3 Biochemische und Klinische Analyse

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Methode umfal3t eine spezielle Extraktion und Aufarbeitung, die jede Ver/inderung der Proben ausschliel3t. Aus den Megwerten von Cannabi- diol CBD, THC und Cannabinol CBN ermittelt man die Verh/iltniszah- Ien A = THC/CBD bzw. B = (THC + CBN)/CBD, womit erm6glicht wird, auf die Herkunft der Proben zu schliel3en, da die Verh/iltniszahlen spezifische Unterschiede je nach Herkunft zeigen. Die Standardabwei- chung betr/igt ca. 1,6%. - Analusis 13, 111 - 116 (1985). Centre Univ. Mesure et Anal., Lille (F) B.R. Glutz

Determination of preservatives in cosmetic products by reversed-phase high-performance liquid chromatography. II. L. Gagliardi, A. Amato, A. Basili, G. Cavazzutti, E. Gattavecchia and D. Tonelli.

Ein einfaches Extraktionsverfahren fiir kosmetische Proben mit an- schlieBender Reversed-Phase HPLC wird zur Analyse von Stabilisie- rungsmitteln in kosmetischen Pr/iparaten vorgeschlagen. Dazu werden die mit 2 M H2SO~ anges/iuerten Proben mit Methanol extrahiert (bei fetthaltigen Proben mug auf 60~ erw/irmt werden). Die sauren und neutralen Verbindungen werden durch Extraktion mit Diethylether und I M NaOH fraktioniert. Die Analyse wird auf Erbasil Cla-Reversed- Phase Sfiulen mit einem linearen Gradienten yon 2 0 - 5 0 % Acetonitril in 5 x 10-3M KHzPO4 (pH 2,8) und nach 15 rain weiter bis 90% Aceto- nitril durchgef/ihrt. Der Nachweis erfolgt bei drei Wellenl/ingen, nfimlich 240, 260 und 280 nm. Die erhaltenen Rf-Werte von 10 untersuchten Stabilisierungsmitteln und die ermittelten Peakverh/iltnisse sind tabel- liert. Die Wiederfindensraten lagen alle fiber 90%. - J. Chromatogr. 325, 353-358 (1985). Ist. Sci. Chim., Univ. Bologna (I) R.H.S.

3 BIOCHEMISCHE UND KLINISCHE ANALYSE

Automated pre-column system for trace enrichment and clean-up of plasma samples in narrow-bore liquid chromatography. M.W.F. Nieleu, R.C.A. Koordes, R.W. Frei and U.A.Th. Brinkman.

The design of a switching valve having an internal pre-column for automated sample handling and trace enrichment in narrow-bore liquid chromatography is described. The system combines low dispersion with the capability of direct plasma injection without any(off-line) clean-up procedure. Band broadening and enrichment factors have been studied for 100 gl trace enrichment v e r s u s 0.5 gl direct loop injection. As an example, the automated analysis of plasma samples containing clobazam and desmethylcl0bazam at the low-ppb level is reported. - J. Chromatogr. 330, 113-119 (1985). Dept. Anal. Chem., Free Univ., Amsterdam (NL)

Protein A-coated glass beads. Universal support medium for high-performance immunoaffinity chromatography. T.M. Phillips, W.D. Queen, N.S. More and A.M. Thompson.

High-performance immunoafinity chromatography (HPIC) is a technique for the fast isolation and quantitation of both antibodies and antigens. Protein A-coated glass beads provide a stable general immobilization support for most immunoglobulin G (IgG) antibodies. In conjunction with the modern expanding repertoire of monoclonal antibodies, HPIC can be applied to be quantitation and isolation of any biological material, in an active form. - J. Chromatogr. 327, 213 - 219 (1985). Immunochem. Lab., Univ. Med. Cent., Washington, DC (USA)

Reverse-phase high-performance liquid chromatography/nuclear magnetic resonance spectrometry separations of biomolecules with 1 - 1 hard pulse solvent suppression. D.A. Laude, Jr., R.W.-K. Lee and C.L. Wilkins.

Recently developed solvent suppression methods that rely upon application of rf excitation with zero spectral density at solvent resonances are demonstrated to provide significant advantages for the reverse-phase LC/NMR experiment. In particular, with minimal delays between scans and the ability to suppress multiple solvent resonances, these suppression techniques are clearly superior to presaturation

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methods previously employed. In the present work, parameters for the 1 - 1 hard pulse suppression technique are optimized for continuous- flow LC/NMR. Application of the method is demonstrated with reverse- phase separations of amino acid, vitamin, and nucleoside mixtures. - Anal. Chem. 57, 1464-1469 (1985). Dept. Chem., Univ. Calif., Riverside, CA (USA)

Local surface dipolar perturbation of lipid membranes by phloretin and its analogues. M. Thompson, U.J. Krull, L.I. Bendell-Young, I. Lundstr6m and C. Nylander.

In einer vorausgehenden Arbeit (M. Thompson und U.J. Krull: Anal. Chim. Acta 147, 1 (1983); vgl. diese Z. 315, 674 (1983)) war gezeigt worden, dab die St6rung des dipolaren Oberflfichenpotentials an Dop- pelschieht-Lipidmembranen (BLM) mit dadurch hervorgerufener Mo- dulation des Ionenflusses ein analytisch verwertbares Signal ergibt. In der vorliegenden Arbeit werden nun Konzentrationsempfindlichkeit, Elektrolytkonzentration und -zusammensetzung sowie Arrhenius-Ey- ring-Energie im Zusammenhang mit Verfinderungen der Leitf/ihigkeit yon Phosphatidylcholin-Cholesterinmembranen untersueht. Insbeson- dere wird dabei die durch Phloretin verursachte Reduktion des adsorpti- veu dipolaren Potentials geprfift. Es zeigt sich, dag diese Membranen (unter beidseitiger Zufiigung von w/igriger Phloretinl6sung) eine schwa- che Oberflfichenbindungsqualitfit ffir Kaliumionen aufweist. Berechnun- gen ffir ein statistisches Modell der Adsorption von Phloretinmolekfilen lokal fiir jede besetzte Kationposition korrelieren mit experimentcllen Trends. Ein schneller (Jbergangsstrom, fihnIich einem kapazitiven La- dungseffekt, wurde kurz nach der Zugabe von Phloretin und 2,4,6- Trihydroxyacetophenon auf einer Membranseite beobachtet, nicht jedoch bei der Zugabe der dipolaren Species Phlorizin, p-Nitrophenol oder o-Nitrophenol. Der beobachtete Effekt zeigt S~ttigungscharak- ter. - Anal. Chim. Acta 173, 129-140 (1985). Dept. Chem., Univ., Toronto (CDN); Dept. Phys./Measurement Technol., Inst. Technol., Link6ping (S) W. Czysz

Langmuir-Blodgett deposition of lipid films on hydrogel as a basis for biosensor development. A. Arya, U.L Krull, M. Thompson and H.E. Wong.

Lipidmembranen aus Phosphatidylcholin und Cholesterin als Grund- lage empfindlicher und selektiver Biosensoren haben den Nachteil, dag sie mechanisch nicht robust genug sind. Es wird deshalb vorgeschlagen, die von Langmuir und Blodgett zuerst entwickelte Technik der Herstel- lung yon Mono- und Multischichten organisierter Lipidfilme, die z.B. such bei der Herstellung von Arzneimittelkapseln wieder aktualisiert wurde, auf die Herstellung mechanisch stabilerer Lipidmembranen zu fibertragen. Die dazu benutzte Adsorption der Lipide an einer Polyacryl- amidgelschicht hfingt in ihrer Effizienz kritisch yon der Hydrasatisierung des Polymers ab. Einige elektrochemische Wandler, in die derartige nach Langmuir/Blodgett geschichtete Membran/Gelstrukturen inkorporiert wurden, gaben bei entsprechenden Tests positive Signale ffir Phloretin und Valinomycin. AuBer den Vorteilen der beschriebenen Anordnung werden such die Grenzen ihres Leistungsverm6gens diskutiert. - Anal. Chim. Acta 173, 331-336 (1985). Dept. Chem., Univ., Toronto, Ont. (CDN) W. Czysz

A comparison of various commercially-available liquid chromatographic supports for immobilization of enzymes and immonoglobulines. R.F. Taylor.

