LÍNEA EDITORIAL: NUEVA ETAPA, NUEVOS HORIZONTES

DICIEMBRE 2016. Volumen 4

QUERATITIS POR ACANTHAMOEBA SPP. EN PACIENTE USUARIO DE LENTES DE CONTACTO

CREACIÓN DE LIBRERÍAS MEDIANTE AMPLIFICACIÓN DEL ARNr 16S PARA

CARACTERIZACIÓN DE LA MICROBIOTA

ASCARIS LUMBRICOIDES EN VIAJERO QUE REGRESA DE PERÚ

LÍNEA EDITORIAL:

NUEVA ETAPA, NUEVOS HORIZONTES

DIAGNOSTICO DE LOIASIS EN NIÑA CON EOSINOFILIA

CADENA DE CUSTODIA PARA EL PROCESAMIENTO DE ETANOL EN SUERO

Laboratory Medicine at a glance

Medicina de Laboratorio de un vistazo

VOL.4 ISSN 2444-8699

LÍNEA EDITORIAL DE NUESTRA REVISTA

Nueva etapa, nuevos horizontes

Estimados lectores,

Ya llevamos un año desde que AEBM decidió aventurarse a publicar una

revista de imágenes del Laboratorio Clínico. Laboratory Medicine at a glance publica

su cuarto volumen y ante todo queremos agradecer el apoyo y la acogida que ha

tenido dentro de nuestro ámbito. Han sido muchos los trabajos que hemos recibido y

los autores que se han volcado para hacer de ésta una revista interesante e

innovadora, que permite mostrar el lado más “visual” del Laboratorio Clínico, muchas

veces abocado a no mostrar más que cifras y unidades.

Desde su lanzamiento los profesionales del laboratorio han estado atentos para

captar esa foto que resulte atractiva y digna de compartir con sus colegas. Sin

embargo, LabMed quiere dar un paso más. Anticipamos que el próximo año nuestra

revista presentará numerosas novedades que van a constituir un giro significativo en

su forma, presentación y contenidos.

Tenemos un gran interés en ir más allá del caso clínico e introducir

esquemas, algoritmos, mapas de procesos, pictogramas… todo aquello que

cualquier profesional del laboratorio querría tener en su escritorio de ordenador,

pegado en la pared frente a su puesto de trabajo, descargado en su móvil… en

definitiva “tener a mano” para consultarlo durante el desempeño de su trabajo

cotidiano. Esa imagen que aparece en las sesiones clínicas o en las ponencias de

congresos, y que pedimos por favor al autor que nos pase porque nos parece

atractiva y práctica, ya que resume de un vistazo información que manejamos

diariamente.






LÍNEA EDITORIAL:




Editores Gema María Varo Sánchez

Luis Francisco Sáenz Mateos

Joaquín Bobillo Lobato

Fecha de publicación 29 diciembre 2016

Páginas Páginas 1-2

VOLUMEN 4

LÍNEA EDITORIAL DE NUESTRA REVISTA 02


No queremos que LabMed sea una revista de imágenes curiosas, ojeada para pasar el tiempo, como

entretenimiento. Queremos que nuestros lectores esperen cada nueva publicación con impaciencia e ilusión,

pensando que en el siguiente número pueden encontrar aquella herramienta que les resuelva ese problema

que no consiguen solventar o les haga más fácil aquella tarea que ya se habían resignado a ejecutar de

forma más o menos tediosa y automática una y otra vez.

Esperamos que el nuevo ciclo que comenzaremos con los siguientes números de Laboratory Medicine

at a glance, supongan una nueva ilusión para nuestros lectores y un nuevo estímulo para nuestros autores.

Ánimo, esperamos ansiosos vuestros trabajos.

“La alegría de ver y entender es el más perfecto don de la naturaleza”

Albert Einstein (1879-1955)

Problemas

Visión

Imaginación

Problemas

SOLUCIONES

Empeño

Procesos

IDEAS

Trabajo

Respuestas

Conceptos



VOL.4 ISSN 2444-8699

PARASITOSIS EN UN VIAJERO QUE REGRESA DE ZONA

TROPICAL

PARASITOSIS OF A TRAVELLER RETURNING FROM A TROPICAL

ZONE

Figura 1. Examen macroscópico de adulto de Ascaris lumbricoides con extremo posterior curvado (detalle parte inferior izquierda). En la parte inferior derecha observamos huevo infértil en examen en fresco a 400 aumentos. Figure 1. Macroscopic examination of adult Ascaris lumbricoides with curved posterior end (detail lower left). Lower right part: 400X fresh examination of an unfertilized egg of Ascaris lumbricoides.

Los autores presentan una composición de The authors present an image composition in






LÍNEA EDITORIAL:




Autores Ana de Malet Pintos-Fonseca

1

Israel Gañán Nieto2

Centro 1

Servicio de Microbiología.

Hospital Comarcal de

Valdeorras, Ourense. 2

Servicio de Inmunología.

Hospital Universitario Ramón y

Cajal, Madrid.



VOLUMEN 4

PARASITOSIS EN UN VIAJERO QUE REGRESA DE ZONA TROPICAL 04


imágenes en la cual, la parte inferior derecha es una

extensión de heces frescas, donde se observa a 400

aumentos un huevo alargado de unas 80x45 μm sin

membrana vitelina, con una cubierta fina muy

irregular y mamelonada, masa citoplasmática con

gránulos amorfos y refringentes identificado como un

huevo infértil de Ascaris lumbricoides. En la parte

superior de la imagen se observa en examen

macroscópico un nematodo adulto de color

ligeramente rosáceo con unos 20 cm de largo, 4 mm

de ancho y con la terminación del extremo caudal

ligeramente curvada (detalle en parte inferior

izquierda), identificado como un macho adulto de

Ascaris lumbricoides.

Ambas formas parasitarias se aíslan de un

varón de 37 años que acude en repetidas ocasiones

al Servicio de Urgencias por referir dolor abdominal

de un mes de evolución. Como dato destacable el

paciente indica viaje a una zona rural de Perú hace 4

meses con ingesta de agua no tratada.

En la exploración física se refiere abdomen

blando con dolor localizado en la zona del

hipocondrio derecho irradiado a la parte posterior.

Tras revisar la historia clínica no se observa ningún

dato destacable excepto la presencia de eosinofilia

progresiva desde la primera vez que acude al

Servicio de Urgencias (ver tabla).

