,~o. FEBRUAR 1937 K L I N I S C H E W O C H E N S C H R I F T . ~6. J A H R G A N G . N r . 8 273

zf indung, die ESt . dagegen ein r e l a t i ve r G r a d m e s s e r ffir die FXhigkei t des K6rpe r s zur eitrigen E n t z f i n d u n g .

L i t e r a t u r : EPPINGER, I~AUNITZ, POPPER, Die ser6se Entzun- dung. Wien: Julius Springer 1935. -- EVERS, Med. Welt 1936, 1173. -- W. GERLAGH, Die Entzfindung. Neue Dtsch. Klin. 3, 181 (1929). - - FR. KAUFFMANN, Krkh.forsch. 2, 372, 448 (1926); 3, 263 (1926). - - SlLVlO ~J~ARKEES, Klin. Wschr. I935, 260. - - HILDEGARD S's GIER, Med. Klin. x936, 1429. -- VONTZ, Mfinch. reed. Wschr. I936, 5Ii. -- 1V~ATHILDE WINTERNITZ-I~oR~NYI, Dtsch. med. ~vVschr. I93o, 1779.

Z U R M E T H O D I K D E R S T U F E N P H O T O M E - T R I S C H E N BESTIMMUNG DES VITAMINS A

IM MENSCHLICHEN BLUT.

Von

D r . F . H . DOST, Assistent der UniversitAts-Kinderklinik Leipzig

(Direktor: Prof. Dr. CATEL).

Die gegenwRrt ig gef ib ten M e t h o d e n zur B e s f i m m u n g des V i t a m i n s A gehen fas t alle au f die yon CARR u n d PRICE 1 angegebene R e a k f i o n zurfick, die au f e iner ffir das V i t a m i n A spez i f i schen B lau fArbung m i t e iner A n t i m o n t r i c h l o r i d l 6 s u n g in Chloroform b e r u h t . Das au f diese Weise e n t s t e h e n d e b lau- gef~rb te R e a k t i o n s p r o d u k t d i en t zu r co lo r ime t r i s chen Be- s t i m m u n g des V i t a m i n s A. Hie rzu wi rd m e i s t das yon ROSEN- HEIM u n d SCHUSTER 2 angegebene L o v i b o n d - T i n t o m e t e r ver- wende t , m i t we lchem die zu u n f e r s u c h e n d e L 6 s u n g gegen s t a n d a r d i s i e r t e Gl~ser in Blau, Gelb u n d R o t co lo r ime t r i e r t wird . Die e r h a l t e n e n F a r b w e r t e werden in L o v i b o n d - E i n h e i - t en ausgedrf ickt , wobei das T i n t o m e f e r so gee ich t ist, d a b eine B l a u - E i n h e i t ge rade e iner b io logischen E i n h e i t (der U.S.- P h a r m a c o p o e - S h e r m a n - E i n h e i t ) en t s p r i eh t .

A n d e r e U n t e r s u c h e r wie KUHN u n d BROCKMANN a sowie BROCKMANN u n d TECKLENBURG 4 h a b e n als Aush i t f s in s t ru - mer i t ein Mikro-Hel l ige -Color imete r v e r w e n d e t u n d die B lau - w e r t e gegen L 6 s u n g e n yon K o b a l t n i t r a t n n d K u p f e r s u l f a t verg l ichen, ode r wie BLEYER, SCHLEMMER u n d MULLER- PARCHEM s, die das e infache A u t h e n r i e t h - C o l o r i m e t e r b e n u t z - ten , das v o r h e r m i t dem L o v i b o n d - T i n t o m e t e r gee ich t wurde .

D a d a s L o v i b o n d - T i n t o m e t e r zur Ze i t wohl s ehwer l i ch zu beschaf fen sein dfirfte, u n d da fflr den spezie l len Zweck der V i t a m i n A - B e s t i m m u n g i m m e n s c h l i c h e n B l u r weniger In t e r e s se d a r a n b e s t e h t , den G e h a l t desse lben a n V i t a m i n A in b io logisehen E i n h e i t e n auszudr f i eken (denn als O b j e k t fflr b iologische Tes t s h a t es wohl k a u m B e d e u t u n g ) , lag es nahe , au f die e ingangs z i t i e r t en Me thoden , die in i h r e m E r g e b n i s au f die b io logische E i n h e i t Bezug n e h m e n , zu v e r z i c h t e n u n d e in V e r f a h r e n aufzuzeigen, welches s ich b e w u B t a n abso lu t e W e r t e an l ehn t . Dies schien uns a u c h d a d u r c h ge rech t fe r t ig t , als inzwischen das V i t a m i n A in s t a n d a r d i s i e r t e r F o r m als V o g a n vor l i eg t bzw. das P r o v i t a m i n sogar in k rys t a l l i s i e r t e r F o r m als Caro t in , u n d s o m i t die M6gl i chke i t be s t eh t , s ich bei der V i t a m i n A - B e s t i m m u n g auf diese Stoffe bez iehen zu k6nnen .