Neun kommerziell erhfiltliche, aktivierte Tr/igersubstrate ffir die Fliis- sigkeits-Chromatographie (LC) werden unter verschiedenen Bedingun- gen (unterschiedliche pH-Werte) getestet; insbesondere werden ihre Ffi- higkeit, Enzyme (alkal. Phosphatase, Glucoseoxidase, Peroxidase) und menschliches Immunoglobulin G (IgG) zu immobilisieren, geprfift und miteinander verglichen. Unter den Tr/igersubstraten unterscheidet man druckstabile Epoxy-aktivierte Tr/iger auf Acrylatbasis, Epoxy-, Cyano- genbromid-, Glutaraldehyd- und N-Hydroxysuccinimid-aktivierte Tr~i- ger auf Agarosebasis sowie aktivierte Tr/iger auf der Grundlage yon Glasperlen. Wie zu erwarten, variiert der fiir eine maximale Proteinim- mobilisierung und Bewahrung der Aktivit/it erforderliche pH sowohl mit der Art des Proteins als auch des Tr/igers. F fir die Kopplung von IgG und die Retention der Anti-IgG-Bindungsaktivit/it lagen die optima- len pH-Werte bei 9 oder 11. Die umfangreicheren Differenzierungen bei

3 Biochemische und klinische Analyse R e , e l a t e

den Enzymen s. Original. - Anal. Chim. Acta 172, 241-248 (1985). Biomed. Res./Technol. Sect., Arthur D. Little, Inc., Cambridge, MA (USA) W. Czysz

Terbium chelates for fluorescence immunoassay. M.P. Bailey, B.F. Rocks and C. Riley.

Im Hinblick auf ihre Verwendbarkeit beim Fluorescenz-Immunoassay werden Fluorescenz-Intensit~it und -Dauer der Tb-Chelate mit solchen Verbindungen untersucht, die durch Reaktion yon Diethylentriaminpen- taessigsfiureanhydrid mit aromatischen Aminen gebildet wird. W/ihrend im allgemeinen geringe Fluorescenz-IntensitMen beobachtet wurden, waren relative lange Fluorescenzzeiten zu verzeichnen (meist fiber 1 ms). - Analyst 110, 603 -604 (1985). Royal Sussex Hosp., Brighton, East Sussex (GB) B. Seifert

Enzyme immonoassays of eicosanoids using acetylcholine esterase as label: An alternative to radioimmunoassay. P. Pradelles, J. Grassi and J. Maclouf.

Pure acetylcholine esterase (EC 3.1.1.7) from electric eel (Electrophorus electricus) has been covalently coupled to different eicosanoids including thromboxane B2, PGDz-methoxamine, 6-keto- PGFI~, and leukotriene C4. The corresponding conjugates have been tested in second-antibody enzyme immunoassay. In the case of thromboxane B2, a comparison was made with a (125I) radioiodinated tracer. Our results show that the separation method has a significant influence on the performance of the assay. The best results are obtained by using microtiter plates with 96 wells coated with the second antibody, as compared with classical immunoprecipitation. In these conditions, EIA appears to possess a sensitivity equivalent to, or better than, RIA. The minimal detectable concentration were 10 pg/ml for prostaglandins or thromboxane B2 and 40 pg/ml for leukotriene C4. For the range 20 - 400 pg/ml thromboxane B2, the intraassay variation was < 10% (n = 10). -- Anal. Chem. 57, 1170-1173 (1985). Sec. Pharmacol. Immun. Lab. Etud. Radioimmun., Dept. Biol. CEN/Saclay, Gif zur Yvette (F)

Trace element studies in the biosphere with neutron activation analysis. R. Cornelis.

This paper outlines the unique possibilities of neutron activation analysis (NAA) to assess the trace elemental composition of living organisms. The method is multielemental and is commonly used in a purely in- strumental way. Radiochemical separations are, however, required for some elements, depending upon the nuclear characteristics and the concentrations. The majority of the publications deal with trace elements in the different parts of the human body and in body fluids. They describe as well total concentrations in health and disease, as they evoke the possible impact of environmental and occupational factors. The remain- ing part of the literature reports on animal experiments, on the composition of the human diet and on the bioaccumulation of heavy metals in diverse species of the biosphere. - J. Trace Microprobe Techniques 2,(3&4), 237-265 (1984-85). Lab. Anal. Chem., Inst. Nuclear Sci., Rijksuniv., Gent (B)

Application of a slotted quartz tube and flame atomic-absorption spectrometry to the analysis of biological samples. A.A. Brown and A. Taylor.

Die Verwendung eines Schlitz-Quarzrohres in Verbindung mit einer Luft/C2H2-Flamme (Analyst 108, 1159 (1983) und 109, 1455 (1984)) erh6ht die Empfindlichkeit der Bestimmung yon Pb und Cd in Blut, yon Cu und Zn in Serum oder von Cd, Cu und Pb in Urin. Es kann entweder mit kontinuierlicher oder diskreter Ansaugung gearbeitet werden. Die Verfahren wurden im Routinebetrieb ffir Pb im Bereich 100-700 gg/1 erfolgreich getestet. Die Empfindlichkeit der Cd-Bestimmung im Blut erm6glicht es, Personen zu identifizieren, die geringffigig fiber dem Normbereich liegende Konzentrationen aufweisen. Die Cu- und Zn- Bestimmunge im Serum stimmte in den Ergebuissen gut mit denen der normalen flammenlosen Techniken fiberein. Die Nachweisgrenzen ffir die Bestimmung yon Cd, Cu und Pb betrugen 1,4, 5 bzw. 10 gg/1. - Analyst 110, 579-582 (1985). Pye Unicam Ltd., Cambridge (GB).

B. Seifert

Determination of traces of lithium in blood serum by electrothermal atomic absorption spectrometry. Optimization of experimental parameters. E. Bourret, I. Moynier, L. Bardet and M. Fussellier.

Zur Bestimmung von Lithium (Spuren) in Blutserum wird ein flam- menloses Atomabsorptionsverfahren vorgeschlagen. Durch sorgf~iltige Optimierung der Arbeitsparameter (Heiz- und Atomisierungstemperatu- ren und -zeiten in einer Tabelle) einschlieBlich der Zugabe yon 0,1% Triton X-100 wurden Signalintensitiit und Reproduzierbarkeit so welt verbessert, dab Nachweisgrenze und Linearit/itsbereich im unteren gg/ 1-Bereich auch ffir Lithiumbestimmungen im Blut normaler Personen ausreichten. Die Prfizision des Verfahrens wurde statistisch fiberprfift. Bei normalen Personen wurden Lithiumkonzentrationen von 2 - 1 7 gg/ 1 Blutserum mit einem Mittelwert yon 8 Ixg/1 gefunden; die Variations- koeffizienten mehrerer Versuchsreihen lagen zwischen 1,5 und 9,9%. - Anal. Chim. Acta 172, 157-166 (1985) (Franz., engl. Zus.fass.). Lab. Physique Industr. Pharmaceut., Fac. Pharm., Montpellier (F)

W. Czysz

PIXE determination of calcium in red blood cells. M. Simonoff, Y. Llabador, G.N. Simonoff, M.R. Boisseau and M.F. Lorient Roudaut.

Die Bestimmung von 0 ,2 - 20 gg Ca/ml (Normwert) in roten Blutk6r- perchen wurde mit der protoneninduzierten R6ntgen-Emissions-Spek- trometrie (PIXE) durchgefiihrt. Wesentlich war dabei die Ausschaltung von vergleichsweise hohen K-Mengen. Dieses Element st6rt wegen seiner benachbarten Ordnungszahl. Ffir die Trennung ist auch die vorherige v611ige Entfernung yon Leukocyten und Thrombocyten wesentlich. Ge- ffige, dest. H20 und Reagentien miissen hochgereinigt sein. Das Trenn- verfahren griindet sich auf die MitF~illung von Ca 2 + mit Sr 2 + in 80%iger HNO3. - J. Radioanal. Nucl. Chem., Letters 94, 297-310 (1985). Chimie Nucl~aire, UA 451, CENBG, Le Haut Vigneau, Gradignan (F)

A.M. Roscovanu

Determination of protein-free and protein-bound calcium and magnesium in biological samples by use of ultrafiltration and ion chromatography. S. Matsushita.

