TechnikenMikroskopie, Gewebeaufschluß und Färbung

D-Praktikum Anatomie der Pflanzen

Marcus Koch, Christoph Dobeš

HIP, Abteilung Biodiversität und Pflanzensystematik

LICHTMIKROSKOPIEKöhlersche Beleuchtungsanordnung

Prinzip der konjugierten Ebenen

Homogene Ausleuchtung der Präparateebene

Keine Abbildung von Teilen der Mikroskopoptik in der Bildebene

Einstellbarkeit der Apertur über die Kondensorblende

Vermeidung von Streulicht (s.u.) durch Regulierbarkeit der Leuchtfeldfläche

http://www.mikroskopie.de/kurse/koehlertheorie.htm

LICHTMIKROSKOPIEweitere Verfahren der Beleuchtung

http://www.mikroskopie-fuer-anfaenger.de/index.shtml

Dunkelfeld

Kritische BeleuchtungsanordnungProjektion einer Mattscheibe in die Nähe der Objektebene

Kontrasterhöhung

Phasenkontrast

Interferenzkontrast

Färbungen

MaterialauswahlBewußte Auswahl des Objektes hinsichtlich

taxonomischer, phylogenetischer Zugehörigkeit

Wahl des pflanzlichen Organes oder Gewebes

Entwicklungszustand (Ontogenie)

Schnittebene bzw. Perspektive der Betrachtung

http://www.puc.edu/Faculty/Gilbert_Muth/art0059.jpg

GewebeaufschlußErzielen eines dünnen (mikroskopierbaren) Präparates

Schnittpräparat – Herstellung mittels Rasierklinge oder Mikrotom

Quetschpräparat – gängige Methodefür zytologische Untersuchungen

Gewebeaufschluß

Matzerationspräparat – Zytologie, Holzanatomie

Zupf- und Schabepräparat – z.B. Indument

Aufhellungspräparat – ungeschnittene Pflanzenteile oder dicke Schnitte

Esau 1960

Färbung – von Organellen, Zellwand, Ein- und Auflagerungen, Speicherstoffen

Ziel: spezifischer Nachweis und KontrastierungZellkomponente Farbstoff Anwendungsbeispiele

Zellkerne Karminessigsäure Chromosomenzählung

Zellulose Astrablau, Anilinblau Lage und Struktur nicht verholzter Gewebe

Lignin SafraninPhloroglucin-Salzsäure

Lage von Gefäßbündel, Xylem

Suberin, Kutin, Wachse, Fette, Öle

Sudan III sekundäre Abschlußgewebe, Kutikula. Caspari, Öltröpfchen

Kallose ResorcinblauAnilinblau

Einlagerung in den Siebplatten

Pektin RutheniumrotMethylenblau (Vitalfarbstoff)

Anfärben der Mittellamelle

Stärke Lugolsche Lösung Nachweis von Speicherstoffeinlagerungen

FärbungSafranin-Astrablau

Kontrastfärbung von verholztenund unverholzten Zellwänden

FärbungPhloroglucin

spezifische Anfärbung von Lignin, d.h. von verholzten Geweben

ethanolische Phloroglucinlösung + HCl

FärbungSudan III

Fette, Öle, Suberin, Wachse, Kutin

FärbungKarminessigsäure

Schnellfärbung von Zellkernen (Chromatin)

kurzes, schonendes Aufkochen des Gewebesin KE

Einbettung

Objektträger und 0,17 mm Deckglas

Medien für die Einbettung:

Wasser - Standardmedium

Ethanol – luftreiches Gewebe

Glycerin – Dauerpräparat, chemisch hydrophobe Objekte

Kanadabalsam, Euparal – Dauerpräparat

Zuckerlösung – Plasmolyse

Dokumentation

Zeichnung Dauerpräparat

Objekt: Taxon, Organ Name des VerfassersSchnittrichtung DatumFärbemethode

Vergrößerung, Maßstab

Überblicks- und Detailzeichnung

Objekt: Taxon, Organ Name des VerfassersDatumFärbemethode

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