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1962 4. Analyse yon biologischem Material 169 zerschnitzelt dos Papier und eluiert es mit 0,5 ml 0,1~ Cadmiumehlorid- 15sung in 60~ w~]rigen Methanol. l~ach einigen 1VIinuten f/illt man mR w~i~rigem Methanol auf 5 ml auf und mil]t noah 10 rain die Extinktion der roten Fi~rbung bei 505 nm. Die Extinktion einer Reagentienblindprobe, die ouch Papier enthalten muB, wire[ abgezogen und tier Wert aus einer Eiehkurve abgelesen. Die Genanigkeit der Bestimmung liegt bei =]=3~ . -- Ninhydrinreagens. Man stellt eine 5~ lqinhydrinlfsungin absolutem Alkohol her, der mR 0,5 ml/100 ml Kalflauge versetzt ist, trod erw~rmt 20 rain uuter l~iiekfluB auf 80~ C. 1 Ann, pharm, frang. 18, 71i--714 (1960). Lab. Chim., Centre de Transfusion- l~6animation de l'Arm6e, ClamorS/Seine (Frankreieh). UI~S~L~ B~V~AN:~ t)ber die chromatogra2hische Bestimmung yon Cysteinsgure beriohten S. L. B~D~ER und R. J. EvA~sL Bei der Elution yon Cysteins/iure (entstanden ans Cystein durch Oxydation mit Perameisens~uro 2) ans einer Dowex-2-S~ule mit Mono- ohloressigs/~urelfsung (15 g/l) erh~lt man naoh Versetzon mit l~atronlauge sohwan- kende Farbwerte mit lqinhydrin, da nioht immer dos p~-Optimum 5,0 erreieht wird. Man erreioht dioses Optimum mit konstanten Farbwerten, wenn man zu ~1 ml Eluat 2 Tr. mit Iqa~riumeitrat ges~ttigto 2 n Iqatronlauge hinzugibt. 1 j. Chromatogr. (Amsterdam) 3, 431--433 (1960). Dept. Agrio. Chem., State Univ. East Lansing, Mich. (USA). -- ~ Scn~_g, E., S. Moog~ u. E. J. BmwooD : Bioehemie. J. 57, 33 (1954); vgl. diese Z. 147, 215 (1955). E. ~iiLL]~, Wiirzburg Eine empfindliche Methode zur Bestimmung yon Cholin in Gewebehomogenaten besehreiben C. J. AcK~ und M. C~o~L Choli~ wird aus alkaliseher Lfsung als Reineekat gefi~llt und dessen Extink~ion in ammoniakalisoher Lfsung im UV- Bereioh bestimmt. -- Aus]i~hrung. Gewebeproben worden 1 rain in 0,15 m Tris- (hydroxymethyl)-aminomethan-Salzs~ure-Puffor yon PH 7,4 homogenisiert und die Suspensionen 5 rain mit 3000 U/rain zentrifngiert. Der ~berstand wird auf 3 ml verdfinnt und mit 0,53 ml konz. Salpeters~ure 2,5--4,5 Std im diffusen Lioht schwach gekooht. Dos abgekfihlte Hydrolysat wird mit festem Na~riumhydroxid und 10 n l~a~ronlauge neu~ralisier~ und duroh Zngabe yon 2 n Iqatroniauge auf eine Konzentration yon 0,1--0,2 n NoOK eingestellt. Iqaoh Filtration dureh eine Glasfri~te in ein Zentrifugenglas wird die Lfsung stark gekiihlt auf 5 ml verdiinnt und mit 2 ml 5~ Ammoniumreineekatlfsung versetzt. I~aeh 4 Std Kiihlung wird die l~eineokatf/~llung mit 3000 U/rain abgetrennt, 3real mit i ml kaltem Pro- panel gewasohon und fiber Sehwefels~ure im Dunkeln getroekaet. Die L5sung der trooknen F/~llung in i ml Aoeton wird dureh Zentrifugieren yon unifsliehem Material befreit, ein aliquoter Toil eingedampft nnd der Rfickstand in 5 ml konz. Ammoniak gelfst. Naoh Erg/~nzung mi~ Wasser auf 10 ml wird die Absorption bei 303 nm bestimmt. -- Wichtig ist die Verwendung yon konz. Ammoniak zur Lfsung des l~eineokats. Stfrungen dureh 2-Dimethylamino~thanol wurden nicht beobaohtet, O-Phosphocholin wurde bei dem angewandten Hydrolysenveffahren nieht gespal~en. Die Leistungsf~higkeit der Methode wurde ouch mit ~4C-ChoHn geprfift. Analy~. :Biochemistry (N.Y.) 1, 337--343 (1960). Dept. Bioehem. and l~utrit., Virginia Poly~eehn. Inst., Blaeksburg, Va. (USA). A. 1 ~ Eine Methode zur Bestimmung yon Fibrinogen in kleinen Blutproben gibt H. D. WYCO~ ~ an. Im verd. Citratplasm~ werden die Zel]bostand~eile nach dora Hamatokritverfahren ermittelt, dos Fibrinogen durch Thrombin als Fibrinfaden an tarierten Glasnadelu gesammelt, gewasehen, getroekuet, gewogen und auf un- verd. Plasma umgereehnet. Dos Verf~hren ist ffir R~tten angegeben. Man kommt mit 0,2 ml Blur aus und kann bei den Tieren 5--6 Bestimmungen in 24 Std

Eine empfindliche Methode zur Bestimmung von Cholin in Gewebehomogenaten

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Page 1: Eine empfindliche Methode zur Bestimmung von Cholin in Gewebehomogenaten

