Bausteine von Oligosacchariden, CVIII. Synthese von modifizierten Oligosacchariden der N-Glycoproteine zur Untersuchung der Substratspezifitäten der N-Acetylglucosaminyltransferasen

H. Paulsen, E. Meinjohanns, F. Reck, I. Brockhausen 737

Bausteine von Oligosacchariden, CVIII['l

Synthese von modifizierten Oligosacchariden der N-Glycoproteine zur Untersuchung der Substratspezifitaten der N-Acetylglucosaminyltransferasen I11 bis VI Hans Paulsen"', Ernst Meinjohanns', Fokert Reckb und Inka Brockhausen"'

Institut fur Organische Chemie der Universitat Hamburg", Martin-Luther-King-Platz 6, W-2000 Hamburg 13, BRD The Research Institute, Hospital for Sick Childrenb, University Avenue, Toronto, Ontario, Canada Department of Biochemistry, University of Toronto', Toronto, Ontario, Canada

Eingegangen am 9. Marz 1993

Key Words: Carbohydrates I Oligosaccharides I Saccharides I Glycoproteins I Glycosyltransferase I Transferases I Enzymes I Proteins I Trichloroacetimidates

Building Units of Oligosaccharides, CVIJI['l. - Synthesis of Modified Oligosaccharides of N-Glycoproteins for Substrate Specificity Studies of N-Acetylglucosaminyltransferases 111 to VI The pentasaccharide p-~-GlcNAc-( 1-+2)-a-~-Man-( 1+3)-[ 0- zed by a block synthesis using functionalized deoxy saccha- D-GIcNAc-( l-r2)-a-~-Man-( 1-+6)]-P-~-Man-octyl (3) and a ride residues. Glycosylation reactions were achieved by the series of modified derivatives of this compound were synthe- trichloroacetimidate method. These pentasaccharides are sized. The 4-OH group of the P-Man residue, the 3-OH or 4- useful for substrate specificity studies of N-acetylglucosami- OH group of the a-(1-+3)-linked Man residue or the 6-OH nyltransferases I11 to VI (GlcNAcT I11 to VI). The substrate group of the a(l+6)-linked Man residue were replaced by specificity of GlcNAcT V will be discussed since this activity deoxy groups. The modified pentasaccharides were synthesi- has been found to be increased in malignancies.

Innerhalb des sogenannten Trimming Prozesses erfolgt im Golgi-Apparat der biosynthetische Aufbau der komple- xen Kohlenhydratketten der N-Glycoproteine. Eine Schlus- selrolle spielen hierbei die N-Acetylglucosaminyltransfera- sen I bis VI (GlcNAcT-I bis -VI)[2,3]. Sie wirken sehr spezi- fisch, wobei die Spezifitat vom Substrat bestimmt wird, da in allen Fallen vom gleichen aktivierten Substrat UDP- GlcNAc das N-Acetylglucosamin ubertragen wird. Die GlcNAcT steuern auch den Verzweigungsgrad der komple- xen Kette des N-Glycoproteins, der fur deren spatere Funk- tion sehr wichtig ist. In vorhergehenden Untersuchungen hatten wir Substanzen zur Uberprufung der Substratspezifi- tat der G~cNAcT-I[~-~] und der G~CNACT-II[ ' ,~~ synthetisiert. Die vorliegende Arbeit befa13t sich mit der Synthese von Substraten, die zur Untersuchung der GlcNAcT-I11 bis -VI geeignet sind.

Das Basissubstrat fur die vier GlcNAcT-I11 bis -VI ist das Pentasaccharid 3, das ein Produkt der GlcNAcT-I1 darstellt. Die Chitobiosylasparagin-Gruppierung ist hier durch einen Octylrest als hydrophober Spacer ersetzt, was nach den bisherigen Erfahrungen zu keiner Beeintrachtigung der Substrataktivitat der GlcNAcT-I11 bis -VI[s-lol fuhrt. Die GlcNAcT-I11 kann 3 in die ,,bisected unit" 1 uberfuhren, die an der 4-OH-Gruppe der Verzweigungseinheit einen zu-

satzlichen GlcNAc-Rest enthaltr' I]. Bei Leber-Tumoren der Ratte sol1 die Aktivitat von GlcNAcT-I11 erhoht sein['*], was zum vermehrten Auftreten von Saccharid-Strukturen wie in 1 fuhrt. Die GlcNAcT-I11 aus Rattennieren-Gewebe ist vor kurzem kloniert und exprimiert worden" 31. Es han- delt sich um ein Glycoprotein mit drei potentiellen N-Gly- cosylierungsstellen.

Die GlcNAcT-IV knupft an 4-OH der a( 1 -3)-gebundenen Mannose von 3 eine zusatzliche GlcNAc-Einheit zu 2. Uber dieses Enzym sind bisher nur wenige Einzelheiten be- kannt. Von hohem Interesse ist dagegen die GlcNAcT-V. Sie katalysiert die Anknupfung einer zusatzlichen Verzwei- gung an 6-OH der a(l+6)-gebundenen Mannose von 3 zum Produkt 4[14]. Die Aktivitat der GlcNAcT-V scheint bei malignen Prozessen erhoht zu sein. Man beobachtet z.B. in BHK-Zellen (baby hamster kidney cells), die durch Rou~-Sarkom['~] oder Polyoma-Viren (onkogene Vi- ren)[16,'7] transformiert sind, einen deutlich erhohten Ver- zweigungsgrad an der 6-OH-Gruppe der a( 1 -6)-gebundenen Mannose, die mit einer doppelt so grol3en Aktivitat der GlcNAcT-V einhergeht. Die Aktivitat der GlcNAcT-V kann als Parameter fur das metastatische Potential transfor- mierter Zellinien angesehen werden und ware daher fur dia- gnostische Zwecke von Interesse['8]. Es sei erwahnt, da13 an

Liebigs Ann. Chern. 1993,737-750 0 VCH Verlagsgesellschaft mbH, D-69451 Weinheim, 1993 0170-2041/93/0707-0737 $ 10.00+.25/0

738 H. Paulsen, E. Meinjohanns, F. Reck, I. Brockhausen

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1-6) \ /

p - D - GlcNAc - (1-4) - p - D - Man - R

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-3)

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-6) \ /

p - D - Man - R

p - D - GlcNAc - (1-2) - a -D - Man - (1-3) /

1 p - D - GlcNAc - (1 -4f 2

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-6) GIcNAc T - IV

p - D - Man - R

p - D - GlcNAc - (142) - a - D - Man - (1-3) GIcNAc T - VI'

3 p - D - GIcNAc - (1 -4)

r /

p - D - GlcNAc - (1 -2) - a - D - Man - (1-6) \

\ /

GIcNAc T - 111

GIcNAc T - V

@ - D - GIcNAc - (1 -6)

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1-6) GIcNAc T - VI

p - D - M a n - R \ /

p - D - GlcNAc - (1 -2) - a - D - Man - (143)

p - D - Man - R

p - D - GlcNAc - (142) - a - D- Man - (1-3) p - D - GIcNAc - (1 46).

4 p - D - GIcNAc - (1 -4) 5

\ R = Chitobiosylasparaginpeptid

A p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-6)

p - D - Man - R oder 8-Methoxycarbonyloctyl

oder Octyl / p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1 -3)

6

diesem zusatzlichen Verzweigungsarm der Mannose weitere Kettenverlangerungen mit Lactosamin-Einheiten erfolgen konnen, die endstandig die sogenannte Lewis-X- oder Le- wis-Y-Struktur enthalten, die typische Krebs-assoziierte Antigene darstellen.

A ~ " H + a AcO A d &

TMS ~ Triflat

1) Pd/H2 2) &COa/MeOH 1

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1-6) - f3 - D - Man - (CHd,CH,

10

Die GlcNAcT-VI modifiziert 4 in der Weise, daI3 an die 4-OH-Gruppe der a( 1 -6)-verknupften Mannose-Einheit eine zusatzliche GlcNAc-Verzweigung zu 6 angebracht wird. Eine andere Aktivitat, GlcNAcT-VI', wirkt direkt an 3 ohne vorherige Anknupfung der p( 1 +6)-glycosidisch gebundenen GlcNAc-Einheit durch GICNACT-V['~~. Die GlcNAcT-VI- und V1'-Aktivitaten sind in Hennen-Eileiter- Membranen, aber bisher noch nicht in Saugetierorganismen nachgewiesen worden. Im Hennen-Ovomucoid kommen derartige hochverzweigte Oligosaccharidketten der N-Gly- coproteine ebenfalls vor.

Zur Gewinnung des Grundkorpers des Pentasaccharids 3 wurden zunachst die verfugbaren Bausteine 71201 (drei Aqui- valente) und 8L2'1 in Gegenwart von (Trimethylsily1)-trifluormethansulfonat (TMS-Triflat) umgesetzt. Die Reak- tion verlauft sehr glatt, da in diesem Falle 2-OH von 7 sub- stituiert ist und kein Orthoester gebildet werden kann. Es erfolgt regioselektiv nur eine Glycosylierung an der reaktiven 6-OH-Gruppe, und das Trisaccharid 9 ist mit 93% Aus- beute zu isolieren. Eine weitere Reaktion der 3-Hydroxyl- gruppe in 9 ist auch in Spuren nicht nachzuweisen. Auch eine erneute Umsetzung von 7 mit 9 fuhrt ebenfalls nicht zu einem zweifach glycosylierten Produkt. Es bestatigt sich wieder der Befund, daI3 bei Anwesenheit einer 4-0-Acetyl- Gruppierung in der P-D-Man-Einheit die 3-OH-Gruppe sich nicht weiter glycosylieren 1aI3t. Das Trisaccharid 9 wird entblockiert durch hydrogenolytische Abspaltung des Ben- zylethers und anschliefiende Hydrolyse der Acetylgruppen. Man gelangt dann zum Produkt 10, das ebenfalls von Inter-

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Bausteine von Oligosacchariden, CVIII 139

esse ist, da nach Hindsgaul et al.tg1 ein vergleichbares Tri- saccharid, in dem der p-D-Man-Rest durch einen P-D-G~c- Rest ersetzt ist, ein gutes Substrat fur die GlcNAcT-V ist. Das entsprechende Trisaccharid rnit einem 8-(Methoxycar- bony1)octyl-Spacer wurde von Hindsgaul et a1.[221 bereits synthetisiert.

Zur Gewinnung von 3 wird auf den bekannten Baustein llm, der durch Kupplung von 7rZ01 rnit 31[21] und anschlie- I3ende Abspaltung der Isopropylidengruppe (Ip-Gruppe) zuganglich ist, zuruckgegriffen. Die Umsetzung von 7 rnit 11 liefert in Gegenwart von TMS-Triflat bei 0°C in glatter Reaktion das gewunschte Pentasaccharid 12. Die Probleme der Orthoesterumlagerung treten hier nicht auf, da sich dieser nicht bilden kann. Nach hydrogenolytischer Abspaltung des Benzylethers zu 13 und Hydrolyse der Acetate rnit Kali- umcarbonat in Methanol sowie nachfolgender gelchroma- tographischer Reinigung ist das entblockierte Pentasaccha- rid 3 in quantitativer Ausbeute zu erhalten. Das 'H-NMR- Spektrum weist die erwarteten Signale der funf anomeren Protonen auf und stimmt rnit der angegebenen Struktur uberein. Von Hindsgaul et al.[''] wurde auf enzymatischem Wege ein entsprechendes Pentasaccharid rnit einem 8-(Me- thoxycarbony1)octyl-Spacer synthetisiert. Auch rnit diesem Produkt stimmen die NMR-Daten von 3 nahezu vollstan-

Ad* AcO 0

7

1) TMS - TrMat 2) k 2 0

AcO

Y AcO

AcO

AcO

(CH2)7CH3 0,

13 R = H

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-6) \ /

p - D - Man - (CHA7CH3

+ 2 x 7 HO

14

AcO AcO

AcO

(CHdFH3 0,

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1-6) \ /

4 - Me0 - p - D - Man - (CH2)7CH3

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-3)

17

21 22 +

TMS - Triflat

ACO AcO

ACO

(CH2)7CH3 0,

f3 - D ~ GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1-6) \ /

4 - Desoxy - f3 - D - Man - (CHA,CH,

p - D - GlcNAc - (142) - a -D - Man - (1-3)

25 p - 0 - GlcNAc - (142) - a - D- Man - (143)'

3



A c O a o A 0 A c O ~ AcO 0

A 0 a 0 ACO A c O a AcO 0

Rod Bu,SnH Pipendin - AcO

OAc OAc 26 R - H 27 R-CSOPh 28

AcO

-OH I

i 29 30 cci3

AcO-0 AcNH I TMS - Triflat

Triflat

t p - D - G l c N A c - ( l - 2 ) -a-D-Man-( l -6)

\ f3 - D - MAn - (CH2)7CH3

/ I p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-3)

36 I

4 - Desoxy

dig uberein. Die Veranderungen am Spacer haben kaum EinfluD auf das Spektrum des Saccharidteiles.

Die Synthese der an C-4 der P-D-Man-Einheit variierten Produkte gestaltet sich wesentlich einfacher. Zur Gewin- nung der 4-0-Methyl-Verbindung 15 wird als Akzeptor das Diol 1417] eingesetzt. 14 1aDt sich rnit drei Aquivalenten des Disaccharidimidats 7 bei Raumtemperatur in Gegenwart von TMS-Triflat glatt umsetzen, und man isoliert 15 rnit der ausgezeichneten Ausbeute von 91%. Hier zeigt sich wieder, daD dann, wenn die 4-OH-Gruppe in 14 durch eine Ethergruppierung blockiert ist, auch eine Glycosylierung der wenig reaktiven 3-OH-Gruppe in der P-D-Man-Einheit ohne Schwierigkeiten moglich ist. Im I3C-NMR-Spektrum von 15 findet man fur die anomeren C-Atome die groDen Kopplungen Jc- l r , l r -H= 172.8 und Jc-I,,,,1r,,-H= 173.8 Hz, die die neuen a-glycosidischen Verknupfungen der beiden Man- Reste anzeigen. Nach hydrogenolytischer Abspaltung des Benzylethers zu 16 erfolgt die vollstandige Abspaltung der Acetylgruppen zum gewunschten Pentasaccharid 17.

Ahnlich gestaltet sich die Synthese der Verbindung, die am P-D-Man-Rest eine 4-Desoxy-Gruppierung enthalt. Al- lerdings wurde hierfur zunachst ein effektiverer Weg zu dem Glycosylakzeptor 2217] ausgearbeitet. Hierzu wird das Trio1 18[21] rnit 2.2 Aquivalenten Benzoylchlorid bei -40°C umgesetzt. Man erhalt dann mit 72% Ausbeute die 2,6-Di-0- benzoylierte Verbindung 19 als Hauptprodukt. Aus 19 ist leicht der Phenoxythiocarbonylester 20 herzustellen. Dieser la& sich rnit Tributylzinnhydrid radikalisch zu 21 reduzie-

Nach alkalischer Abspaltung der Benzoylgruppen steht der gewunschte Glycosylakzeptor 22 zur Verfugung.

Die 4-Desoxy-Verbindung 22 kann wiederum mit 2.5 Aquivalenten des Trichloracetimidats 7["1 unter TMS-Tri- flat-Katalyse in einem Schritt umgesetzt werden. Man erhalt das Pentasaccharid 23 rnit 79% Ausbeute. Das NMR- Spektrum stimmt mit der angegebenen Struktur uberein. Die Entblockierung erfolgt durch Hydrogenolyse des Ben- zylethers zu 24 und endgultiger Abspaltung aller Acetyl- gruppen zu 25.

Die Pentasaccharide 17 und 25 sind insofern interessant, da sie nicht mehr als Substrat fur die GlcNAcT-I11 fungie- ren konnen, da die 4-OH-Gruppe an der P-D-Man-Einheit blockiert oder entfernt ist. Beide Verbindungen konnten aber ein Substrat fur GlcNAcT-IV oder -V sein, wenn man annimmt, da13 GlcNAcT-VI in Saugetieren nicht vor- kommt. Vorlaufige Versuche zeigen, daD sowohll7 als auch 25 gute Substrate fur GlcNAcT-V sind. Dies ist von Inter- esse, denn es zeigt, daD die sogenannte ,,bisected" Position der P-D-Man-Einheit keinen EinfluD auf die Glycosylie- rungsreaktion von GlcNAcT-V hat, obwohl ,,bisected" Ver- bindungen selbst keine Substrate fur GlcNAcT-V ~ind[*~] . Bei der GlcNAcT-I und -11 ist diese Position von hoher Be- deutung, denn die geeignete, 17 entsprechende 0-Methyl- Verbindung ist in beiden Fallen kein Substrat.

Von Interesse ist ferner ein Pentasaccharid, bei dem in der a( 1+3)-glycosidisch verknupften Man-Einheit die 4- OH-Gruppe durch eine Desoxygruppierung ersetzt wird, denn dieses ist der Angriffspunkt fur die GlcNAcT-IV. Fur die Synthese ist zunachst ein geeigneter Disaccharidblock


Bausteine von Oligosacchariden, CVIII

darzustellen. Hierfur kann das Disaccharid 2@1 verwendet werden. Dieses wird in den Phenoxythiocarbonylester 27 ubergefuhrt. Die radikalische Reduktion von 27 mit Tribu- tyl~innhydrid[~~I liefert das desoxygenierte Produkt 28. Durch Behandlung rnit Piperidin wird selektiv die 1-0-Ace- tyl-Gruppe zu 29 (96%) hydrolysiert. Die Umsetzung von 29 rnit Trichloracetonitril in Gegenwart von Kaliumcarbo- nat als Base liefert den gesuchten Glycosyldonor, das Tri- chloracetimidat 30.