Proteinfreies und proteingebundenes Ca und Mg k6nnen in biologi- schem Material (z. B. Blutserum, Milch und Eier-Eiweig) durch Ultrafil- tration (UFO-P kit, Toyo Soda) und anschlieBende Ionenchromatogra- phie (Toyo Sofa HLC-803B) selektiv getrennt werden. Getrennt wurden 100 gl-Aliquots an einer 50 x 4,6 mm TSK-Gel IC-Anion-SW Anionen- austauschers/iule mit 1 mM EDTA-L6sung pH 6,5 (1,0 ml/min). Bei der Ultrafiltration waren vorher Proteine mit Molekulargewichten fiber 10.000 abgetrennt worden. Der Gehalt an proteingebundenem Kation wird durch Subtraktion des Wertes ffir das proteinfreie Kation yon dem an Gesamtkation berechnet. Ein proteinfreies Kationfiltrat erh/ilt man durch Ultrafiltration einer verdfinnten Probe, ein Gesamtkationfiltrat durch Zugabe yon EDTA zur Probe und anschlieBende Filtration. Ffir die selektive Bestimmung yon Calcium und Magnesium nach Trennung an der Separators/iule (s. o.) verwendet man einen Leitffihigkeitsdetektor allein oder in Verbindung mit einem davorgeschalteten UV-Detektor. - Anal. Chim. Acta 172, 249-255 (1985). Central Res. Labs., Toyo Soda Manufact. Comp., Shinnanyo, Yamaguchi (J) W. Czysz

Monitoring of aluminum in whole blood, plasma, serum, and water by a single procedure using tameless atomic absorption spectrophotometry. G.B. van der Voet, Ed J.M. de Haas and F.A. de Wolff.

A simple, time-saving procedure to measure aluminum (AI) in whole blood, plasma, and water samples of low ionic strength by tameless atomic absorption spectrometry is presented. With this procedure, an analagous pretreatment is given to all samples. Moreover, the pretreated samples are analyzed using an identical program of the atomic absorption spectrophotometer. The detection limit is 1.3 gg/1 for aqueous solutions and 1.9 gg/1, 1.8 gg/1, and 2.3 gg/1 for serum, plasma, and blood samples respectively. The precision of the method varies between 2.8% and 4.2% of all analyses. Using this method, a comparison was made between A1 levels in whole blood (A1B) and plasma (ALP) in rats and A1B and AIP in renal patients. The A1B and AlP were strongly correlated. It is concluded that the monitoring of A1B may have a similar prognostic value for toxicity as the monitoring of AlP, but more experimental advantages. - J. Anal. Toxicol. 9, 97 - 100 (1985). Toxicol. Lab., Univ. Hospital, Leiden (NL)

Direct determination of arsenic in blood serum by electrothermal atomic absorption spectrometry. Y. Pegon.

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~ S ~ F a � 9 3 Biochemical and clinical analysis

Ftir die direkte Bestimmung von Arsen in Blut durch Graphitofen- AAS kommt es besonders darauf an, Arsenverluste beim Aufheizen im Graphitofen durch Verflfichtigung und chemische Interferenzen zu vermeiden. Die Bildung nichtflfichtiger Verbindungen des Arsens mit Graphit und die Verwendung von Matrixmodifiern wurden getestet. Es wird gezeigt, dal3 bei der Einwirkung von Graphit auf Arsen, wenn dieses in w/il3riger L6sung eingebracht wird, der gewfinschte Effekt zwar eintritt, in Gegenwart yon Blutserum bleibt er jedoch aus. Deshalb wurden Versuche mit 18 verschiedenen Matrixmodifiern gemacht. Dabei erwies sich Nickel, wenn es in gentigend hoher Konzentration zugegeben wird, bei gleichzeitiger Anwesenheit yon Triton X-100 als am besten geeignet. Optimale Konzentrationen: 0,1 M Nickelion und 1% Triton X-100 in der injizierten Probe. Weitere Einzelheiten, insbesondere die leicht variierenden Parameter und Ergebnisse beim Arbeiten mit einer Standard-Graphitkfivette, einer Kfivette mit pyrolytisch imprfignierter Graphitwandung und bei Verwendung einer L'vov-Plattform, sind in Tabellen nebeneinandergestellt. Gravierende Unterschiede sind nicht zu erkennen. Die h6chste Empfindlichkeit erreicht man, wenn man die Probe mit dem Matrixmodifier (0,2 M Ni(II)/2% Triton X-I00) 1 + 1 verdtinnt. Veraschungstemperatur: 1600~ Die Kalibrierung kann mit w/il3riger Arsenstandardl6sung durchgeffihrt werden. Nachweisgrenze: 0,4 gg/1 As. - Anal. Chim. Acta 172, 147-156 (1985). Lab. Biochim. D, Hop. Ed. Herriot, Lyon (F) W. Czysz

The extraction and analysis of quaternary ammonium compounds in biological material by GC and GC/MS. T. Lukaszewski.

An injection port pyrolysis method for the analysis of quaternary ammonium compounds is reported. Identification and confirmation of the analyte was accomplished by GC/MS. With minor modifications to pH used and solvent composition, a common ion-pair method of extraction of quaternary ammonium compounds from biological matrices with an iodide counter ion is described. Although the combined extraction-identification methodology was limited to neostigmine, succinylcholine, and paraquat, it should easily be applicable to any of the other compounds examined in this study. - J. Anal. Toxicol. 9, 101-108 (1985). Cent. Forensic Lab., R. Can. Mount. Pol., Ottawa, Ont. (CDN)

Semiautomatic bioluminiscence determination of glycerol using a computer controlled luminescence analyzer (Berthold LB 950 T). E. Wieland, B. Fischer and H. Kather.

Da jetzt ein computergesteuertes Luminescenzger/it (Berthold LB 950 T) zur Verffigung steht, haben Verff. ihr manuelles, enzymatisches Ver- fahren zur Glycerinbestimmung im Serum zu einer halbautomatischen Methode modifiziert. Im ersten Schritt wird Glycerin zu 3-Phosphogly- cerat umgewandelt. Das dabei anfallende NADH wird fiber NAD(P)H:FMN-Oxidoreduktase (EC 1.6.8.1) und Luciferase (EC 1.14.14.3) automatisch ausgewertet. Die Methode ist fund 10real empfindlicher als vergleichbare. Ihre Werte stimmen mit denen der enzyma- tischen Fluorescenzmethode von S. Laurell and G. Tibbling [Clin. Chim. Acta 13, 317 (1966)] gut fiberein (r = 0,99). Eine Person kann 200 Analysen/Tag durchffihren. - J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 23, 9 9 - ] 03 (1985). Klin. Inst. Herzinfarktforsch, Med. Univ.-Kiln., Heidelberg (D) E. Mfiller

Amperometric detection of acetylcholine and choline in a liquid chromatographic system with an immobilized enzyme reactor. T. Yao and M. Sato.

Zur Bestimmung yon Acetylcholin und Cholin wird eine HPLC-Sfiule (LiChrosorb NHz; Merck), an der die beiden Substanzen chromatographisch getrennt werden (0,01 M Natriumacetattpuffer pH 5,0 mit 10 rag/ 1 Natriumoctylsulfat und 1 mM Tetramethylammoniumchlorid als mobiler Phase), mit einem Enzymreaktor kombiniert. In diesem Enzymre- aktor sind Acetylcholinesterase und Cholinoxidase durch Reaktion mit Glutaraldehyd an alkylaminogebundener Kiesels/iure (Yanagimoto ODS 120T) immobilisiert. Durch AChE wird Acetylcholin zu Cholin und Essigsfiure gespalten, ChO oxidiert alas Cholin unter Bildung von Betain und H202. Letzteres wird in dem angeschlossenen amperometri- schen Detektor (Pt-Elektrode) bei 0.5 V vs. Ag/AgCI bestimmt. Als Nachweisgrenzen werden 1,2 pMol Cholin und 1,8 pMol Acetylcholin angegeben. Bei Lagerung in 0,1 M Phosphatpuffer pH 8,0 und 5~ be- hfilt der Enzymreaktor ffir 3 Monate fiber 95% seiner urspriinglichen

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Aktivit/it. -- Anal. Chim. Acta 172, 371--375 (1985). Dept. Appl. Chem., Coll. Engin., Univ. Osaka Prefecture, Mozu-Umemachi, Sakai (J) W. Czysz

Estimation of adrenal catecholamines by elevated-temperature liquid chromatography with amperometric detection. J.-P. Gagner and S. Gauthier.

