Immunhämatologische Grundlagen Dr. med. Guido Heymann Zentrale Abteilung für Laboratoriumsmedizin DRK-Kliniken Berlin Blutgruppenbestimmung Antikörpersuchtest

Immunhämatologische Grundlagen

Dr. med. Guido HeymannZentrale Abteilung für LaboratoriumsmedizinDRK-Kliniken Berlin

BlutgruppenbestimmungAntikörpersuchtestVerträglichkeitsprobe

Heymann Immunhämatologische Grundlagen 2


Anforderung: RiLi 4.2.3 und 4.2.4

Jedes Probengefäß ist vor der Abnahme eindeutig zu kennzeichnen (Name, Vorname, Geburtsdatum, ggf. Code)

Der Untersuchungsauftrag muß vollständig einschließlich Entnahmedatum ausgefüllt

und von der abnehmenden Person unterschrieben sein. Der Einsender muß auf dem Untersuchungsauftrag eindeutig

ausgewiesen sein. Der anfordernde Arzt ist für die Identität der Blutprobe verantwortlich. Bestimmte, dem Empfänger verabreichte Medikamente (z.B.

Plasmaexpander, Heparin) müssen mitgeteilt werden. Ebenso sind vorangegangene allogene Stammzelltransplantationen

und/oder Bluttransfusionen sowie Schwangerschaften zu vermerken. Für die serologische Diagnostik kann das Untersuchungsmaterial

Serum durch EDTA-Plasma ersetzt werden.


Was sind Blutgruppen?

Antigene Epitope auf Proteinen, Glycoproteinen oder Zuckermolekülen auf der Erythrozytenoberfläche, die immunogen sind und mittels serologischer oder molekulargenetischer Methoden getestet werden können. Ihre Funktion ist z.T. bekannt. Sie werden entweder im Rahmen der Erythropoese gebildet oder passiv aus dem Plasma adsorbiert.


Blutgruppenbestimmung

Mindestbestimmung:AB0-System, Rhesusmerkmal D

Kinder, gebärfähige Frauen, Polytransfundierte, spez. Fragestellungen:+ Rhesusmerkmale C, c, E, e und Kell, ggf. Cellano

weitere erythrozytäre Merkmale, falls erforderlich ABD-Kontrolle, wenn Blutgruppe im Labor bekannt


Bestimmungsverfahren

Plattentest

Röhrchentest

Kartentest

Andere Verfahren

Automatisierung

PCR


Was wird noch benötigt? (...ggf.)


Röhrchentest mit kompletten Antiseren


AB0-Blutgruppen (Landsteiner 1900)

Phänotyp Genotyp %Mitteleuropa Antikörper

0 00 39 Anti-A,Anti-BA A0,AA 48 Anti-BB B0,BB 9 Anti-AAB AB 4 keine

A1, A2, A-Untergruppen IgM „Natürliche Ak“IgG

Immunantikörper Die biologische Funktion der ABH-Antigene ist unklar. Auf endothelialen und epithelialen Zellen Krankheitsassoziation:

oberflächlich keine; Transfusionsreaktion, MHN, Bg 0: H. pylori, vWF ca. 25% niedriger; Pest- und Choleraepidemien



Bestimmung der AB0-Blutgruppe


Rh (Rhesus)-SystemLevine, Stetson, 1939; Landsteiner, Wiener 1940

Hauptantigen D bzw. d (hypothetisch)homozygot DD ddheterozygot Dd

Rhesus positiv rhesus negativ85% 15%

„Nebenantigene“: C,c,E,e

Antigenkomplexe: Cde/cDe Rh-Formel CcD.ee Haplotypencde/cde ccddee

... Integrität der Erythrozytenmembran, (Ammonium- und ggf. CO2-Transport)

Erythrozyten und Knochenmark, RHAG, RHBG und RHCG auf Niere, Leber, Haut, Hoden und Gehirn

Krankheitsassoziation:Transfusionsreaktion, MHN!!, Rh deficiency syndrome


Rhesus-Eigenschaften


D partial


Kell-System (Coombs,Mourant, 1946) Wichtigste Antigene: Kell (K), Cellano (k)

Phänotypen Häufigkeit (%) Antikörper

kk 92 Kell negativ Anti-K

Kk 7,8 Kell positiv

KK 0,2 Kell positiv Anti-k

Weitere Antigene:Kpa 0,02 selten Ak-BildungKpb 99,98Jsa

Jsb 100 Unterfamilie der Zink-Endopeptidasen Erythrozyten, KM, Hoden, weniger auf Gehirn, lymphatisches Gewebe, Herz, Skelettmuskel Krankheitsassoziation:

(McLeod Phänotyp: Hämolyse, Neurologie, Cardiomyopathie)


Antigene können immunogen sein…

Malaria

Harnstoff-transporter

Rezeptor?


Antikörpersuchtest, -differenzierungRiLi 4.2.5.7 und 4.2.5.8 Der Antikörpersuchtest ist Bestandteil der

Blutgruppenbestimmung Er wird…wiederholt, sofern der letzte AKS länger als 3 Tage

zurückliegt (Tag der Blutentnahme plus 3 Tage) Dieser Zeitraum…kann auf 7 Tage ausgedehnt werden, wenn…

zwischenzeitlich keine Transfusionen durchgeführt worden sind und innerhalb von 3 Monaten keine Transfusionen oder Schwangerschaften bekannt waren.