Zum Aufbau des Pentasaccharides wird 30 zunachst mit dem Akzeptor 31l2'1 in Gegenwart von TMS-Tnflat umgesetzt. Man erhalt rnit 85% Ausbeute das Trisaccharid 32, bei dem die Isopropylidengruppe (Ip-Gruppe) sauer abgespalten wird zu 33. In einer zweiten Glycosidsynthese wird jetzt 33 rnit 7L2'1 in Gegenwart von TMS-Triflat umgesetzt zu 34. Die Ent blockierungssequenz erfordert wiederum die hydrogenolytische Abspaltung des Benzylethers zu 35. Die endgultige Abspaltung aller Acetylgruppen rnit Kaliumcar- bonat in Methanol fuhrt dann zum gewunschten Pentasac- charid 36.

Die Verbindung 36 ist insofern von Interesse, da sie kein Substrat fur die GlcNAcT-IV, wohl jedoch fur GlcNAcT- I11 und -V sein kann. Vorlaufige Versuche bestatigen, daD 36 ein gutes Substrat fur GlcNAcT-V darstellt.

A c O ~ ACO 0

37 - (CH2)&H3

+ 7

2) k 0

1) TMS . Triflat

0, 38 R-Bzl 39 R - H 40 R - A c

\

I p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-6)

p - D - MLn - (CH&CH3 / I

p - 0 - GlcNAc - (1-2) - a - D- Man - (1-3)

41 I

3 - Desoxy


741

Weiterhin wurde das Pentasaccharid dargestellt, dessen a( 1 +3)-glycosidisch gebundene Man-Einheit eine 3-Des- oxygruppierung enthalt. Hierfur kann der schon bekannte Baustein 37[ll eingesetzt werden. Dieser la& sich mit einem Aquivalent des Disacchariddonors 7r2O] umsetzen zum Pen- tasaccharid 38. Nach Abspaltung des Benzylethers in 38 zu 39 werden aus dem nachacetylierten Produkt 40 alle Acetyl- gruppen abgespalten, und es 1aBt sich die 3-desoxygenierte Verbindung 41 isolieren. Die I3C-NMR- und 'H-NMR-Da- ten stimmen rnit der angegebenen Struktur 41 uberein. Die Verbindung 41 stellt, wie die vorlaufige Prufung ergab, ein Substrat fur die GlcNAcT-V dar.

Ferner wurde ein Pentasaccharid synthetisiert, das spezi- fisch nur rnit der GlcNAcT-V reagieren kann. In aquimola- ren Mengen 1aBt sich der Akzeptor 14F71 rnit dem Disaccha- riddonor 7L2O] regioselektiv in Gegenwart von TMS-Triflat zum Trisaccharid 42 mit 78% Ausbeute umsetzen. Es wird nur die primare 6-OH-Gruppe glycosyliert. In einem weiteren Glycosylierungsschritt erfolgt die Umsetzung von 42 rnit 30 zum gewunschten Pentasaccharid 43 ebenfalls rnit 78% Ausbeute. In Folge der Anwesenheit der 4-0-Methyl- Gruppe in 42 ist die 3-OH-Gruppe fur diesen zweiten Gly- cosylierungsschritt geniigend aktiviert, so daD die Umset-

A c O G ; 7 + 14

TMS - Triflat

AcO-0

AcO

/O

42 l+ 30 AcO

AcO AcO

AcO

p - D - GlcNAc - (1-2) -a - D- Man - (1-6) \

4 - Me0 - p - D - MAn - (CH&CH3 / / p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-3)

I 4 - Desoxy

45

142 H. Paulsen, E. Meinjohanns, F. Reek, I. Brockhausen

CH,

+ 7

TMS ~ Triflal

AcO AcNH

A&

(CH2)7CH3 0,

6 - Desoxy I

a - D - Man - (1-6)

4 - Me0 - p - D Man - (CH2),CH3 1 /

p - D - GlcNAc - (1-2) - a - D - Man - (1-3)

50

zung ohne Schwierigkeiten gelingt. Die NMR-Daten von 43 stimmen rnit der angegebenen Struktur uberein. Im ge- koppelten ‘3C-NMR-Spektrum zeigen sich die Signale der anomeren C-Atome rnit den charakteristischen Kopplungs- konstanten mit Jc- -H = 1 52.6 ( p-manno), Jc- ,, 1 -H = 172.1

gluco), und JC-18zrj,1,r,r-.H = 162.2 Hz (P-glum). Die Entblockie- rung von 43 erfolgt uber primare Abspaltung des Benzyl- ethers zu 44 und Abspaltung aller Acetylgruppen zu 45.

Verbindung 45 ist ein gutes Substrat fur GlcNAcT-V. Sie weist eine deutlich hohere Maximalgeschwindigkeit (V,,, [relativ]) auf als die in GlcNAcT-V-Assays meist venvende- ten Trisaccharid-Substrate wie 10. Zur Bestimmung gerin- ger Enzymaktivitaten ist die Verbindung 45 deshalb besser geeignet. Sie ist an der P-D-Man-Einheit durch eine 4-0- Methyl-Gruppe blockiert und kann daher nicht rnit GlcNAcT-I11 reagieren. Weiterhin enthalt die a( 1+3)-glycosidisch gebundene Man-Einheit eine 4-Desoxygruppie- rung, wodurch eine Reaktion rnit der GlcNAcT-IV verhindert wird. Verbindung 45 ware somit ein spezifisches Sub- strat, das sehr gut zur Bestimmung der Enzymaktivitat der GlcNAcT-V herangezogen werden kann.

Die vorlaufigen Ergebnisse der enzymatischen Tests der modifizierten Pentasaccharidakzeptoren rnit der GlcNAcT- V zeigen, daR alle synthetisierten Pentasaccharide bezogen auf 3 gute Substrate fur die GlcNAcT-V darstellen. Die Pentasaccharide haben dabei K,-Werte im Bereich von 35- 180 PM. Differenzen zeigen sich auch bei den jeweiligen

(a-mafifio), JC.l’”,1”-H= 173.0 (a-manno), JC-1”,1“.H= 164.2 (p-

relativen Maximalgeschwindigkeiten V,,, [relativ]. Ferner kann gezeigt werden, daR die ,,bisecting“ 4-OH-Gruppe der zentralen P-D-Mannose keine spezifische Erkennungsstruk- tur fur die GlcNAcT-V darstellt. So sind sowohl die 4-Me- thoxy- als auch die 4-Desoxy-Verbindungen 17, 45 und 25 gute Akzeptoren fur die GlcNAcT-V. Besonders interessant ist hierbei die Tatsache, daf3 die Pentasaccharide rnit einer 4-0-Methyl-substituierten zentralen Mannose 17 und 45 sehr gute Substrate fur GlcNAcT-V darstellen, aber ,,bisected” Strukturen keine Substrate ~ i n d [ ~ ~ ] . Wahrscheinlich spielen hier sterische Faktoren eine Rolle. Die GlcNAcT-V zeigt also keine hohe Spezifitat bezuglich der P-D-Mannose, da auch die 2-OH-Gruppe variiert werden kann, denn ein P-D-Glucose-Rest anstelle der P-D-Mannose ergibt ein Sac- charid, das ebenfalls gute Substrateigenschaften besitzd91. Vollstandige Substitution der P-D-Mannose-Einheit durch eine andere Gruppierung z.B. einer Methylgruppe fuhrt jedoch zum Verlust der Substrateigenschaft. So stellt z.B. das Disaccharid p-~-GlcNAc-( 1 -+2)-a-D-Man-OMe kein Sub- strat fur die GlcNAcT-V mehr dar.

Die erhaltenen Befunde stimmen gut rnit den Ergebnissen von Hindsgaul et al. iiberein, nach denen der P-D-G~cNAc- (1 -2)-a-D-Man-( 1 +=3)-Arm in 3 zur spezifischen Erken- nung und Bindung der GlcNAcT-V nicht notwendig id9]. Kleine Modifizierungen in der a( 1 --+3)-verknupften D-Man- nose haben einen gewissen EinfluR auf die Substrateigen- schaften. So zeigt z.B. das 3 ’-Desoxy-Pentasaccharid 41 eine dreifach geringere Maximalgeschwindigkeit als 3. Die Maximalgeschwindigkeit des 4‘-desoxygenierten Pentasac- charids 36 zeigt dagegen ungefahr den gleichen Wert wie 3. Das rnit dem Substrat von Hindsgaul et a1.[221 vergleichbare Trisaccharid 10 zeigt ebenfalls eine deutlich geringere Maxi- malgeschwindigkeit als 3.

Nach Hindsgaul et al. ist die 4”’-OH-Gruppe der GlcNAc-Einheit des a( 1 -6)-gebundenen Armes eine ,,Key- polar“-Gruppe, die fur die Bindung der GlcNAcT-V essen- tiell i ~ t [ ~ ~ I . Werden an dieser Position eine Deoxygruppie- rung oder andere Substituenten (4-OMe, 4-F, 4-NH2, 4- NHAc oder 4-OHax) eingefuhrt, so sind alle diese Verbin- dungen keine Substrate fur die GlcNAcT-V mehr[251. Im Laufe des weiteren normalen Trimming-Prozesses wird an dieser 4“’-OH-Gruppe rnit Hilfe einer Galactosyltransferase ein P-D-Gal-Rest eingefuhrt. 1st somit der (1+=6)-Arm ver- langert zum p-D-Gal-( 1 -4)-p-~-GlcNAc-( 1 +=2)-a-D-Man- (1+=6)-Arm, so kann auch dann wie bei den modifizierten Sacchariden die GlcNAcT-V nicht mehr wirksam sein, und es ist keine weitere Verzweigung am (1+6)-Arm mehr moglich. Dieses ist von erheblichem Interesse, da gerade der er- hohte Verzweigungsgrad am (1 +6)-Arm als ein Merkmal fur Krebszellen angesehen wird.

Aus den vorhandenen Bausteinen 1aRt sich auch eine Substanz synthetisieren, die eventuell als spezifisches Sub- strat fur die GlcNAcT-IV in Frage kommt. Die Umsetzung des Akzeptors 14L7] rnit dem Trichloracetimidat 46t1] ergibt regioselektiv das Disaccharid 47. In 47 kann jetzt die freie 3-OH-Gruppe rnit dem Disacchariddonator 7I2O1 umgesetzt werden. In Gegenwart von TMS-Triflat erhalt man das Te- trasaccharid 48. Die NMR-Daten von 48 stimmen mit der



angegebenen Struktur iiberein. Zur Entblockierung wird zunachst der Benzylether hydrogenolytisch entfernt zu 49 und dann alle Acetylgruppen mit Kaliumcarbonat in Me- thanol abgespalten zum entblockierten Tetrasaccharid 50.

Die 4-0-Methyl-Gruppe an der P-D-Man-Einheit in 50 verhindert nach den bisherigen Befunden die Einwirkung der GlcNAcT-11, so daD eine Verlangerung des (1+6)-gebundenen Armes in 50 nicht eintreten sollte. Weiterhin ist die GlcNAcT-V auch durch die 6-Desoxy-Gruppierung in der a( 1 -6)-gebundenen Man-Einheit blockiert. Die GlcNAcT-IV konnte somit nur an der a( 1 -3)-gebundenen Man-Einheit reagieren. Offen ist allerdings die Frage, ob die GlcNAcT-IV die 4-0-Methyl-Gruppe an der ,,bisected"-Position der P-D-Man-Einheit toleriert.

Dem Bundesministerium fur Forschung und Technologie sind wir fur die Forderung dieser Untersuchungen zu Dank verpflichtet.

Experimenteller Teil

henden Arbeit"]. Die allgemeinen Methoden sind die gleichen wie in der vorherge-

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2-desoxy-~-o-glucopyranosyl) - ( 1 42) -0- (3,4,6-tri-O-acetyl-a-~-mannopyra- nosy1)-(I -4)-4-O-acetyl-2-O-benzyl-~-o-mannopyranosid (9): In eine Losung von 7L2O] (40 mg, 0.0512 mmol) und 8[211 (9 mg, 0.021 1 mmol) in absol. Dichlormethan (3 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei Raumtemp. eine 0.01 M Losung von (Trimethylsi- ly1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (1 00 pl) gespritzt. Nach l h (DC: Petrolether/Aceton, l: l , v/v) wird die Reak- tion rnit Triethylamin (1 Tropfen) abgebrochen, das Reaktionsge- misch filtriert und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel mit EthylacetatlPetrolether (4: 1, v/v) ergibt 20.4 mg (93%) Sirup; [a]$? =-21.4 (c= 1.0, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 6=7.40-7.23 (m, 5H, Ph), 5.63 (d, lH, J2",NHjf=8.0 Hz, NH"), 5.52 (dd, lH, J2,,,3"=10.4 Hz, J3*,4"=9.6 Hz, 3"-H), 5.23 (dd, lH, J2',3,=10.4 Hz, J3,,4,=9.6 Hz, 3'-H), 5.06 (d, lH, J = 12.0 Hz, CHPh), 5.04 (dd, lH, J4,,5, = 9.6 Hz, 4'-H), 4.95 (d, lH, J1,,,2,,=8.O

Hz, 1"-H), 4.94 (dd, lH, J4,,,5,,=9.6 Hz, 4"-H), 4.93 (dd, lH, J3,4=9.8 Hz, J4,5=9.8 Hz, 4-H), 4.67 (d, lH, J1,,2,=1.0 Hz, 1'-H), 4.64 (d, lH, CHPh), 4.51 (s, lH, 1-H), 4.25 (dd, lH, J5,,,6,"=5.2 HZ, J6a,,,6bf, = 12.4 HZ, 6a"-H), 4.20-4.15 (m, 2H, 5'-H und 2'-H), 4.09 (dd, lH, J52,6az=2.4 Hz, J6=',6b' = 12.2 Hz, 6a'-H), 4.00 (dd, lH, J5,j,6w=2.2 Hz, 6b"-H), 3.90 (mc, lH, CH-0), 3.95 (dd, lH, J5',6b'=4.8 Hz, 6b'-H), 3.84 (dd, lH, J2,3=3.2 Hz, 2-H), 3.80 (dd, IH, J5,6a27.6 HZ, J6a,6b=12.0 Hz, 6a-H), 3.67 (ddd, IH, 5"-H), 3.61-3.49 (m, 5H, 3-H, 6b-H, 2"'-H, 5-H und CH-0), 2.35 (d, lH, J3,0H=8.0 Hz, 3-OH), 2.12, 2.10, 2.09, 2.07, 2.04, 2.03, 2.01 (7s, 21H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, NHCOCH,), 1.67-1.55 (m, 2H, CH2), 1.37 (m, 10H, CH2), 0.89 (t, 3H, CH3). - I3C-NMR (100.6 MHz, CDCI,): 6=101.94 (C-l), 98.29 (C-1") und 96.79 (C-1'). - C49H71N023 (1042.1): ber. C 56.48, H 6.87, N 1.34; gef. C 56.54, H 6.93, N 1.43.

Octyl- 0- (2-Acetamido-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl) - (I -2) - 0- (a-~-mannopyranosyl)-(146)-P-D-mannopyranosid (10): Verbin- dung 9 (19 mg, 0.0182 mmol) wird in absol. Ethylacetat (2 ml) gelost und an PalladiundKohle (loo/, Pd, 20 mg) unter Normal- druck hydriert. Nach 6 h (DC: Petrolether/Aceton, 2:3, v/v) wird filtriert, eingeengt und im Hochvakuum getrocknet. Es wird in Me- thanol (2 ml) aufgenommen und rnit Kaliumcarbonat (5 mg) versetzt. Die Losung wird bei Raumtemp. 4 h (DC: ChloroforndMe- thanowasser, 5:4: 1, v/v) geruhrt, rnit schwach saurem Ionentau- scher (Amberlite G-50 I) neutralisiert, filtriert und eingeengt. Gel-

chromatographie an Sephadex LH-20 mit ChlorofordMethanol (1 : 1, v/v) und nachfolgende Gefriertrocknung ergeben 1 1 .O mg (92%) amorphes hlver; [a]g=+17.35 (c=l.l, CH,OH). - 'H- NMR (400 MHz, CD3OD): 6=4.88 (d, IH, J1,,2,=1.4 Hz, 1'-H), 4.48 (s, lH, 1-H), 4.47 (d, IH, J1*,2"=8.2 Hz, 1"-H), 3.99 (d, lH, J2,,3,=3.4 HZ, 2'-H), 3.95 (dd, IH, J5",5,,,=5.2 HZ, J6a",6b"=11.2 Hz, 6a"-H), 3.92-3.38 (m. 18H), 2.01 (s, 3H, NHCOCH3), 1.66-1.53 (m, 2H, CH2), 1.41-1.30 (m, 10H, CH2), 0.89 (t, 3H, CH3).