La analítica en el momento del ingreso

presenta una amilasa ligeramente elevada, lipasa

normal, marcada eosinofilia y perfil hepático

ligeramente alterado.

which, the lower right is a 400X fresh stool

examination, where an elongated egg of about 80x45

μm without vitelline membrane, with a very irregular

and mamelonated thin covering and cytoplasmic

mass with amorphous and refracting granules is

showed, being identified as an infertile egg of Ascaris

lumbricoides. In the upper part of the image, an adult

nematode of slightly pinkish color, about 20 cm long,

4 mm wide and with a slightly curved caudal end (left

lower part) is presented, being identified as an adult

male of Ascaris lumbricoides.

Both parasitic forms are isolated from a 37-

year-old male who comes frequently to the

Emergency Department for abdominal referred pain

of a month of evolution. The patient indicates trip to a

rural area of Peru 4 months ago with ingestion of

untreated water.

The exploration revealed soft abdomen with

pain located in the right hipocondry radiating to the

back. Medical history don´t revealed any important

finding, except the presence of progressive

eosinophilia since the first time he came to the

Emergency Department (See table).

Admission laboratory testing revealed a slightly

elevated amylase, normal lipase, high eosinophilia

and a tiny liver function alteration.

VOLUMEN 4



ANÁLISIS BIOQUÍMICO EN SANGRE PERIFÉRICA

Analítica ingreso

Rango Unidades

Amilasa 135 (25-125) U/L

Lipasa 20 (8 -78) U/L

Albúmina 43 (40 - 50) g/L

Bilirrubina Total

2 (0,20 -1,20) mg/dL

AST/GOT 60 (4 - 50) U/L

ALT/GPT 44 (5 - 40) U/L

GGT 44 (10 - 50) U/L

Fosfatasa Alcalina

200 (53 - 128) U/L

Tiempo de Protrombina

15 (9,70-12,60) sg

Al día siguiente del ingreso se realiza un

estudio parasitológico en heces donde se observa un

huevo infértil de Ascaris lumbricoides.

Tras el hallazgo se inicia tratamiento con

albendazol oral 400 mg/día durante una semana. A

los siete días de ingreso, al empeorar el perfil

hepático, se decide realizar una

colangiopancreatografía retrógrada endoscópica

donde se extrae del conducto biliar un macho adulto

de Ascaris lumbricoides.

Ascaris lumbricoides es el nematodo intestinal

más frecuente en el mundo, afectando alrededor de

un billón de personas1. Presenta una elevada

prevalencia en las regiones tropicales y subtropicales

de los países subdesarrollados o en vías de

One day after admission, a parasitological

study was performed in stools, where an infertile egg

of Ascaris lumbricoides is observed.

Knowing these microbiological findings, a

treatment with oral albendazole 400 mg/day for a

week was started. After seven days of admission, to

worsen liver profile, it was performed an endoscopic

retrograde cholangiopancreatography, extracting an

adult form of Ascaris lumbricoides from bile duct.

Ascaris lumbricoides is the most common

intestinal nematode in the world, affecting around one

billion people1. It has a high prevalence in the tropical

and subtropical regions of the underdeveloped or

developing countries of Africa, Latin America and

Asia2-3.

VOLUMEN 4



desarrollo de África, Latinoamérica y Asia2,3

.

La ascariasis es una parasitosis cosmopolita,

más frecuente en poblaciones con condiciones

socioeconómicas y sanitarias deficitarias1-3

. En los

países desarrollados es muy poco común, siendo los

casos documentados de población emigrante o

viajeros que regresan de zonas endémicas3. La

mayoría de los casos suelen ser asintomáticas sobre

todo en la fase larvaria y siguen un curso benigno2,

pero puede haber complicaciones cuando se

producen migraciones ectópicas, de modo que tanto

el parásito adulto como las larvas invaden los

conductos de Wirsung o biliar causando colangitis,

pancreatitis o abscesos hepáticos2. Otra

complicación, pero debida a la elevada concentración

de parásitos, es la perforación de la mucosa

intestinal pudiendo provocar peritonitis, apendicitis u

oclusión intestinal. Cuando la concentración de

helmintos se localiza en vías aéreas puede provocar

infiltrados pulmonares o asfixia por oclusión de la

tráquea1.

El período prepatente de la ascariasis es de

dos a tres meses4.

La puerta de entrada del parásito es la ingesta

directa de larvas L4 o de alimentos contaminados

con huevos embrionados. El siguiente esquema

resume el ciclo vital de Ascaris lumbricoides.

Ascariasis is a cosmopolitan parasitosis, more

frequent in populations with socioeconomic and

health deficient conditions1-2-3

. It is very rare in

developed countries, with documented cases of

migrant population or travellers returning from

endemic areas3. Most cases are usually

asymptomatic, with a good evolution especially in the

larval stage2, but may have complications when

ectopic migration occurs, so that both the adult and

larvae invade the bile or Wirsung ducts causing

cholangitis, pancreatitis or liver abscesses2. Another

complication due to the high concentration of

parasites is the perforation of the intestinal mucosa,

which may cause peritonitis, appendicitis or intestinal

obstruction. Pulmonary infiltrates or asphyxiation by

windpipe can occur when the concentration of

helminthes is located in airways1.

The prepatent period of ascariasis is two to

three months4.

The gateway of the parasite is direct ingestion

of L4 larvae or contaminated food with embryonated

eggs. The following outline summarizes the life cycle

of Ascaris lumbricoides.

VOLUMEN 4



Figura 2. Ciclo de vida del Ascaris lumbricoides. Figure 2. Ascaris lumbricoides lifecycle.

Durante el pasaje larvario pulmonar se puede

desarrollar síndrome de Löffler o neumonía

eosinofílica, manifestándose con irritación, tos y

disnea5.

La presencia del parásito se puede detectar

por técnicas radiológicas2, aunque habitualmente su

identificación se hace mediante observación directa

macroscópica y microscópica de los nematodos en

fase adulta, larvaria o de los huevos4.

El tratamiento de elección es albendazol,

mebendazol o ivermectina y como alternativa

pamoato de pirantel o nitazosamida. En caso de

ascariasis biliar no complicada la eliminación

It is possible to develop Löffler syndrome or

eosinophilic pneumonia during the larval pulmonary

passage, which are showed with irritation, coughing

and breathlessness5.

Presence of helminthes can be detected by

imaging techniques2, but usually their identification is

done by direct observation of macroscopic and

microscopic nematodes in adult, larvae or eggs

phases4.

