vom Schmp. 119-121" und [a]'," = -10.6" (c = 2.0, in Athanol) isoliert .

Das gleiche Verfahren rnit Cbo-Gly-0x1) (Schmp. 79 - 80") und L-Phe-Gly-OEt . HBr (Schmp. 135 - 136"; = +39.9", in Wasser) liefert kein Racemat, sondern ausschlieRlich Cbo-L-Tripeptidester vom Schmp. 11 8- 119" und [alb = - 1 1.8" (c = 2.0, in Athanol).

B. Priifung der Pyrazolon-Methode mittels des Anderson-Tests Cbo-Gly-L-Phe-pyr. - Es wurde nach der allgemeinen Vorschrift (Carbodiimid-Methode)

aus Cbo-Gly-~-Phe15) (Schmp. 125-126"; [a]'," = +38.5", in Athanol) gewonnen und durch Hochvakuumbehandlung von Pyrazolonresten befreit. [a16 = -7.0" (c = 0.5, in khanol) .

C29H28N405 (512.6) Ber. C 67.95 H 5.51 N 10.93 Gef. C 67.65 H 6.26 N 11.53

Das aktivierte Peptid wird in absol. T H F bei Raumtemperatur mit der aquimolaren Menge frisch destilliertem Glycinathylester wie unter A) umgesetzt und aufgearbeitet. Ausbeute 80% d. Th.

Nach dem ANDERSON-YOUNG-Test wurden isoliert : 8.4 % DL-Tripeptidderivat vom Schmp. 131-133" und 71.2% L-Tripeptidderivat vom Schmp. 116-118", [a]iO = -12.8" (c = 2.0, in Athanol).

Durch Umsetzung von Cbo-Gly-pyrl) (Schmp. 131") rnit L-Phe-Gly-OEt. HBr (Scbmp. 135-136"; [u]ko = +40.2", in Wasser) konnte nur L-Tripeptidderivat vom Schmp. 117-119" und [a]ko = -12.1" (c = 2.0, in Athanol) erhalten werden.

Allgemeine Vorschrift fur Peptidsynthesen: a) Ankniipfung freier Aminosauren: Aquimolare Mengen N-geschiitzter Aminosaure-oxim- bzw. -pyrazolonester und Aminosaure werdeo mit 3 Aquivv. Triiithylumin in Dioxan/Wasser (1 : 1) 12 Stdn. bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach Abdestillieren wird in Wasser aufgenommen, rnit 2 n HC1 angesauert, in Essigester aufgenommen und wie iiblich aufgearbeitet.

b) Anknupfung von Aminosaureestern: Aquimolare Mengen N-geschiitzter Aminosaure- uktiv.-ester und Aminosaurealkylester (bzw. Alkylester-hydrochlorid + 1 Aquiv. Triathylamin) in THF, Dioxan oder Acetonitril werden 12 Stdn. bei Raumtemperatur stehengelassen. Dann wird i. Vak. abgedampft, mit Essigester aufgenommen und nach Waschen der Essigester- losung rnit 1 n HCI, 5-proz. NaHCO3-Losung und Wasser rnit Na2S04 getrocknet. Reste des bei der Aminolyse freigesetzten Oxims oder Pyrazolons lassen sich bei 60" und 10-3 Torr absublimieren.