Die Catecholamine Dopamin und Epinephrin sowie 20 weitere Cate- cholamine, die in Nebennierenrinde vorkommen, k6nnen mit einem verbesserten Verfahren durch Erh6hung tier Elutionstemperatur auf 30~ um 20% verkfirzt bestimmt werden. AuBerdem wird gegenfiber dem Verfahren yon T.P. Moyer und N.-S. Jiang (J. Chromatogr. 153, 365 (1978) und Clin. Chem. 25, 256 (1979)) der Methanolgehalt der mobilen Phase auf 8% erh6ht. - J. Chromatogr. 342, 363 - 369 (1985). Dept. Neurolog., McGill Univ., Montreal Neurolog. Inst., Montreal, Quebec (CDN) R.H.S.

Alkyl boronates as catechol-specific mobile phase pairing agents. Applica- tion of high-performance liquid chromatographic analysis of amines, pre- cursors arts metabolites in brain tissue. M.H. Joseph.

Butanbors~iure kann als Paarungsreagens in einer mobilen Phase fib die HPLC-Trennung von Catecholverbindungen, besonders Catechol- aminen auf ODS-Silicagel-Tr/igermaterialien bei neutralen pH-Werten eingesetzt werden. Eine Reihe anderer Alkylborsfiuren ht/ihnliche Eigen- schaften. Durch den Zusatz der Alkylborate zur mobilen Phase k6nnen die Trenneigenschaften yon ODS-S/iulen wirkungsvoll modifiziert werden. Der Einflug des Zusatzes von Butanborsfiure (5 raM) zum 0,1 M Phosphatpuffer (pH 7,5) auf die Kapazit/itsfaktoren einer Reihe von Catecholen und verwandten Verbindungen wird untersucht. Die Cate- cholamine und ihre Metabolite werden selektiv gegenfiber den Methoxy- Hydroxy-Metaboliten zuriickgehalten. - J. Chromatogr. 342, 370 - 375 (1985). Div. Psych., MRC Clin. Res. Centre, Harrow (GB) R.H.S.

Determination of dopamin-3- and -4-O-sulphate in human plasma and urine by anion-exchange high-performance liquid chromatography with fluorimetric detection. T. Yamamoto, A. Yamatodani, M. Nishimura and H. Wada.

Ein HPLC-Verfahren zur Bestimmung yon Dopamin-3- und -4-0- sulfatisomeren in Humanplasma und Urin unter Verwendung einer Anionenaustauschersfiule gekoppelt mit anschlieBender Hydrolyse und fluorimetrischem Nachweis wird beschrieben. Die Urin- und Plasmapro- ben werden teilweise auf Dowex 1- und Dowex 50-S~iulen vorgereinigt und dann anschliel3end auf einer TSK-Gel DEAE 2 SW-S/iule mit einer mobilen Phase aus 25 mM Natriumphosphatpuffer (pH 6,5) getrennt. AnschlieBend wird das Effluat vollautomatisch mit 0,92 M HC104 hydrolysiert und mit 0,6% p-Aminobenzoesfiure derivatisiert. Da das p- Aminobenzoes/iure-Verfahren sehr spezifisch ffir Dopamin ist, k6nnen auch Bestimmungen yon Urinproben oder enteiweiBten Plasmaproben direkt ohne Vorreinigung auf den HPLC-S~iulen durchgeffihrt werden. Die Nachweisgrenze ffir beide Isomere liegt bei 0,3 pMol. - J. Chroma- togr. 342, 261-267 (1985). Dept. Pharmacolog., Osaka Univ. Med. School, Kita-ku, Osaka (J) R.H.S.

Determination of creatinine in human serum by isotope dilution-mass spectrometry. Definitive methods in clinical chemistry, IV. L. Siekmann.

Die Methode beruht auf dem Prinzip der Isotopenverdiinnungs-Mas- senspektrometrie (ID-MS). Die Serumprobe wird mit bekannter Menge [13C, 15N2]-Kreatinin (Synthese beschrieben) versetzt. Nach Isolierung an Kationenaustauscher AG 50W-X2 wird das Trimethylsilylderivat von Kreatinin hergestellt, dessert gaschromatographische-massenspektrome- trische Auswertung bei den m/z-Werten 329 und 332 erfolgt. Durch Vergleich mit Standardl6sungen (unmarkiertes + markiertes Kreatinin) lfiBt sich der Kreatiningehalt der Serumprobe berechnen. Bei sehr hoher Spezifitfit liegt der Variationskoeffizient zwischen 0,35 und 1,05%. Noch 0,5 ng Kreatinin sind nachweisbar. - J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 23, 137-144 (1985). Inst. Klin. Biochem., Univ. Bonn (D) E. Mtiller

Reversed-phase liquid chromatographic retention behaviour of catechol amino-acids. T. Ishimitsu, S. Hirose an H. Sakurai.

Ffir eine Gruppe yon Catechoi-Aminos~iuren, die sich hinsichtlich S/iurestfirke und Hydrophobicit/it betriichtlich unterscheiden, werden

3 Biochemische und klinische Analyse ~ e f @ [ ~ e

die Einfiiisse der Zusammensetzung der mobilen Phase, des pH und der Ionenstfirke bei der Umkehrphasen-HPLC untersucht. Die Trennungen erfolgen an 250 x 4,0 mm (i.D.) Stahts/iulen mit Yanapak ODS (10 gin) bei Fliegraten von 0,58 ml/min. Die mobile Phase wurde so variiert, dab zuerst 6 rain mit w/iBrigem Phosphatpuffer (0.05 M, pH 2 , 6 - 8,5), dann mit in 30 min auf 15 % zunehmendem Methanolgehalt und dann weiter mit dieser Zusammensetzung eluiert wurde. Die etektrochemische De- tektion erfolgte mit einer auf 0,9 V vs. Ag/AgC1 gestellten Arbeitselek- trode bzw. mit einem stufenweise yon 0,3 auf 0,9 V ansteigenden Arbeits- potential. Insgesamt 18 Verbindungen wurden aufdiese Weise untersucht und ihr Verhalten charakterisiert. Die MeBergebnisse sind in Form von Kurven, Chromatogrammen und Tabellen dargestellt. Retardationsfak- toren und Retentionsverhalten lassen sich innerhalb eines Schemas mit Sfiuredissoziations- und Tautomer-Konstanten erkl~iren. - Talanta 23, 865-873 (1095). Kyoto Pharm. Univ., Yamashina-ku, Kyoto 607 (J)

W. Czysz

Microbore reversed-phase chromatography of proteins with conventional gradient equipment for high-performance liquid chromatography. R. van der Zee and G.W. Welling.

Reversed-phase HPLC with microbore columns (50 x 1.0 mm) was used effectively for the separation and analysis of proteins down to 1 ng at flow-rates of 0.1 -0 .2 ml/min. With the use of standard low-pressure gradient HPLC equipment, the peak volumes were five times smaller when compared with a conventional column at equal chromatographic efficiencies and analysis time. The sensitivity of detection was further increased by a reduction in solvent peaks, resulting in a 20-fold overall increase. - J. Chromatogr. 325, 187-194 (1985). Lab. Med. Microbiol., Rijksuniv. Groningen (NL)

Vizualization of protein retention and migration in reversed-phase liquid chromatography. J.M. Di Bussolo and J.R. Oant.

The adsorption and elution of proteins in RPLC systems were investi- gated by visually observing the retention and migration of colored and non-colored proteins in glass columns, packed with RPLC matrices. This system permits direct observation and measurement of the retention characteristics of colored proteins under various isocratic and gradient conditions. The system vividly illustrates that in organic-lean acidic eluents (e.g. , aq. 0.1% trifluoroacetic acid), proteins are adsorbed on the closest available hydrophobic surface of the support without dis- placing any noticeable amount of previously injected proteins. When the eluent contains a moderate amount of organic solvent (e.g., aq. 20% acetonitrile), proteins displace previously injected proteins of lesser hydrophobicity but do not displace previously injected proteins of greater hydrophobicity. These observations support the view that proteins are adsorbed on RPLC matrices in a monolayer. Observation of color-protein migration in glass columns during isocratic elution provides a practical means for determining very long retention times at very low mobile phase strength as well as the acceleration of protein migration during gradient elution. Our observations under such conditions agree with the retention relationships described by the chromatography theory for small molecules. - J. Chromatogr. 327, 67 - 7 6 (1985). Perkin-Elmer Corp. Liquid Chromatogr. Prod. Dept., Norwalk, CT (USA)

Serum protein analysis on immobilized pH gradients with in situ adsorption of albumin on Dextran Blue. E. Gianazza, P. Giacon, S. Astrua-Testori and P.C. Righetti.

