Package Inserts - quidel.com02... · VERWENDUNGSZWECK Der quantitative Vitamin D FIA für Sofia ist ein Immunfluoreszenz-basierter Lateral -Flow-Test, der für die quantitative Bestimmung

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Sofia Quantitative Vitamin D FIA Seite 1 von 13

ZUR VERWENDUNG MIT SOFIA

Für den Einsatz in der In-vitro-Diagnostik.

VERWENDUNGSZWECK Der quantitative Vitamin D FIA für Sofia ist ein Immunfluoreszenz-basierter Lateral-Flow-Test, der für die quantitative Bestimmung des Gesamt-25-OH-Vitamin D (25-Hydroxy-Vitamin D) aus Serumproben konzipiert ist. Der quantitative Vitamin D FIA für Sofia ist für die Verwendung als Hilfe bei der Untersuchung des Vitamin D-Mangels gedacht.

ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG Vitamin D ist ein fettlösliches Vitamin, das hilft, die Serumkonzentrationen von Kalzium und Phosphat aufrecht zu erhalten, und das eine wichtige Rolle in der Knochenmineralisierung spielt. Vitamin D erleichtert auch die Modulation des Zellwachstums, die neuromuskuläre Funktion, die Immunfunktion und lindert Entzündungen.1 Der Vitamin D-Mangel wurde entsprechend mit einem erhöhten Risiko für verschiedene Gesundheitsprobleme in Zusammenhang gebracht, einschließlich, aber nicht beschränkt auf, Krebs, Knochenerkrankungen, kardiovaskulärer Krankheiten und Hypertonie.2,3,4,5 Kinder im Alter ab Geburt bis 18 Jahren mit Vitamin D-Mangel können an Rachitis leiden, was zu einer deutlichen Reduktion des Wachstums und der Knochenentwicklung führt, einschließlich eines negativen Einflusses auf Knochendichte und Spitzenknochenmasse.6 Während den Jahren der Pubertät, in denen Wachstumsschübe auftreten, besteht ein erhöhter Bedarf an Vitamin D, um die metabolischen Wachstumsanforderungen zu erfüllen.6

Die Prävalenz des Vitamin D-Mangels bei Menschen ist weltweit hoch. Zu den Hauptursachen eines Vitamin D-Mangels zählen die fehlende direkte Sonnenexposition der Haut ohne Sonnenschutz wie Kleider oder Sonnenschutzmittel, eine beschränkte Anzahl von Nahrungsmitteln, die natürlicherweise Vitamin D enthalten und der Mangel an mit Vitamin D angereicherten Nahrungsmitteln, um den Vitamin D-Bedarf zu decken.2,3

Das Gesamt-25-OH-Vitamin D ist der beste Indikator für den Vitamin D-Status. Es spiegelt das in der Haut produzierte und aus Nahrungs- und Ergänzungsmitteln aufgenommene Vitamin D wider,7 und hat eine verhältnismäßig lange Halbwertszeit von 15 Tagen.8 In der Haut endogen produziertes oder aus Nahrungsquellen aufgenommenes Vitamin D wird in der Leber zu 25-OH-Vitamin D metabolisiert. In den Nieren wird dieses schließlich in seine biologisch aktive Form, 1,25-(OH)2-Vitamin D umgewandelt. Im Gegensatz zu 25-OH-Vitamin D ist das zirkulierende 1,25-(OH)2 kein guter Indikator für den Vitamin D-Status, weil es eine kurze Halbwertszeit von 15 Stunden hat und die Serumkonzentration eng durch das Parathormon, Kalzium und Phosphat reguliert wird.8 Die 1,25(OH)2-Vitamin D-Spiegel sinken typischerweise erst, wenn der Vitamin D-Mangel schwerwiegend ist.9,10 Das Gesamt-25-OH-Vitamin D ist die beste Methode zum Nachweis eines Vitamin D-Mangels; es kann zur Unterstützung bei der Festlegung der vorbeugenden Behandlung und Wiederherstellung des Vitamin D-Spiegels beim Menschen eingesetzt werden.2,3


TESTPRINZIP Der quantitative Vitamin D FIA für Sofia ist ein Immunfluoreszenz-basierter Lateral-Flow-Test zur Verwendung mit Sofia für die schnelle Quantifizierung des Gesamt-25-OH-Vitamin D. Zur Durchführung dieses Tests wird eine Blutprobe vom Patienten entnommen und in Serum verarbeitet. Die Probe wird so behandelt, dass die 25-OH-Vitamin D-Moleküle von den Vitamin D-Bindungsproteinen gelöst werden. Die behandelte Probe wird in die Probenvertiefung der Testkassette gegeben. Die Probe wandert aus der Probenvertiefung durch den Teststreifen. Der Teststreifen enthält verschiedene einzigartige chemische Umgebungen, die ein Fluoreszenzsignal produzieren, das die Konzentration des Gesamt-25-OH-Vitamin D in der Patientenprobe anzeigt. Das Fluoreszenzsignal ist von bloßem Auge nicht zu erkennen und muss mittels Sofia interpretiert werden.