The treatment of choice is albendazole,

mebendazole or ivermectin and pyrantel pamoate or

nitazosamida alternatively. Spontaneous parasite

elimination occurs in 80% of cases of uncomplicated

VOLUMEN 4



espontánea del parásito ocurre hasta en 80 % de los

casos. La colangiopancreatografía está indicada

cuando se sospecha una complicación, deterioro

clínico o cuando falla el tratamiento farmacológico2.

En nuestro caso hubo que combinar el tratamiento

con albendazol y la colangiopancreatografía.

biliary ascariasis. Cholangiopancreatography is

indicated when a complication, clinical deterioration

or when drug treatment fails is suspected2. In our

case, we combined treatment with albendazole and

cholangiopancreatography.

Bibliografía/References:

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VOL.4 ISSN 2444-8699

CREACIÓN DE LIBRERÍAS MEDIANTE AMPLIFICACIÓN

DEL ARN RIBOSOMAL 16S PARA LA CARACTERIZACIÓN

DE LA MICROBIOTA

LIBRARY GENERATION THROUGH RIBOSOMAL RNA 16S GENE

AMPLIFICATION FOR DETERMINING MICROBIOTA COMPOSITION

Figura 1. Esquema del proceso seguido para la creación de librerías mediante amplificación del gen del ARNr 16S. La región amplificada comprende a las regiones variables V3 y V4 y la región conservada que se encuentra entre ellas. Una primera PCR se realiza con los primers específicos V3-V4 que contienen los adaptadores para los índices Nextera XT. En una segunda PCR, se añaden los índices para introducir una combinación única para cada muestra y las secuencias P5 y P7 (que hibridan con los adaptadores de la célula de flujo del sistema MiSeq). Tras normalizar la cantidad de cada muestra que se añade al pool final, las librerías están listas para ser secuenciadas mediante MiSeq. Figure 1. Summary of the approach followed for the generation of 16S rRNA gene libraries. The amplified region comprised variable regions V3 and V4 and the conserved region between them. A first PCR was performed with specific primers for V3-V4 that contain adaptors for Nextera XT indexes. In a second PCR, a different combination of indexes for each sample and P5/P7 sequences (which hybridise with flow cell adaptor in the MiSeq system) were introduced. After normalization of the quantity of each sample that was included in the final pool, libraries were ready to be sequenced in the MiSeq system.






LÍNEA EDITORIAL:




Autores Emilio J. Laserna Mendieta

Marcus J. Claesson

Centro School of Microbiology and

APC Microbiome Institute,

University College Cork, Cork,

Ireland



VOLUMEN 4 CREACIÓN DE LIBRERÍAS MEDIANTE AMPLIFICACIÓN DEL ARN

RIBOSOMAL 16S PARA LA CARACTERIZACIÓN DE LA MICROBIOTA 10


Una gran cantidad de estudios

metagenómicos, cuyo objetivo es la determinación de

la composición bacteriana de un determinado tipo de

muestra, se han realizado mediante el análisis por

secuenciación masiva de librerías resultantes de la

amplificación por PCR del gen procariota del ARN

ribosómico (ARNr) 16S. Este gen posee una longitud

de 1542 pares de bases y está formado por nueve

regiones variables entre las que se intercalan

regiones conservadas. Son precisamente los

fragmentos resultantes de la amplificación de una o

dos regiones variables del ARNr16S las que

mayoritariamente se han empleado en la

caracterización filogenética de las diversas especies

bacterianas que constituyen la microbiota humana1.

Una de las fuentes principales de variabilidad

de este tipo de estudios, aparte del método de

extracción del ADN y de la plataforma de

secuenciación, lo constituye la elección de los

primers empleados en la amplificación del ARNr

16S2. La evaluación in silico que Klindworth y

colaboradores3 llevaron a cabo sobre este aspecto,

demostró que una pareja de primers degenerados

(es decir, que tienen en varias posiciones dos o más

bases nucleotídicas) para las regiones V3-V4

mostraba los resultados más prometedores, lo que

ha extendido su uso en posteriores trabajos (casi 300

citas a finales de septiembre de 2016).

En nuestro laboratorio hemos venido

realizando diversos proyectos encaminados a la

caracterización de la microbiota presente en

muestras humanas de heces y biopsias intestinales,

de modo que el ADN es extraído y posteriormente

amplificado en dos PCR consecutivas (Figura 2). El

objetivo es la construcción de librerías que contienen

los amplicones del gen del ARNr16S de diversas

muestras, protocolo que se esquematiza en la Figura

1. Dicho protocolo toma como referencia el método

Many metagenomic studies are aimed at

determining the bacterial composition in a specific

type of sample. This is usually performed by next-

generation sequencing analysis of the data obtained

from libraries created by PCR amplification of the

prokaryotic 16S ribosomal RNA (rRNA) gene. This

gene has a length of 1542 base pairs and it is

composed by nine variable regions and interspaced

by more conserved regions. The amplification of one

or two of these variable regions of the 16S rRNA

gene is a common approach employed in the

phylogenetic identification of hundreds of species that

are present in the human microbiota1.

One of the main sources of variation in these

sorts of studies, apart from the DNA extraction

method and the sequencing platform, is the choice of

primers used in 16S rRNA gene amplification2.

Klindworth and co-authors3 carried out an in silico

evaluation about this issue and described a couple of

degenerate primers (that is, with two or more

nucleotide bases in several positions) for regions V3-

V4 as those showing the most promising results. As a

result, these primers have been widely employed in

later studies (almost 300 cites at the end of

September 2016).

In our laboratory, we have been analysing

microbiota composition across multiple studies from

hundreds of stool and biopsy human samples. Here,

DNA was extracted from those samples and

employed for two consecutive PCR amplifications

(Figure 2). In this way and following the protocol

summarized in Figure 1, we have created libraries

that contain amplicons of the 16S rRNA gene from

several samples. This approach was based in the

method recommended by Illumina4, although some

modifications were introduced.

.




recomendado por Illumina4 aunque introduciendo

algunos cambios.

Figura 2. En la parte izquierda se puede observar el resultado de la PCR de amplificación del gen del ARNr16S en seis muestras de ADN extraído de heces humanas. Se distingue claramente una banda específica de tamaño entre 500 y 600 pares de bases. En la parte derecha, se puede visualizar el resultado de la PCR empleando los índices Nextera XT, de modo que ahora los amplicones poseen un tamaño superior a los 600 pares de bases. En ambos casos las muestras se corrieron en un gel de agarosa al 2% teñido con Midori Green (NipponGenetics). Figure 2. On the left, it is shown the PCR result for 16S rRNA gene amplification in six DNA samples from human faeces. Clear and specific bands are observed in the size range of 500-600 base pairs. On the right, it is shown the PCR result employing Nextera XT indexes, thus now amplicons have a size higher than 600 base pairs. In both cases, samples were run in a 2% agarose gel stained with Midori Green (Nippon Genetics).

