1960 GOLDSCHMIDT und ROSCULET 2387

Ausb. 420 mg (40 % d. Th.). Nach zweimaligem Umkristallisieren aus Isopropylalkohol/ Wasser (2: 1) Schmp. 120-1122", [u]g: -49" (c = 0.93, Methanol).

C32H35N09 (577.6) Ber. C 66.54 H 6.1 1 N 2.43 Gef. C 66.29 H 6.20 N 2.56

N-[I-Desoxy-4.6-benzaI-l-~-fructosyll-~-glutaminsaure (Formel C): I 0 0 mg PdClz wer- den in 20 ccm absol. Methanol mit Wasserstoff reduziert. D a m wird eine Lbsung von 620 mg des vorstehenden Dibenzylesters in 40 ccm absol. Methanol gegeben und hydriert (Dauer ca. 50 Min.). Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat mit etwas Cellulose-Pulver versetzt und i. Vak. bei 30-40" eingeengt. Das trockene Cellulose-Pulver wird auf eine CelluloseSaule gegeben und mit ButanollkhanollWasser (4: 1 : 5 ) entwickelt. Man ver- wendet die obere Phase des Zweiphasen-Gemisches. Nach Austesten der Fraktionen werden die N-~1-Desoxy-4.6-benzaI-l-~-fructosyl]-~-glutaminsaure enthaltenden i. Vak. bis auf etwa 10 ccm eingeengt. Dabei tritt Kristallisation ein. Nach 2stdg. Aufbewahren im Kiihl- schrank wird abgesaugt und rnit Ather gewaschen. Die Substanz ist analysenrein. Schmp. 157--158", [u]i*: -74.5" (c = 1, PyridinlWasser 1 : l ) .

ClsH23N09 (397.4) Ber. C 54.40 H 5.83 N 3.53 Gef. C 55.53 H 6.02 N 3.64

STEFAN GOLDSCHMIDT und GEORGE ROSCULET Peptidsynthesen, V 1)

Synthesen optisch aktiver Peptide

Aus dem Organisch-Chemischen lnstitut der Technischen Hochschule Munchen

(Eingegangen am I . Juni 1960)

Synthesen von Di- und Tripeptiden nach der sogenannten ,,Phosphorazo-Me- thode" unter Einsatz optisch aktiver Aminosiiuren werden beschrieben. R a c e

misierungen wurden nicht festgestellt.

Die Brauchbarkeit einer Methode zur Kniipfung der Peptidbindung ist erheblich davon abhbgig, ob sich bei Einsatz optisch aktiver Aminosauren oder Peptide Racemisierungserscheinungen vollig oder zumindest weitgehend vermeiden lassen. Wir haben daher die sogenannte Phosphorazo-Methode, die in umserem Laboratorium entwickelt wurde 2), auf die Synthese einer erheblichen Zahl von optisch aktiven Dipeptiden und Tripeptiden ausgedehnt. Dies erschien besonders deshalb wichtig, weil im Gegensatz zu unseren eigenen Erfahrungen gelegentlich Angaben iiber Race- misierungen bei Durchfiihrung der Phosphorazo-Methode mitgeteilt wurden3).

Die von urn angegebene Methode besteht darin, daB zunachst der freie Amino- saure- oder Peptidester bzw. dessen Hydrochlorid mit Phosphor(III)-chlorid in

1) IV. Mitteil.: Sr. GOLDSCHMIDT und CHR. JUTZ, Chem. Ber. 89, 518 [1956]. 2) ST. GOLDSCHMIDT und H. LAUTENSCHLAGER, Liebigs Ann. Chem. 580, 68 [19531;

3) Z. B. a ) bei Darst. v. L-Leu-Gly durch G. T. YOUNG (Privatmitteilung v. 24.9. 1955); ST. GOLDSCHMIDT und CHR. JUTZ, Chem. Ber. 86, 11 16 [I9531 u. 1. c.5).

b) W. GRASSMANN, E. WUNSCH und H. RIEDEL, Chem. Ber. 91, 455 [1958].

2388 GOLDSCHMIDT und ROSCULET Jahrg. 93

Pyridin zur dimeren Phosphorazo-Verbindung I umgesetzt wird, die dann ohne Isolierung mit einer Acylaminosaure oder einem Acylpeptid I1 den Acylpeptidester liefert. Die Ausbeuten sind im allgemeinen ausgezeichnet, vorausgesetzt, d a B man unter peinlichem AusschluD von Feuchtigkeit arbeitet.

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Bei unseren Synthesen haben wir als Schutzgruppe am Stickstoff durchweg den Carbobenzoxyrest (Z = COzCHzGH5) venvendet, als Ester kam meist der Methyl- oder Athyl-, zuweilen auch der Benzylester zum Einsatz, von denen der letztgenannte den Vorteil besitzt, da8 die Estergruppe sich in einem Schritt durch Abhydrierung zugleich mit der Carbobenzoxygruppe entfernen IaBt.

DIPEPTIDE

Die Ergebnisse unserer Untersuchungen finden sich in Tab. 1. Man ersieht daraus, daI3 die gefundene Drehung durchweg rnit den Angaben der Literatur innerhalb der Fehlergrenzen iibereinstimmt. Bernerkenswert ist, daB auch L-Leucyl-glycin im Gegensatz zu den Erfahrungen von G. T. YOUNG^^) den richtigen Drehwert besitzt. Da dieser Autor den Acetylrest als Schutzgruppe des Stickstoffs verwendet hat, ist die Racemisierung wohl auf dessen Einsatz, nicht aber auf die Anwendung der Phosphorazo-Methode an sich zuriickzufiihren.