Sofia scannt den Teststreifen und analysiert das Fluoreszenzsignal mithilfe methodenspezifischer Algorithmen. Sofia zeigt dann die Testergebnisse (quantitativer Spiegel des Gesamt-25-OH-Vitamin D) auf dem Bildschirm an oder druckt die Ergebnisse optional auf einem integrierten Drucker aus.

REAGENZIEN UND MATERIALIEN IN DER PACKUNG Testkit (25 Stück): Einzeln verpackte Testkassetten (25) Monoklonales Anti-25-OH-Vitamin D des Schafs Reagenzfläschchen mit 0,6 ml rosafarbener Reagenzlösung (25) Packungsbeilage (1) Kurzanleitung (1) QK-Karte (an der Kit-Schachtel) Druckerpapier (1)

ERFORDERLICHE, JEDOCH NICHT ENTHALTENE MATERIALIEN Sofia Kalibrationskassette (gehört zum Lieferumfang des Sofia-Installationspakets) Sofia Quantitatives Vitamin-D-Kontrollset Kalibrierte Mikropipette – zur Messung von 100 µl und 120 µl Volumina Blutentnahmeröhrchen

WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN Zur In Vitro-Diagnostik. Den Inhalt des Kits nicht nach Ablauf des Verfallsdatums, das außen auf der Packung aufgedruckt ist,

verwenden. Bei der Entnahme, Handhabung, Lagerung und Entsorgung von Patientenproben und dem Inhalt von

benutzten Kits sind entsprechende Vorsichtsmaßnahmen zu befolgen.11 Für die Handhabung von Patientenproben wird die Verwendung von Nitril- oder Latexhandschuhen (oder

gleichwertigen Handschuhen) empfohlen.11 Verwendete Testkassetten nicht wiederverwenden. Die Testkassette muss bis kurz vor ihrer Verwendung im Folienbeutel bleiben und darf erst dann der

Umgebung ausgesetzt werden. Beschädigte Testkassetten bzw. andere Set-Komponenten dürfen nicht verwendet und müssen entsorgt

werden. Um genaue Ergebnisse zu erhalten, müssen die Anweisungen auf der Packungsbeilage befolgt werden. Zur Sicherstellung eines genauen quantitativen Ergebnisses muss eine präzise Messung der Probe

verwendet werden. Zur Messung der Patientenproben oder Kontrollen eine kalibrierte Mikropipette verwenden.


Die Kalibrationskassette muss bei Nichtgebrauch in dem mitgelieferten Schutzbeutel aufbewahrt werden. Falsche oder ungeeignete Probengewinnung, -lagerung und -transport können zu fehlerhaften

Testergebnissen führen. Keine Serumproben verwenden oder testen, die Zeichen einer Hämolyse zeigen. HAMA-Interferenz: Bestimmte Individuen haben Antikörper gegen Mäuseprotein (HAMA), was zu

Interferenzen in Immunassays führen kann, die von der Maus abgeleitete Antikörper verwenden. Nicht auf den Strichcode der Testkassette schreiben. Dies wird vom Sofia dazu verwendet, um die Art des

durchgeführten Tests und die einzelnen Testkassetten zu erkennen, um ein zweites Ablesen der Testkassette durch denselben Sofia zu verhindern.

Da es sich bei dem Nachweisreagenz um eine fluoreszierende Substanz handelt, bilden sich keine sichtbaren Ergebnisse auf dem Teststreifen. Zur Ergebnisauswertung muss Sofia verwendet werden.

Tests müssen in einer Umgebung mit ausreichender Belüftung durchgeführt werden. Behälter und ungebrauchte Inhalte gemäß den staatlichen, bundesstaatlichen und örtlichen behördlichen

Anforderungen entsorgen. Beim Umgang mit den Inhalten dieses Kits geeignete Schutzkleidung, Handschuhe und

Schutzbrille/Gesichtsschutz tragen. Nach Gebrauch Hände gründlich waschen.

AUFBEWAHRUNG UND STABILITÄT DES KITS Das Kit bei Raumtemperatur 15 °C bis 30 °C (59 °F bis 86 °F) und vor direktem Sonnenlicht geschützt aufbewahren. Der Inhalt des Kits ist bis zu dem auf der Schachtel aufgedruckten Verfallsdatum stabil. Nicht einfrieren. QUALITÄTSKONTROLLE Bei Sofia und der Testkassette kommen drei Qualitätskontrolltypen zum Einsatz: Sofia-Kalibrationsprüfung, integrierte Verfahrenskontrollfunktionen und externe Kontrollen.