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acety~-2-desoxy-P-o-gluco- pyranosy1)- (142) -0- (3,4,6-tri-O-acetyl-a-o-mannopyranosyl) - (I -3) - 0-[ (2-acetarnido-3,4,6-tri-O-acety~-2-desoxy-P-o- glucopyranosyl) - (142) -0- (3,4,6-tri- O-acetyl-a-o-rnan- nopyranosyl) -(1-+6)]-4-O-acetyl-2-benzyl-~-o-glucopyranosid (12): In eine Losung von 7[201 (18 mg, 0.023 mmol) und l lfq (20 mg, 0.0199 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei 0°C eine 0.01 M Losung von (Trimethylsily1)- trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (100 pl) gespritzt. Nach 1 h (DC: Petrolether/Aceton, 1: 1, v/v) wird mit Triethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Der Ruckstand wird in absol. Pyridin/Essigsaureanhydrid (3 ml; 2: 1, v/v) aufgenommen und 4 h (DC: Petrolether/Aceton, 1 : 1, v/v) bei Raumtemp. belassen. Es wird eingeengt, mit Toluol codestilliert und saulenchromatographisch an Kieselgel rnit Petrolether/Aceton 3 : 2, v/v, gereinigt; Ausb. 25.4 mg (77y0) amorphes hlver, [a]g= -8.8 (c= 1.0, Chloro- form). - 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=7.43-7.22 (m, 5H, Ph),

Hz, J3rrrr,4,T,j=9.8 Hz, 3""-H), 5.60 (dd, 1 H, J2,,,NHf,=8.0 Hz, NH"), 5.87 (d, lH, Jy",~~,, , ,=7.2 Hz, NH""), 5.68 (dd, lH, J2,n,,3"n=10.4

5.47 (dd, lH, JT,y=10.4 Hz, 53*,4-=9.2 Hz, 3"-H), 5.28 (dd, lH, J3,4=8.8 Hz, J4,5=1O.O Hz, 4-H), 5.23 (dd, lH, J3,,4,=9.6 Hz, J4,,5,=9.6 Hz, 4'-H), 5.18 (d, lH, Jlf*,,,2,,*=8.O Hz, 1""-H), 5.11 (dd, lH, J3,,,,4,,,=9.6 Hz, J4,*,5*,*=9.6 Hz, 4"'-H), 5.09 (dd, 1H, J2*,3,=3.0 Hz, J3,,4'=9.8 Hz, 3'-H), 5.07 (dd, lH, J2",y=3.2 Hz, J3,9,,4-,=9.8 Hz, 3"'-H), 5.04 (d, lH, J = 12.4 Hz, CHPh), 5.03 (dd, lH, J4,,,,,5,,,,= 10.4 Hz, 4""-H), 4.95 (dd, lH, J4,,,5,,=10.4 Hz, 4"-H), 4.92 (d, lH, J1,,,2,,=8.2 Hz, 1"-H), 4.84 (d, lH, J1,,2'=1.2 Hz, 1'-H), 4.73

(dd, 1H, Jy,,6a,,-=4.8 Hz, J6a"",&'"=12.4 Hz, 6a""-H), 4.25 (dd, 1H,

und 6a'-H), 4.17 (dd, lH, J22fr,3,,,=3.4 Hz, 2'"-H), 4.16 (dd, lH,

Hz, 6b"-H), 4.06 (dd, lH, 2'-H), 4.05-3.90 (m, 4H, 6b-H), 6b'- H, 5'-H und CH-0), 3.87 (dd, lH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 3.85-3.80 (m, 2H, 6a-H und 6b-H), 3.76 (dd, lH, 3-H), 3.70-3.60 (3 ddd, 3H, 2"-H, 5"-H und 5""-H), 3.57-3.50 (2 ddd, 2H, 5"'-H und 5-H), 3.46 (mJ, IH, CH-0), 3.20 (ddd, lH, 2 - H ) , 2.10, 2.08 (2 x), 2.05, 2.04, 2.03, 2.02 (3 X), 2.01, 2.00 (2 X), 1.99 (9 s, 39H, CH3CO), 1.95 und 1.93 (2 s, 6H, NHCOCH3), 1.67-1.52 (m, 2H, CH2), 1.40-1.29 (m. 10H, CH2), 0.89 (t, 3H, CH3).

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-o-glucopyranosyl) - (142) - 0- (3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-rnannopyra- nosyl) - (I 43) - 0-[ (2-acetarnido-3,4,6-tri- O-acetyl-2-desoxy-~-o- glucopyranosyl) - (I -2) - 0- (3,4,6-tri- O-acetyl-a-o-mannopyranosyl)-(l~6)]-4-O-acetyl-~-o-glucopyranosid (13): Verbin- dung 12 (25.4 mg, 0.0153 mmol) wird in absol. Ethylacetat (3 ml) gelost und an PalladiudKohle (10% Pd, 20 mg) unter Normal- druck fur ca. 12 h (DC: Toluol/Ethanol, 7: 1, vlv) hydriert. Es wird filtriert und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel mit Petrol- ether/Aceton ( l : l , v/v) ergibt 23.9 mg (99%) Sirup; [a]g=-9.85 (c= 1.1, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 6 = 5.82 (d,

(d, lH, CHPh), 4.69 (d, lH, J1,,,,2,,,=1.2 Hz, 4.52 (s, lH, 1-H), 4.26

J5",6a,*=4.4 HZ, J6a",6w = 12.0 HZ, 6a"-H), 4.23-4.20 (m, 2H, 6 b H

J5,,,,6,,, 5.2 HZ, J6a,,,,6v=12.0 HZ, 6-H) , 4.10 (dd, 1H, J5",6b"=2.0

1H, J2"",~~""=8.4 Hz, NH'"'), 5.77 (d, 1H, J 2 " , ~ ~ " = 7 . 6 Hz, NH"), 5.65 (dd, lH, J2",3,,=10.4 Hz, .J3,,,4,, = 9.2 Hz, 3"-H), 5.43 (dd, IH, Jy,,3,,,,= 10.6 Hz, J3,,,,,4,,,,= 10.6 Hz, 3 - H ) , 5.28 (dd, 1 H, J3.4~9.6 Hz, J4,5=9.6 Hz, 4-H), 5.22 (dd, IH, J3,,4,=9.6 Hz, J4,,5,=9.6 Hz,



4’-H), 5.20 (dd, lH, Jy,y=9.6 Hz, J4,,,,5,,,=9.6 Hz, 4”’-H), 5.16 (d, IH, Jl,,,2,r=8.4 Hz, I”-H), 5.07 (dd, lH, J2,,33=3.4 Hz, 3’-H), 5.04 (dd, IH, Jy,,3,,,=3.2 Hz, 3’”-H), 5.02 (dd, IH, 34,,,,,5,,,,= 10.0 Hz, 4““- H), 4.96 (dd, lH, J4,,5v=9.4 Hz, 4“-H), 4.94 (d, lH, Jl,,,,,z,,,=8.2 Hz, 1””-H), 4.85 (d, IH, J1,,2*=1.4 Hz, 1’-H), 4.79 (d, lH, J1,,,,2,,,=1.6 Hz, I”’-H), 4.50 (s, IH, 1-H), 4.27 (dd, lH, J5,~,,,6~,,,,=4.8 Hz, J6am,,6bmt= 12.2 HZ, 6a””-H), 4.24 (dd, 1 H, J5,,,6a,,=4.4 HZ, J6a”,6b = 12.0 Hz, 6a”-H), 4.23 (ddd, lH, 5’-H), 4.22-4.14 (m, 6H, 6a”’-H, 6a’-H, 2-H, 2”’-H und 6b’-H), 4.07 (dd, 1H, J5”’,6brr=2.4 Hz, J6a”,6b”= 12.6 Hz, 6b-H), 4.04 (dd, lH, J5,,tt,6b,,,,=2.0 Hz, 6b -H) , 4.01 (dd, IH, J5,,,6b,,=2.4 Hz, 6b-H), 3.92 (ddd, 1H, 5””-H), 3.89 (mc, IH, CH-0), 3.78 (dd, IH, J5,6a=6.2 HZ, J6a,6b=II.4 HZ, 6a- H), 3.74 (ddd, lH, 5”-H), 3.70 (dd, lH, J2,3=3.0 Hz, J3,4=9.6 Hz, 3-H), 3.67 (ddd, lH, 2””-H), 3.64 (dd, lH, J6a,6b=2.2 Hz,

3.23(ddd,lH,2”-H),2.92(br.s,1H,2-OH),2.16,2.10,2.08(2X), 2.07, 2.05, 2.04, 2.03, 2.02, 2.01, 2.00, 1.99, 1.98 (12s, 39H, CH,CO), 1.94 und 1.93 (2 s, 6H, NHCOCH,), 1.65-1.55 (m, 2H, CH2), 1.32-1.24 (m, 10H, CH2), 0.87 (t, 3H, CH3).

Octyl- 0- (2-acetamido-2-desoxy-~-~-gh~opyranosy~) - ( I -2) - 0- (a-D-mannopyranosyl) - ( I -3) -0-[ (2-acetamido-2-desoxy-P-~- g ~ u c o p y r a n o s y ~ ) - ( ~ ~ ~ ) - ~ - ( a - D - m a n n o p y r a n o s y ~ ) - ( ~ ~ 6 ) ] - ~ - D - m a n - nopyranosid (3): Verbindung 13 (23.9 mg, 0.0152 mmol) wird in absol. Methanol (3 ml) gelost und rnit Kaliumcarbonat (6 mg) versetzt. Diese Losung wird 3 h (DC: ChloroforndMethanoVsser, 5:4: 1, v/v) turbulent geriihrt. Es wird mit schwach saurem Ionen- austauscher (Amberlite CG-50 I) neutralisiert, filtriert und eingeengt. Gelfiltration an Sephadex LH-20 (ChloroforrdMethanol, 1 : 1, v/v) und anschlienende Gefriertrocknung ergeben 15.5 mg (quantitativ) amorphes Pulver; [a]g= +4.7 (c= 1.2, Methanol). -

J6a,6b=11.4H~,6b-H),3.56(ddd, IH, 5-H), 3.51 (mc, IH,CH-0),

‘H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=5.11 (d, IH, J1,,2,=1.0 Hz, 1’- H), 4.90 (d, IH, Jl,,,.2,,,= 1.2 Hz, 1”’-H), 4.48 (d, lH, J1,,,2,,=8.2 Hz, I”-H), 4.47 (s, IH, I-H), 4.46 (d, lH, J1~~,,,y=8.0 Hz, 1””-H), 4.09 (dd, lH, J2,,3*’3.2 Hz, 2’-H), 4.08 (d, IH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 4.03 (dd, IH, J2,,,,3,,,=3.4 Hz, 2’”-H), 3.98 (dd, IH, J5f,,,,6a,,,,=5.0 Hz, J6af”,6bff“= 11.4 HZ, 6a””-H), 3.92-3.22 (m, 28H), 2.01, 2.00 (2 S, 6H, NHCOCH,), 1.65-1.58 (m, 2H, CH2), 1.37-1.26 (m, IOH, CH2),

Octyl-0- (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acety~-2-desoxy-P-~-glucopyranosyl) - ( 1 4 2 ) - 0- (3 ,4 ,6- tr i - 0-acetyl-a-D-mannopyranosyl) - ( I -3) - 0-[ (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2-desoxy-P-o- glucopyranosyl) - ( I -2) - 0- (3 ,4 ,6- tr i - 0 -ace ty l -a - D-manno- pyranosy1)-(I -5) ]-2-O-benzyl-4-O-methyl-~~-mannopyranosid (15): In eine Losung von 7120] (59 mg, 0.0756 mmol) und 14E71 (10 mg, 0.0252 mmol) in absol. Dichlormethan (3 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei 0°C eine 0.01 M Losung von (Trimethylsily1)- trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (250 pl) gespritzt. Es wird auf Raumtemp. erwarmt und 1 h (DC: Petrolether/Aceton, 1:1, v/v) geriihrt. Es wird rnit Triethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel mit Petrol- ether/Aceton (2:l - 3:2, v/v) ergibt 37.2 mg (91%) Sirup; [a]g = - 14.6 (c= 1.2, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDCI,):

0.90 (t, 3H, CH3).

6=5.70 (d, IH, J~,,NH,,,, = 8.4 HZ, NH””), 5.67 (d, IH, J~,,,NH,,=~.O Hz, NH’)), 5.54 (dd, IH, Jy,3,,=10.6 Hz, J3,,,4,,=9.2 Hz, 3”-H), 5.37 (dd, lH, J2,,,,,3,,,,= 10.6 Hz, J3,,,,,4,,,,=9.3 Hz, 3””-H), 5.25 (dd, lH, Jy,4,,=9.6 Hz, J4,,,,5,,,=9.6 Hz, 4”’-H), 5.17 (dd, lH, J3,,4,=9.6 Hz, Jq,5,=9.6 Hz, 4’-H), 5.09 (dd, lH, J2’,3,=3.0 Hz, J3’,4’=9.6 Hz, 3’- H), 5.06 (dd, lH, Jy8,3,,,=3.2 Hz, J3”,4,,9=9.8 Hz, 3”’-H), 5.05 (d, lH, J = 12.4 Hz, CHPh), 5.02 (d, lH, J1m,yv=8.0 Hz, 1””-H), 5.00 (dd, IH, J3”,4,,=9.4 Hz, J4,,,5,,=9.4 Hz, 4”-H), 4.99 (d, lH, J1,,2,=1.2 Hz, 1’-H), 4.97 (dd, IH, J3,,,,,4,,,,=9.2 Hz, J4,,,*,5,w= 10.0 Hz, 4””-H), 4.86 (d, IH, Jl,,,,,2,,-=8.O Hz, 1””-H), 4.75 (d, lH, J=12.4 Hz, CHPh), 4.45 (s, 1H, 1-H), 4.32 (dd, IH, Jy,6a,,*=6.0 Hz, 56a”“,6W=12.4 Hz,

6a””-H), 4.27 (dd, lH, 2’-H), 4.23 (lH, J5”,6af”5.8 Hz, J6a,,,6b= 12.4 Hz, 6a”-H), 4.22 (dd, IH, 2”’-H), 4.13 (dd, lH, J5rpfr,6btfr,=2.4 Hz, J6a*”,6,,,,,,= 12.4 Hz, 6b -H) , 4.03 (dd, 1H, J5,?,6~=2.O Hz, 6b-H), 4.00 (m, 1H, CH-O), 3.96 (dd, IH, J5~,6~’=6.0 HZ, J6a’,6b,=12.0 Hz, 6a’-H), 3.93 (dd, 1H, J5”,6a”’=5.8 Hz, J6a2,,,6b’“= 12.0 Hz, 6a”’-

Hz, 6a-H), 3.84 (d, lH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 3.77 (dd, IH, J5,6b=2.0 Hz, J6a,6br10.8 Hz, 6b-H), 3.72-3.60 (m, 5H, 3-H, 5’-H, 5“-H, 2””-H und 6b-H), 3.56 (s, 3H, OCH3), 3.55 (dd, IH, J3,4=9.6 Hz,

3.47 (mc, IH, CH-0), 3.33 (ddd, lH, 5-H), 2.16, 2.11, 2.10, 2.09,

1.96 und 1.94 (2s, 6H, NHCOCH,), 1.62-1.55 (m, 2H, CH2), 1.39-1.25 (m, IOH, CH2), 0.89 (t, 3H, CH,). - C74H1&2038 (1631.7): ber. C 54.47, H 6.55, N 1.72; gef. C 54.34, H 6.61, N 1.82.

