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Modul BA05:
Reinhard Fischer
Enzymreinigung
Radioaktivität
Wildtype
10 µmM P C
brlA abaA
!apsA
!hymA
brlA
abaA
wetA
yAwA
fluffy
Bisher: Entwicklungsmutanten A. nidulansForward Genetics
Entwicklungsmutanten von A. nidulansForward Genetics
asexual
sexual
Entwicklung in Aspergillus nidulansAktuell: Lichtregulation
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Heute: Fruchtkörperentwicklung in A. nidulans
100 µm
Stadienspezifisches Enzym: Laccase
Stadienspezifisches Enzym
Protein als Werkzeug, um neue Gene zu isolieren
Laccasegen
Regulator
Regulator
Regulierte Gene
Signale
Fruchtkörperent-wicklung
Hiwis
Hiwis für Modul BA04 gesucht
Homepage design Dekanat
Proteinreinigung (mit Tagg)
Affinitätschromatographie: Ni-Agarose etc.
Voraussetzungen: - Gen bekannt- Reinigung aus E. coli oder Organismus ist selbst transformierbar
Proteinreinigung (ohne Tagg)
Reinigung von Proteinen aus einem Organismus, um- Stoffwechselwege aufzuklären- ein Protein oder Enzym zu charakterisieren,
(Enzymkinetik, Substratspektrum, pH OptimumTemperaturoptimum, kinetische Parameter,Cofaktoranalyse)
- das Enzym biotechnologisch zu nutzen (Waschmittelindustrie, Getänkeindustrie, Medizin)- Antikörper herzustellen- Kristallstruktur zu bestimmen (Modelling)- das Gen zu isolieren
Zellaufschlussmethoden
Dounce Homogenisator
Kugelmühle, Zellmühle
French press
Cavitation
Säulenchromatographie
Säulenchromatographie
FPLC – SäulenchromatographieFast performance liquid chromatography
Säulenchromatographie
Gelfiltration (Molekularsieb) Adsorption
SäulenchromatographieIonenaustausch
Säulenchromatographie
Stadienspezifisches Enzym
Enzym als Werkzeug, um neue Gene zu isolieren
Laccasegen
Regulator
Regulator
Regulierte Gene
Signale
Fruchtkörperent-wicklung
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BC DCB
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Nachweis von Laccase IIEnzymtest
Abs
orpt
ion
bei 5
50 n
m
Zeit
∆E (c)
∆t
Enzymaktivität: µmol / minSpez. Enzymaktivität: µmol / min . mg protein
Zugabe Enzym
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-'23"*(423*+"&*5"(67+'8*9
Peptide Fingerprinting
Suche nach dem GenModul 3
Peptide Fingerprinting
Suche nach dem GenModul 3
Laccase Fusion mit GFP
PstI PstIATG Stop
ClaI
0.3 kb0.4 kb 2.3 kb
CpeA::GFP
GFP
!
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Stadienspezifisches Enzym
Enzym als Werkzeug, um Regulatorenzu isolieren
Laccasegen
Regulator
Regulator
Regulierte Gene
Signale
Fruchtkörperent-wicklung
4 Hiwis für Modul BA04 gesucht!
2. Radioaktivität
Isotope
Stabilität der Kerne
Zerfallsarten
Radioaktivität in der Biologie
Zerfallsschema für Tritium
Cl1735 + e- + Neutrino HWZ: 82 Tage
P1532 S
1632 + e- + Neutrino HWZ: 14 Tage
C6
14 N7
14 + e- + Neutrino HWZ: 5730 Jahre
S1635
Nachweis von RadioaktivitätFilm Szintillationszähler