Dextran Blue incorporated in concentrations up to 1% w/v into a gel layer buffered with Immobiline chemicals to pH 9.1 does not interfere with isoelectric focusing within an adjacent immobilized pH gradient (IPG) and retains its ability to strongly bind human serum albumin. With minor modifications of the procedure, it is possible to use Dextran Blue shelves in connection with either non-denaturing or denaturing (i. e. containing 8 M urea) analysis media. Examples include easier typing of group-specific component in an ultranarrow IPG against a completely clear background and improved resolution of transferrin and hemopexin in two-dimensional separations. - Electrophoresis 6, 326--331 (1985). Chair Biochem., Fac. Pharm., Univ. Milano (I)

Sensitive Nitro Blue Tetrazolium staining of proteins in high resolution two-dimensional gel electrophoresis. N. Bahrman and H. Thiellement.

A new method is described for staining proteins after high resolution two-dimensional gel electrophoresis. The polyacrylamide gel matrix is stained blue, by photoreduction of Nitro Blue Tetrazolium, while the spots of polypeptides remain unstained. The method is much more sensitive than Coomassie Blue staining and its sensitivity is close to that obtained by silver staining. - Electrophoresis 6, 357-358 (1985). Lab. G6n6tique, Gif-sur-Yvette (F)

Detection of non-heme iron proteins following polyacrylamide gel elec-tro- phoresis. D. Ohmori, Y. Tanaka, F. Yamakura and K. Suzuki.

Non-heine iron proteins were stained in the gel with bathophen- antroline disulfonate after polyacrylamide gel electrophoresis. This staining method proved more resistant to color fading than iron detection by c~,ct'-dipyridyl, with > 50 % of the color being retained after 24 h by three ferredoxins of different origin. A linear relationship was found for the amount of iron in non-heine iron proteins, applied to the gel, and the areas of densitometric tracings. - Electrophoresis 6, 351 -352 (1985). Dept. Chem. School Med., Juntendo Univ. Narashino, Chiba (J)

Fast atom bombardment and tandem mass spectrometry for sequencing peptides and polyamino alcohols. D.L. Lippstreu-Fisher and M.L. Gross.

Fast atom bombardment combined with collisional activation decomposition (CAD) spectrometry has been used to investigate eight peptides containing from three to six amino acids in order to derive some general conclusions about the CAD of the (M + H) § of peptides. A scheme for interpreting the CAD spectra is developed and exemplified using a pentapeptide. Complementary amino acid sequence-determining information is obtained. Moreover, the NH-CH2 cleavage, with charge retention on the C terminus, is now prominent for the reduced peptides. The potential of CAD spectrometry for studies of mixtures of peptides and mixtures of polyamino alcohols is demonstrated by analyzing an equimolar mixture of four peptides. - Anal. Chem. 57, 1174-1180 (1985). Midwest Cent. Mass. Spectrom., Dept. Chem., Univ. Lincoln, NB (USA)

Improved detection limits in the analysis of tyrosine-containing polypeptide hormones by using electrochemical detection. A.F. Spatola and D.E. Benovitz.

The pairing of reversed-phase HPLC with electrochemical detection (ED) represents a potent combination for maximal resolution and sensitivity. These techniques have been utilized for the separation and detection of peptide fragments following their timed incubation in human serum. Using an operating potential of + 1.06 V, HPLC-ED has been applied to such tyrosine-containing peptides as leucine enkephalin, luteinizing hormone-releasing hormone, and several �9 [CH2S] pseudopeptides. Improvements of at least 20-fold or greater over UV detection limits have been realized. Using a diode array UV spectrometer upstream of the electrochemical detector, the parent peptides or ~heir more abundant fragments may be further characterized. - J. Chromatogr. 327, 165-171 (1985). Dept. Chem., Univ. Louisville, KY (USA)

Automated high-performance immunosorbent assay for recombinant leukocyte A interferon. S.K. Roy, W.C. McGregor and S.T. Orichowskyj.

A rapid assay for recombinant leukocyte A interferon has been developed that includes a small immunosorbent column (Amicon glass column ca. 10 x 6 ram; i. e., ca. 0.5 ml), containing monoclonal antibody, immobilized on Nugel-polyhydroxy phase silica, 500 A., 200-400 mesh (Diagnostic Specialties, Metuchen, NJ, U.S.A.). The column has been automated so that the operator needs only inject sample (0.25 ml) every 18 rain (or one can use an automatic sample injector) and initiate the program cycle of the microprocessor. A hard-copy result from an in- tegrator is available in less than 20 rain. Routine analyses were performed at a flow-rate of 4 ml/min in the concentration range 0 .02- 0.3 mg/ml. Reproducibility of the assay was checked by assaying the same crude extract seven times in succession. Standard deviation was 3.96% and correlation coefficient was 0.9996. The advantages of this techniqe include rapid analysis time and relative simplicity, compared to the enzyme immunoassay. - J. Chromatogr. 327, 189-192 (1985). Hoffmann-La Roche, Inc., Nutley, NJ (USA)

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~ b S t f a C t S 3 Biochemical and clinical analysis

A combination of Coomassie Blue and eoncanavalin A-based glycoprotein stains avoids ambiguities in the assignment of bands. H.-C. Spatz, T.V. Waehneldt and V. Neuhoff.

A simple procedure is described to douple-stain sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels both with Coomassie Blue and by the concanavalin A-horseradish peroxidase method to detect glycoproteins among the protein bands. Double staining proves useful in cases where many bands are present on the gels and where a comparison of banding patterns from separate gels or even separate lanes of the same gel cannot be carried out with sufficient accuracy. - Electrophoresis 6, 353-356 (1985). Max-Planck-Inst. Exp. Med., Forsch. Neurochem., G6ttingen (D)

Comparison of relationships between the chemical structures and mobilities of hyaluronate oligosaccharides in thin-layer and high-performance liquid chromatography. E. Shimada and G. Matsumura.

The RM values of odd- and even-numbered hyaluronate oligosaccharides, comprised of N-acetylglucosamine and glucuronic acid residues, were determined by TLC. Previous retention time data of the acidic oligosaccharides obtained by HPLC were converted into RM values. By dividing the oligosaccharide structures into several fragments, the contributions of these fragments to chromatographic mobility (group constants) were estimated essentially from the difference between the RM values of two oligomers having appropriate structures. The group constants of the bridging oxygen atoms at the [3-1,4- and -1,3-glycosidic linkages of these oligomers were identical in HPLC but not in TLC. In the two types of chromatography, the mobility of a given hyaluronate oligasaccharide could by explained by a linear combination of group constants and the RM value of N-acetylglucosamine or glucuronic acid, with the exception that the RM value of the uronic acid in TLC was anomalous. - J. Chromatogr. 328, 7 3 - 80 (1985). School Pharm. Sci., Showa Univ., Tokyo (J)

Relative molecular weight and concentration determination of sodium hyaluronate solutions by geLexclnsion high-performance liquid chromatography. N.B. Beaty, W.P. Tew and R.J. Mello.

Durch Kombination von GelausschluB-Chromatographie (Toya Soda TSK G6000 PW) und HPLC mit 150mMol NaC1 und 3mMol NaH2PO4 als Elutionspuffer kann das Molekulargewicht von Na-Hy- aluronat in L6sung reproduzierbar, genau und schnell bis zu 2 .10 6 auch in Gegenwart yon erheblichen Mengen an Verunreinigungen bestimmt werden. Neben dem Molgewicht kann die Konzentration an Na-Hyalu- ronat im Bereich von 0,1 -0 ,3 mg/ml entsprechend der Empflndlichkeit des Differentialrefraktometers gemessen werden. Die gefundenen Mol- gewichte korrelieren gut mit denen der Intrinsic-Viskositfit, bieten aber gegenfiber den Methoden der Bestimmung fiber die Lichtstreuung oder Sedimentationsgleichgewicht den Vorteil der Unempfindlichkeit gegenfiber Verunreinigungen. - Anal. Biochem. 47, 387-395 (1985). Chesa- peake Biol. Lab. Inc., Hunt Valley, MD (USA) J.B.