Als besonders geeignet ffir die colorimetrische Auswertung der Carr-Price-Reaktion erschien uns das Zeisssche Stufenphotometer, welches bereits yon VAN ~EEKELEN, EMMERIE und WOLFF 6 und yon NEUWEILER 7 ZU diesem Zweck verwendet worden ist. Es galt zu- n~chst eine Eichkurve fhr das Stufenphotometer mit einem vi tamin- A-haltigen Standardpr/ iparat aufzustellen, Da hierffir eine Vielzahl yon einzelnen Best immungen zu erwarten war, wghlten wir zu diesem Zwecke das leicht zu beschaffende und mi t nahezu kon- s tan tem Vitamin A-Gehalt s i m Handel befindliche Vogan , ,Bayer". Als Kompensationsflfissigkeit wurde eine Viktoriablaul6sung l/so0000 benutzt , die bereits yon BLEYER u. a. 9 bei der Vi tamin A-Bestim- mnng im Hellige-Cotorimeter Anwendung fan& Die Ablesungen wurden unter Vorschaltung des Filters ,,S 6I" vorgenommen.

Z u n ~ c h s t w a r es wicht ig , fes tzus te l len , ob zwischen de r F a r b t i e f e der C a r r - P r i c e - R e a k t i o n n n d ve r s ch i eden konzen- t r i e r t e n V o g a n l 6 s u n g e n dieselbe B e z i e h u n g bes t eh t , wie dies ffir ande re Stoffe, y o r n e h m l i c h L ebe r t r ane , b e k a n n t ist . Von v o r n h e r e i n d u r f t e d a m i t g e r e c h n e t werden , d a b dies n i c h t der Fa l l ist, e n t h ~ l t doch de r L e b e r t r a n , wie EMMERIE 1~ sowie NORRIS und CHURCH ~1 fes tges te l l t h a b e n , in s e inem verseif -

Klinische Wochensehlift, x6. Jahrg.

b a r e n An te i l Stoffe, welche in s tArkerer K o n z e n t r a t i o n die C a r r - P r i c e - R e a k t i o n h e m m e n , so d a b bei s t e igenden Lebe r - t r a n m e n g e n s ich r e l a t i v k le inere B l a u w e r t e e rgeben . Die K u r v e de r B lauwer t e , gemessen in L o v i b o n d - E i n h e i t e n , ze igt also b e i m L e b e r t r a n ke inen l inea ren Verlauf , v i e l m e h r i s t aus der yon NORRIS u n d CHURCH 12 ffir die K u r v e au fges t e l l t en F o r m e l zu e n t n e h m e n , d a b sie o f f enba r e ine F u n k t i o n zwei ten Grades da rs te l l t . Es l ieg t au f de r H a n d , d a b u n t e r d iesen U m s t ~ n d e n de r chemisch e r f a B b a r ; V i t a m i n A - G e h a l t e ines Stoffes k le iner sein muB, als es se iner b io logischen W i r k s a m - ke i t en t sp r i ch t , u n d daB d a h e r aus d iesem G r u n d e ke ine b i n d e n d e n Rfickschlf isse v o n d e r Zah l de r e r h a l t e n e n B lau - e i n h e i t e n au f de ren b io logischen E f f e k t zulXssJg s ind.

S te l l t m a n dagegen die Ca r r -P r i ce -Reak t Jon m i t d e m U n - ve r se i fba ren des L e b e r t r a n s an, wie dies NORRIS u n d CHURCH 13 g e t a n h a b e n , so e rh~ l t m a n eine l ineare K u r v e der L o v i b o n d - B l a u w e r t e bei s t e igenden V i t a m i n A-Mengen bzw. e ine log- a r i t h m i s c h e K u r v e der E x t i n k t i o n s w e r t e (VAN EEKELEN 1~) bei V e r w e n d u n g des S t u f e n p h o t o m e t e r s . I n E i n k l a n g h i e r m i t s t e h t die B e o b a c h t u n g yon BLEYER U, a . 15, die bei de r mod i - f iz ie r ten V e r w e n d u n g des A u t h e n r i e t h - C o l o r i m e t e r s e ine an- n ~ h e r n d l ineare F u n k f i o n zwischen d e m (n icht l o g a r i t h m i - schen) W e r t de r l~ei ldieke u n d ve r sch iedenen , a l le rd ings n u r wenig a u s e i n a n d e r l i e g e n d e n Mengen yon L e b e r t r a n fes t s te l l en k o n n t e n . A u c h wir e rh i e l t en u n t e r B e n u t z u n g des S tu fen - p h o t o m e t e r s , f i b e r e i n s t i m m e n d m i t d e m eben e rwXhn ten Be- fund von VAN EEKELEN, bei E i n t r a g u n g de r E x t i n k t i o n s w e r t e au f l ineares Mi l l ime t e rpap i e r e inen l o g a r i t h m i s c h e n K u r v e n - ve r l au f (s. Abb . I).

In d e m Bes t r eben , s ich bei den sp~ te ren V i t a m i n b e s t i m - m u n g e n au f abso lu t e W e r t e bez iehen zu k6nnen , w u r d e die so e r h a l t e n e V o g a n k u r v e a n v e r s c h i e d e n e n P u n k t e n d u r c h B e s t i m m u n g de r E x f i n k t i o n s w e r t e eines chemisch r e i n e n P r ~ p a r a t e s au f a b s o l u t e W e r t e geeicht .