Octyl-0- (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-~-g~uco- p y r a n o s y l ) - ( 1-2) -0-(3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-mannopyranosyl) - ( I -3)-0-[(2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-D- g l u c o p y r a n o s y l ) - ( 1 4 2 ) - 0- ( 3 , 4 , 6 - t r i - o - a c e t y l - a - D - mannopyranosyl)-(l~6)]-4-O-methy~-~-~-mannopyranosid (16): Verbindung 15 (80.2 mg, 0.0491 mmol) wird in absol. Essigester ( 5 ml) gelost und unter Normaldruck an PalladiudKohle (10% Pd, 30 mg) hydriert. Nach 14 h (DC: Petrolether/Aceton, 2:3, v/v) wird filtriert und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel mit Petrol- ether/Aceton ( I : ] , v/v) ergibt 75.6 mg (99%) Sirup; [a]g=-7.5 (c = 0.9, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDCI3): 6 = 5.68 (d,

H), 3.90 (ddd, IH, 5”’-H), 3.89 (dd, IH, J5,6a=5.4 HZ, J6a,6b= 10.8

J4,5=9.6 Hz, 4-H), 3.54 (ddd, lH, 5””-H), 3.50 (ddd, IH, 2”-H),

2.08, 2.06 (2 X), 2.05, 2.04, 2.03, 2.02, 2.00 (11 S, 36H. CH,CO),

IH, Jy,,NH,,,,=8.4 Hz, N H ) , 5.66 (d, IH, Jy ,NH, ,=8 .0 Hz, NH”), 5.56 (dd, lH, J2,,,3”=10.4 Hz, Jy,q = 9.2 Hz, 3”-H), 5.40 (dd, lH, J2,,f,,3c8j,= 10.6 Hz, J3rr,2,4t888=9.2 Hz, 3””-H), 5.27-5.21 (m, 2H, 4’-H und 4”’-H), 5.09 (dd, lH, J2,,3, = 3.0 Hz, J3,,42=9.6 Hz, 3’-H), 5.08 (d, IH, J1,,,2,,=8.0 HJz, 1”-H), 5.03 (dd, IH, J3”,,,4,w=9.8 Hz, J4,,,,5un

= 9.8 Hz, 4””-H), 5.02 (dd, IH, Jy,,3,,,=3.0 Hz, J3’”,4w=9.6 Hz, 3”’- H), 4.99 (dd, IH, J3,,,4,,=9.8 Hz, J4,,,5,,=9.8 Hz, 4”-H), 4.96 (d, lH, J1,,,,~=1.4 Hz, I”’-H), 4.94 (d, IH, J1,,,,,2’”=8.0 Hz, 1”“-H), 4.93 (br. s, lH, 1’-H), 4.41 (s, IH, I-H), 4.34 (m, lH, 5’-H), 4.32-4.18 (m, 5H, 2’-H, 2 - H , 6a”-H, 6a””-H und 6a’-H), 4.14-4.02 (m, 4H, 2- H, 6b-H, 6b””-H und 6b’-H), 3.97 (ddd, lH, Y-H), 3.92 (m, lH, CH-0), 3.84-3.76 (m, 2H, 5”-H und 6a”-H), 3.74-3.63 (m, 3H, 2””-H, 6 b - H und 5””-H), 3.62-3.56 (m, 6H, 4-H, 6a-H, 6b-H und OCH3), 3.50(ddd, 1H,2”-H), 3.48 (mc, lH, CH-0), 3.33 (m, lH, 5-H), 2.84 (br. s, lH, 2-OH), 2.17, 2.14, 2.11, 2.09, 2.08, 2.06 (2

NHCOCH3), 1.67-1.55 (m, 2H, CH2), 1.34-1.22 (m, IOH, CH3, 0.87 (t, 3H, CH3). - C67H100N2038 (1541.53): ber. C 52.20, H 6.54, N 1.82; gef. C 52.34, H 6.61, N 1.87.

octyl-0- (2-acetamido-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl) - ( I ’ 2 ) -(a- D-mannopyranosyl) - (1 -3) - 0-[ (2-acetamido-2-desoxy-~-~- glucopyranosyl) - ( I -2) -0- (a-D-mannopyranosyl) - ( I -6)l-4- 0- methyl-P-D-mannopyranosid (17): Verbindung 16 (75.6 mg, 0.049 mmol) wird in absol. Methanol (4 ml) gelost und rnit Kaliumcarbo- nat (8 mg) versetzt. Die Losung wird bei Raumtemp. 5 h (DC: ChloroforrdMethanoVsser, 5:4: 1, vlv) geriihrt. Es wird mit schwach saurem Ionentauscher (Amberlite CG-50 I) neutralisiert, filtriert, eingeengt, gelchromatographisch an Sephadex LH-20 mit ChlorofordMethanol (1 : I , v/v) gereinigt und gefriertrocknet; Ausb. 49.4 mg (97%) amorphes Pulver, [a]g= f4.4 (c= 1.1, Metha- nol). - ‘H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6 = 5.07 (d, 1 H, Jl,,2, = 1 .O

X), 2.04, 2.03, 2.02, 2.01, 1.99 (I1 S, 36H, CH,CO), 1.94 (s, 6H,

Hz, 1’-H), 4.94 (d, IH, Jl*~~,2w=1.2 Hz, 1”‘-H), 4.49 (d, lH, J1”,2”=8.4 Hz, 1”-H), 4.48 (d, 1 H, J1w,,2,m=8.0 Hz, 1””-H), 4.45 (s, lH, 1-H), 4.08 (d, lH, J2,3=3.O Hz, 2-H), 4.04 (dd, lH, J2,,3,=3.2 Hz, 2’-H), 4.03 (dd, IH, Jy,,3,,,=3.0 Hz, 2”’-H), 3.94 (dd, lH, J~ ,6~“=4.6 HZ, J6a,,,,5b*, = 12.0 Hz, 6a”-H), 3.90-3.22 (m, 31H), 3.87 (m, IH, CH-0), 3.72 (dd, 12H, J5”,6b,,=2.O Hz, 6b”-H), 3.64 (ddd,



lH, 2"-H), 3.62 (ddd, IH, 2""-H), 3.54 (s, 3H, OCH3), 3.47 (mc, lH, CH-0), 2.01 und 1.99 (2 s, 6H, NHCOCH3), 1.66-1.52 (m, 2H, CHZ), 1.35-1.25 (m, IOH, CHz), 0.90 (t, 3H, CH3). - C43H76N2026 (1037.1): ber. c 49.80, H 7.39, N 2.70; gef. C 49.87, H 7.32, N 2.68.

mmol) in absol. Toluol (1 ml) unter Stickstoff (1 bar) zugetropft. Die Desoxygenierung (DC: Petrolether/Aceton, 2:1, v/v) ist nach 30 min beendet. Nach dem Abkuhlen der Losung wird i.Vak. eingeengt und das Produkt saulenchromatographisch gereinigt (Petrol- ether/Aceton, 20:l + l5:1, v/v); Ausb. 66 mg (83%) [a]@=-88.4

Octyl-2-O-benzyl-P-~-munnopyranosid (18): Eine Losung von 8r2'] (200 mg, 0.471 mmol) in Methanol (2 ml) wird innerhalb ca. 12 h rnit einer gesattigten ammoniakalischen Methanollosung (5 ml) bei Raumtemp. deacetyliert. Nach Einengen und mehrmaliger Codestillation rnit absol. Toluol wird der Riickstand an Kieselgel rnit PetrolethedAceton (1 : 1, v/v) chromatographiert; Ausb. 170 mg (94%) amorphes Pulver, [a]? -78.4 (c= 1.4, Chloroform). - 'H- NMR (250 MHz, CDCI3): 6=7.42-7.22 (m, 5H, Ph), 5.07 (d, IH,

1-H), 3.96 (mc, lH, CH-0), 3.92-3.80 (m, 2H, 6a-H und 6b-H),

J4,5=9.8 Hz, J4,0H=2.0 Hz, 4-H), 3.54-3.40 (m, 2H, 3-H und CH-0), 3.27 (ddd, lH, 5-H), 2.60, 2.34, 2.28 (3 br. s, 3H, 3-OH, 4-OH und 6-OH), 1.72-1.55 (m, 2H, CH2), 1.41-1.30 (m, IOH, CHz), 0.88 (t, 3H, CH3). - Cz1H34O6 (382.5): ber. C 65.94, H 8.96; gef. C 65.49, H 9.12.

Octyl-3,6-di- 0-benzoyl-2- 0-benzyl-p-D-mannopyrunosid (19): Das Octylglycosid 18 (106 mg, 0.277 mmol) wird in absol. Pyridin (3 ml) gelost und die Losung auf -50°C gekuhlt. In die Losung wird langsam Benzoylchlorid (80 pl, 0.692 mmol), gelost in Dichlorme- than (1 ml), getropft. Die Losung wird dann langsam innerhalb von 6 h auf Raumtemp. erwarmt und 2 h bei Raumtemp. belassen (DC: Petrolether/Aceton, 2: 1, v/v). Es wird Methanol (100 pl) zu- gegeben und 15 min geriihrt. Es wird i.Vak. eingeengt und rnehr- mals rnit Toluol codestilliert. Der Ruckstand wird saulenchromatographisch rnit PetroletherlAceton (7: I, v/v), an Kieselgel gereinigt; Ausb. 147 mg (88%) Sirup, [a]?= - 109.7 (c= 1 .O, Chloroform). - 'H-NMR (250 MHz, CDCI3): 6=8.10-7.22 (rn, 15H, 3 Ph), 5.00

CHPh), 4.74-4.68 (m, 2H, 6a-H und 6b-H), 4.67 (d, IH, CHPh),

J=12.0 Hz, CHPh), 4.61 (d, IH, CHPh), 4.53 (d, IH, J1,2=0.4 Hz,

3.82 (dd, lH, J2,3=3.4 Hz, 2-H), 3.65 (ddd, IH, J3,4=9.6 Hz,

(d, lH, J2,3=3.0 Hz, J3,4=10.0 Hz, 3-H), 4.93 (d, lH, J=12.0 Hz,

4.65 (s, IH, J1,2=0.4 Hz, 1-H), 4.21 (dd, lH, J4,5=10.0 Hz, 4-H), 4.10 (dd, IH, 2-H), 3.97 (m, lH, CH-0), 3.67 (ddd, lH, 5-H), 3.51 (mc, IH, CH-0), 2.74 (br. s, lH, 4-OH), 1.67-1.53 (m, 2H, CH2), 1.47-1.32 (m, ]OH, CH2), 0.88 (t, 3H, CH3). - C35H4206 (590.7): ber. C71.17, H7.17; gef. C70.97, H7.39.

Octyl-3,6-di-O-benzoyl-2-O-benzyl-4-phenoxythiocurbonyl-~-~-mun- nopyrunosid (20): Verbindung 19 (100 mg, 0.168 mmol) wird in absol. Dichlormethan (2 ml) und absol. Pyridin (2 ml) gelost und rnit Phenoxythiocarbonylchlorid (35 pl, 0.253 mmol) versetzt. Nach 36stdg. Ruhren bei Raumtemp. (DC: Petrolether/Aceton, 2: 1, v/v) wird i.Vak. eingeengt, der Riickstand in Chloroform (50 ml) aufgenommen und rnit Wasser (40 ml) ausgeschuttelt. Die organische Phase wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, eingeengt und saulenchromatographisch an Kieselgel mit Petrolether/Aceton (10: 1, v/v) gereinigt; Ausb. 106.5 mg (87%), [a]g= - 110.8 (c= 1.2, Chloro- form). - 'H-NMR (250 MHz, CDC13): 6=8.11-6.81 (m, 20H, 4 Ph),6.36(dd, IH,J3,4=1O.OH~,J4,5=10.4H~,4-H),5.18(dd, IH, J2,3=3.0 Hz, 3-H), 4.91 (d, lH, J ~ 1 2 . 0 Hz, CHPh), 4.71 (d, IH, CHPh), 4.51 (s, lH, J1,2=0.4 Hz, 1-H), 4.50-4.40 (m, 2H, 6a-H und 6b-H), 4.20 (d, lH, 2-H), 4.05-3.94 (m, 2H, 5-H und CH-0), 3.57-3.50 (mc, IH, CH-0), 1.67-1.52 (m, 2H, CH2), 1.47-1.32 (m, IOH, CH2), 0.88 (t, 3H, CH3). - C42H4609S (726.9): ber. C 69.40, H 6.37, S 4.41; gef. C 69.58, H 6.56, S 4.43.

(c= 1.0, Chloroform). - 'H-NMR (250 MHZ,- CDCI3): 6=8.12-7.12 (m, 15H, 3 Ph), 5.11 (ddd, IH, J2,3=3.0 Hz, J3,4a=11.8 Hz, J3,4e=4.8 Hz, 3-H), 4.96 (d, IH, J=12.4 Hz, CHPh), 4.75 (d, lH, CHPh), 4.52 (s, lH, 1-H), 4.51 (dd, lH, J5,6a=6.0 HZ, J6a,6bz12.0 HZ, 6a-H), 4.45 (dd, lH, J5,6b=5.0 HZ, 6b-H), 4.00 (mc, lH, CH-0), 3.97 (d, IH, 2-H), 3.91 (dddd, IH, J4a,5=12.2 Hz, J&,5=2.0 Hz, 5-H), 3.48 (mc, lH, CH-0), 2.08 (ddd, IH, 4a-H), 1.67 (ddd, IH, 4e-H), 1.65-1.52 (m, 2H, CH2), 1.37-1.22 (m, 10H, CH2), 0.88 (t. 3H, CH3). - C35H4207 (574.7): ber. C 73.14, H 7.36; gef. C 73.32, H 7.34.

Octyl-2-O-benzyl-4-desoxy-~-~-lyxo-hexopyrunosid (22): Verbin- dung 21 (66 mg, 0.1 15 mmol) wird in absol. Methanol (3 ml) gelost und rnit Kaliumcarbonat (10 mg) versetzt. Es wird ca. 12 h geriihrt (DC: Petrolether/Aceton, 3: 2, dv), mit schwach saurem Ionenaus- tauscher (Amberlite CG-50 I) neutralisiert, der Ionenaustauscher abfiltriert und die Losung eingeengt. Chromatographie erfolgt an Kieselgel rnit Petrolether/Aceton (4: 1, v/v); Ausb. 36.5 mg (86%), [a]@= -92.7 (c= 1.1, Chloroform). - 'H-NMR (250 MHz, C6D6): 6=7.38-7.03 (m, 5H, Ph), 5.14 (d, lH, J=11.8 Hz, CHPh), 4.62 (d, IH, CHPh), 3.99 (s, IH, I-H), 3.85 (mC, lH, CH-0), 3.52 (d, lH, J2,3=3.2 Hz, 2-H), 3.48-3.38 (m, 2H, 6a-H und 6b-H), 3.36

3.23 (mc, IH, CH-O), 3.02 (dddd, IH, J4a,5=9.6 Hz, J4e,5=2.4

1.65-1.50 (m, 3H, 4a-H und CH2), 1.35 (ddd, IH, J4a,4e= 12.0 Hz, 4e-H), 1.42-1.21 (m, IOH, CHI), 0.89 (t, 3H, CH3). - C21H3405 (366.5): ber. C 68.82, H 9.35; gef. C 68.79, H 9.39.

Octyl-0- [2-ucetumido-3,4,6-tri- O-ucetyl-Z-desoxy-/?-D-glucopyrunosyl) - [ 1-2) -0- [3,4,6-tri- O-ucety~-a-~-munnopyru?lo- syl) - (1-3)- 0-[ [2-ucetumido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-~- glucopyranosyl) - [ 1 - 2 ) - 0- [3,4,6-tri-O-ucetyl-a- D - munnopyranosyl) - [ I -+6)]-2-O-benzyl-4-desoxy-~-~-lyxo-hexopyrunosid (23): In eine Losung von 7["] (47 mg, 0.0602 mmol) und 22 (9.1 mg, 0.0246 mmol) in absol. Dichlormethan (2 rnl) und Mo- lekularsieb (3 A, geperlt) wird bei Raurntemp. eine 0.01 M Losung von (Trimethylsily1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlorme- than (100 pl) gespritzt. Nach 30 min (DC: Petrolether/Aceton, 1: 1, v/v) wird rnit Triethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel rnit Petrolether/Aceton (2: 1 -+

1:1, v/v) ergibt 31.2 mg (79%) amorphes Pulver; [a]g=-15.6 (c= 1.0, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDCI3):

(dddd, IH, J3,0~=11.0 Hz, J3,4a=11.0 Hz, J3,4e=4.8 Hz, 3-H),

HZ, J5,6a=4.2 HZ, J5,6b=5.4 HZ, 5-H), 2.15 (d, IH, 3-OH),

6~7.48-7.22 (m, 5H, Ph), 5.90 (d, lH, J2"",~~""=8.4 Hz, NH'"'), 5.75 (d, IH, J2",NH"=8.4 Hz, NH) , 5.44 (dd, lH, J2,,,3"=10.4 Hz, J3,,,4,,=9.4 Hz, 3"-H), 5.37 (dd, lH, Jy,,3,,.= 10.6 Hz, Jy ,y=9 .2 Hz, 3""-H), 5.24 (dd, lH, Jy,,4,,,=9.6 Hz, Jp,y=9.6 Hz, 4-H) , 5.22 (dd, lH, J33,47=9.6 Hz, J4',5,=9.6 Hz, 4'-H), 5.09 (dd, lH, J2~,,,3,,,=3.4 Hz, J3,,,,4,,,=9.6 Hz, 3'"-H), 5.08 (dd, lH, 52,,3,=3.2 Hz, J3,,4'=9.8 Hz, 3'-H), 5.02 (dd, lH, Jy,,.y,=9.2 Hz, J4,5,,=10.4 Hz, 4"-H), 5.01 (dd, IH, Jy,4,,,,=9.2 Hz, J4*,,,,5,,,,=9.8 Hz, 4""-H), 4.99 (d, lH, Jz12.4 Hz), 4.93 (d, IH, lH, Jl,,zs=1.2 Hz, 1'-H), 4.91 (d, JI,,,2.=8.O Hz, 1"-H), 4.84 (d, IH, J1rett,2rrf8=8.0 Hz, 1""-H), 4.83 (d,

4.27 (dd, 1 H, J5,rf,,6a,,r,= 5.2 Hz, J6ar,",6b"'= 12.4 Hz, 6a""-H), 4.24 (dd, lH, CHPh), 4.78 (d, IH, J1,,,,z,, = 1.0 Hz, 1"'-H), 4.35 (s, lH, I-H),

IH, J5,,.6,,,=4.8 HZ, J6a".6b" = 12.0 HZ, 6a"-H), 4.21 (dd, IH, 2'-H), OctyM,6-di-O-benzoyl-2-O-benzyl4-desoxy-~-~-~xo-hexopyruno-

sid (21): z u einer siedenden Losung von 20 (100 mg, 0.137 mmol) in absol. Toluol (3 ml) wird eine Losung von Tributylzinnhydrid (153 pl, 0.55 mmol) und Azo-bis(isobutyronitri1) (5 mg, 0.025

4.19 (dd, 1 H, J5"",6b""=2.0 Hz, 6b""-H), 4.18 (ddd, 1 H, 2"'-H), 4.17 (dd, IH, J5,,6a,=6.6 Hz, J,5a',6b'= 12.0 Hz, 6a'-H), 4.14-3.95 (m, 6H, 6b-H, 6a-H, 6b-H, 2-H, 5"'-H und 6a"'-H), 3.89 (m, lH, CH-0), 3.80-3.67 (m, 7H, 3-H, 2'-H, 5'-H, 6b-H, 5"-H, 4-H



und 6b’-H), 3.66 (ddd, lH, 2”-H), 3.64 (ddd, lH, 5 - H ) , 3.56 (dddd, lH, 5-H), 3 . 4 4 ( ~ , lH, CH-0), 2.10,2.09, 2.08, 2.07,2.06, 2.04 (2 x), 2.03 (2 x), 2.02, 2.01 (10 s, 36H, CH,CO), 1.95 und 1.92 (2s, 6H, NHCOCH,), 1.85-1.72 (m, 2H, 4a-H und 4e-H), 1.65-1.55 (m, 2H, CHJ, 1.38-1.26 (m, 10H, CHJ, 0.88 (t, 3H, CH3).