El primer paso consiste en una PCR con los

primers V3-V4 a los que se les añade la secuencia

adaptadora para los índices Nextera XT de Illumina.

Así, la secuencia completa (nomenclatura IUPAC) de

los primers empleados es:

The first step consisted in a PCR with V3-V4

primers where an adaptor sequence for Nextera XT

indexes (Illumina) was added to. Thus, the complete

sequence for these primers was (IUPAC

nomenclature):

Directo (Forward):

5' TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG 3'

Reverso (Reverse):

5' GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGACTACHVGGGTATCTAATCC 3'




Esta reacción de amplificación se realiza

usando una polimerasa de alta fidelidad (en nuestro

caso, Phusion High-Fidelity DNA polymerase

suministrada por ThermoScientific). Las condiciones

para la PCR son: 98°C durante 30 s, seguido de 25

ciclos de 98°C durante 10 s, 55°C durante 15 s y

72°C durante 20 s, con un ciclo final de 72°C durante

5 min. Los productos de la PCR son purificados

mediante bolitas magnéticas (AgencourtAMPure XP

beads, suministradas por Beckman-Coulter). A

continuación, se usan 5 µL del ADN purificado para

la segunda PCR con los primers de los índices

Nextera XT. El programa para esta PCR es el mismo

que para la PCR del 16S, con la salvedad de que

sólo se realizan 8 ciclos de amplificación. Con esta

PCR, se consigue que para cada muestra los

amplicones 16S posean una combinación de índices

única que la diferencia del resto. Tras realizar una

nueva purificación del ADN resultante, se procede a

la cuantificación de su concentración, para lo cual se

emplean métodos de alta sensibilidad para el ADN

de doble cadena como el Quant-iTPicogreen o Qubit

(suministrados por ThermoScientific). Finalmente, se

prepara un pool, es decir, se mezclan todas las

muestras en un único tubo de modo que la cantidad

de ADN sea la misma para todas ellas, y dicho pool

se diluye a una concentración adecuada para

secuenciación mediante el sistema MiSeq de

Illumina.

Los resultados de la secuenciación han de ser

procesados mediante las correspondientes

herramientas bioinformáticas para obtener la

composición bacteriana de cada muestra. Esta

metodología ha sido empleada con éxito en el

estudio sobre la comparación de microbiota en

personas tratadas a largo plazo con inhibidores de la

bomba de protones e individuos control, que mostró

cambios en la microbiota intestinal (como el ratio

This PCR reaction was performed using a

high-fidelity DNA polymerase (in our case, Phusion

High-Fidelity DNA polymerase, purchased from

Thermo Scientific). PCR conditions were: 98°C for 30

s, followed by 25 cycles of 98°C for 10 s, 55°C for 15

s and 72°C for 20 s, with a final extension step of

72°C for 5 min. PCR products were purified using

magnetic beads (Agencourt AMPure XP beads,

purchased from Beckman-Coulter). Then, 5 µL of the

purified DNA were used in the second PCR that

employed primers from Nextera XT indexes. The

program for this second PCR was the same set up for

16S rRNA PCR, only changing the amplification

cycles from 25 to 8. After this PCR, we achieved 16S

amplicons that had a different and unique

combination of indexes for every single sample. After

a new purification of the second PCR products, DNA

quantification is performed employing high sensitivity

methods for double stranded DNA, like Quant-iT

Picogreen or Qubit (both from Thermo Scientific).

Finally, we pooled all samples, which should have the

same final concentration, by mixing them in one

single tube. This pool was afterwards diluted to

achieve an adequate concentration to be sequenced

in the MiSeq system (Illumina).

Sequencing results have to be processed

using properly selected bioinformatic pipelines to get

the bacterial composition of each sample. This

methodology was successfully employed in a study

carried out in our laboratory about stool microbiota

comparison between people in long-term treatment

with proton pump inhibitors and control individuals.

The analysis of 16S rRNA gene amplicons recently

revealed changes in the colonic microbiota, as the

Firmicutes/Bacteroides ratio, associated to the long-

term prescription of these types of drugs5.




entre los filos Firmicutes/Bacteroides) asociados al

uso de estos fármacos5.


1. 1. Cox MJ, Cookson WO, Moffatt MF. Sequencing the human microbiome in health and disease. Hum

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VOL.4 ISSN 2444-8699

QUERATITIS POR ACANTHAMOEBA SPP. EN PACIENTE

USUARIO DE LENTES DE CONTACTO

ACANTHAMOEBA KERATITIS IN CONTACT LENS WEARER

Figura 1. Quistes de Acanthamoeba spp. Figure 1. Acanthamoeba spp. cysts






LÍNEA EDITORIAL:




Autores Ana Peña Cabia1

Jorge Alfredo Pérez García2

Mª José Rodríguez Escudero2

Centro 1 Servicio de Análisis Clínicos. 2 Servicio de Microbiología

Clínica.

Hospital Virgen de la Luz.

Cuenca.



VOLUMEN 4 QUERATITIS POR ACANTHAMOEBA SPP. EN PACIENTE USUARIO

DE LENTES DE CONTACTO 15


La imagen corresponde a una mujer de 35 años

en estudio por presentar dolor en ojo izquierdo. Se

observan quistes de Acanthamoeba spp. examinados

a microscopio óptico (100x), en el líquido de limpieza

de las lentillas. Se utilizó la tinción azul de metileno.

Para ello, en un portaobjetos se realiza una

suspensión homogénea entre el líquido de lentillas y

el colorante. Este método permite distinguir

correctamente los diferentes protozoos basándose en

las características morfológicas de cada uno de ellos.

En el quiste de Acanthamoeba spp. se puede observar

la existencia de una doble pared celular, la externa

conocida como ectocisto, delgado y ondulado, y la

interna conocida como endocisto, de aspecto

redondeado.

Este parásito que se encuentra en el aire, tierra

y agua fue reconocido como agente patógeno ocular

en la década de los 70. Se dividen en tres grupos

según las diferencias de tamaño y características

morfológicas de los quistes. El tamaño del quiste

puede variar de 13 a 20 μm de acuerdo a la especie1.

Presenta dos estadios: una forma activa o

trofozoito y una forma latente o quiste. La formación

del quiste ocurre bajo condiciones ambientales

adversas, como la falta de alimento, cambios de

temperatura y pH. Si el quiste rompe, se libera el

parásito y esto sucede cuando las condiciones

ambientales se vuelven de nuevo favorables.