Fatty acid analysis in phosphatidylethanolamine subclasses of human erythrocyte membranes by high-performance liquid chromatography. Y, Antoku, T. Sakai and H. Iwashita.

Die Phosphatidylethanolaminunterklassen yon Humanerythrocyten- membranen k6nnen auf einer Zorbax Cs-S/iule bei 60~ mit einem linearen Gradienten zwischen Acetonitril/Wasser (80: 20 bis 100: 0) getrennt werden. Oabei werden C20:60)3, C20:4036, C18:2(D6, C20:30)6, Ca 6: o, C21: #to6, Ca s: ~co9 und C18: o Fetts/iuren getrennt. Der Nachweis erfolgt fluorimetrisch bei 365/412 nm, nach Markierung mit 9-Anthryl- diazomethan. Die Vortrennung der Lipidextrakte erfolgt dfinnschicht- chromatographisch auf Silicageldfinnschichtplatten mit Chloroform/ Methanol/28% Ammoniak/Wasser (65:25:0,5:2), die Phosphatidyl- ethanolaminunterklassen werden mit Ioddampf lokalisiert, isoliert, mit KOH/Methanol hydrolysiert, anges~iuert und die Fetts~uren in Chloro- form extrahiert. AnschlieBend erfolgt die Fluorescenzmarkierung und die HPLC-Trennung. -- J. Chromatogr. 342, 359-362 (1985). Dept. Neurolog., Nat. Chikugo Hosp., Chikugo City (J) R.H.S.

The application of gradient saturation in unidimensional planar chromatography of polar lipids. Part 1: Presentation of the HPLC system. K. Kolarovic and H. Traitler.

A thermostated HPTLC system was assembled to test the influence of gradient chamber saturation upon resolution of polar lipids chromtographed on boric acid-impregnated silica gel plates. Inexpensive mixtures of nonacidic (14 component peaks) and acidic (8 component peaks) lipids were prepared from soya lecithin by a simplified procedure involving DEAE-Sephadex liquid chromatography to monitor performance of the system using a readily available reference material. The system requires c a . 5 rain chamber presaturation after which the polar lipids are chromatographed in less than 30 min. Retention times (tR) as well as peak area % values of all component peaks and measured by scanning photodensitometry to demonstrate the influence of different modes of chamber saturation upon the resolution of polar lipids. - J. High Resolut. Chromatogr. 8, 341 -346 (1985). Nestec Ltd., Res. Dept., Vevey (CH)

Enzymatic determination of the major serum lipids with a common in- dicator reaction. M.W. McGowan, J.D. Artiss and B. Zak.

Total lipids in human serum are approximated by summing cholesterol, choline containing lipids and triglycerides determined enzymatically by previously reported methods. Results average 145 mg/ dl lower than those found by nephelometry in range 200-1000 rag/d1. The discrepancy is not entirely explained by lipids which are inactive in enzymatic determinations. - Microehem. J. 31 ,216- 223 (1985). Wayne State Univ. Sch. Medicine, Detroit, MI (USA) J.S. Dunnett

The analysis of 25-hydroxyeholesterol in plasma and cholesterol containing foods by high-performance fiquid chromatography. I.L. Kou and R.P. Holmes.

Ein Verfahren zur Analyse yon 25-Hydroxycholesterolen durch HPLC aus einer grogen Anzahl unterschiedlicher Proben wird beschrieben. Dazu werden die Lipidextrakte erst fiber Octadecyl-Kiesels/iures/iulen (Sep-Pak C~ s-Patronen) gereinigt. Die Trennung der fraktionierten Ex- trakte erfolgt erst auf einer Ca8-Reversed-Phase S/iule zur Entfernung yon st6renden Verunreinigungen und anschlieBend auf einer 5 p,m Kie- sels/iuresfiule. Der Nachweis des 25-Hydroxycholesterols kann bei 205 nm erfolgen. Das Verfahren wird hier zur Bestimmung von 25- Hydroxycholesterol in Futtermitteln, Lebensmitteln und Plasma eingesetzt. - J. Chromatogr. 330, 339-346 (1985). Dept. Food Sci., Univ. Illinois, Urbana, IL (USA) R.H.S.

Quantification of R-( + )-7-chloro-8-hydroxy-l-phenyl-2,3,4,5-tetrahydro- 1H-3-methyl-3-benzazepine(I) in brain and blood by use of reversed-phase high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. C.D. Kilts, K.L. Dew, T.D. Ely and R.B. Mailman.

Zur quantitativen Bestimmung des antipsychotisch wirkenden selekti- ven D1-Antagonisten (I) wird ein HPLC-Verfahren mit elektrochemi- schem Nachweis beschrieben. Dazu werden Rattenhirn und -serumpro- ben alkalisch gemacht, mit tert.-Butylmethylether/Hexan (1:1) extrahiert, in 0,1 M HC1 rfickextrahiert und nach Alkalisierung erneut extrahiert. Die organische Phase wird eingedampft, der Rfickstand in mobiler Phase aufgenommen und auf einer Si 100 RP-8 Reversed-Phase Sfiule mit 0,1 M Ammoniumacetat (pH 5,5)/Acetonitril (1 : 1) analysiert. Die cyclischen Voltammogramme werden ffir I bei +730 mV und ffir Chlor- promazin, den internen Standard bei 810 mV ausgewertet. Hirngewebe- proben werden vor der Extraktion mit Perchlors~iure enteiweiBt. - J. Chromatogr. 342, 452-457 (1985). Dept. Psych., Biolog. Sci., Res. Center, Univ. North Carolina School Med., Chapel Hill, NC (USA)

R.H.S.

Enzyme immunoassay for screening suffamethazine residues in swine blood. J.R. Fleeker and L.J. Lovett.

An enzyme immunoassay (EIA) was developed to screen for residues of sulfamethazine (SMT) and its metabolites in swine blood. Swine blood was treated with perchloric acid and centrifuged. The supernatant solution was neutralized with K2HPO4, centrifuged, and applied to reverse phase C8 cartridge. The analytes were eluted with methanol/ water (2: 3), and the eluate was diluted and assayed. Average recoveries, using 14C-labeled compounds, were 73, 72, 61, and 62% for SMT, N 4- glucosylSMT, N4-acetylSMT, and N4-desaminoSMT, respectively. Tubes coated with antibody were incubated with the eluate and an SMT-[~- galactosidase conjugate. Bound enzyme was detected with fluorogenic

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3 Biochemische und klinische Analyse ~ f e F ~ e

substrate. When blood was fortified with 0.1 ppm SMT or a molar equivalent of metabolite, the average relative response of the EIA was 100%, control blood; 61%, SMT; 66%, glucosyISMT; 60%, acetylISMT; and 77% desaminoSMT. - J. Assoc. Off. Anal. Chem. 68, 172-174 (1985). N. Dakota State Univ., Dept. Biochem., Fargo, ND (USA)

A dual-column HPLC method for the simultaneous determination of DHPG (9-[(1,3-dihydroxy-2-propoxy)methyl]guanine) and its mono and diesters in biological samples. E.J. Benjamin, B.A. Firestone and J.A. Schneider.

This method utilizes a cation exchange column (25 cmx 4.6 mm i.d.) coupled in series to a short reversed-phase column (5 cmx 4.6 mm i. d.). The mobile phase consists of methanol/0.005 M ammonium phosphate buffer; pH 2.5. The simultaneous determination of the diesters, mono- esters, and DHPG using only the cation exchange or the reversed-phase column is not possible without time-consuming gradient elution. In the reversed-phase mode alone, the esters are highly retained relative to DHPG, whereas the esters are only slightly retained on a cation exchange column and are insensitive to changes in pH and ionic strength of the mobile phase. However, a combination of these two columns provides interesting selectivity for these compounds and offers a unique way of controlling the retention times of these species relative to each other. The retention time of esters can be selectively altered (with respect to DHPG) by changing the composition of methanol in the mobile phase. In contrast, the retention time of DHPG is controlled by changing the buffer strength and pH of the mobile phase. - J. Chromatogr. Sci. 23, 168 - 170 (1985). Inst. Pharm. Sci, Syntex Res., Stanford Ind. Park, Palo Alto, CA (USA)

Determination of chlorambucil in plasma using reversed-phase high-performance liquid chromatography. C.G. Adair, D.T. Burns, A.D. Crockard and M. Harriott.