Octyl-0- (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-~-g~uco- pyranosyl) - (1 42) -0- (3,4,6-tri- O-acetyl-a-o-mannopyrano- sy1)- ( I -3) -0-[ (2-acetamido-3,4,6-tri-O-actyl-2-desoxy-~-D- glucopyranosyl) - ( I -2) - 0- ( 3 , 4 , 6 - t r i - O - a c e t y l - U - D - mannopyranosyl)-(1-r6)]-4-desoxy-~-~-lyxo-hexopyranosid (24): Verbindung 23 (31.2 mg, 0.0194 mmol) wird in absol. Ethylacetat (4 ml) gelost und an PalladiudKohle (10% Pd, 20 mg) unter Nor- maldruck hydriert. Nach 16 h (DC: PetroletherlAceton: 2:3, v/v) wird filtriert und eingeengt. Chromatographie an Kieselgel rnit Pe- trolether/Aceton (1: l , v/v) ergibt 28.3 mg (97%) Sirup, [a]::= -4.95 (c=0.9, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDC1,): 6=5.78 (d, lH, Jy,N~,,,,=8.4 Hz, NH”’), 5.70 (d, lH, Jy,-qH”=8.2 Hz, NH”), 5.51 (dd, 1 H , Jy,,3,,,,= 10.0 Hz, J3”,,,4,,,,=9.6 Hz, 3””-H), 5.44 (dd, 1 H, JTr,y=10.6 Hz, Jy,4“=9.3 Hz, 3”-H), 5.24 (dd, lH, J3,,,,4,,,=9.6 Hz, J4nr,yw=9.6 Hz, 4”’-H), 5.21 (dd, IH, J3,,4,=9.6 Hz, J4’,5,=9.6 Hz, 4’-H), 5.21 (dd, IH, J2,,r,y=3.2 Hz, 3”’-H), 5.08 (dd, lH, J2,,3,=3.4 Hz, 3’-H), 5.06 (d, IH, J1,,,,,2,,,,=8.2 Hz, 1””-H), 5.03 (dd, lH, J4mt,5wr=9.8 Hz, 4 - H ) , 5.00 (dd, lH, J4,,,5“=10.4 Hz, 4”-H), 4.96 (d, IH, J1fr,2,,=8.0 Hz, 1“-H), 4.92 (d, IH, J1,,2f=1.2 Hz, 1’-H), 4.84 (d, lH, J1,,,,2-=1.4 Hz, I”’-H), 4.34 (s, IH, 1-H), 4.26 (dd, IH, J5~,,,,6~,,,,= 5.2 HZ, J6a””,6b”= 12.4 HZ, 6a””-H), 4.25 (dd, 1 H, Jz-,~,,, =3.2 HZ, 2”‘-H), 4.24 (dd, IH, J5,,,6a,,=4.8 HZ, J6a,,,6y=12.0 HZ, 6a”-H), 4.21 (dd, lH, J2s,3r=3.0 Hz, 3’-H), 4.17-4.00 (m, 4H, 6a”’- H, 6b”‘-H, 6a’-H und 2-H), 3.98 (ddd, IH, J5,fr,6afp,=5.8 Hz, J 5 ” , 6 b

=2.6 Hz, 5”’-H), 3.92 (mc, IH, CH-0), 3.82-3.67 (m, 4H, 3-H, 5’-H, 6a-H und 4-H), 3.67-3.59 (m, 2H, 6b’-H und 2”-H), 3.56-3.48 (m, 4H, 5-H, 6b-H, 2””-H und CH-0), 2.58 (br. s, lH,

2.01 (12 s, 36H, CH,CO), 1.99 und 1.94 (2s, 6H, NHCOCH,). 1.84-1.69 (m, 2H, 4e-H und 4a-H), 1.63-1.55 (m, 2H, CH2), 1.34-1.26 (m, IOH, CH2), 0.88 (t, 3H, CH3).

2-OH), 2.17,2.14, 2.11,2.10, 2.09,2.08, 2.06, 2.05,2.04,2.03, 2.02,

Octy 1- 0- (2-ace tam ido-2-desoxy -p- ~-glucopyranosy 1) -(I -2) - 0- (a-D-mannopyranosyl) - (1 -3) - 0-[ (2-acetamido-2-desoxy-P-o- glucopyranosyl) - (I -2) -0- (a-D-mannopyranosyl) - (146)]-4- desoxy-&D-lyxo-hexopyranosid (25): Verbindung 24 (28.3 mg, 0.0186 mmol) wird in absol. Methanol (3 ml) gelost und mit Kali- umcarbonat (8 mg) versetzt. Diese Losung wird bei Raumtemp. 5 h (DC: ChloroformlMethanolMser, 5:4: 1, vlv) turbulent geruhrt. Es wird rnit schwach saurem Ionentauscher (Amberlite CG- 50 I) neutralisiert und eingeengt. Gelfiltration an Sephadex LH-20 mit ChlorofordMethanol (1 : 1, v/v) und nachfolgende Gefrier- trocknung ergeben 18.7 (quantitativ) amorphes Pulver; [a]g= +4.2 (c= 1.2, Methanol). - ‘H-NMR (400 MHz, CD30D): 4.99 (d, lH, JI,,2,=1.2 Hz, 1‘-H), 4.87 (d, lH, J1,,,,2,,,=1.4 Hz, 1”’-H), 4.49 (d, lH, J1“,y=8.0 Hz, 1”-H), 4.48 (d, IH, J13,*,,2”,,=8.4 Hz, I””-H), 4.39 (s, IH, 1-H), 3.98 (dd, lH, J2,,,,3,,,=3.2 Hz, 2”‘-H), 3.96 (d, IH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 3.94 (dd, lH, J2,,3,=3.2 Hz, 2’-H), 3.90-3.22 (m, 28H), 3.77 (dd, lH, J3t,4t=9.6 Hz, 3’-H), 2.01 und 2.00 (2s, 6H, NHCOCH,), 1.80-1.70 (m, 2H, 4e-H und 4a-H), 1.65-1.58 (m, 2H, CH2), 1.35-1.26 (m, 10H, CH3, 0.90 (t, 3H, CH,).

2-Acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl- (142)- Z,3,6-tri-O-acetyl-4-phenoxythiocarbonyl-a-~-mannopyranose (27): Zu einer Losung von 26[’1(100 mg, 0.157 mmol) in absol. Dichlor- methan/Pyridin (6 ml; 1 : 1, v/v) wird Phenoxythiocarbonylchlorid (0.05 ml, 0.375 mmol) gegeben. Nach 36stdg. Ruhren (DC: Toluol/ Ethanol, 4: 1, v/v) wird i.Vak. eingeengt, der Ruckstand in Dichlor-

methan (25 ml) aufgenommen und mit Wasser ausgeschuttelt. Die organische Phase wird mit MgS04 getrocknet, eingeengt und sku- lenchromatographisch (Petrolether/Aceton, 2: 1, v/v) gereinigt; Ausb. 107 mg (88%) Sirup, [a]g = -54.3 (c= 1.4, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDCI,): 6=7.42-7.12 (m, 5H, Ph), 6.00 (d, IH, J1,2=1.2 Hz, 1-H), 5.92 (dd, lH, J3,4=9.8 Hz, J4,5=9.8 Hz, 4- H), 5.73 (d, lH, J2’ ,~~3=8.4 Hz, NH‘), 5.32 (dd, lH, J2‘,3,=10.4 Hz, J3,,4‘=9.6 Hz, 3‘-H), 5.27 (dd, IH, J4,,5,=9.6 Hz, 4’-H), 5.14 (dd, lH, J2,3=3.4 Hz, J3,4=9.8 Hz, 3-H), 4.79 (d, lH, J1,,2,=8.O Hz, l’-H), 4.42 (dd, IH, J~ ,6~=4.6 Hz, J6a,6b=12.0 HZ, 6a-H), 4.29 (dd, IH, 2-H), 4.27 (dd, 1H, J5,,6a,=4.8 HZ, J6a,,6b,=12.0 HZ, 6a’- H), 4.17 (dd, 1H, J5,6b=2.8 Hz, 6b-H), 4.10 (ddd, lH, 5-H), 4.02

lH, 5’-H), 2.17, 2.11, 2.09, 2.08, 2.02, 2.01 ( 6 ~ , 18H, CH,CO), (dd, IH, J5,,6b,=2.0 Hz, 6b’-H), 3.90 (ddd, lH, 2’-H), 3.70 (ddd,

1.96 (s, 3H, NHCOCH3). - C33H41N018S (771.8): ber. C 51.36, H 5.35, N 1.81; gef. C 51.58, H 5.23, N 1.75.

2-Acetamido-3,4,6-tri-~-acety~-~-desoxy-~-D-g~ucopyranosy~- (1 -2) - I,3,6-tri-O-acetyl-4-desoxy-a-~-~yxo-hexopyranose (28): Zu einer siedenden Losung von 27 (100 mg, 0.129 mmol) in absol. Toluol (10 ml) und absol. Dioxan (1 ml) wird eine Losung von Tributyl- zinnhydrid (0.1 ml, 0.378 mmol) und Azo-bis(isobutyronitri1) (5 mg, 0.025 mmol) in absol. Toluol (1 ml) getropft. Nach 30 min (DC: ToluollEthanol, 4: 1, v/v) wird die erkaltete Losung mit To- luol verdunnt, eingeengt und saulenchromatographisch mit ToluoU Ethanol (30: 1, vlv) gereinigt; Ausb. 54 mg (67%) amorphes Pulver, [a]::= -33.4 (c= 1.0, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=6.01 (d, IH, J1,2=1.2 Hz, I-H), 5.67 (d, IH, J ~ , , N H , = ~ . O Hz, NH’), 5.19 (dd, lH, J2~2’,3,=10.4 Hz, J3,,4,=9.6 Hz, 3’-H), 5.06 (dd, lH, J4,,5,=9.6 Hz, 4’-H), 5.05 (ddd, IH, Jz,3=3.2 Hz, J3,4a=10.8 Hz, J3.4ez4.6 Hz, 3-H), 4.61 (d, IH, J1,,2,=8.0 Hz, l’-H), 4.25 (dd, IH, J5,,6ar=5.2 HZ, J6a’,6br=12.4 HZ, 6a’-H), 4.14 (dd, IH, J~ ,6~=4 .8 Hz, J.a,6b=12.4 Hz, 6a-H), 4.07 (dd, IH, 2-H), 4.05 (dd, IH, J5,6b=3.0 Hz, 6b-H), 4.04 (dd, IH, J5‘,6(,’=2.0 Hz, 6b’-H), 4.00 (ddd, IH, 2’-H), 3.98 (m, lH, 5-H), 3.65 (ddd, lH,

(s, 3H, NHCOCH3). - C26H3,NOl6 (619.6): ber. C 50.40, H 6.02, N 2.26; gef. C 50.78, H 6.45, N 2.08.

5’-H), 2.12, 2.10, 2.09, 2.05, 2.04, 2.03 (6 S, 18H, CH,CO), 1.95

2-Acetamido-3,4,6-tri-O-acety~-2-desoxy-~-o-glucopyranosyl- (1 -2)- 3,6-di-O-acetyl-4-desoxy-a/~-~-lyxo-hexopyranose (29): Zu einer Losung von 28 (54 mg, 0.087 mmol) in absol. Tetrahydrofuran (5 ml) wird Piperidin (0.5 ml) gegeben. Diese Losung wird 12 h (DC: ToluollEthanol, 5: 1, v/v) bei Raumtemp. belassen, eingeengt, mit Toluol codestilliert und saulenchromatographisch mit ToluollEtha- no1 (30: 1 -+ 20: 1, v/v) gereinigt; Ausb. 48 mg (96%) Sirup. Das lH- NMR-Spektrum zeigt ein Anomerenverhaltnis von a:p wie 3:2. - ‘H-NMR des a-Anomeren (400 MHz, CDCI3): 6=5.87 (d, IH, J2,,NH’=8.0 Hz, NH’), 5.37 (dd, lH, J2,,3,=10.6 Hz, J3’,4,=9.4 Hz, 3‘-H), 5.17 (dd, lH, J4,,5’=9.6 Hz, 4’-H), 5.07 (ddd, lH, J2,3=3.2 Hz, J3,4a=10.8 Hz, J3,4e=4.6 Hz, 3-H), 5.02 (d, lH, Jl,2=1.4 Hz, I-H), 4.85 (d, lH, J1f,2,=8.0 Hz, 1‘-H), 4.25-4.14 (m, 3H, 6a-H, 6a’-H und 2-H), 4.10-4.01 (m, 3H, 6b-H, 6b’-H und 2’-H), 3.92 (m, lH, 5-H), 3.73 (m, lH, 5’-H), 3.45 (d, IH, Jl,0H=3.8 Hz, 1-

3H, NHCOCH,), 1.85 (ddd, lH, 4e-H). OH), 2.12, 2.09, 2.06, 2.04, 2.02, 2.01 (5 S, 15H, CH&O), 1.96 (s,

O-[(2-Acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl- (1 -2) -3,6-di-O-acetyl-4-desoxy-a-~-lyxo-hexopyranosyl)]-trichloracetimidat (30): Eine Losung von 29 (48 mg, 0.0831 mmol) und Trichloroacetonitril (0.2 ml, 1.97 mmol) in absol. Dichlorme- than (3 ml), wird rnit Kaliumcarbonat (100 mg) versetzt und 2 h (DC: PetroletherlAceton, 1: 1, vlv) turbulent bei Raumtemp. geruhrt. Dann wird rnit Dichlormethan verdunnt, uber Celite filtriert und eingeengt. Der erhaltene Ruckstand wird saulenchromatogra-



phisch an Kieselgel mit PetroletherlAceton (2: 1, v/v) gereinigt; Ausb. 50 mg (82Y0) amorphes Pulver, [a]g= -12.9 (c= 1.3, Chloro- form). - 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=8.61 (s, lH, =NH), 6.19 (d, lH, J1,2=1.2 Hz, l-H), 5.61 (d, lH, J2,,NH,=8.8 Hz, NH'), 5.24 (dd, lH, J2,,3,=10.6 Hz, J3,,4,=9.4 Hz, 3'-H), 5.13 (ddd, lH, J2,3=3.2 Hz, J3,4a=10.8 Hz, J3,4e=4.6 Hz, 3-H), 5.07 (dd, Je,5* = 10.0 Hz, 4'-H), 4.70 (d, lH, J1*,2'=8.4 Hz, 1'-H), 4.27 (dd, lH, J5',6ar=5.0 HZ, J6a',6br=12.4 HZ, 6a'-H), 4.19 (dd, IH, 2-H), 4.18-4.10 (m, 3H, 6a-H, 6b-H und 5-H), 4.06 (dd, lH, J5j,6b,=2.2

2.05, 2.03, 2.01 (5s, 15H, CH3CO), 2.05 (m, lH, 4e-H), 1.97 (s,

ber.C42.32,H4.78,N3.79;gef.C42.67,H4.44,N3.98.