Acanthamoeba spp. puede entrar a través de los ojos,

por contacto con agua contaminada o en usuarios de

lentes de contacto2.

El diagnóstico de la infección puede realizarse

por la visión al microscopio óptico en el líquido de

limpieza de las lentillas de formas quísticas

compatibles con Acanthamoeba spp., por cultivo in

vitro en medio agar no nutritivo o agar con una baja

concentración de nutrientes en presencia de

The image belongs to a 35 year old woman with

pain in the left eye. Acanthamoeba spp. cyts can be

seen when we examine the contact lenses solution

(optical microscope 100x with methylene blue

staining). On a slide, a homogenous suspension is

made between contact lenses solution and methylene

blue. This method allows you to know the protozoa,

based on morphological characteristics. It can be

seen Acanthamoeba spp. cyst with a double cell wall.

The outside wall is called ectocisto, thin and wavy, and

inside one is called endocisto, rounded.

This parasite is found on air, land and tap water,

and it was identified as a pathogenic eye agent in the

70s. There are three groups based on cysts

morphological characteristics and size. The cyst size

is between 13-20 μm1.

This parasite exists in two forms: an active,

infective trophozoite and a dormant, environmentally

hardy cyst. The role of the cyst state is protection

against adverse environmental conditions, as lack of

food, temperature and pH’s changes. But when

conditions change, cysts are broken and the parasite

is released to the environment. Acanthamoeba spp.

can access in the eye by contaminated water or

wearing contact lenses2.

The infection is usually diagnosed seeing the

cysts in the contact lenses solution with an optical

microscope or in vitro culture with no nutritive agar

medium or low nutrients concentrations in the

presence of bacteria. Another option could be use of

the polymerase chain reaction (PCR)3.

.




bacterias, y por la técnica de reacción de polimerasa

en cadena-RCP3.

Figura 2. Ciclo biológico de Acanthamoeba spp. Figure 2. Acanthamoeba’s life cycle.

En la paciente, el diagnóstico se retrasó debido

a que al principio se sospechaba de otro tipo de

infección. En la exploración física inicial se observó

úlcera corneal, celulitis y conjuntivitis. Se le pautó

tobramicina y amoxicilina-clavulánico. Al día siguiente,

se observó úlcera central de aspecto “dendritiforme”,

lesión sugerente de infección por virus herpes, por lo

que se le pautó tratamiento con aciclovir. Al mes

acudió a consulta por persistencia del dolor y ojo rojo.

En la exploración se observó edema corneal central

con “infiltrado en semiluna”, signo característico de

infección por amebas. Se cambió tratamiento a

ceftazidima, vancomicina y colirio de clorhexidina

0,02%. Por primera vez en todo el proceso se envió

una muestra al Laboratorio. Se analizó el líquido de

lavado de las lentes de contacto en el Laboratorio de

In this patient, the diagnosis was delayed

because another infection was suspected at the

beginning. Physical examination showed corneal

ulcer, cellulitis and conjunctivitis. Tobramycin and

amoxicilin-clavulanate was prescribed to the patient.

Next day, the examination showed “dendritic central

ulcer” what is associated with herpes simplex virus

infection, so acyclovir was prescribed. A month later,

she went to the hospital because she had red eye and

pain. In exploration was observed a central corneal

edema with “ring-like” infiltrate, typical sign of infection

by amoeba. So the treatment was changed to

ceftazidime and vancomycin eye drops and

chlorhexidine 0,02% eyewash. The first sample sent to

the Laboratory was the washing liquid of contact lens.




Microbiología, observándose abundantes formas

quísticas de Acanthamoeba spp. que confirmaban el

diagnóstico. Se comenzó tratamiento con isetionato

de propamidina al 0,1%. La evolución no fue buena,

sufrió sobreinfecciones por hongos y bacterias, por lo

que, finalmente, se le realizó trasplante corneal, el

cual fue llevado a cabo con éxito.

Las bacterias son las principales responsables

de las infecciones derivadas del uso de lentes de

contacto. Un pequeño porcentaje de las queratitis que

producen el uso de lentillas se debe a infecciones por

hongos o protozoos4. Acanthamoeba spp. es una

familia de protozoos que en el ojo puede provocar

infección grave por queratitis con riesgo significativo

de pérdida de visión, resultado de las úlceras y

cicatrices que provocan en la córnea. La queratitis

amebiana se caracteriza por ser dolorosa e

invalidante. Los portadores de lentes de contacto son

una población con especial riesgo de padecerla, sobre

todo si se usan soluciones salinas caseras o agua

corriente para su lavado5.

Es una enfermedad difícil de diagnosticar

y tratar, ya que las manifestaciones clínicas se

confunden frecuentemente con las de queratitis

herpética, fúngica o micobacteriana. Antes de

disponer de tratamientos eficaces, la queratitis por

Acanthamoeba spp. en muchos casos derivaba en

extirpar el globo ocular. En la actualidad, esto es poco

frecuente6.

Como tratamiento de primera línea se utilizan

las diaminas y biguanidas, que son de los pocos

agentes químicos que tiene efecto sobre los quistes

de Acanthamoeba spp. Dentro de las diaminas

disponibles están el isetionato de propamidina y la

hexamidina, que afectan a la permeabilidad y

desnaturalizan enzimas y proteínas en el citoplasma.

Sin embargo, a diferencia de las biguanidas, el

Microbiology Laboratory reported cystics forms

in this sample, so Acanthamoeba spp. infection was

confirmed. Although patient was treated with

propamidine isethionate 0,1%, she had a negative

evolution, with several bacterial and fungal

superinfections. She was requested for a corneal

transplantation, with a successful result.

The bacteria are largely responsible for the

majority of contact lenses-related infections. A smaller

subset of contact lenses-related keratitis is because of

fungal or protozoal infections4. Acanthamoeba spp.

belong to a protozoal family that is a causative agent

of keratitis. Acanthamoeba keratitis is a severe eye

infection with a significant risk of vision loss due to

corneal ulceration and scarring. Wearing contact

lenses is a risk factor, especially if people use

homemade saline or tap water5.

Acanthamoeba keratitis is an invalidating and

painful disease. It’s important differential diagnosis

against herpetic, fungal or mycobacterial keratitis.

Before the appearance of optical treatments, it was

necessary the eye’s removal in some cases to resolve

the infection. Nowadays this practice is infrequent6.