Das V i t a m i n A se lbs t i s t j a zur Ze i t noch n i c h t in c h e m i s c h r e ine r F o r m b e k a n n t , so d a b wir zu d iesem Zweck a u f die Ver - w e n d u n g des Ca ro t in s angewiesen waren . Das Ca ro t i n g i b t b e k a n n t l i c h ebenfa l l s die R e a k t i o n yon CARR n n d I~RICE (V. EULER ls, VAN EEKELENI~), a l le rd ings in wesen t l i ch ge- r i nge re r I n t e n s i t ~ t (BOMSKOV18), was j e d o c h in H i n b l i c k au f den e r s t r e b t e n E n d z w e c k ve rnach l~s s ig t werden darI . W i e h - t iger wa r es v ie lmehr , fes tzus te l len , ob der K u r v e n v e r l a u f de r C a r o t i n - B l a u r e a k t i o n m i t der V o g a n k u r v e K o n g r u e n z auf- weist . Diese F r a g e h a b e n wir d u r c h B e s t i m m u n g e n der B lau- t 6ne des i n t e r n a t i o n a l e n C a r o f i n - S t a n d a r d p r X p a r a t e s 1931 ge- kl~rt , yon we l chem uns IO m g d u r c h das R e i c h s g e s u n d h e i t s - a m t zur Verf f igung ges te l l t wurden* . Le ide r wa r es uns n i c h t m6gl ich, vom. Ca ro t i n e ine d e r a r t vo l l s t~ndige K u r v e de r E x t i n k t i o n s w e r t e au fzus t e l l en wie e twa v o m Vogan, da uns n u r e ine b e s c h r ~ n k t e Menge des S t a n d a r d p r ~ p a r a t e s zu r Ver - ff igung s t and . Die V o g a n k u r v e w u r d e d a h e r n u r a n e inze lnen P u n k t e n m i t den C a r o t i n w e r t e n in Verg le ich gesetz t , vor - n e h m l i c h abe r doff , wo die z u n ~ c h s t n u r zur O r i e n t i e r u n g b e s t i m m t e n V i t a m i n A - W e r t e des B lu t e s zu e r w a r t e n w a r e n .

Aus Abb. i ist ersichtlich, dab die Kurven der Ext inkt ionswerte des Vogans und des Carotins eine so weitgehende Kongruenz auf- weisen, dab es an Hand der Farbwerte des reinen Carotins ohne weiteres m6glich ist, sich bei den Vitamin A-Best immungen im Blute ebenfalls auf Carotin beziehen zu konnen.

Die Kurve in Abb. I ist so angelegt, dab jeweils die gleichen Ext inkt ionswerte des Vogans und des Carotins auf der Ordinate eingetragen sind. Auf der Abszisse werden die Voganwerte abge- lesen, wahrend die zugehOrigen Carotinkonzentrat ionen an den markier ten Punkten selbst angegeben sind. Emer Voganverdflnnung "con l/a00 entspr icht also die Carotinverdfinnung 1/,2s 0 (s. Punk t I), bei Punk t 2 verhal ten sich die ~rerte wie 1/~0o zn 1/2so 0 nsw. Die Voganmengen verhal ten sich also zu denen des Carotins wie 4,2/I.

Sola'nge das V i t a m i n A se lbs t als R e i n s u b s t a n z n o c h n i c h t vor l iegt , i s t es na t f i r l i ch a u c h in ke iner Weise m6gl ich, a b s o l u t e W e r t e desse lben in i r g e n d e i n e m Stoff zu b e s t i m m e n . W i r s ind uns d a h e r bewuBt, d a b d u r c h die b e s c h r i e b e n e M e t h o d e s ich keinesfal ls abso lu t e V i t a m i n A - W e r t e des B lu tes au f s t e l l en lassen, da ja i m B l u r sowohl V i t a m i n A als a u c h die ve rsch ie -

* Fur die 0berlassung des benotigten Standard-Carotins sind wir dem Remhsgesundheits- ~mt zu Dank verpflichtet.

20

2 7 4 K L I N I S C H E \ V O C H E N S C H

d e n e n C a r o t i n e e n t h a l t e n s i nd , d ie al le , w e n n a u c h i n v e r s c h i e - d e n e r I n t e n s i t ~ t , d i e R e a k t i o n y o n CARR u n d PRICE g e b e n . Mit der auJgezeigten 2tf ethode soll also lediglieh der Gesamtgehalt des Blutes an Provitamin A und Vi tamin A in seinem chemi- schen Verhalten er]aflt und auf Carotin bezogen werden, ohne i~ber die Einzelmengen dieser beiden Stoffe Ndheres aussagen zu wollen.