Octyl-0- (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~- ~-glucopyra- n o s y l ) - ( I - 2 ) -0- ( 3 , 6 - d i - 0-acetyl-4-desoxy-a-D-lyxo- hexopyranosyl) - ( 1 -3) -2- O-benzyl-4,6-di- 0-isopropyliden-P-o-mannopyranosid (32): In eine Losung von 30 (28 mg, 0.0387 mmol) und 31[*l] (16 mg, 0.0378 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei Raumtemp. eine 0.01 M Lo- sung von (Trimethylsily1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlor- methan (100 pl) gespritzt. Nach 10 min (DC Petrolether/Aceton, 3:2, v/v) wird mit Triethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Chromatographie erfolgt an Kieselgel mit Petrolether/ Aceton (3: 1, v/v); Ausb. 32.2 mg (85%) Sirup, [a]$?= +23.7 (c= 1, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=7.42-7.27 (m,

Hz, 6b'-H), 4.02 (ddd, IH, 2'-H), 3.68 (ddd, lH, 5'-H), 2.09, 2.07,

3H, NHCOCH3), 1.75 (m, 1H, 4a-H). - C26H35C13N2016 (737.9):

5H, Ph), 5.31 (d, lH, J y , ~ ~ " = 8 . 2 Hz, NH"), 5.22 (dd, lH, J29*,3,*=10.6 Hz, J3",4"=9.6 Hz, 3"-H), 5.02 (dd, lH, J4",5"=9.6 Hz, 4"-H), 5.00 (ddd, lH, J2,,3*=3.2 Hz, J3,,4e,=4.8 Hz, J3,,4a*=9.6 Hz, 3'-H), 4.93 (d, lH, J19,2,=1.2 Hz, 1'-H), 4.92 (d, lH, Jz12.4 Hz, CHPh), 4.82 (d, IH, CHPh), 4.53 (d, lH, J1,,,2"=8.2 Hz, 1"-H), 4.48 (S, 1H, I-H), 4.26 (dd, 1 H, J5,,,6a,, = 5.2 Hz, J6a*,,6~"= 12.0 Hz, 6a"- H), 4.14 (dd, lH, J3,4=9.6 Hz, J4,5=9.6 Hz, 4-H), 4.06 (dd, IH, J5",6w=2.0 Hz, 6b-H), 4.02 (dd, lH, J2,,3'=3.2 Hz, 2'-H), 3.95 (dd,

CH-0), 3.92-3.84 (m, 4H, 6a-H, 6b-H, 6b'-H und 2"-H), 3.80 IH, J5,,6a,=5.4 HZ, J6a',6b' = 12.4 HZ, 6a'-H), 3.93 (I&, IH,

(dd, lH, J2,3=3.2 Hz, 2-H), 3.62 (dd, lH, 3-H), 3.58 (ddd, lH, 5"- H), 3.44 (I&, lH, CH-0), 3.35 (dddd, lH, 5'-H), 3.17 (ddd, lH, 5-H), 2.09, 2.06 (2 X), 2.02 (2 X) (3 S, 15H, CH,CO), 1.90 (s, 3H, NHCOCH,), 1.63 (ddd, lH, 4a'-H), 1.58-1.51 (m, 2H, CH,), 1.54 und 1.44 (2s, 6H, CMe2), 1.37-1.25 (m, 10H, CH2), 0.88 (t, 3H, CH3). - I3C-NMR (100.6 MHz, CDC13): 6=100.27 (d, Jc-1,l-a = 154.2 Hz, C-l), 98.37 (d, Jc-1,,1,.H=172.8 Hz, C-1'), 98.22 (d, JC-I",1"-H= 162.3 HZ, C-1").

O c t y l - 0 - (2-acetamido-3,4,6- tr i - O-acetyl-2-desoxy-P-o- glucopyranosyl) - ( I -2) - 0- (3,6-di-o-acetyl-4-desoxy-a-o-lyxo- hexopyranosy1)-(I -+3)-2-O-benzyl-~-o-mannopyranosid (33): Ver- bindung 32 (32.2 mg, 0.327 mmol) wird in waljriger Essigsaure (SOproz., 5 ml) bei Raumtemp. belassen. Nach 2.5 h (DC: Petrol- ether/Aceton, 1 : 1, v/v) wird eingeengt, mit Toluol codestilliert und saulenchromatographisch an Kieselgel mit Petrolether/Aceton (3: 2, v/v) gereinigt; Ausb. 30.8 mg (quantitativ) Sirup, [a]$?= +22.4 (c= 1.1, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 6=7.42-7.27(m, 5H,Ph),5.74(d, ~H,J~",NH"=~.OHZ,NH"), 5.14 (d, lH, J1,,2,=1.0 Hz, 1'-H), 5.11 (dd, lH, Jy,3"=10.6 Hz, J3,,,4,,=9.6 Hz, 3"-H), 5.02 (dd, 1 H, J4,,,5*,= 10.4 Hz, 4"-H), 5.01 (d, lH, J=12.4Hz, CHPh), 5.00 (ddd, lH, 3'-H), 4.71 (d, lH, CHPh), 4.53 (s, IH, 1-H), 4.50 (d, lH, J1",2"=8.2 Hz, 1"-H), 4.23 (dd, lH, J5",6a9,=5.0 Hz, J6aa,,6b= 12.0 Hz, 6a"H), 4.08 (dd, lH, J3,4=9.6 Hz, J4,5=9.6 Hz, 4-H), 4.04 (dd, lH, J5",6b"=2.0 Hz, 6b-H), 4.00 (dd, lH, J2,,3s=3.0 Hz, 2'-H), 3.98-3.86 (m, 7H, 2"-H, 5"-H, 6a-H, 6a'- H, 6b-H, 6b'-H und CH-0), 3.84 (dd, lH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 3.59 (dd, lH, J3.4~9.6 Hz, 3-H), 3.54 (dddd, lH, 5'-H), 3.45 (I&, IH, CH-0), 3.28 (ddd, lH, 5-H), 2.09, 2.06, 2.04, 2.01, 2.00 ( 5 S,

15H, CH3CO), 1.91 (s, 3H, NHCOCH,), 1.82-1.75 (m, lH, 4a'- H), 1.67-1.58 (m, 2H, CH2), 1.47-1.38 (m, lH, 4e'-H), 1.37-1.25 (m, IOH, CH3, 0.88 (t, 3H, CH3). - C45H67N020 (942.03): ber. C 57.38, H 7.17, N 1.49; gef. C 57.43, H 7.21, N 1.50.

O c t y l - 0 - (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-o- glucopyranosyl) -(1-2)-0-(3.6-di-O-acetyl-4-desoxy-a-o-lyxo- hexopyranosyl) - ( I ' 3 ) -0-[ (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acety1-2- desoxy-P-o-glucopyranosyl) - (1 -2) - 0- (3,4,6-tri- 0-acetyl-a-D- mannopyranosyl) - (1-4)]-4-O-acetyl-2-O-benzyl-P-o-mannopyranosid (34): In eine Losung von 7I2O] (22 mg, 0.0282 mmol) und 33 (24 mg, 0.0254 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Mole- kularsieb (3 A, geperlt) wird bei 0°C eine 0.01 M Losung von (Tri- methylsily1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (100 pl) gespritzt. Nach 1 h (DC: Petrolether/Aceton, 1 : 1, v/v) wird mit Triethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Der Ruckstand wird in absol. Pyridin (2 ml) aufgenommen und mit Essigsaureanhydrid (1 ml) versetzt. Nach 9 h (DC: PetrolethedAce- ton, 1 : 1, v/v) wird eingeengt, rnit Toluol codestilliert und an Kiesel- gel mit Petrolether/Aceton (3:2, v/v) gereinigt; Ausb. 26.8 mg (66%) amorphes hlver, [a]@= +17.6 (c= 1.0, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDCI3): 6=7.42-7.22 (m, 5H, Ph), 5.85 (d, lH, J2",NHn"=8.0 HZ, NH""), 5.72 (d, IH, J~*,,NH"=~.O HZ, NH"), 5.44 (dd, IH, J2,,,3"=10.6 Hz, J3",4"=9.6 Hz, 3"-H), 5.26 (dd, lH, J2,,*,3,,"=10.6 Hz, J3"",4",,=9.8 Hz, 3""-H), 5.21 (d, lH, J1*,2,=1.0 Hz, 1'-H), 5.12 (dd, lH, J3",4"=9.6 Hz, J4~,5",=9.6 Hz, 4"'-H), 5.10 (dd, lH, J2,,,,3,,,=3.2 Hz, 3"'-H), 5.04 (d, lH, J=12.4 Hz, CHPh), 5.00 (dd, lH, J4,,5,3=9.8 Hz, 4"-H), 4.98 (dd, lH, J3,4=10.0 Hz, J4,5=9.8 Hz, 4-H), 4.96 (dd, IH, J4",*,5*"=9.6 Hz, 4""-H), 4.95 (ddd, lH, 3'- H), 4.92 (d, lH, J1,,,2,,=8.O Hz, 1"-H), 4.84 (d, lH, J19,,,2",=1.2 Hz,

J,.N,2rjt3= 8.0 Hz, 1""-H), 4.26 (dd, lH, J28fi,3r"=3.0 Hz, 2-H), 4.25 1"'-H), 4.70 (d, lH, CHPh), 4.50 (s, lH, 1-H), 4.44 (d, lH,

(dd, 1 H, J5,,,3,6a,,,9= 5.2 Hz, J6a"*,6b"= 12.0 Hz, 6a""-H), 4.22 (dd, 1 H, J5,,,6,,=4.8 HZ, J6a",6b" = 12.0 HZ, 6a"-H), 4.17 (m, 3H, 6a'-H, 6b"- H und 6b-H) , 4.04-3.90 (m, 9H, 5"'-H, 5""-H, 2'-H, 2""-H, 6a"'- H, 6b'-H, 6a-H 6b-H und CH-0), 3.87 (ddd, lH, 2"-H), 3.85 (dd, lH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 3.80 (dd, lH, 3-H), 3.65-3.55 (m, 3H, 6b"'- H, 5'-H und 5"-H), 3.45 (I&, lH, CH-0), 3.35 (ddd, lH, 5-H), 2.14, 2.09 (2 X), 2.07, 2.06, 2.05, 2.04 (2 X), 2.03, 2.02, 2.01, 2.00, 1.99 (11 s, 39H, CH3CO), 1.96 und 1.92 (2s, 6H, NHCOCH,), 1.85-1.70 (m, 2H, 4a'-H und 4e'-H), 1.62-1.55 (m, 2H, CH2), 1.37-1.25 (m, 10H, CH2), 0.88 (t, 3H, CH3). - I3C-NMR (100.6 MHz, CDC13): 6=100.42 (d, Jc-l,l-~=151.7 Hz, C-l), 99.47 (d, JC-1*,,1"-H=161.8 Hz, C-1'9, 98.83 (d, JC-1,,1*-H=172.4 Hz, C-l'), 98.32 (d, JC.l-",1,,"-H=159.2 Hz, C-I""), 97.63 (d, JC-I,,,,1,,,-H=173.5 Hz, C-1"'). Die Signale fur C-1' und C-1"' sowie fur C-1" und C- 1"" konnen vertauscht sein.

O c t y l - 0 - (2-acetamido-3,4,6- tr i - O-acetyl-2-desoxy-B-o- glucopyranosyl) - ( I 4 2 ) - 0- (3,6-di- O-acetyl-4-desoxy-a-o-lyxo- hexopyranosyl) - ( 1 ' 3 ) -0- f (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2- desoxy-8-o-glucopyranosyl) - (1 -2 ) -0- (3,4,6-tri- 0-aCetyl-a-D- mannopyranosy I ) - ( 1 4 6 ) 1-4- 0-acetyl-B-~-mannopyranosid (35): Verbindung 34 (26.8 mg, 0.0167 mmol) wird in absol. Ethylacetat (2 ml) gelost und unter Normaldruck an PalladiundKohle (10% Pd, 20 mg) hydriert. Nach 12 h (DC: Petrolether/Aceton, 2:3, v/v) wird filtriert und eingeengt. Reinigung erfolgt saulenchromatographisch an Kieselgel rnit Petrolether/Aceton (1 : 1, v/v); Ausb. 24.2 mg (96%) Sirup, [a]g=-4.6 (c=O.8, Chloroform). - 'H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=6.02 (d, 1H, J~",,,NH"~ = 8.6 Hz, NH""), 5.75 (d, lH, Jy,NH,,=8.0 Hz, NH"), 5.44 (dd, lH, J2",3*=10.4 Hz, Jy,,C=9.2 Hz, 3"-H), 5.26 (dd, lH, Jy",3",,= 10.0 Hz, J3,,",4,,"=9.8 Hz, 3""-H), 5.24 (d, lH, J1*,2,=1.0 Hz, 1'-H), 5.23 (dd, lH, Jy,v=9.6 Hz, J4,jp,5,,,=9.6 Hz, 4"'-H), 5.21 (d, lH, Jl,,,2"=8.O Hz, 1"-H), 5.15 (ddd, lH, 3'-H), 5.09 (dd, lH, Jyr,4"=3.4 Hz, J3"',4",=9.6 Hz, 3'"-



H), 5.05 (dd; IH, J3f,r2,4““=9.8 Hz, J4f,,,,5fr,, = 9.8 Hz, 4 - H ) , 5.01 (dd,

J4,s,5ff=9.8 Hz, 4”-H), 4.92 (d, lH, J1,rr,2”=1.4 Hz, 1”’-H), 4.74 (d, lH, J3,4=10.0 Hz, J4,5= 10.0 Hz, 4-H), 4.97 (dd, lH, J3“,4”=9.8 Hz,

lH, J1ntt,2,m=8.0 Hz, I””-,), 4.45 (s, lH, 1-H), 4.31 (dd, lH, J2,”,3”’

=3.4 Hz, 2-H), 4.25 (dd, lH, J2.,3,=3.4 Hz, 2’-H), 4.25 (dd, lH, J5,~,,6~m=5.2 Hz, J6asr,,,6w= 12.0 Hz, 6a””-H), 4.22 (dd, IH, J5”,6a,r=4.8 HZ, J(ja”,6b” = 12.4 HZ, 6a”-H), 4.14 (m, 1H, 2-H), 4.11-3.98 (m, 4H, 6a’-H, 6a-H, 6b”-H und 6b’-H), 3.97 (ddd, lH, 2 - H ) , 3.92 (mc, lH, CH-0), 3.84 (dd, lH, J5””,6b”,8=2.0 Hz, J6a“”,6y=12.0 Hz, 6b-H) , 3.77 (ddd, lH, 5”‘-H), 3.69 (dddd, 1H, 5’-H), 3.60 (dd, lH, 6b’-H), 3.55 (ddd, lH, 2”-H), 3.53 (mc, lH, CH-0), 3.38 (ddd, 1H, 5-H), 2.75 (br. s, lH, 2-OH), 2.11, 2.10, 2.08 (2 x), 2.07, 2.06, 2.05, 2.04, 2.03, 2.01, 2.00 (2 X) (10 s, 36H, CH3CO), 1.94 und 1.93 (2 s, 6H, NHCOCH3), 1.84 (m, 1 H, 4a’- H), 1.70 (m, lH, 4e‘-H), 1.67-1.55 (m, 2H, CH2), 1.35-1.24 (m,

Octyl- 0- (2-acetamido-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl) - (1 4 2 ) - 0- (4-desoxy-a-~-lyxo-hexopyranosy~) - (1 -3) - 0-( (2-acetamido-2- desoxy-P-D-glucopyranosyl) -( 1-2) -0-(a-D-mannopyran0syl)- (1+6)]-P-~-mannopyranosid (36): Verbindung 35 (24.2 mg, 0.0160 mmol) wird in absol. Methanol (3 ml) gelost und die Losung rnit Kaliumcarbonat (8 mg) versetzt. Die Losung wird bei Raumtemp. 5 h (DC: ChloroforndMethanolhVasser, 5:4: 1, v/v) geruhrt, rnit schwach saurem Ionentauscher (Amberlite CG-50 I) neutralisiert, filtriert und eingeengt. Gelchromatographie an Sephadex LH-20 mit ChloroforndMethanol (1 : 1, vlv) und nachfolgende Gefrier- trocknung ergeben 16.1 mg (quantitativ) amorphes Pulver, [a]$? =+4.2 (c=0.52, Methanol). - ‘H-NMR (400 MHz, CD30D):

1”’-H), 4.51 (d, IH, Jl,,,2,,=8.0 Hz, 1”-H), 4.50 (s, lH, 1-H), 4.49 (d,

10H, CH3, 0.89 (t, 3H, CH3).

6=5.14 (d, lH, JI,,2,=1.0 Hz, 1’-H), 4.89 (d, lH, J1,*,,y,=1.4 Hz,

lH, J1*,”,y=8.4 Hz, 1’”’-H), 4.07 (d, IH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 4.02 (dd, lH, J2,,,,3,,,=3.2 Hz, 2“’-H), 3.98 (dd, lH, J5,f,,,6a,,,,=4.8 Hz, J&,””,6b””= 11.6 Hz, 6a””-H), 3.94 (dd, lH, J2,,3,=3.2 Hz, 2’-H), 3.92-3.22 (m, 27H), 2.01 und 1.98 (2s, 6H, NHCOCH,), 1.67-1.54 (m, 4H, 4a’-H, 4e’-H und CH2), 1.35-1.25 (m, IOH,

Octyl-0- (2-acetamido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-~- glucopyranosyl) - (1 -2) - 0- (4,6-di-O-acetyl-3-desoxy-a-~-arabino- hexopyranosyl- (1 -3) - 0-[(2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2- desoxy-a-D-glucopyranosyl) - (1 4 2 j - 0 - (3,4,6-tri-O-acetyl-a-D- mannopyranosyl) - (1 -6)]-4- O-acetyl-2-O-benzyl-P-~-mannopyranosid (38): In eine Losung von 7L2O] (20 mg, 0.0256 mmol) und 37[ll (24 mg, 0.0254 mmol) in absol. Dichlormethan (3 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei 0°C eine 0.01 M von (Trime- thylsily1)-trifluormethansulfonat (50 pl) gespritzt. Nach 30 min (DC: PetroletherlAceton, 1: 1, vlv) wird die Reaktion rnit Triethyl- amin (1 Tropfen) abgebrochen. Das Reaktionsgemisch wird filtriert und eingeengt. Der Ruckstand wird in absol. Pyridin (3 ml) aufgenommen und rnit Essigsiureanhydrid (1 ml) versetzt. Nach 7 h (DC: PetroletherlAceton, 1: 1, vlv) wird eingeengt, einige Male rnit Toluol codestilliert und saulenchromatographisch an Kieselgel rnit PetroletherlAceton (3:2, vlv) gereinigt; Ausb. 23.6 mg (58%), [a]$? = - 12.5 (c= 1 .O, Chloroform). - ’H-NMR (400 MHz, CDCI,): F=7.44-7.22 (m, 5H, Ph), 5.85 (d, lH, J212”rt,NHff8f=8.2 Hz, N H ) ,

CH2), 0.89 (t, 3H, CH3).