Treatment is usually started with dual agents

such as diamidines (propamidine isethionate or

hexamidine, that affect the permeability and destroy

cytoplasmic enzymes and proteins) and biguanides,

because are chemical agents effectives to eliminate

Acanthamoeba spp. cysts. However, a long treatment

with diamidines could be toxic7.

When acanthamoeba keratitis is suspected or

patient has a negative evolution, it’s recommended to

order, as soon as possible, analyze the corneal

scraping or the washing liquid of contact lenses by

Microbiology Laboratory. Early diagnosis is very

important to avoid an unfavorably evolution.




tratamiento prolongado con diamidinas puede llegar a

ser tóxico7.

Ante la sospecha de queratitis por

Acanthamoeba spp. o ante una queratitis de evolución

tórpida, es conveniente solicitar lo antes posible el

análisis de muestras al laboratorio de Microbiología

Clínica, ya sea en muestras de raspado corneal o en

el líquido usado para la limpieza de lentillas. Como

hemos podido observar en el caso clínico descrito, un

retraso en el diagnóstico puede tener consecuencias

fatales para el paciente.


1. J. Castrillón, L. Orozco. Acanthamoeba spp. Como parásitos patógenos y oportunistas. Rev Chilena

Infectol. 2013; 30(2):147-155. http://www.scielo.cl/pdf/rci/v30n2/art05.pdf

2. D. Oddó. Infecciones por amebas de vida libre. Comentarios históricos, taxonomía y nomenclatura,

protozoología y cuadros anatomo-clínicos. Rev Chil Infect 2006; 23(3):200-214.

http://www.scielo.cl/pdf/rci/v23n3/art02.pdf

3. J. Pérez-Irezábal, I. Martínez, P. Isasa, J. Barrón. Queratitis por Acanthamoeba. Enferm Infecc Microbiol

Clin. 2006; 24: 46-52. http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-

28-articulo-queratitis-por-acanthamoeba-13094278

4. N. Cheung, P. Nagra, K. Hammersmith. Emerging trends in contact lens-related infections. Curr Opin

Ophthalmol. 2016; 27:1-6.

5. R. Siddiqui, Y. Aqeel, N A. Khan. The use of dimethyl sulfoxide in contact lens disinfectants is a potential

preventative strategy against contracting Acanthamoeba keratitis. Contact lens and anterior eye. 2016;

article in press.

6. J.A. Abreu, J.J. Aguilar, F.J. Rodríguez, V.T. Díaz, R. González. A. Queratitis por acanthamoeba en

pacientes no portador de lentes de contacto. Arch. Soc. Canar. Oftal. 2003; 14:77-80.

http://sociedadcanariadeoftalmologia.com/wp-content/revista/revista-14/14sco13.pdf

7. F. Guisasola. Queratitis por Acanthamoeba. Análisis de casos en el Hospital Oftalmológico Santa Lucía

(2009-2010). Arch Oftal B Aires 2011; 82:25-29.

www.sao.org.ar/files/archivosoftalmologia/...82.../05queratitis_por_acanthamoeba.pdf



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http://www.sao.org.ar/files/archivosoftalmologia/...82.../05queratitis_por_acanthamoeba.pdf

Laboratory Medicine at a glance Medicina de Laboratorio de un vistazo

VOL.4 ISSN 2444-8699


DIAGNOSIS OF LOIASIS IN A GIRL WITH EOSINOPHILIA

Figura 1. Visión de la filaria en extensión del sedimento de sangre periférica teñida con May grünwald-Giemsa. Figure 1. Image of the filaria in peripheral blood sediment with May Grünwald-Giemsa quick stain.

Presentamos el caso clínico de una niña de 9 años de edad remitida a urgencias desde la consulta de su pediatra por molestias oculares. Como antecedentes familiares presenta que su madre fue diagnosticada de filariasis por Loa loa en su embarazo, aunque no refiere seguimiento posterior. El oftalmólogo de guardia no detecta ningún hallazgo patológico a nivel ocular.

Se solicita analítica al laboratorio de urgencias (bioquimica básica y hemograma). En el hemograma

We report a case of a 9-year-old girl referred to the emergency department from her primary care pediatrician for eye discomfort. Her mother was diagnosed of filariasis by Loa loa in her pregnancy, although she did not report follow-up. The ophthalmologist does not detect any pathological findings at ocular level.

Basic biochemistry and hemogram were required for emergency laboratory. Eosinophilia (1.18 x 103/µL) called attention to laboratory, and after



CREACIÓN DE LIBRERÍAS MEDIANTE AMPLIFICACIÓN DEL ARNr 16S PARA CARACTERIZACIÓN DE LA MICROBIOTA


LÍNEA EDITORIAL: NUEVA ETAPA, NUEVOS HORIZONTES



Autores Badr Lakbakbi1 Amparo Alba Redondo1 Mª Jesús Castaño Arocas2

Centro 1Servicio de Análisis Clínicos. 2Servicio de Microbiología. Hospital Universitario y Politécnico La Fe



VOLUMEN 4

DIAGNOSTICO DE LOIASIS EN NIÑA CON EOSINOFILIA 20


se evidencia una eosinofilia (1.18 x 103/µL) que llama la atención al analista clínico de guardia, y tras revisión de la historia clínica y con los antecedentes maternos, decide realizar una búsqueda del parásito Loa loa. Realiza una visión del sedimento de sangre periférica al microscopio óptico y una extensión con May Grünwald-Giemsa rápida (recogida del fondo del tubo tras centrifugación), ofreciendo las imágenes y el video que se adjuntan. Se avisa al oftalmólogo de guardia con los resultados, que realiza exploración ocular en quirófano sin conseguir visualizarse el parásito. Se solicita estudio parasitológico y DNA en plasma que a los 2 días confirma la presencia de 2000 microfilarias/mL en suero y DNA por reacción en cadena de la polimerasa positivo para Loa loa.

Las filariasis son enfermedades causadas por gusanos redondos (nematodos), que pertenecen a la familia Filaroidea. La afectación de la conjuntiva ocular es característica de Loa loa. Se considera que la filariais por Loa loa es endémica de países del centro y oeste de Africa, y por tanto no suelen afectar, salvo casos importados, a la población de países desarrollados

El ciclo vital del parásito comienza por una picadura de la mosca tabánida del género Chrysops que introduce la larva en el huésped. Esta larva tarda 6-12 meses en poder producir microfilarias y se transforma en gusano adulto en 3 meses. Los gusanos se acantonan en el tejido celular subcutáneo, desde donde migran a distintas localizaciones durante el periodo diurno. Se ha descrito una alta prevalencia de loiasis en mujeres embarazadas de países de Africa Central.