I m e i n z e l n e n w u r d e f o t g e n d e r m a B e n v e r f a h r e n :

Es w u r d e z u n ~ c h s t s ine S t a m m I 6 s u n g yon I g Vogan in Chloro- f o rm ad ioo c c m a n g e s e t z t u n d h i e r a u s wei tere Ve rd f innungen bis

.,,[ 4d

3,2 3,o

;2

N

~e

,j I ] I I ] I I

3000 2000 ;'OO0 Voj~nkonzen/ml/on

Abb, I. Stufenphotometrisch Iestgest~llte Extinktionswerte verschiedener Vogankonzen- tratlonen bei Anstellung der Carr-Price-Reaktion mit 1110 Vol, Vitaminlbsung und *]loVol. SbCls-L6sung. Nachtragliche Eichung der Kurve durch Carotinbestimmungen, Ablese- zelt 45 Sekunden. o = Extinktionswerte des Vogans. • = Extinktionswerte des Caro- tins (I93~); 1 Carotin-Konzentration x/x25 o, B Carotinkonzentration ~/25oo, s Carotin-

konzentrationx]5ooo, # Carotinkonzentrafion i / ioooo.

~]3a00 herges te l l t . ]Die R e a k t i o n wurde n a c h der a l lgemein flblichen Vorsch r i f t jeweils m i t I Tei t V i t a m i n A - L 6 s n n g u n d 9 Tei len ge- s~Lttigter A n t i m o n t r i c h l o r i d - C h l o r o f o r m - L 6 s u n g ausgeff ihr t , und zwar bei den V o g a n V e r d f l n n u n g e n yon 1]~oo bis 1/so0 in e iner Cuve t t e yon x/2 cm D i c k e ( = 2 ccmVol . ) , bei d e n V e r d f i n n u n g e n yon ~/900 bis ~/a~00 in i cm dicker C uve t t e ( = 4 ccm Vol.). E benso w u r d e n die Be- s t i m m u n g e n des Caro t ins ausgef t ih r t , yon we lchem die VerdSn- n u n g e n y o n 4 m g in 5 c cm Chloroform (---- ~]i~0) u n d die en t spre - e h e n d e n wei te ren Ve rd f i nnungen yon ~/~oo, ~/~000 u n d ~/~0000 in R e a k t i o n gese t z t wurden ,

N u n b e g a n n e n wi t m i t der V i t a m i n A - B e s t i m m u n g iln Blute , wobei wir u n s zur E x t r a k t i o n des V i t a m i n s A u n d des Caro t ins der Methode yon ME~KE~ x~ bed ien ten , die wi t fiir unsere Zwecke ge- r ingff igig abge l tnder t h a b e n . Das aus 15- -2o ccm Blu t a b g e t r e n n t e S e r u m wurde m i t der i o f a c h e n Menge 96proz. Alkohols verse tz t , der N iede r sch lag zen t r i fug ie r t n n d die dekan t i e r t e Flf iss igkei t wiederho l t m i t Pe t ro l~ the r ausgeschS t t e l t . Der Pe t ro l~ the r - e x t r a k t wurde z u m ldn te r sch ied yon M ~ K ~ zur Trockene ein- g e d a m p f t u n d der R f i cks t and n a c h Z usa t z yon i g t . Essigsi~ure- A n h y d r i d in 3 c cm Chloroform aufgel6s t . Anschl ieBend wurde n a c h E i n e n g u n g des C h ]o ro fo rmex t r ak t e s au f 0, 4 c cm auf oben angegebene A r t die Ca r r -P r i ce -Reak t ion in I cm dicker ( = 4 ccm fas sender Cuvet te ) anges te l l t . Hie rbe i e rgaben s ich n u n Blauwer te , die so ge r ing waren, dab sie n o c h auBerha lb der m i t d e m Vogan au fges t e l l t en W e r t e lagen. Dase l b s t zeigt jedoch, wie aus Abb. 1 erhel l t , die K u r v e e inen de r a r t f l achen Verlauf , dab zun~chs t s ine V i t a m i n A - B e s t i m m u n g in d i e sem Bere ich in Frage ges te l l t schien.

E s s t a n d s o m i t z u r A u f g a b e , d ie K u r v e d e r E x t i n k t i o n s - w e r t e k l e i n s t e r V i t a m i n A - M e n g e n i i b e r s i c h t l i c h e r u n d w e n n m 6 g l i c h a u c h s t e i l e r zu g e s t a l t e n , w a s n a c h f o l g e n d e m G e d a n - k e n g a n g i n e i n f a c h e r ~ u z u 16sen w a r :

W e n n m a n s ich vors te l l t , dal~ schw~chs te Blau t6ne , wie sie bei so ger ingen , zu r Verf f igung s t e h e n d e n V i t a m i n A - K o n z e n t r a t i o n e n au f t r e t en , d u r c h ~bersch~ssige SbCl~-L6sungen n u t u n n 6 t i g ver- d i inn t u n d aufgehe l l t werden , i s t zu e rwar ten , dab m a n bei An- g le i chung der zur R e a k t i o n v e r w e n d e t e n SbCls-L6sung an die Menge des v i t a m i n h a l t i g e n C h l o ro fo rmex t r ak t e s dunk le re B l a u t 6 n e erh~l t . Wi r h a b e n dahe r die u yon ~/2000--x/s000 u n d ebenso den v i t a m i n A-ha l t igen E x t r a k t des Blu tes n i ch t m i t der v ie l fachen Menge yon SbCla-L6sung in R e a k t i o n gese tz t , wie dies bei grSl3e-