5.75 (d, lH, Jy,Nw=8.O Hz, NH) , 5.46 (dd, lH, J2,,,yr=10.4 Hz, J3,,,p=9.6 Hz, 3”-H), 5.33 (dd, IH, Jy,,3,,,,=10.0 Hz, J3,,,,,4““=9.8 Hz, 3””-H), 5.18 (dd, lH, 33,,,,4,*’=9.8 Hz, JW,y”=9.6 Hz, 4-H), 5.10 (dd, lH, J2”’,3rrt=2.8 Hz, 3’”-H), 5.08-4.94 (m, 6H, 4”-H, 4“”-H, CHPh, I‘-H, 4-H, 4’-H), 4.91 (d, lH, Ji,,,2,,=8.0 Hz, I”-H), 4.86 (d, lH, J i~~,7~, ,=1 .4H~, .- l”’-H),4.78(d, lH,J=12.0H~,CHPh) ,4 .50(~ , lH, 1-H), 4.46 (d, lH, J1,,,,,y,r=8.2 Hz, l’”’-H), 4.24 (dd, lH, J5,*,6d,*=5.4 Hz, J6;,”,6~= 12.0 Hz, 6a”-H), 4.20 (dd, lH, J5,,t,,6a9,,j=4.6 Hz, J&,””,6b=12.4Hz,6a””-H),4.19(dd, lH,2’”-H),4.11-4.05(m,5H,

2’-H, 6b-H, 6 b - H , 6a’-H und 5”’-H), 4.02-3.93 (m, 6H, 6a”’-H, 5”-H, 5””-H, 2”-H, 2 - H und 6a-H), 3.85 (mc, lH, CH-0),

3-H), 3.74-3.55 (m, 3H, 6b-H, 6b-H und 5’-H), 3.51 (w, lH,

J3e,,4,=4.6 Hz, J3ez,4a,=14.0 Hz, 3e’-H), 2.11, 2.09, 2.07 (2 X), 2.06

1.95 und 1.93 (2 s, 6H, NHCOH3), 1.75-1.65 (m, 2H, CH3, 1.45 (m, lH, 3a’-H), 1.39-1.25 (m, 10H, CH2), 0.89 (t, 3H, CH3). -

3.84-3.77 (d, lH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 3.76 (dd, lH, J3,4=9.8 Hz,

CH-0), 3.32 (ddd, lH, 5-H), 2.26 (ddd, lH, J2,,3ef=3.0 Hz,

(2 X), 2.04, 2.03 (2 X), 2.02, 2.01, 2.00, 1.99 (10 S, 39H, CH,CO),

13C-NMR (100 MHz, CDC13): 100.33 (d, JC-l,I-H=152.8 Hz), 99.5 (d, Jc.lt,l..H=172.5 Hz, C-1‘), 98.4 (d, JC-i,,,I,,-H=158.4 Hz, C-l”), 97.3 (d, Jc.I”,,,1,,,,.H=162.4 Hz, C-1””), 97.8 (d, Jc.1*,,,1,,,-~=172.5 Hz, C-1”’). Die Signale fur C-1” und C-I”” sowie fur C-1’ und C-1”’ konnen vertauscht sein.

Octyl-0- (2-acetarnido-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl) -( 1-2) -(3- desoxy-a-D-arabino-hexopyranosy1)-(1 -3)-0-( (2-acetamido-2- desoxy-P-D-glucopyranosyl) - (1-2) -0-(a-D-mannopyranosyi)- (1+6)]-P-~-mannopyranosid (41): Verbindung 38 (23.6 mg, 0.0147 mmol) wird in absol. Ethylacetat (5 ml) gelost und an Palladium/ Kohle (loo/, Pd, 25 mg) unter Normaldruck hydriert. Nach 3 h (DC: PetroletherlAceton, 2: 3, vlv) wird rnit Ethylacetat verdunnt, vom Katalysator abfiltriert und eingeengt. Die so erhaltene Verbin- dung 39 wird in Pyridin (3 ml) aufgenommen und rnit Essigsaure- anhydrid (1 ml) versetzt. Nach 7 h (DC: PetroletherlAceton, 2:3, vlv) wird die Losung eingeengt und einige Male rnit Toluol codestilliert. Saulenchromatographie an Kieselgel rnit PetrolethedAce- ton (3:2, v/v) ergibt das peracetylierte Pentasaccharid 40. Dieses wird dann in absol. Methanol (3 ml) gelost und rnit Kaliumcarbo- nat (6 mg) versetzt. Die Losung wird bei Raumtemp. ca. 12 h (DC: ChlorofordMethanol, 5:4: 1, vlv) geruhrt, mit schwach saurem Io- nentauscher (Amberlite GC-50 I) neutralisiert, filtriert und eingeengt. Gelchromatographische Reinigung erfolgt an Sephadex LH- 20 rnit ChlorofordMethanol (1 : 1, vlv) als Elutionsmittel. An- schlieBende Gefriertrocknung ergibt 11.4 mg (78%, bezogen auf 38) amorphes Pulver; [a]$?= -10.9 (c=0.9, Methanol). - ’H-NMR (400 MHz, CDC13): 6 ~ 4 . 8 9 (d, lH, JL,,2,=1.4 Hz, 1’-H), 4.86 (d, lH, J1,,,2,,=8.4 Hz, 1”-H), 4.75 (s, IH, 1”’-H), 4.51 (s, lH, 1-H), 4.48 (d, lH, J1rrff,2”,t=8.2 Hz, 1””-H), 4.08 (d, lH, J2,3=3.2 Hz, 2-H), 4.05

3.94-3.22 (m, 28H), 2.28 (m, lH, 3e’-H), 2.02 und 1.98 (2s, 6H. NHCOCH,), 1.67-1.56 (m, 3H, 3a’-H und CH2), 1.37-1.25 (m,

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl)-(1+2)-0-(3,4,6-tri-O-acetyl-a-~-mannopyranosy/)- (1 -6) -2-O-benzyl-4-O-methyl-P-~-mannopyranosid (42): In eine Losung von 7c2O1 (30 mg, 0.0384 mmol) und 14”l (15 mg, 0.0378 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei -20°C eine 0.01 M Losung von (Trimethylsi- ly1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (100 ml) gespritzt. Nach l h (DC: PetroletherlAceton, 3:2, vlv) wird mit Tri- ethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Chromato- graphie erfolgt an Kieselgel rnit PetroletherlAceton (2: 1, vlv); Ausb. 30 mg (78.3%) Sirup, [a]::= +23.6 (c= 1.0, Chloroform).’H-NMR (400 MHz, CDC13): F=7.42-7.23 (m, 5H, Ph), 5.57 (d, lH,

(d, lH, J2”,,3,,,=3.2 Hz, 2”’-H), 4.00 (dd, lH, 52,,3,=3.2 Hz, 2’-H),

10H, CH3, 0.89 (t, 3H, CH3).

J y , N H , * = 8 . 0 Hz, NH) , 5.47 (dd, IH, Jy,,y= 10.4 Hz, Jy,q=9.4 Hz, 3”-H), 5.24 (dd, lH, J3,,4,=10.0 Hz, J4!,5,=10.0 Hz, 4’-H), 5.09 (dd, IH, J2’,3’=3.4 Hz, 3’-H), 5.06 (d, IH, J=12.0 Hz, CHPh), 5.00 (d, lH, J1,,,2,,=8.O Hz, 1”-H), 4.79 (d, lH, J1,,7s= 1.4 Hz, 1’- H), 4.64 (d, lH, J = 12.0 Hz, CHPh), 4.47 (s, lH, 1-H), 4.26 (dd, lH, J2,,3”3.4 HZ, 2’-H), 4.24 (dd, lH, J ~ , 6 ~ ” = 5 . 2 Hz, J6a”,6b”=12.4HZ, 6a”-H),4.19(dd, 1H,J5,,6a,=5.2HZ,J66’,6b,=12.4 Hz, 6a‘-H), 4.11 (dd, lH, JY ,6~=2 .2 Hz, 6b”-H), 3.98 (dd, lH, J5’,6b‘=2.0 Hz, 6b’-H), 3.95 (ddd, lH, 5’-H), 3.92 (mc, lH,



CH-0), 3.89 (dd, IH, J5,6a = 6.0 HZ, J6a,6t,= 10.8 HZ, 6a-H), 3.79 (d, 1H, J2,3=3.4 HZ, 2-H), 3.73 (dd, 1H, J5,6b=1.6 Hz, 6b-H), 3.63 (ddd, lH, 5”-H), 3.57 (ddd, lH, 2”-H), 3.56 (ddd, lH, J2,3=3.4 Hz, J3,4=9.6 Hz, J3,0~=9.8 Hz, 3-H), 3.55 (s, 3H, OCH3), 3.47 (q, lH, CH-0), 3.31 (ddd, IH, J4,5=9.2 Hz, 5-H), 3.22 (dd, lH, 4- H), 2.42 (d, IH, 3-OH), 2.09, 2.07, 2.04, 2.03, 2.02, 2.01 (6 S, 18H, COCH3), 1.94 (s, 3H, NHCOCH3), 1.64-1.59 (m, 2H, CH2), 1.42-1.25 (m, 10H, CHJ, 0.89 (t, 3H, CH3). - I3C-NMR (100.6 MHz, CDC13): 6=101.75 (d, Jc-I,i.H=152.2 Hz, C-l), 99.25 (d, J~.1,,,1,,.~=159.8 Hz, C-l”), 98.72 (d, JC-1,,1,-H=173.3 Hz, C-1‘). - C48H71N022 (1014.1): ber. C 56.85, H 7.36, N 1.38; gef. C 57.12, H 7.21, N 1.45.

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2-desoxy-~-o-glucopyranosyl) - ( I -2) - 0- (3,6-di- O-acetyl-4-desoxy-a-~-lyxo-hexopyranosyl) - (1 -3) - 0-[ (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acetyl-2-desoxy-P-o- g l u c o p y r a n o s y l ) - ( 1 - 2 ) -0- ( 3 , 4 , 6 - t r i - 0 - a c e t y l - a - D - mannopyranosyl) - (I ~6)]-2-O-benzyl-4-O-methyl-P-o-mannopyranosid (43): In eine Losung von 30 (24 mg, 0.0332 mmol) und 42 (30 mg, 0.0295 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Mole- kularsieb (3 A, geperlt) wird bei Raumtemp. eine 0.01 M Losung von (Trimethylsily1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlorme- than (120 ml) gespritzt. Nach 30 min wird die Reaktion durch Zu- gabe von Triethylamin (1 Tropfen) abgebrochen, das Gemisch filtriert und das Filtrat eingeengt. Reinigung erfolgt saulenchromatographisch an Kieselgel rnit Petrolether/Aceton (2: 1 - 3:2, vlv); Ausb. 36 mg (78%) amorphes Pulver, [a]g= +17.5 (c= 1.1, CHC13). Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDC13): 6=7.47-7.22 (m, 5H, Ph), 5.66 (d, lH, J2tprr,NHrr8,=8.0 Hz, NH””), 5.56 (d, IH, J 2 ” , ~ ~ ” = 8 . 4 Hz, N H ) , 5.42 (dd, lH, J2*,,3”=10.4 Hz, Jyy”9.2 Hz, 3”-H), 5.34 (dd, lH, Jy,y=10.6 Hz, Jy,4””=9.2 Hz, 3 - H ) , 5.25 (dd, lH, J3”,4,,,=9.6 Hz, J4,,,5,,,=9.6 Hz, 4-H) , 5.09 (dd, lH, Jy,,3” ~ 3 . 4 Hz, 3”’-H), 5.02 (dd, lH, J4”,5”=9.4 Hz, 4”-H), 5.01 (d, lH, J=12.6 Hz, CHPh), 5.00 (dd, lH, J4,*,,,5”3,=10.8 Hz, 4””-H), 4.98 (ddd, lH, J2,,3,=3.2 Hz, 3’-H), 4.97 (dd, lH, J4,,5’=9.8 Hz, 4’-H), 4.96 (d, lH, J1.,2t=1.0 Hz, 1’-H), 4.90 (d, lH, J1ff,2”=8.0 Hz, 1”-

lH, J1,8,2”=8.0 Hz, 1””-H), 4.45 (s, lH, 1-H), 4.26 (dd, lH, H), 4.86 (d, lH, 1”’-H), 4.76 (d, lH, Jz12.6 Hz, CHPh), 4.70 (d,

J5*-,,6an,,=5.2 HZ, J6a,f,,,6+y= 12.4 HZ, 6a””-H), 4.23 (dd, IH, 2”’-H), 4.18 (dd, IH, Jys,6a3*=6.0 HZ, J6a,,,6b,,= 12.0 HZ, 6a”-H), 4.17-4.10 (m, 3H, 6a’-H, 6 b - H und 6b-H), 4.07-3.85 (m, 5H, 5’”-H, 2’-H, 6a-H, 6b-H und CH-0), 3.84-3.74 (m, 4H, 2-H, 2””-H, 3-H und 6a”’-H), 3.65 (ddd, lH, 2”-H), 3.61 (ddd, lH, 5””-H), 3.59-3.52 (m, 4H, 5”-H, 4-H, 6b-H und 6b-H), 3.54 (s, 3H, OCH3), 3.46 (me,

2.09, 2.08, 2.07, 2.06, 2.05, 2.04, 2.03 (2 X), 2.02, 2.01, 2.00 (11 s, 36H, CH3CO), 1.95 und 1.92 (2 s, 6H, NHCOCH3), 1.67-1.47 (m, 4H, 4a’-H, 4e’-H und CH2), 1.38-1.25 (m, 10H, CH2), 0.89 (t,

lH, CH-0), 3.43 (dddd, lH, 5’-H), 3.32 (ddd, lH, 5-H), 2.17,

3H, CH3). - I3C-NMR (100.6 Hz, CDC13): 6=101.8 (d, J~-1,1-H=152.6 Hz, C-l), 99.2 (d, JC-1,,1,-H=172.1 Hz, C-l‘), 98.7 (d, JC.1wf,1,,cH= 164.2 Hz, C-l””), 98.3 (d, JC-1,,,l,,-H= 164.2 Hz, C- 1‘3, 97.8 (d, JC.Ir~~,l~~~.H=173.0 Hz, C-1”’). Die Signale fur C-1‘ und C-1”’ sowie C-1” und C-1”” konnen vertauscht sein.

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri- O-acety~-2-desoxy-P-~-glucopyranosyl) - ( I 4 2 ) -0- (3,6-di- 0-acetyl-4-desoxy-a-D-lyxo-hexopyranosyl) - ( I 4 3 ) - 0-[ (2-acetarnido-3,4,6-tri-O-acetyl-2-desoxy-~-D- glucopyranosyl) - (1 -2 ) -0- (3,4,6-tri-O-acetyl-a-D-manno- pyranosy1)-(I 46)]-4-O-methyl-P-~-mannopyranosid (44): Verbin- dung 43 (36 mg, 0.0228 mmol) wird in absol. Ethylacetat (3 ml) gelost und unter Normaldruck an PalladiudKohle (loo/, Pd, 20 mg) hydriert. Nach 16 h (DC: Petrolether/Aceton, 2:3, v/v) wird filtriert und eingeengt. Chromatographie erfolgt an Kieselgel rnit PetroletherlAceton (2: 1 -+ 3:2, v/v); Ausb. 33.8 mg (quantitativ) Sirup; [a]Z,O=-7.8 (c= 1.0, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz,

CDC13): 6 ~ 5 . 7 4 (d, lH, J ~ , N H , ~ , , = 8.6 Hz, NH””), 5.59 (d, lH, J 2 ” , ~ ~ ” = 8 . 4 Hz, NH) , 5.37 (dd, lH, J2,,,3,,=9.6 Hz, J3”,4,,=9.6 Hz, 3”-H), 5.36 (dd, lH, Jy,,3mr=9.6 Hz, Jy,4,m = 9.6 Hz, 3””-H), 5.23 (dd, lH, J3,,,,4,,,=9.6 Hz, J4,,,,y“=9.6 Hz, 4-H) , 5.21 (ddd, lH, 3’- H), 5.08 (dd, lH, Jy,3,=3.4 Hz, 3”’-H), 5.04 (dd, IH, J4”,5”=9.6 Hz, 4”-H), 5.01 (dd, lH, J4”~,59,,,=9.6 Hz, 4””-H), 4.98 (d, lH, J1,,2,=1.2 Hz, 1’-H), 4.95 (d, lH, J1,*,,2,-=1.4 Hz, 1”’-H), 4.91 (d, lH, J1rrfr,2rr,t=8.2 Hz, 1””-H), 4.82 (d, lH, J1r,,2fz=8.0 Hz, 1”-H), 4.40

J6a“,6b”“= 12.0 Hz, 6a””-H), 4.25 (dd, lH, 6a”’-H), 4.21 (dd, lH, J5,,,6a,,=5.6 Hz, J6a,,,6b,,= 12.0 Hz, 6a”-H), 4.14-4.03 (m, 4H, 6 b - H, 6 b - H , 2’-H und 6b”-H), 3.96 (ddd, lH, 5”’-H), 3.89 (mc, lH, CH-0), 3.84-3.65 (m, 6H, 4-H, 6a-H, 2”-H, 2””-H, 2-H und 3- H), 3.62-3.55 (m, 2H, 6b-H und 5‘-H), 3.57 (s, 3H, OCH3), 3.48 (q, lH, CH-0), 3.33 (ddd, lH, 5-H), 2.91 (br. s, lH, 2-OH), 2.14, 2.11, 2.08, 2.07, 2.06, 2.04, 2.03, 2.02, 2.01, 2.00, 1.99 (lls, 33H, CH3CO), 1.94 und 1.93 (2 s, 6H, NHCOCH,), 1.74- 1.55 (m, 4H, 4e’-H, 4a’-H und CHz), 1.35-1.23 (m, 10H, CH2), 0.88 (t,

(s, lH, 1-H), 4.27 (dd, 1H, 2”’-H), 4.26 (dd, lH, J5,,,,,6a,,,*=5.4 Hz,

3H, CH3).