Mucha gente infectada por filariais no presenta síntomas, aunque las manifestaciones más frecuentes son el ojo caliente y el edema de Calabar. El ojo caliente consiste en una inflamación de la

reviewing the medical history and maternal backgroun, decides to perform a search for the Loa loa parasite. He decided to performs a peripheral blood sediment view to optical microscopy and a quick stain with May Grünwald-Giemsa (collecting sample from the bottom of the tube after centrifugation), offering the images and video that are attached. We decided to notify the finding to the ophthalmologist, who performed ocular examination in the quirophan with sedation without being able to visualize the parasite. A parasitological study and DNA in plasma were requested and after 2 days, the presence of 2000 microfilariae/mL in serum and DNA by Loa loa positive polymerase chain reaction were reported.

Filariasis are diseases caused by nematodes, which belong to the Filaroidea family. The involvement of the ocular conjunctiva is characteristic of Loa loa. Loa loa filariasis is considered to be endemic in countries of central and western Africa, and they do not usually affect population of developed countries, except for imported cases.

Life cycle of the parasite begins with a sting of fly genus Chrysops that introduces the larva in the host. This larva takes 6-12 months to be able to produce microfilariae and turns into an adult in 3 months. The worms are confined in the subcutaneous cellular tissue, from where they migrate to different locations during the daytime period. A high prevalence of loiasis has been reported in pregnant women in Central African countries.

Many people infected by filariasis have no symptoms, although the most frequent manifestations are warm eye and the edema of Calabar. The warm eye consists of an inflammation of the ocular conjunctiva that can present edema and itching and it is caused by the passage of the worm through the

VOLUMEN 4



conjuntiva ocular que puede presentar edema y picor y que está ocasionada por el paso del gusano a través de la conjuntiva. El edema de Calabar consiste en un edema del tejido celular subcutáneo por el paso del gusano o a sustancias secretadas por la microfilaria.

En el caso de nuestra paciente no se pudo encontrar el gusano en la conjuntiva porque probablemente ya había migrado, aunque por la eosinofilia y los antecedentes familiares se pensó en buscar el parásito Loa loa en sangre periférica. Se sospecha posible transmisión transplacentaria.

conjunctiva. Calabar edema consists of an edema of the subcutaneous cellular tissue by the passage of the worm or to substances secreted by the microfilariae.

In the case of our patient the worm could not be found in the conjunctiva because it probably had already migrated, although due to eosinophilia and family history we thought to look for the parasite Loa loa in peripheral blood. Transplacental transmission was suspected.

Figuras 2 y 3. Videos en los que se observa el gusano Loa loa con sus característicos movimientos en danza filaria. Figures 2 and 3. Videos of Loa loa warm with characteristic movements filaria dance.

Bibliografía/References: 1. Knopp S, Steinman M, Hatz C, Keiser J, Utzinger J. Nematode infections: filariases. Infect Dis Clin North

Am. 2012;26:359-81. 2. Mombo-Ngoma G, Mackanga JR, Basra A, Capan M, Manego RZ, Adegnika AA et al. Loa loa Infection

in Pregnant Women. Emerg Infect Dis. 2015;21(10):899-901. 3. Burgués-Ceballos A, Marcos MA, March GA, Juberías JR. Loiasis ocular en paciente con

hipereosinofilia crónica. Arch Soc Esp Oftalmol. 2014;89(10):411–413. 4. Cañavate C, Cuadros J, Martínez R, Martín P. El laboratorio de microbiología ante las enfermedades

parasitarias importadas. En: Cercenado E, Canton R eds. Procedimientos en Microbiología Clínica. Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. Madrid : SEIMC; 2009.P.26-31.

VOLUMEN 4



5. Enlace de interés: www.cdc.gov/parasites/loiasis/



VOL.4 ISSN 2444-8699

CADENA DE CUSTODIA PARA EL PROCESAMIENTO DE

ETANOL EN SUERO

CUSTODY FOR THE MEASURING BLOOD ALCOHOL LEVELS






LÍNEA EDITORIAL:




Autores Daniel Párraga García

Jose Manuel Sánchez Zapardiel

Carmela Vargas Calleja

Centro Servicio de Análisis Clínicos.

Hospital Universitario Doce de

Octubre. Madrid



Figura: Mapa de procesos para la determinación de etanol en sangre con cadena de custodia. Figure: Map of processes for the measuring blood alcohol levels with chain of custody

VOLUMEN 4 CADENA DE CUSTODIA PARA EL PROCESAMIENTO DE ETANOL EN

SUERO 23


Las elevadas tasas de consumo de alcohol en

la sociedad actual son responsables de un gran

número de ingresos en las unidades de urgencias

tanto en atención especializada como en consultas

en atención primaria1. Este consumo de alcohol, lejos

de ser solo un importante problema médico para la

salud de los pacientes, puede tener implicaciones

jurídicas en ciertas situaciones.

Medir los niveles de alcoholemia en estos

casos debería de hacerse principalmente en dos

situaciones2:

Paciente con alteración de su nivel de

conciencia y causa incierta.

Accidentes de tráfico, traumatismos u otros

casos en los que tales muestras puedan ser

requeridas como medios de prueba en un

juicio.

La mayor parte de las unidades de urgencias

no tienen protocolos preestablecidos para el correcto

procesamiento de las muestras de etanol en sangre.

El presente trabajo muestra un ejemplo real de un

mapa de procesos (del H.U. Doce de Octubre) donde

se resumen los pasos a seguir para el correcto

análisis de una muestra de etanol de urgencia que

cumpla con los requisitos legales necesarios,

pudiendo dar un resultado legalmente válido que

sirviese como prueba en un juicio (Figura).

En el ejemplo expuesto, los servicios que

participan en el proceso son la Unidad de Politrauma

del Servicio de Medicina Intensiva y la Unidad de

Laboratorio de Urgencias del Servicio de Bioquímica.

El plan comienza con el ingreso de un paciente

donde se plantea realizar la determinación de etanol

en sangre.

The high rate of alcohol consumption in our

society is responsible for a large number of

emergency admissions in both specialized care and

primary care atention1. Alcohol consumption is not

only an important medical problem for patient heath,

but also may have legal implications in certain

situations.

Measuring blood alcohol levels should be

performed mainly in two situations2:

Patients with altered consciousness level of

unknown causes

Patients with injuries related to traffic accidents

or other causes with legal implications.