Ein schnelles und einfaches Verfahren zur Bestimmung des bei der Leukfimiebehandlung verwendeten Alkylierungsmittels Chlorambucil in Plasmaproben wird beschrieben. Dazu werden die Plasmaproben mit Perchlorsfiure enteiweiBt, und der Llberstand fiber eine C~s Sep-Pak Patrone extrahiert, yon der Chlorambucil mit Methanol eluiert wird. Diese Phase wird aufeiner Spherisorb ODS 5 gm S/iule mit einer gleichen SchutzsS.ule mit Methanol/Wasser (80:20) analysiert. Der Nachweis wird im UV bei 260 nm durchgeffihrt. Die Nachweisgrenze des Verfah- tens liegt bei 10 ng/ml. Plasmaproben sollten bei 2~ (Eis) aufbewahrt werden, um eine Hydrolyse des Wirkstoffs zu verhindern. - J. Chroma- togr. 342, 447-451 (1985). Dept. Haemotolog., Queen's Univ. Belfast, Inst. Patholog., Belfast (GB) R.H.S.

Determination of benzylpenicillin in plasma and urine by high-performance liquid chromatography. R.H. Rumble and M.S. Roberts.

Ein schnelles und selektives HPLC-Verfahren zur Bestimmung yon Benzylpenicillin in Plasma und Urin wird beschrieben. Die Proben werden mit Acetonitril zentrifugiert und der lJberstand direkt auf eine C ~ 8- gBondapak Sfiule gegeben, der eine analoge Schutzsfiule vorgeschaltet ist. AIs mobile Phase wird 0,015 M Phosphatpuffer (pH 7)/Methanol (72: 30) verwendet. Der Nachweis wird bei 214 nm im UV durchgeffihrt. Die Nachweisgrenze liegt bei 0,2 mg Benzylpenicillin pro 1 Plasma bzw. bei 10 mg/1 Urin. - J. Chromatogr. 342, 436-441 (1985). School Pharm., Univ. Tasmania, Hobart (AUS) R.H.S.

Rapid method for the measurement of methylprednisolone and its hemisnccinate in plasma and urine following ,,pulse therapy" by high- performance liquid chromatography. GJ. Lawson.

Methylprednisolon-21-hemisuccinat und sein aktiver Metabolit, 21- Hydrocorticosteroid, k6nnen aus Plasma und Urinproben nach Eingabe yon st/irker konzentrierten Infusionsl6sungen durch ein HPLC-Verfah- ren bestimmt werden. Die Wirkstoffe werden tiber Exteluts/iulen extrahiert, die mit Ethylacetat eluiert werden. Das Eluat wird zur Trockne eingedampft, in mobiler Phase aufgenommen und auf einer Spherisorb ODS-2-Sfiule mit einem Acetonitril/Acetatpffer (pH 3) (32,5:67,5)-Ge- misch als mobiler Phase getrennt. Die Trennung wird bei 30~ durchgeffihrt, und der Nachweis erfolgt bei 251 nm im UV. Es werden keine St6rungen durch endogene Verbindungen ermittelt. - J. Chromatogr.

342, 251-260 (1985). Dept. Clin. Chem., Kent Sussex Hosp., Tunbridge Wells, Kent (GB) R.H.S.

Determination of malotilate and its metabolites in plasma and urine. N. Takasugi, E. Mafune, S. Yokokawa, K. Toriyama, K. Tsuchiya and T. Sugimoto.

Malotiiat (Diisopropyl-l,3-diethio-2-ylidenmalonat), welches bei der Behandlung yon chronischer Hepatitis und Leberzirrhose eingesetzt wird, kann zusammen mit seinen Stoffwechselprodukten, der korrespon- dierenden Monocarboxylsfiure und deren decarboxyliertem Produkt in Plasma analysiert werden. Dazu wird die Probe mit internem Standard versetzt und bei pH 5 mit Chloroform extrahiert. Der Rfickstand der eingedampften organischen Phase wird in Methanol gel6st und auf einer Nucleosil 5Cls Reversed-Phase Sfiule mit 60% Acetonitril/l% Essig- s/iure in Wasser chromatographiert. Die Nachweisgrenze liegt zwischen 25 und 1100 ng der Verbindungen pro ml Plasma. Malotilat kann auch gaschromatographisch mit EI-MS-Nachweis analysiert werden, dabei erreicht man eine Nachweisgrenze yon 2,5 ng/ml Plasma. - J. Chroma- togr. 342, 349-358 (1985). Pharm. Formulation Res. Center, Res. Inst., Daiichi Seiyaku Co., Tokyo (J) R.H.S.

Paired-ion liquid chromatographic method for the analysis of a phenanthrenemethanol antimalarial in whole blood. LW. Hines, P.D. Elkins, C.E. Cook and C.M. Sparacino.

Ftir _+ 1-(l,3-Dichlor-6-trifluormethyl-(9)-phenantryl-3-di-n-butyl- aminopropanol (I) mit Antimalariawirkung wird ein Analysenverfahren beschrieben. Als Metabolit wird das Monobutylaminoderivat(II) erwar- tet. Ffir die Quantifizierung wird 1-Phenanthryl-(9)-3-di-n-heptylamino- propanol(III) als innerer Standard verwendet. I ist bei - 17~ in Vollblut 4 Monate, im Extrakt 34 Tage stabil. Die Bestimmungsgrenze liegt bei 10 ng/ml. - Verfahren." 2 m1 Vollblut +II I werden mit 30~ Essisester in Hexan extrahiert, die organische Phase abgedampft, in Hexan aufgenommen und mit 0,I M Citronensfiure in 90% Methanol/Wasser ausge- schiittelt. Die saure Phase wird fast zur Trockne gebracht, in Tri-Na- Phosphat-Bors/iure pH 10,9 aufgenommen und mit 30% Essigester/ Hexan extrahiert. Die organische Phase wird nun im Na-Strom zur Trockne gebracht und mit 200 gl Acetonitril/Methanol (1 : 1) aufgenommen. Die HPLC-Trennung an Partisil PXS ODS-3 bzw. an selbst pr/ipa- rierter S/iule (I0 gm Silicagel mit Octadecyltrichlorsilan und Hexame- thyldisilazan behandelt) mit Acetonitril/Wasser (70:30) mit 0,005 M Laurylsulfat bei pH 3,5 dauert 25 rain. - J. Pharm. Sci. 74, 433-437 (1985). Res. Triangle Inst., Res. Triangle Park, NC (USA)

K.F. Becker

Detection of phenolalkylaminees by capillary column gas chromatography- negative chemical ionization mass spectrometry. C.P. Cartoni, M. Ciardi, A. Giarrusso and F. Rosati.

12 Phenolalkytamine, die in pharmazeutischen Produkten vorkommen, werden im Harn durch ein GLC/MS Verfahren bestimmt. D i e Harnproben werden dazu fiber Sep-Pak C18-Patronen gegeben, die mit Wasser gewaschen und mit Methanol eluiert werden. Der Rfickstand des eingedampften Eluats wird mit HC1 hydrolysiert, Cystein wird als interner Standard zugesetzt. Dann wird auf pH 9 gepuffert und mit Diethylether/tert. Butanol (5:1) extrahiert. Der Rfickstand des eingedampften Extraktes wird in Cyclohexan aufgenommen und mit Penta- fluorpropions/iureanhydrid oder Heptafluorbutters/iureanhydrid und Pyridin durch 15 min Erhitzen bei 70~ derivatisiert. Ubersch/issiges Reagens wird dutch Waschen mit 1 M Natriumborat entfernt. Die Deri- vate werden auf einer Quarzcapillarsfiule mit SE-54 Beschichtung getrennt (Temperaturprogramm von 140-220~ Der Nachweis wird dutch NCI mit Methan als Reagensgas massenspektrometrisch durchgefiihrt. Die untersuchten Verbindungen k6nnen mit groger Selektivit/it und Empfindlichkeit mit diesem Verfahren bestimmt werden. - J. Chro- matogr. 330, 315-321 (1985). Dept. Chim., Univ. Rom (I) R.H.S.