Octyl- 0- (2-acetamido-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl) - (1 -2) - 0- (4-desoxy-a-o-lyxo-hexopyranosyl)-( 1 -.3)-0-[ (2-acetamido-2- desoxy-a-o-ghcopyranosyl) -(1-2)-O-(a-D-mannOpyranOSyl)- ( I -6)]-4-O-methyl-~-~-mannopyranosid (45): Verbindung 44 (33.8 mg, 0.027 mmol) wird in absol. Methanol gelost und mit Kaliumcar- bonat (8 mg) versetzt. Die Losung wird bei Raumtemp. ca. 12 h (DC: ChlorofordMethanollsser, 5:4: 1, v/v) geriihrt. Es wird mit schwach saurem Ionentauscher (Amberlite CG-50 I) neutralisiert, filtriert und eingeengt. Reinigung durch Gelfiltration an Sephadex LH-20 rnit ChlorofordMethanol (1 : 1, v/v) als Elutionsmittel und nachfolgende Gefriertrocknung ergeben 23.2 mg (quantitativ) amorphes Pulver; [a@= +8.4 (c= 1.2, Methanol). - ‘H-NMR (400 MHz, CD30D): 6 ~ 5 . 1 1 (d, 1H,J1‘,2’=1.0H~, l’-H),4.94(d, lH,Jl,, , ,y= 1.6 Hz, 1”’-H), 4.52 (d, lH, J1“,2”=8.2 Hz, 1”-H), 4.50 (d, lH, J1,,,,,2,,,,=8.4 Hz, 1’”’-H), 4.45 (s, lH, 1-H), 4.08-4.04 (3 dd, 2‘-H, 2”’- H und 2-H), 3.94 (dd, IH, J5,,,,,6a”,,=4.8 Hz, J6a““,6b””= 11.8 Hz, 6a“”- H), 3.92-3.22 (m, 30H), 3.54 (s, 3H, OCH3), 2.01 und 1.99 (2 s, 6H, NHCOCH,), 1.67-1.53 (m,4H,4af-H,4e’-HundCH2), 1.35-1.25 (m, 10H, CH2), 0.89 (t, 3H, CH3).

Octyl-0- (2,3,4-tri-0-acetyl-6-desoxy-a-~-mannopyranosy~) - ( I -6) - 0-2-0-benzyl-4- 0-methyl-P-o-mannopyranosid (47): In eine Losung von 46[’] (18.5 mg, 0.0425 mmol) und 14L7] (15 mg, 0.0378 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei 0°C eine 0.01 M Losung von (Trimethylsily1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (50 ml) gespritzt. Nach 30 min (DC: Petrolether/Aceton, 3: 2, v/v) wird mit Triethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Die Reinigung erfolgt saulenchromatographisch an Kieselgel rnit Petrolether/Aceton (5: 1 - 4: 1, v/v) und nachfolgend mit Petrolether/Ethylacetat (2: 1, v/v); Ausb. 16.4 mg (65%) Sirup, [a]g= -11.6 (c= 1.0, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDCl,): 6=7.39-7.22 (m, 5H, Ph), 5.32 (dd, lH, J2,,3f=3.4 H z , J ~ , , ~ , = ~ . ~ H z , ~ ’ - H ) , 5.29(dd, lH,J1’ ,2 ,=1.2H~,52, ,3 ,=3.4H~, 2’-H),5.07(dd, lH,J3,,4,=9.8H~,J~,5*=1O.OH~,4’-H),5.04(d, lH, J = 12.0 Hz, CHPh), 4.83 (d, lH, J1,,2, = 1.2 Hz, 1’-H), 4.63 (d, lH, CHPh), 4.47 (s, IH, 1-H), 4.02 (dq, lH, J4,,5, = 10.0 Hz, J5 ’ ,6 ’ -~~~=6 .2 HZ, 5’-H), 3.94 (I&, IH, CH-0), 3.86 (dd, lH, J5,6a

= 6.6 Hz, J6a,6b=11.0 HZ, 6a-H), 3.78 (d, IH, J2,3=3.4 HZ, 2-H), 3.76 (dd, lH, J5,6b=2.2 Hz, 6b-H), 3.58 (ddd, lH, J3,4=9.4 Hz, J3,OH=10.0 Hz, 3-H), 3.53 (s, 3H, OCH3), 3.47 (me, lH, CH-0), 3.34(ddd, lH,J5,6a=6.6Hz, J5,6b=2.2Hz,J4,5=9.2Hz,5-H), 3.14

1.67-1.58 (m, 2H, CH2), 1.35-1.24 (m, 10H, CH2), 1.23 (d, 3H, (dd, lH,4-H),2.44(d, lH, 3-OH),2.14,2.03,1.97(3 s ,~H,CH~CO) ,

J5’,6’.CH3’6.2 Hz, 6’-H3), 0.87 (t, 3H, CH3). - I3C-NMR (62.89

Liebigs Ann. Chern. 1993, 737-750


MHz, CDC13): 6=101.55 (d, Jc.1,I-H = 152.6 Hz, C-l), 97.41 (d, JC-1,.1,-H=170.5 Hz, (2-1‘).

3.54(~, 3H,0CH3),2.51 (d, lH,2-OH),2.16,2.14,2.08,2.06(2 X),

2.03, 2.01, 2.00, 1.99 (8 S, 27H, CH,CO), 1.94 (s, 3H, NHCOCH,),

Octyl- 0- (2-acetamido-3,4,6-tri- 0-acetyl-2-desoxy-8-D- glucopyranosyl) - (1 -2) -0- (3,4,6-tri- O-aCetyl-a-D-mannOpy- ranosyl) - (1 4 3 ) - 0-[ (2,3,4-tri- O-acetyl-6-desoxy-a-~-manno- ranosyl) - ( I -6)) 0-2- 0-benzyl-4- 0-methyl-P-D-mannopyranosid (48): In eine Losung von 7[201 (22 mg, 0.0282 mmol) und 47 (16.4 mg, 0.0245 mmol) in absol. Dichlormethan (2 ml) und Molekularsieb (3 A, geperlt) wird bei Raumtemp. eine 0.01 M Losung von (Trime- thylsily1)-trifluormethansulfonat in absol. Dichlormethan (100 pl) gespritzt. Nach 1 h (DC: Petrolether/Aceton 3:2, v/v) wird rnit Tri- ethylamin (1 Tropfen) versetzt, filtriert und eingeengt. Chromatogra- phie erfolgt an Kieselgel mit Petrolether/Aceton (3: 1 2: 1, v/v); Ausb. 23.8 mg (76%), Sirup [a]%= +16.4 (c= 1.3, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDC13): 6 = 5.61 (d, 1 H, J2 , , ,~~ , ,=7 .9 Hz, NH“), 5.50 (dd, lH, J2,,,3,,=9.4 Hz, 53”,4,,=10.0 Hz, 3”-H), 5.31 (dd, lH, Jy,,y=3.4 Hz, J3,,,,4,,,= 10.0 Hz, 3”’-H), 5.28 (dd, lH, JI-,y= 1.6 Hz, 2”’-H),5.18(dd, ~ H , J ~ ~ , ~ ~ = ~ O . O H Z , J ~ ~ , ~ ~ = ~ O . O H Z , ~ ‘ - H ) , 5.08(dd, IH, J3,,r,4m=lO.O Hz, J4,,,,5m= 10.0 Hz, 4-H), 5.06 (dd, lH, J2,,3,=3.2 Hz,J~,,~~=~O.OHZ,~’-H),~.O~(~, I H , J = 12.4Hz,CHPh),4.98(dd, lH, Jy.48, = 10.0 Hz, J4,,,5,,= 10.0 Hz, 4’-H), 4.97 (d, lH, JI,,,,2-= 1.4 Hz, 1”‘-H), 4.94(d, lH, J1,,,2,,=8.0 Hz, 1”-H),4.85 (d, lH, Jl,,2,=1.2 Hz, 1‘-H), 4.73 (d, lH, CHPh), 4.45 (br. s, lH, 1-H), 4.26 (dd, lH,

2’-H), 4.05-3.98 (m, 3H, 5”’-H, 6a’-H und 6b”-H), 3.93 (w, lH,

(dd, lH, J2,3=2.8 Hz, J3,4=10.4 Hz, 3-H), 3.82 (d, lH, 2-H), 3.77 (dd, lH, J5,6b=2.0 Hz, 6b-H), 3.72-3.65 (m, 2H, 5”-H und 5’-H),

6b’-H), 3.52 (s, 3H, OCH3), 3.47 (dd, lH, J4,5= 10.0 Hz, 4-H), 3.42

X), 2.01, 1.98 (6s, 27H, CH3CO), 1.92 (s, 3H, NHCOCH3), 1.66-1.58 (m, 2H, CH2), 1.33-1.27 (m, 10H, CHI), 1.24 (d, 3H,

J5.,sa,,=5.4HZ,Jsa,,,6b”= 12.2HZ, 6ar’-H),4.24(dd, IH,J2*,3,=3.4HZ,

CH-0), 3.87 (dd, IH, J5,6,=7.2 HZ, J6a,6b=10.6 HZ, 6a-H), 3.85

3.62(ddd, lH,2”-H), 3.59(dd, 1H,J5’,6b’=2.4HZ,J6a,,6b,=12.4Hz,

(w, lH, CH-0), 3.37 (ddd, lH, 5-H), 2.14,2.07,2.04(2 X), 2.03 (3

J 5 , - , 6 ~ ~ ~ ~ = 6 . 2 Hz, 6‘”-H3), 0.87 (t, 3H, CH3). - I3C-NMR (100.6 MHz, CDCl3): 6=101.23 (d, JC.l,l.H=152.5 Hz, C-I), 99.5 (d, Jc.I,,,,I,,,.H= 171.8 Hz, C-1”‘), 99.23 (d, Jc-I,,,I,,-H= 159.4 Hz, C-1”), 98.45 (d, JC.lf,lr.H= 171.5 Hz, C-1’). Die Signale fur C-1’ und C-1”’ konnen vertauscht sein.

Octy l -0- (2-ucetumido-3,4,6-tri-O-ucetyl-2-desoxy-~-~- glucopyrunosyl- ( I -2) - 0- (3,4,6-tri-O-ucety~-a-D-mannopyrunosyl) - ( I -3)-0-((2,3,4-tri-0-acetyl-6-desoxy-a-~-mannopyranosyl) - (1 +6)]-4-O-methyl-~-~-mannopyrunosid (49): Verbindung 48 (23.8 mg, 0.0185 mmol) wird in absol. Ethylacetat (3 ml) gelost und an PalladiundKohle (10% Pd, 20 mg) unter Normaldruck hydriert. Nach 4 h (DC: Petrolether/Aceton, 2:3, vlv) wird mit Ethylacetat verdunnt, filtriert und eingeengt. Chromatographie erfolgt an Kie- selgel rnit Petrolether/Aceton (3:2, v /~ ) ; Ausb. 20.9 mg (950/,) Si- rup, [a]2=-5.3 (c=0.75, Chloroform). - ‘H-NMR (400 MHz, CDCI,): 6=5.65 (d, lH, Jy,NH,,=7.8 Hz, NH) , 5.54 (d, IH, J2,,,3,,=10.4 Hz, Jy,c=9.6 Hz, 3”-H), 5.32 (dd, lH, Jy,,y,=3.2 Hz, J3,,,,4,,,= 10.0 Hz, 3”’-H), 5.28 (dd, lH, JIm,,2m= 1.2 Hz, 2-H), 5.23 (dd, IH, J3,,4,=9.6 Hz, J4*,5’=9.6 Hz, 4’-H), 5.19 (dd, IH, J2,,3,’3.2 Hz, J3!,4’=9.6 Hz, 3’-H), 5.07 (dd, lH, J3,,,,4,,,=10.0 Hz, Jw,y,,=lO.O Hz, 4-H) , 4.99 (dd, lH, J4”,5”=9.6 Hz, 4”-H), 4.92 (d, lH, J1,,2’=1.6 Hz, 1’-H), 4.89 (d, lH, J1,,,,2,,,=1.2 Hz, 1”‘-H), 4.44 (br. s, lH, 1-H), 4.26 (dd, lH, 2’-H), 4.24 (m, lH, 5’-H), 4.18 (dd, 1H, J5”,6asr=6.4 Hz, J6a“,6y=12.0 Hz, 6a”-H), 4.12 (dd, lH, JZ.oHz2.6 Hz, J2,3=3.2 Hz, 2-H), 4.00 (dd, lH, J5”,6brr=2.0 Hz,

J5,5a=5.8 Hz, J6a,6b=11.0 Hz, 6a-H), 3.85-3.80 (m, 3H, 6a’-H, 6b’-H und CH-O), 3.77 (dd, lH, J5,6b=1.4 Hz, 6b-H), 3.71 (ddd,

6b-H), 3.98 (dq, lH, Jy,V=H,=6.4 Hz, 5”‘-H), 3.86 (dd, lH,

1.62-1.54 (m, 2H, CHI), 1.32-1.25 (m, 10H, CHI), 1.23 (d, 3H,

Octyl-0- (2-acetamido-2-desoxy-~-~-glucopyranosyl) - ( 1 -2) -0- (a-D-mannopyranosyl)-(1--3)-0-[ (6-desoxy-a-D-mannopyranosyl) - ( I -.6)]-4-O-methyl-/l-~-mannopyranosid (50): Ver- bindung 49 (20.9 mg, 0.0174 mmol) wird in absol. Methanol (3 ml) gelost und die Losung rnit Kaliumcarbonat (7 mg) versetzt. Die Lo- sung wird bei Raumtemp. geruhrt. Nach 4 h (DC: ChlorofordMe- thanoVWasser, 5:4: 1, v/v) wird mit schwach saurem Ionentauscher (Amberlite CG-50 I) neutralisiert, filtriert und eingeengt. Gelfiltra- tion an Sephadex LH-20 rnit ChlorofordMethanol (l : l , v/v) als Elutionsmittel und anschlieDende Gefriertrocknung ergeben 13.7 mg (97%) amorphes Pulver, [a]g= +7.1 (c= 1.0, Methanol). - ‘H-

6”’-H3), 0.87 (t, 3H, CH3).

NMR (400 MHz, CD3OD): 6=5.07 (d, lH, J1’,2,=0.8 Hz, 1’-H), 4.83 (d, lH, J1,,,,2,,,= 1.2 Hz, 1”‘-H), 4.48 (d, lH, J1,,,2,,=8.0 Hz, 1”-H), 4.45 (br. s, lH, 1-H), 4.07 (d, lH, J2,3=3.0 Hz, 2-H), 4.04 (dd, lH, J2’,3,=3.4 Hz, 2‘-H), 3.90-3.29 (m, 25H), 3.86 (dd, lH, J2,m,3w=3.2 Hz,2”’-H),3.84(m,,1H,CH-O),3.64(m,1H,5”’-H),3.62(ddd,1H, 2”-H), 3.52 (s, 3H, OCH3), 1.99 (s, 3H, NHCOCH3), 3.45 (mc, lH, CH-0), 1.64-1.55 (m, 2H, CHz), 1.35-1.27 (m, 10H, CHI), 1.26 (d, 3H, J5,,,,6,,,-~,=6.2 Hz, 6’-H3), 0.89 (t, 3H, CH3).

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Bausteine von Oligosacchariden, CVIII. Synthese von modifizierten Oligosacchariden der N-Glycoproteine zur Untersuchung der Substratspezifitäten der N-Acetylglucosaminyltransferasen