TRlPEPTlDE

Fur die Synthese von Tripeptiden standen zwei Wege zur Verfiigung, d. h. Reaktion einer Z-Aminosaure rnit einem PA*)-Dipeptidester (a) oder Umsetzung eines Z- Peptids rnit einem PA-Aminosaureester (b). Da GRASSMANN und Mitarbeiter 3b) bei

* I Folgende Abkurzungen werden in der vorliegenden Arbeit gebraucht: Z =- Car- bobenzoxy - C6H~CH20CO-, Bz = Benzyl, Ae = Athyl, Me = Methyl, PA 2 Phosphorazo.

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1960 Peptidsynthesen (V.) 2391

der Synthese von Glycyl-L-phenylalanyl-L-alanin aus Z-Peptid und PA-Aminosaure- ester eine teilweise Racemisierung beobachtet haben, haben wir den Aufbau ver- schiedener Peptide auf beiden genannten Wegen (a und b) vorgenommen. Unter- schiede in der optischen Aktivitat l i e k n sich in unseren Versuchen nicht feststellen (s. Tab. 2). Wi r haben weiterhin bei einigen Lysin-peptiden das erhaltene Tripeptid hydrolysiert und die Drehung des Hydrolysats gemessen (Tab. 2, Nr. 18, 19a, 1 9 b und 20). Sie entsprach nach Umrechnung der des eingesetzten L-Lysins.

M a n kann daher aus den Ergebnissen von GRASSMANN und Mitarbeitern keines- falls folgern, da13 die Umsetzung ekes PA-Arninosiiureesters rnit einem Z-Dipeptid stets unter Teil-Racemisierung verlauft. Prinzipiell ist es wohl so, daR bei vielseitiger Anwendung irgend einer Methode zur Herstellung von optisch-aktiven Peptiden gelegentlich eine Teil-Racemisierung beobachtet wird, ohne daD daraus allgemeine SchluDfolgerungen auf die Anwendbarkeit der Methode abgeleitet werden konnen.

B E S C H R E I B U N G D E R V E R S U C H E

Darstellung der Peptide

A. 2-Peptidesrer: Die auf -10" abgeklihlte L6sung von 0.01 Mol Aminosaure- bzw. Pep- tidester-hydrochlorid in 50 ccm absol. trockenem Pyridin wird unter RUhren tropfenweise rnit 0.005 Mol(O.44 ccm) PCl3 in 10 ccm Pyridin versetzt und 15 Min. bei Raumtemperatur stehengelassen. Man f igt dann 0.01 Mol 2-Aminosaure bzw. 2-Peptid zu und erhitzt 3 Stdn. auf dem siedenden Wasserbad (sorgfAltiger FeuchtigkeitsausschluD bei allen Umsetzungen). Nach dem Erkalten wird die meist gelblich-rotliche Losung durch AbgieDen bzw. Abfiltrieren von ausgeschiedener (HPOz), getrennt und das Pyridin i. Vak. weitgehend abdestilliert. Den Riickstand extrahiert man nach Zugabe von etwas Wasser dreimal rnit Essigester - falls notig unter schwachem Erwarmen - und schlittelt die vereinigten Esterextrakte rnit 2 n HCI, Wasser und rnit 10-proz. Natriumcarbonatlosung aus, bis eine Probe des Natriumcarbonat- extrakts beim Ansauern klar bleibt. Dann wascht man den Essigester nochmals rnit Wasser, trocknet ihn iiber Na2S04 und engt i. Vak. ein. Den Riickstand kristallisiert man aus einem geeigneten Losungsmittelpaar um. Falls er 6lig anfallt und nicht zur Kristallisation zu bringen ist, wird er ohne Reinigung weiter verarbeitet (Tab. 3).

B. Z-Peptide: 0.01 Mol 2-Peptidester in etwa 25 ccm Aceton bzw. anderen Lasungsmitteln werden rnit 10 ccm n NaOH unter RUhren tropfenweise versetzt und 2 Stdn. bei Raum- temp. belassen. Dann neutralisiert man das Gemisch rnit einigen Tropfen Essigsaure und verdampft i. Vak. zur Trockne. Der Rlickstand wird in wenig Wasser aufgenommen, rnit 2 n HC1 kongosauer gemacht und iiber Nacht stehengelassen. Eventuell ausgefallene Kristalle nebst Lasung schlittelt man rnit Essigester aus, wascht diesen saurefrei und verdampft nach Trocknen uber Na2S04 i. Vak. zur Trockne. Den Rlickstand kristallisiert man aus einem geeigneten Lasungsmittelpaar, z. B. Essigester/Petrolather um (Tab. 4).

C . Peptide: 0.005 Mol 2-Peptid in 50 ccrn etwa 70-prOZ. Methanol werden nach Zugabe von einigen Tropfen Eisessig und 200 mg 5-prOZ. Palladium/Tierkohle rnit durchperlendem Wasserstoffstrom hydriert, bis die Abgabe von COz beendigt ist. Dann saugt man den Kata- lysator ab, wascht ihn rnit Wasser und verdampft das Filtrat i. Vak. zur Trockne. Soweit im folgenden nicht anders vermerkt, wird der Riickstand in moglichst wenig heil3em Wasser gelbst und rnit absol. Alkohol versetzt (Tab. 5).

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