Sofias Kalibrationsprüfung Hinweis: Hierbei handelt es sich um eine „Kalibrationsprüfung“. Die Kalibrationsprüfung ist eine erforderliche Funktion, die mithilfe einer hierfür vorgesehenen Kalibrationskassette Sofias Optik und die Berechnungssysteme überprüft. Eine Kalibrationskassette gehört zum Lieferumfang des Sofia-Installationspakets.

Wichtig: Zwischen den Tests muss die Kalibrationskassette zum Lichtschutz im mitgelieferten Schutzbeutel aufbewahrt werden.

1. Um die Kalibration des Sofia zu überprüfen, wählen Sie „Kalibration“ aus dem Hauptmenü.


2. Legen Sie gemäß den Aufforderungen die Kalibrationskassette in Sofia ein und schließen Sie das Schubfach. Der Sofia führt automatisch die Kalibrationsprüfung durch, wobei keine Benutzereingaben erforderlich sind.

Der Sofia meldet, wenn die Kalibrationsprüfung abgeschlossen ist. Wählen Sie dann OK, um zum Hauptmenü zurückzukehren.

HINWEIS: Falls die Kalibrationsprüfung nicht erfolgreich ausgeführt werden konnte, benachrichtigen Sie bitte den Laborleiter vor Ort, oder wenden Sie sich telefonisch an den technischen Support von Quidel, Montag bis Freitag zwischen 7 und 17 Uhr Pazifische Zeit: 858.552.1100 (außerhalb der USA); Fax: 858.455.4960; [email protected] (Kundendienst); [email protected] (technischer Support), oder wenden Sie sich an Ihr Vertriebsunternehmen vor Ort.

Integrierte Verfahrenskontrollen Der Teststreifen des quantitativen Vitamin D FIA-Tests für Sofia enthält eingebaute Verfahrenskontrollfunktionen. Bei jeder Testdurchführung scannt Sofia die Kontrollfunktionen des Teststreifens und zeigt die Ergebnisse auf der Anzeige des Sofia an.

Der Hersteller empfiehlt, die Ergebnisse der integrierten Verfahrenskontrollen täglich bei der Durchführung des ersten Tests zu dokumentieren. Diese Dokumentation wird automatisch zusammen mit dem Testergebnis im Sofia protokolliert.

Durch ein gültiges Ergebnis der Verfahrenskontrolle wird bestätigt, dass der Test ordnungsgemäß durchgeführt wurde und die Testkassette voll funktionsfähig war. Die Verfahrenskontrollen werden von Sofia gleichzeitig mit dem Ende des Assays ausgewertet. Wenn die Lösung nicht ordnungsgemäß gewandert ist, zeigt Sofia das Ergebnis als ungültig an. Falls dies geschieht, überprüfen Sie das Verfahren und wiederholen Sie den Test mit einer neuen Testkassette.

Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein ungültiges Ergebnis an.


Externe Qualitätskontrollen Anhand externer Kontrollen sollte nachgewiesen werden, dass die Reagenzien richtig reagieren und der Assay korrekt durchgeführt wurde.

Quidel empfiehlt die Durchführung von Kontrollen: einmal je ungeschulter Bediener einmal je neue Kit-Lieferung – vorausgesetzt, dass jedes einzelne Los der Lieferung getestet wird wie es unter Berücksichtigung Ihrer internen Qualitätskontrollverfahren und im Einklang mit

regionalen und staatlichen Bestimmungen oder Akkreditierungsanforderungen als zusätzlich erforderlich erachtet wird.

Zur Durchführung externer Kontrollen ist das quantitative Vitamin D Kontrollset für Sofia (separat ausgeliefert) erforderlich. Das Kontrollset enthält zwei Fläschchen jeder Kontrolllösung. Die Kontrolllösungen müssen gemäß dem in der Packungsbeilage zum quantitativen Vitamin D Kontrollset für Sofia enthaltenen externen Kontrollverfahren für die Tests vorbereitet werden. Eine Testkassette für jede Kontrolllösung vorbereiten. Zur Durchführung eines Qualitätskontroll-Testlaufs sind zwei Kassetten erforderlich.

Wenn der Qualitätskontrolltest abgeschlossen ist, wird ein quantitativer Wert angezeigt, sowie „bestanden“ oder „fehlgeschlagen“ für jede der durchgeführten Kontrollen.