1962 4. Analyse yon biologischem Material 169

zerschnitzelt dos Papier und eluiert es mit 0,5 ml 0,1~ Cadmiumehlorid- 15sung in 60~ w~]rigen Methanol. l~ach einigen 1VIinuten f/illt man mR w~i~rigem Methanol auf 5 ml auf und mil]t noah 10 rain die Extinktion der roten Fi~rbung bei 505 nm. Die Extinktion einer Reagentienblindprobe, die ouch Papier enthalten muB, wire[ abgezogen und tier Wert aus einer Eiehkurve abgelesen. Die Genanigkeit der Bestimmung liegt bei =]=3~ . -- Ninhydrinreagens. Man stellt eine 5~ lqinhydrinlfsung in absolutem Alkohol her, der mR 0,5 ml/100 ml Kalflauge versetzt ist, trod erw~rmt 20 rain uuter l~iiekfluB auf 80 ~ C.

1 Ann, pharm, frang. 18, 71i--714 (1960). Lab. Chim., Centre de Transfusion- l~6animation de l'Arm6e, ClamorS/Seine (Frankreieh). UI~S~L~ B~V~AN:~

t)ber die chromatogra2hische Bestimmung yon Cysteinsgure beriohten S. L. B ~ D ~ E R und R. J. EvA~sL Bei der Elution yon Cysteins/iure (entstanden ans Cystein durch Oxydation mit Perameisens~uro 2) ans einer Dowex-2-S~ule mit Mono- ohloressigs/~urelfsung (15 g/l) erh~lt man naoh Versetzon mit l~atronlauge sohwan- kende Farbwerte mit lqinhydrin, da nioht immer dos p~-Optimum 5,0 erreieht wird. Man erreioht dioses Optimum mit konstanten Farbwerten, wenn man zu ~1 ml Eluat 2 Tr. mit Iqa~riumeitrat ges~ttigto 2 n Iqatronlauge hinzugibt.

1 j . Chromatogr. (Amsterdam) 3, 431--433 (1960). Dept. Agrio. Chem., State Univ. East Lansing, Mich. (USA). -- ~ Scn~_g, E., S. Moog~ u. E. J. BmwooD : Bioehemie. J. 57, 33 (1954); vgl. diese Z. 147, 215 (1955). E. ~iiLL]~, Wiirzburg

Eine empfindliche Methode zur Bestimmung yon Cholin in Gewebehomogenaten besehreiben C. J. A c K ~ und M. C~o~L Choli~ wird aus alkaliseher Lfsung als Reineekat gefi~llt und dessen Extink~ion in ammoniakalisoher Lfsung im UV- Bereioh bestimmt. -- Aus]i~hrung. Gewebeproben worden 1 rain in 0,15 m Tris- (hydroxymethyl)-aminomethan-Salzs~ure-Puffor yon PH 7,4 homogenisiert und die Suspensionen 5 rain mit 3000 U/rain zentrifngiert. Der ~berstand wird auf 3 ml verdfinnt und mit 0,53 ml konz. Salpeters~ure 2,5--4,5 Std im diffusen Lioht schwach gekooht. Dos abgekfihlte Hydrolysat wird mit festem Na~riumhydroxid und 10 n l~a~ronlauge neu~ralisier~ und duroh Zngabe yon 2 n Iqatroniauge auf eine Konzentration yon 0,1--0,2 n NoOK eingestellt. Iqaoh Filtration dureh eine Glasfri~te in ein Zentrifugenglas wird die Lfsung stark gekiihlt auf 5 ml verdiinnt und mit 2 ml 5~ Ammoniumreineekatlfsung versetzt. I~aeh 4 Std Kiihlung wird die l~eineokatf/~llung mit 3000 U/rain abgetrennt, 3real mit i ml kaltem Pro- panel gewasohon und fiber Sehwefels~ure im Dunkeln getroekaet. Die L5sung der trooknen F/~llung in i ml Aoeton wird dureh Zentrifugieren yon unifsliehem Material befreit, ein aliquoter Toil eingedampft nnd der Rfickstand in 5 ml konz. Ammoniak gelfst. Naoh Erg/~nzung mi~ Wasser auf 10 ml wird die Absorption bei 303 nm bestimmt. -- Wichtig ist die Verwendung yon konz. Ammoniak zur Lfsung des l~eineokats. Stfrungen dureh 2-Dimethylamino~thanol wurden nicht beobaohtet, O-Phosphocholin wurde bei dem angewandten Hydrolysenveffahren nieht gespal~en. Die Leistungsf~higkeit der Methode wurde ouch mit ~4C-ChoHn geprfift.

Analy~. :Biochemistry (N.Y.) 1, 337--343 (1960). Dept. Bioehem. and l~utrit., Virginia Poly~eehn. Inst., Blaeksburg, Va. (USA). A. 1 ~

Eine Methode zur Bestimmung yon Fibrinogen in kleinen Blutproben gibt H. D. WYCO~ ~ an. Im verd. Citratplasm~ werden die Zel]bostand~eile nach dora Hamatokritverfahren ermittelt, dos Fibrinogen durch Thrombin als Fibrinfaden an tarierten Glasnadelu gesammelt, gewasehen, getroekuet, gewogen und auf un- verd. Plasma umgereehnet. Dos Verf~hren ist ffir R~tten angegeben. Man kommt mit 0,2 ml Blur aus und kann bei den Tieren 5--6 Bestimmungen in 24 Std