Application of derivative spectroscopy to the determination of plasma theophylline in the presence of phenobarbital. A. Bermejo, M. Lopez- Rivadulla, P. Fernandez and L. Concheiro.

3 ml Plasma, 2 ml Phosphatpuffer pH 7,4 (0,5 M Na2HPO4 und 0,5 M KH2PO4-L6sung 1 : 1) und 30 ml Chloroform/Isopropanol (95: 5, v/v) werden 10 rain lang geschtittelt, nach dem Absetzen wird die untere

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~ S S F a ~ S 3 Biochemical and clinical analysis

Phase abgetrennt und filtriert. 25 mi Filtrat werden mit 3 ml 0,1 M NaOH-L6sung 5 rain geschfittelt und 10 min zentrifugiert (5000 U/rain). Nun wird die alkalische Phase vom CHC13 abgetrennt und der CHCI3- Rest durch Erwfirmen entfernt. Es werden UV-Absorptionsspektren von ~, = 200-300 nm aufgenommen und mit denen bekannter Standard- konzentrationen der o.g. Arzneistoffe verglichen. - J. Anal. Toxicol. 9, 7 6 - 80 (1985). Dept. Med. Legal, Serv. Toxicol. Forense, Univ. Santiago de Compostela (E) K. S611ner

Liquid chromatography with pre-column dansyl derivatisation and fluorimetric detection applied to the assay of morphine in biological samples. F. Tagliaro, A. Frigcrio, R. Dorizzi, G. Lubli and M. Marigo.

A simple method employing pre-c01umn dansylation and liquid chromatography is proposed for a very sensitive and specific assay of morphine in biological samples. Nalorphine is used as an internal standard. The detection limit is 0.2 picomol of injected morphine. In the assay of human sera spiked with 150 mnol/1, the intra- and inter-assay coefficients of variation were 3.7% (n = 10) and 4.5% (n = 10), respectively. No interferences were observed from more than 70 opiate and nonopiate drugs. Urine, plasma and total blood were assayed, using different extraction methods, with negligible interference from coextractives. - J. Chromatogr. 330, 323 - 331 (1985). Ist. Med. Legale, Univ. Verona (I)

Colchicine quantitation by high-performance liquid chromatography in human plasma and urine. M. Lhermitte, J.L. Bernier, D. Mathieu, M. Mathieu-Nolf, F. Erb and P. Roussel.

Zur Bestimmung von Colchicinvergiftungen wird ein schnelles HPLC- Verfahren fiir Plasma und Urin ausgearbeitet. Morpholinopropylchol- chicamid wird als interner Standard verwendet. Die Extraktion erfolgt aus alkalischen Plasmaproben mit Dichlormethan, dann wird mit Etha- nol geschiittelt und der Uberstand zur Trockne eingedampft. Der Rfick- stand wird in mobiler Phase aufgenommen und auf einer Micropak MCH-Sfiule mit einer Vorsfiule mit Acetonitril/Wasser (1:1) als mobiler Phase getrennt. Der Nachweis erfolgt bei 245 nm. Urinproben werden nach der Extraktion noch fiber eine Sep-Pak C18-Patrone gereinigt. Es werden keine St6rungen dutch endogene Substanzen beobachtet. Man kann bereits nach 10 rain fiber die Colchicinvergiftung Aussagen machen und besitzt nach 1 h das genaue Ergebnis. - J. Chromatogr. 342, 4 1 6 - 423 (1985). Lab. Toxico1., Fac. Pharm., INSERM, Lille (F) R.H.S.

Determination of di- and mono-(2-ethylhexyl)phthalate in plasma by gas chromatography. D.A. Teirlynck and M.T. Rosseel.

Bei der gleichzeitigen gaschromatographischen Analyse des Weichma- chers Di(2-ethylhexylphthalat) und seines im K6rper auftretenden Meta- boliten Mono(2-ethylhexyl)-phthalat treten St6rungen auf. Es wird da- her empfohlen, MEHP mit Tetrabutylammoniumhydroxid in der geheiz- ten EinlaBzone des Gaschromatographen zu derivatisieren. Als Standard fiir DEHP dient Di-n-octylphthalat und fiir MEDP Mono-n-octylphthalat. Die gaschromatographische Analyse yon DEHP wird auf einer S~ule mit 2% SE-30 und die yon MEHP auf einer Sfiule mit 5% SE-30 auf Gas-Chrom Q bei 190~ durchgef/ihrt. Die untere quantitative Bestim- mungsgrenze wird mit 5 gg/ml angegeben. In 0,5 ml Plasmaproben konnten noch 1,5 gg beider Verbindungen pro ml nachgewiesen werden. - J. Chromatogr. 342, 399-405 (1985). Heymans Inst. Pharmaco- log., Ghent (B) R.H.S.

Quantitative liquid chromatographic method using fluorescence detection for determining zearalcnone and its metabolites in blood plasma and urine. M.E. Olsen, H.I. Pettersson, K.A. Sandholm and K.-H.C. Kiessling.

The LC method described, is applicable for determination of zearalenone and ~-zearalenol at levels as low as 0.5 ng/ml plasma and 5 ng/ml urine. The sample is incubated overnight with 13-glucuronidase to analyze for both conjugated and unconjugated forms of zearalenone. The next day, the sample is acidified with H3PO4, extracted with chloroform, and evaporated to dryness. The residue is dissolved in toluene and loaded onto a silica gel cartridge which is washed with toluene and eluted with toluene/acetone (88:12). The eluate is evaporated, and the residue is dissolved in chloroform, extracted with 0.18M NaOH, neutralized with H3PO4, and re-extracted with chloroform. The chloroform extract is evaporated, dissolved in mobile phase for LC, and injected onto a normal phase column under the following chromatographic conditions: mobile phase of water-saturated dichloromethane containing 2% 1-propanol, and fluorescence detector, excitation wavelength 236 nm, and 418 nm cut-off emission flter. Re- coveries of zearalenone and its metabolites from blood plasma and urine are 8 0 - 89% in the range 2 .0 -10 ng standard/ml plasma, and 81 - 9 0 % in the range 1 0 - 30 ng standard/ml urine. - J. Assoc. Off. Anal. Chem. 68, 632--635 (1985). Swedish Univ. Agric. Sci., Dept. Animal Nutr. Manage, Uppsala (S)

Flow-through pH-stat method for lipase activity. F. Taylor. A new method for lipase activity which combines the simplicity and

rapidity of continuous pH-stat methods with the flexibility in choice of conditions (pH, temperature etc.) of manual methods is described. The lipase-catalyzed hydrolysis of olive oil and titration of fatty acid products can be carried out separately in two small continuously stirred reactors in series. The response is linear with enzyme dilution. - Anal. Biochem. 148, 149-153 (1985). East. Reg. Res. Center Agric. Res. Serv., Philadelphia, PA (USA)

Simultaneous measurement of prolidase and prolinase activities in erythrocytes using an isotachophoretic analyser. H. Mikasa, K. Sasaski, J. Arata, Y. Yamamoto, T. Ohno and H. Kodama.

Zur Bestimmung von Prolidase- und Prolinase-Aktivit/it in Erythrocy- ten wird ein isotachophoretisches Verfahren beschrieben. Dazu werden Erythrocyten-Lysate mit Tris-HC1-Puffer (pH 7,4) verdtinnt und 1 mM MnClz-L6sung zugesetzt. 10 mM Iminopeptide in Tris-HC1-Puffer werden als Substrat zugegeben. Nach verschieden langer Inkubationszeit bei 37~ wird die Reaktion dutch Erhitzen unterbrochen und H-Gly- Pro-OH, H-Pro-Gly-OH sowie Gly werden gleichzeitig im Uberstand des Inkubationsgemisches mit einem Leitelektrolyten aus 10 mM HC1 + 0,05% Polyvinylalkohol (pH 6 mit 2-Amino-2-methyl-l-propanol) und einem Abbruchelektrolyten von 10raM y-Aminobutters/iure (.pH 10,9 mit Ba(OH)z) mit 75 pA isotachophoretisch bestimmt. Prolin wird in dem Oberstand mit der Chinard-Methode bestimmt. Das Verfah- ren ist einfacher und schneller als bisher benutzte Methoden. - J. Chromatogr. 343, 179-185 (1985). Dept. Chem., Kochi Med. School, Nankoku-shi, Kochi (J) R.H.S.

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3 Biochemische und Klinische Analyse