R I F T . 16. J A H R G A N G . N r . 8 20. FEBRUAR x937

ren V i t a m i n A - K o n z e n t r a t i o n e n angeze ig t is t u n d al leror ts geflbt wird, sonde rn h a b e n die R e a k t i o n m i t jeweils den gle ichen Mengen yon V i t a m i n A-L6sung un~I SbCl~-L6sung angese tz t . Aus d e m gle ichen Grunde w u r d e n a u c h n u r je 0, 5 ccm* yon den beiden, die R e a k t i o n b e w i r k e n d e n L 6 s u n g e n v e r w e n d e t u n d die Colori- m e t r i e r u n g in I ccm fassender Cuve t t e v o r g e n o m m e n . Der h ierbei au f t r e t ende Nachte i l , dab bei d iesen ger ingen V o l u m i n a au ch sehr df inne (o,25 era) Cuve t t en b e n u t z t werden muBten , wurde aufgewogen du rch die r e ch t deu t l i chen , noch g u t ab l e sba ren E x t i n k t i o n s w e r t e , die au f diese We i s s erzie l t we rden k o n n t e n (s. Abb. 2). Die auf- ges te l l te K u r v e der so e rha t t enen W e r t e wurde d a n n gleichfatls d u r c h C a r o t i n b e s t i m m u n g e n geeicht , u m so die M6gl ichkei t zu schaffen, sicI1 bei der V i t a m i n A - B e s t i m m u n g im Blu r s desgle ichen auf Caro t in bez iehen zu k6nnen . In der K u r v e auf Abb. 2 ve rha l t en sich die V o g a n k o n z e n t r a t i o n e n zu denen des Caro t ins bei g le ichem Ex t ink t ionskoe f f i z i en t en d u r c h s c h n i t t l i c h wie 7,2 zu I.

Es empf i eh l t sich, bei der B e s t i m m u n g des V i t a m i n A-Geha l t es im N o r m a l b l u t n a c h der Methode vo rzugehen , die Ifir die Vogan- v e r d f i n n u n g e n yon ~/~000--1/s000 beschr ieben wurde, u n d n u r dann , wenn auBerorden t l i ch hohe V i t a m i n A-Wer te zu e rwar t en s ind (z. t3. n a c h V e r a b r e i c h u n g yon L e b e r t r a n oder ande ren V i t a m i n A- Tr~gern) , das ffir die V o g a n v e r d f i n n u n g e n yon l[loo--J[aso o be- schr iebene Ver fah ren a n z u w e n d e n .

Zur T e c h n i k der Ab le sung sei noch bemerk t , dab der bei der Car r -P r i ce -Reak t ion a n f t r e t e n d e F a r b t o n aul3erordent l ich r a sch an I n t e n s i t ~ t verl ier t , a n d dab dahe r die Ab le sungen s te t s an e in em genau e i n z u h a l t e n d e n Z e i t p u n k t v o r g e n o m m e n werden mSssen . I m a l lgemeinen ist es fiblich, dies n a e h io oder 3 ~ Sek u n d en zu t u n . Leider is t d a d u r c h n i c h t die M6gl ichkei t gegeben, d u rch m eh r f ach e Ab lesungen e inen pe in l ichs t g e n a u e n E x t i n k t i o n s w e r t zu e rha l ten . Indessen ist, wie ans unse ren diesbezfigl ichen U n t e r s u c h u n g e n her- vorgeh t , zu e inem spa t e r en Ze i t punk t , an we lchem die A b n a h m e der Farb t ie fe zwar l a n g s a m e r vor s ich geh t nnd schliel31ich sogar z u m St i l l s tand k o m m t , e ine Ab le sung noch viel weniger zu em p feh - len, da a u c h bei ve r sch iedenen V i t a m i n A - K o n z e n t r a t i o n e n die a n f a n g s sehr d i f fe renten B lauwer te m i t fo r t schre i t ender Zeit m e h r u n d m e h r zu e inem g e m e i n s a m e n E n d w e r t konverg ie ren . Aus die- sere Grunde h a b e n wir f ibrigens auch au f die V e r w e n d u n g y o n Mik rocuve t t en verz ich te t , deren e inwandf re ie F u l l u n g u n s zuviel Zeit in A n s p r u c h n a h m . Vqir h a b e n bei unse ren ]3es t immungen s t e t s n a c h 45 Sekunden abgelesen u n d u n s bemf lh t , d iesen Z e i t p u n k t au f da s genaues t e e inzuha l t en . W i t s ind u n s aber bewuBt, dab eine Co to r ime t r i e rung n a c h der S t o p p u h r i m m e r einen, wenn a n c h kleinen, s u b j e k t i v e n Fehle r m i t s ich b r ingen wird.