Most of the Emergency Units do not have pre-

established protocols for the correct determination of

ethanol in blood samples. This study shows an

example of the process map (Fig1) at HU 12 of

October for the correct analysis of ethanol in an

urgency blood sample that accomplish the necessary

legal requirements. This allows giving a legally valid

result that serves as an evidence in a trial.

This is a multidisciplinary work involving both

Polytrauma Unit (Intensive Care Department) and the

Emergency Laboratory Unit (Biochemistry

Department).

The process map starts with the patient

admission, when ethanol determination in blood

samples is proposed. The next steps are detailed

below:

1. Clinicians must consider urgent analysis of

blood alcohol levels in patients who show a

decreased awareness of uncertain

meaning or injuries with possible

prosecution. Once the decision has been

made the petition must be electronically


SUERO 24


A continuación suceden los siguientes pasos:

1. El facultativo debe plantearse la determinación

urgente de etanol si considera que el paciente

puede presentar disminución de conciencia de

significado incierto, accidentes de tráfico o

traumatismos con posible judicialización. Una

vez tomada la decisión debe realizar la

petición electrónica de forma que sus datos

queden registrados en el sistema informático.

2. Enfermería realiza la extracción de la muestra

de sangre. El personal encargado de la

extracción debe estar formado para la correcta

toma de muestra, lo cual implica no usar

ningún derivado de alcohol para limpiar la

zona del cuerpo donde se va a realizar la

extracción, así como mezclar la sangre en

tubos de extracción heparnizados durante un

minuto. Antes de enviar la muestra al

laboratorio debe indentificarla correctamente

con un código de barras y resgistrarla en el

sistema informático, quedando constancia del

responsable de la extracción y la hora en el

mismo., Esto último es muy importante ya que

el etanol se va metabolizando en sangre

periférica, de forma que un retraso en la

recogida de la muestra así como su posterior

análisis podría falsear los resultados2.

3. Llamada telefónica facultativa de la unidad de

politraumatizados a la unidad de laboratorio de

urgencias donde se informa al facultativo del

servicio de bioquímica que se va a enviar una

muestra de suero/plasma para el análisis de

etanol.

4. Recepción de la muestra por parte del

laboratorio de urgencias. El técnico

especialista de laboratorio (T.E.L.) debe

asegurarse que vienen en un sobre precintado

request, so data are recorded in the

computer system.

2. Nurses perform the extraction of the blood

sample. They must follow some

instructions, including not using any alcohol

derivative to clean the extraction area, as

well as mixing the heparinized tubes during

one minute. Before sending the blood

sample to the laboratory, they must

correctly identify it with a barcode and

register it in the computer system, so the

responsible person and time of the

extraction are recorded. Time of the

extraction is very important as ethanol is

metabolized in peripheral blood. A delay in

both the collection of the sample and its

subsequent analysis could alter the

results2.

3. Telephone call from Polytrauma Unit to the

Emergency Laboratory Unit informs the

biochemist specialist that a serum/plasma

sample has being sent for ethanol level

analysis.

4. Laboratory technicians receive the samples

and must ensure that they come in a

sealed envelope and will be delivered to

the biochemist specialist. Every person

involved must fill a form with the following

data: name, identification number, time of

receipt and delivery of the sample and

signature.

5. Blood samples are processed after

validation of the corresponding internal

quality controls by the biochemist

specialist.

6. The biochemist specialist validates the


SUERO 25


y se lo entregará al facultativo de bioquímica

que se encuentre en el momento en el

laboratorio. Se toman los datos de ambos

implicados (nombre, número de identificación,

hora de recepción y entrega de la muestra y

firma).

5. Se procesa la muestra de etanol tras la

validación de los correspondientes controles

internos de calidad. Estos controles deberán

ser validados por el personal facultativo.

6. Finalmente el facultativo valida la prueba en el

sistema informático del laboratorio (S.I.L.). El

informe final se emite en formato digital.

7. Una vez procesada se guardará en una

nevera automatizada donde se garantiza la

custodia de la misma durante 5 días.

Igualmente se recogen los datos del

encargado del análisis de la muestra y de la

persona que guarda la muestra en la nevera.

* Tras este periodo si ningún organismo

debidamente autorizado ha reclamado la muestra

esta se desechará automáticamente por la nevera

robotizada, finalizando la cadena de custodia.

8. Queda registrado en el S.I.L. (Sistema

Informático de Laboratorio) el resultado de la

muestra, la hora de entrada de la muestra al

analizador, la hora de la validación facultativa

y la hora de entrada de la muestra en la

nevera. SI alguien sacase la muestra de la

nevera automatizada esto también quedaría

registrado.

9. Existe un apartado de incidencias donde se

describirá cualquier circunstancia no recogida

en el protocolo, el cual deberá de ir firmado

por el facultativo responsable.

result in the laboratory informatic system

(LIS). The final report is issued in digital

format.

7. After processing the samples, they are

stored in an automated refrigerator, where

custody of the samples is guaranteed for 5

days. Likewise the data of the person who

performed the analysis and the person who

stored the sample in the refrigerator are

collected.

* After this period, if no duly authorized person

claim the blood sample, it will be automatically

discarded by the robotized refrigerator, ending the

chain of custody.

8. Both the result of the sample and the time

when the sample enters the analyzer, is

validated and is stored in the refrigerator

are recorded in the LIS. If someone

removed the sample from the automated

refrigerator, it would be also recorded.

9. Any incidences not described in the

process map must be recorded in the

correspondent section of the form and

signed by the responsible specialist.

10. After filling out the liability form, it is

scanned.

Currently, a project is being developed to

integrate the form in the LIS.

This process map summarizes how to proceed

so the result of ethanol blood levels meets the legal

requirements to be used as evidence in a trial, unlike

other determinations that are exclusive for clinical

use.


SUERO 26


10. Una vez completado el formulario de

responsabilidad, este se digitaliza.

Actualmente se está desarrollando un proyecto

para integrar la forma de cumplimentar el formulario

a través del S.I.L.

Este mapa de procesos recoge de forma

resumida la forma de proceder para que el resultado

de la determinación de etanol en sangre cumpla los

requisitos legales para poder usarse como prueba en

un juicio, a diferencia de otras determinaciones cuya

validez sería exclusiva para uso clínico.


1. Parejo R., Barca I., Julián A., Carrascoso E. Aspectos médico-legales en Urgencias. En: Julián A,

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ale%3Des_ES%26textOnly%3Dfalse%26idMmedia%3D10761&usg=AFQjCNGSMN1vFOBxEwlJWQiEv

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https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=4418118

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LÍNEA EDITORIAL: NUEVA ETAPA, NUEVOS HORIZONTES