Werden im Serum/Plasma irreguläre Antikörper oder Autoantikörper festgestellt, so soll versucht werden, deren Spezifität und klinische Bedeutung zu klären.

Bei Vorliegen von klinisch relevanten Antikörpern ist der betreffenden Person ein Notfallpaß mit dem Befund auszustellen.


Antikörpertypen generell


Immunologie prinzipiell

Erstimmunisierung:Erstkontakt mit immunogenem AntigenZeitbedarf: 14 Tage bis 4 Wochen

Boosterung (Reimmunisierung):Erneuter Antigenkontakt der Memory-ZellenZeitbedarf: (Stunden?) bis ca. 1-3 Tage


Transfusionsreaktion

RES

Anti-JkAnti-VelAnti-AB

Anti-RhesusAnti-D

akut

verzögert


Nicht nur HTR…

Rh-Inkompatible SS Inzidenz bei 10 % aller SSbereits zwischen 8. Und 13. SSW tritt fetales Blut in geringer Mengein den mütterlichen Kreislauf über (ca.0,05ml) bei 25% der Schwangerenfetomaternale Makrotransfusion >25ml fetales Blutohne Prophylaxe bilden rh-neg Frauen in 4-8% d.F. Antikörper gegen Merkmal Dnach der ersten inkompatiblen SS.Mit Prophylaxe noch bei 0,4%zweitwichtigstes Antigen auch aus Rhesussystem: c


AKS mit 2-3 Testzellen


AK-Differenzierung mit 10 bis x Testzellen


Kartentest: Coombs-Test


Weitere Testverfahren : Enzymbehandlung

Manche Antigene lassen sich durch Behandlung mit z.B. Papain, Ficin, Bromel(a)in zerstörenpapainsensibel: Duffy, M, N, (S, s, Kell)

bessere Zugänglichkeit

Y Y Y


Bestimmung weiterer Antigene

RiLi 4.2.5.6Die Bestimmung weiterer Rh-Merkmale und/oder anderer Blutgruppenmerkmale soll grundsätzlich mit zwei verschiedenen Testreagenzien unter Mitführung von Kontrollen (...) erfolgen. Die positive Kontrolle sollte das Merkmal schwach ausgeprägt aufweisen (heterozygote Anlage für das Allel).


Ak, immer relevant

A und B, H bei Bombay Duffy (Fy), Kell, Kidd (Jk), Rhesus S, s, U P, PP1Pk

Vel, Lan


Ak, manchmal relevant

Landsteiner-Wiener (Lw) Cartwright (Yt), Cromer, Dombrock Colton, Gerbich, Scianna Junior (Jr), Indian At(a)


Ak, relevant, wenn reaktiv bei 37°C

M, N, P1 Lewis a (Le(a)) Lutheran (Lu) KAK (Transfusion?)


Ak, immer irrelevant

Lewis b (Le(b)) HLA (Bg(a-c)) HTLA: Chido, Rodgers, Knops, McCoy, Cost JMH(?)


Blutanforderung RiLi 4.3.1 und 4.3.2

Die Anforderung von Blutkomponenten erfolgt für jeden Empfänger schriftlich durch den anfordernden Arzt unter Angabe der

Diagnose Transfusionen Schwangerschaften Allogene KMT Medikamente, welche die Verträglichkeitsprobe beeinträchtigen Blutgruppenserologische Vorergebnisse Zeitliche Dringlichkeit Vorgesehener Transfusionstermin Stehen Eigenblutpräparate zur Verfügung, muß durch organisatorische

Maßnahmen gewährleistet sein, daß diese zuerst transfundiert werden. Alle Blutproben, die zur transfusionsserologischen Untersuchung

erforderlich sind, müssen stets – auch im Notfall – eindeutig beschriftet und bezüglich der Herkunft gesichert sein.


Was geschieht im Labor?

ABD-Kontrolle des Kreuzblutesggf. AKS

Auswahl geeigneter Konserven

Kreuztest im indirekten AHG-Test

Zuordnung zum Patienten undErzeugung von Begleitpapieren

5-30 min

5 min - ??

30 min - >1h

5 - ?? min

= 1 h – 2-3 h - ?


Bed-Side-Test RiLi 4.3.2.1:

Unmittelbar vor der Transfusion von EKs und Granulozytenkonzentraten ist vom transfundierenden Arzt oder unter seiner direkten Aufsicht der AB0-Bestätigungstest am Empfänger vorzunehmen.

RiLi 4.6.1Unmittelbar vor der Eigenbluttransfusion die Identität durch Vergleich der personalien des Empfängers mit der Kennzeichnung des Eigenblutprodukts zu sichern. Der AB0-Identitätstest ... ist in jedem Fall mit dem Blut des Empfängers, im Falle erythrozytenhaltiger Präparate auch mit dem des autologen Blutprodukts vorzunehmen.


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