E s h a t f i b r i g e n s d a h e r a u c h n i c h t a n V o r s c h l X g e n g e f e h l t , d ie C a r r - P r i c e - R e a k t i o n d u t c h a n d e r e F a r b r e a k t i o n e n zu er -

1,0 ~9

0.6 0,5

.~ 0.3 -

o/

o 8000

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I ~ t q I l t 1 I ]

7 ~ ~ooo 5o0o ~ooo 3ooo Kojenkoncenlm//#n

r 2O0O

Abb. 2. Stufenphotometnsch festgestellte Extinktionswerte verschiedener, sehr kleiner Vogankonzentrationen bei Anstellung der Carr-Price-Reaktion mit 1]~ VoL Vitamin- losung und i]~ Vol. SbCla Losung. Nachtr~tgliche Eichung der Kurve durch Carotin- bestimmungen. Ablesezeit 45 Sekunden. o = Extinktionswerte des Vogans. x ~ Ex- tinktionswerte des Carotins (193I); 1 Carotinkonzentration 1/~000o, ~ Carotmkonzentra-

tion 114oo0o.

s e t z e n , d ie den Yor t e i l d e r B e s t ~ n d i g k e i t h a b e n . I n d i e s e m Z u s a m m e n h a n g v e r d i e n t E r w ~ h n u n g d a s u n l i ~ n g s t y o n RO- S]~NTHAL 20 sowie ~OSENTHAL u n d ERD~LYI 2x a n g e k i i n d i g t e V e r f a h r e n , d i e b l a u e F a r b e d e r S b - C i 3 - R e a k t i o n d u r c h G u a j a - col b z w . B r e n z c a t e c h i n i n e i n e k o n s t a n t e r o t v i o l e t t e F a r b c zu i~berf f ihren. W i r h a b e n d i e se M c t h o d e d e s h a l b n i c h t b e i u n s e r e n B e s t i m m u n g e n a n g e w e n d e t , d a h i e r b e i n u t d a s V i t a - m i n A, n i c h t a b e r d a s C a r o t i n e r f a B t w i rd .

Sch l i eB l i ch m 6 c h t e n w i r n o c h a u f d ie b e m e r k e n s w e r t e T a t s a c h e h i n w e i s e n , d a b w i r be i A n s t e l l u n g d e r A n t i m o n t r i -

* Hierbei wurde der Chloroformextrakt auf o,5 ccm eingedampft.

20. F E B R U A R 1937 K L I N I S C H E W O C H E N S C H R I F T . 16. J A H R G A N G . N r . 8

ch lor id reak t ion m i t r e i n e m Carot in (1931) keine nach t r~gl iche ~-nderung des F a r b w e r t e s b e o b a c h t e n konnten . Auch nach ungefXhr lO Minu ten war der E x t i n k t i o n s w e r t bei der Kon- trol le im S t u f e n p h o t o m e t e r noch der gleiche. Sp~ter t r a t meis t eine Trf lbung auf, die eine wei te re Ablesung verbot .

In folgendem seien die Ergebnisse einiger V i t amin A-Be- s t i m m u n g e n im Blur yon S~uglingen mi tge te i l t :

Tabelle I. V i t a m i n A - W e r t e im B l u t e y o n SAug l ingen* .

Vita- Tag der min A-

Name Geburtstag Vltamh~ A- Wert des Krankheit Bestlmmung Blutes

rag%

\V. G. H.S . K .M. E .S . H . R .

14 11.1936 17. III. 1936 4,11. 1936

20. III. 1936 4. IV. 1936

18. I. 1936 2i. III . 1936 24. II. 1936 16. II. 1936 5. IV. 1936

22. X. 1935 3 o. V. 1936 16.11. 1936 22. V. 1936 22. V. 1936

IO. VI. 1936 IO. VI. 1936 IO. VI. 1936

4. IX. 1936 4. IX. 1936

Durchschnitt : 29. VIII . 1936 29. VIII . 1936 ~I. VIII . 1936 5. IX. 1936 3. IX. 1936 3. IX. 1936 5- IX. 1936 5. IX. 1936 7- IX. 1936 7- IX. 1936

0,096 0,086 0,099 0,099 O, lO8

O,O97 O,126 O, II 5 o,134 o, I72 O, I27 O, I I I O 133 o,I72 O,126 O,127

Frfihgeburt, Rachitis Frfihgeburt, Rachitis Keratitis parenchymat. Intertrigo, Cystitis Pyodermie

Gesunde Kinder

U . L . E.M. K.E. W.S. W.H. R.R. M.E. E.Z. H.T. E. So.

Durchschnitt : o,134

Bei B e t r a c h t u n g der Tabel le fAllt sofor t auf, dab der Vi ta - min A-Spiegel bei den k ranken K i n d e r n m i t o,o97 mg % deu t - l ich niedr iger l iegt als bei den gesunden mi t o, I34 mg % Durch- schni t t . Ob dieser Un te r sch i ed allein in d e m verschiedenen Gesundhe i t s zus t and seinen Grund ha t , i s t n i ch t m i t Sicher- he i t zu en tsche iden , da die gesunden K inde r du rchschn i t t l i ch e twas ~Llter waren als die k ranken und folglich auch schon l~n- gere Zei t h indu rch Vegetabi l ien v e r a b r e i c h t b e k o m m e n h a t t en ,

Vergle icht m a n die e rha l t enen W e r t e m i t den in der Li te ra- t u r zu f indenden Angaben , so muB m a n sich yon vo rnhe re in eine gewisse Zur t ickha l tung aufer legen. Von den hier in te r - ess ie renden V i t a m i n b e s t i m m u n g e n k6nnen se lbs tve rs t~nd l ich n u t die jenigen des Carot ins zum Vergle ich herangezogen wer- den. ]Da das Carot in im a l lgemeinen u n t e r Verz ich t auf die R e a k t i o n yon CARR und PRICE d i rek t gegen K a l i u m b i c h r o m a t bzw. Azobenzol co lor imet r ie r t wird, s ind auf jeden Fal l andere Vderte zu e rwar ten . So l and HIJMANS V. D. BERGH ~2 im Se rum o ,4- -1 ,3 4 rag% Carotin, Wer te , die in der Folgeze i t ffir zu hoch angesprochen und yon CONNOR 23 an~ e twa 0,o 5 mg % korr ig ie r t wurden . Auch SCHNEIDER und WIDMANN 24 i anden e inen iihnlich n iedr igen Carot inspiegel im Serum (o,o33 bis o,o8 mg %), wobei sie ein Ans te igen des Caro t ingeha l tes im h6heren Lebensa l t e r fes ts te l len konn ten .

Was schlieBlich den Ante i l des e igent l ichen Vi t amins A in unseren B e s t i m m u n g e n anbe langt , so ha l t en wi t es fflr ge- wagt , i rgendwelche Rtickschlt isse auf L o v i b o n d - E i n h e i t e n , auch nur zu Vergleichszwecken, v o r n e h m e n zu wollen. Zwar kommen ]~ROCKMANN und TECKLENBURG 25 aul Grund beson- derer l~berlegungen zu der Annahme, dab 2,2 Lovibond- Einhe i t en e twa 0,5 y V i t amin A en t sp rechen , doch kann es sich dabei nur um einen a p p r o x i m a t i v e n U m r e c h n n n g s w e r t hande ln , dessen sich t ibrigens auch SCHNEIDER und WID- MANN "~ bedienen, den wi t aber vorlXufig auger ach t lassen m6ch ten . (Weitere Ergebnisse yon V i t a m i n A-13est immungen erscheinen ausff lhrl ich in der Mschr. Kinderhei lk . )

ZusammenJassung: I. Es wird vorgeschlagen, das u rain A i m Blu t n i ch t nach Lov ibond-Kinhe i t en zu be s t immen , sondern den bei der Ca r r -P r i ce -Reak t ion a u f t r e t e n d e n BlaB- ton, der sowohl v o m P r o v i t a m i n A als auch yore V i t a m i n A herr i ihr t , m i t d e m Blauwer t eines chemisch re inen V i t ami n - p r~para te s in Vergleich zu setzen. Als solches wird das in ter - na t iona le S t a n d a r d c a r o t i n 1931 ve rwende t .

* unter ,,vitamin A-Weft" ist der GesamtgehaIt des Blutes an Carotin und Vitamin A zu verstehen, bezogen auf Carotin (naheres s. Text).

275

2. Zur Color imet r ie rung der Ca r r -P r i ce -Reak t ion wi rd das Zeisssche S t u f e n p h o t o m e t e r benu tz t , welches vo rhe r m i t Vogan und Carot in geeicht wurde .

3. Da sich bei Ans te l lung der Ca r r -P r i ce -Reak t ion m i t d e m v i t a m i n A-ha l t igen E x t r a k t des Blu tes n a c h der Original- vo r schr i f t ~uBerst schwache Blau t6ne ergeben, wird die Menge der zur Reak t i o n v e r w e n d e t e n SbC13-L6sung reduzier t , wo- du rch viel deu t l ichere ]31aut6ne en t s t ehen .

4. Nur wenn ein a b n o r m hohe r V i t a m i n A-Geha l t des ]3lu- tes zu e rwar t en ist, empf i eh l t es sich, die lReakfion n a c h der Or ig ina lvorschr i f t auszuff ihren.

5. Mi t te i lung der Ergebnisse yon V i t a m i n A- ]3es t immungen iln Serum yon 15 Kindern .

L i t e r a t u r : 1 CARR U. PRICE, Biochemic. J. zo, 497 (1926). - - ROSENHEIIa U. SCHUSCER, Biochemic. J. 2I, 1329 (1927). - -

KUHN u. BROCKMANN, Bet. dtsch, chem. Ges. 64, 1862 (1931). - - 4 BROCKMANN U. TECKLENBURG, Hoppe-Seylers Z. 22I, 117 (1933)- __ 5 B L E Y E R , SCHLEMMER 11. M t ) L L E R - P A R C H E M , Arch. d. Pharmac. 566, 269 ( 1931 ) . - - 6 VAN E C K E L E N , E M M E R I E U. W O L F F , N e e d e r l . Tijdschr. Geneesk. I933, 605. - - 7 NEUWEILER, Z. Vitaminforsch. 4, 259 (1935). - - s Naeh einer privaten Anfrage bei der wissenschaft- lichen Abteilung der I .G.-Farben. - - 9 BLEYER U. a., loc. cit. - - i0 EMMERIE, Nature (Lond.) 1, 364 (1933) - - Acta neerl. Physiol etc. 2, 156 (1933) - - Proc. roy. Soe. Amsterdam 35, 1347 (1933) (zit. nach BOMSKOV, Methodik der Vitaminforschung, S. 60. Leipzig: Georg Thieme 1935). - - 11 NORRIS U. CHURCH, J . of biol. Chem. 85, 477 (193o). - - 12 NORRIS U. CHURCH, J. of biol. Chem. 87, 139 (193o). _ 13 NORRIS U. CttURCH, J. of biol. Chem. 85, 477 (193o) . - - 14 VAN ]~EKELEN, loc. cit. - - 15 BLEYER, ]OC. cit. - - is v. EULER, Hoppe- Seylers Z. 157 , 263 (1926) - - Biochem. Z. 2o8, 73 (1929). - - 17 VAN EEKELEN, Proc. 35, Nr IO (I932), zit. nach SCHNEIDER 12. WIDMANN, Klin. Wschr. 1935, 670. - - is BOY[SKOV, Methodik der Vitaminforschung, S. 53. Leipzig: Georg Thieme 1935. - - 19 MEN- KEN, Dtsch. reed. Wschr. 1932, 1484. - - ~0 ROS1~NTHAL, Klin. Wschr. i935 , 307. _ 21 :RoSENTHAL U. ERD~LYI, Biochem. Z. 267, 119 (1933). __ 22 HIJMANS V. D. BERGH, zit. nach BOMSKOV, ]oc. cir. S. 7 o. - - 23 CONNOR, J. of biol. Chem. 77, 619 (1928). - - 24 SCHNEIDER n. XVIDMANN, Klin. Wsehr. 1935, 670. - - ~5 ~ROCKMANN U. TECKLEN- BURG, 1OC. cir. - - ~s S C H N E I D E R U. W I D M A N N , Klin. Wschr. I934, 1497.

D A S W E I S S E B L U T B I L D B E I U R ~ M I E .

Von

Dr . G. GOTTSEGE~. Aus der Inneren Abteilung ,,A" der Krankenhauser der lsraelitischen Gemeinde (Primar- arzt: Dr. J. BIEDERMANN) und aus der II. Inneren Abteilung der Kaszab-Po]iklinlk

(Primararzt: Dr. H. LAX) zu Pest.

]Die Frage, ob die Ur~mie m i t cha rak t e r i s t i s chen Ver~nde- rungen der morpho log i schen t a l u t z u s a m m e n s e t z u n g e inher- geht , ist im S c h r i f t t u m bere i t s des 6f te ren e r6 r t e r t worden . In f rf iheren U n t e r s u c h u n g e n 1, die sich m i t d e m ve rme in t l i chen EinfluB der S~uerung auf das weige Blu tb i ld be fag ten , wiesen wir nach, dab die ur~mische Acidose keineswegs gesetzm~Big eine Leukocy tose zur Folge h a t u n d die gegentei l igen Be- funde andere r A u t o ren wohl auf das N i c h t b e a c h t e n aku t - en tz t ind l icher K o m p l i k a t i o n e n (Bronchopneumonie , Pyel i t i s usw.) zurt ickzuff ihren sind. Wi r b e f a n d e n uns d a m i t in 13ber- e i n s t i m m u n g mi t KOLLERT und PASCHKIS ~, die e inen urs~ch- l ichen Z u s a m m e n h a n g zwischen Ur~mie und Leukocy tose ebenfal ls ab lehn ten .

I s t abe r auch die Leukocy tose eine mehr -wen ige r bana le Ersche inung , de ren ausl6sende Ursache im Einzelfal le schwer fes tzulegen ist, so s t e h t es doch nl i t d e m yon REICtIEL 8 neuer- dings beschr i ebenen h~Lmatologischen Merkmal ganz anders . Dieser A u t o r ver6f fen t l i ch te die K r a n k e n g e s c h i c h t e n y o n 20 Ur/~mikern, die alle eine V e r m i n d e r n n g der abso lu ten Zahlen der L y m p h o c y t e n (Ly.) bis an t eine einzige Ausnahme , wo die Ly . -Zah l ungef~hr no rma l (lO2O pro Kubikmi l l imete r ) war . Oft l a n d er j edoch eine exzessiv hochgrad ige L y m p h o p e n i e , in der H~lf te seiner F~lle waren weniger als 500 Ly. im Kub ik - mi l l imete r Blur v o r h a n d e n . N a e h d e m L y m p h o p e n i e in sol- chem Ausmal3e zu den se l teneren hAmatologischen B e f u n d e n geh6r t und die Abgrenzung jener E r k r a n k u n g e n , bei d e n e n sie v o r z u k o m m e n pflegt, gegen die Ur~mie Bur in ganz ver - e inze l ten F~l len an / Schwier igke i ten stolaen wfirde, k/~me d iesem S y m p t o m n ich t nur ein a l lgemein-h~matologisches ,

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