Keine Patiententests durchführen oder Patiententestergebnisse melden, wenn einer der QK-Tests fehlschlägt. Wiederholen Sie den Test, oder wenden Sie sich an den technischen Support von Quidel, bevor Patientenproben getestet werden.

ENTNAHME UND LAGERUNG VON PROBEN Serum Serum gemäß den Standardverfahren entnehmen und verarbeiten. Polymer-Gel und Silikon sind mit dem quantitativen Vitamin D FIA für Sofia kompatibel. Proben können bei Raumtemperatur für bis zu 10 Stunden, gekühlt (2–8 °C) bis zu 48 Stunden und gefroren für bis zu 24 Stunden aufbewahrt werden. Sicherstellen, dass die Proben Raumtemperatur aufweisen, bevor sie für den Test verwendet werden. Proben, die zuvor gekühlt wurden, durch 10-maliges Umdrehen des Serumfläschchens gut mischen.

TESTVERFAHREN Sicherheitsmaßnahmen Den Folienbeutel mit der Testkassette ERST DANN öffnen, wenn die Probe zum Testen bereit ist. Die Testkassette auf eine saubere und ebene Fläche legen. Quantitative Vitamin D FIA-Tests für Sofia müssen bei Temperaturen zwischen 18 bis 27 °C (65 bis 80 °F) durchgeführt werden und alle Proben müssen vor Beginn des Assays Raumtemperatur aufweisen. Vor dem Gebrauch ist das Verfallsdatum auf jeder einzelnen Testverpackung oder Außenverpackung zu überprüfen. Nach Ablauf des auf dem Etikett aufgedruckten Verfallsdatums darf der Test nicht mehr verwendet werden. 1. Eine kalibrierte Mikropipette mit 100 μl der Serumprobe des Patienten füllen.

Patientenprobe


2. Die Patientenprobe in das Reagenzfläschchen geben.

3. Das Reagenzfläschchen zum Vermischen zweimal umdrehen. Das Reagenzfläschchen kann zum Vermischen auch gevortext werden.

4. Die Probe 5 Minuten lang im Reagenzfläschchen stehen lassen.

Schritte 5 und 6 durchführen, während die Patientenprobe im Reagenzfläschchen steht. Unmittelbar nach der 5-minütigen Inkubation mit Schritt 7 fortfahren.

5. „Test durchführen“ aus dem Sofia Hauptmenü auswählen.

6. Benutzer-ID und Patienten-ID oder Bestellnr. eingeben.

a) Die Benutzer-ID mittels Strichcodescanner einlesen; die Daten können auch über das Tastenfeld manuell eingegeben werden.

b) Patienten-ID oder Bestellnr. mit dem Strichcodescanner einlesen; die Daten können auch über das Tastenfeld manuell eingegeben werden.

c) Auf „Test starten“ drücken; das Schubfach des Sofia öffnet sich automatisch.

HINWEIS: Falls irrtümlich der falsche Strichcode gescannt wird, einfach nochmals scannen unter Verwendung des richtigen Strichcodes. Der vorangegangene wird mit dem neuen Strichcode überschrieben.


7. Sofort nach Abschluss der 5-minütigen Inkubation eine kalibrierte Mikropipette mit 120 µl der behandelten Lösung aus dem Reagenzfläschchen füllen.

8. Den Inhalt der Mikropipette in die Probenvertiefung der Testkassette füllen.

9. Die vorbereitete Testkassette in das Schubfach einlegen. Dann das Schubfach vorsichtig schließen, um die Zeitschaltuhr zu starten. HINWEIS: Der quantitative Vitamin D FIA für Sofia wird, unabhängig vom aktuell gewählten Modus, automatisch im WALK AWAY-Modus durchgeführt, sobald die Testkassette eingelegt und das Schubfach geschlossen wurde.

10. Sofia startet automatisch und zeigt den Fortschritt an. Die Testergebnisse werden nach ungefähr 5 Minuten am Bildschirm angezeigt. Weitere Informationen unter „Auswertung der Ergebnisse“.

AUSWERTUNG DER ERGEBNISSE Nach Abschluss des Tests werden die Ergebnisse auf dem Sofia-Bildschirm angezeigt. Die Ergebnisse werden automatisch auf dem integrierten Drucker gedruckt, wenn die entsprechende Option gewählt wurde. Die fluoreszierenden Testlinien sind mit dem bloßen Auge nicht zu erkennen.

Der Sofia-Bildschirm zeigt die Ergebnisse für die Verfahrenskontrolle als „gültig“ oder „ungültig“ an und liefert ein quantitatives Ergebnis für die Bestimmung des Gesamtspiegels von 25-OH-Vitamin D. Wenn die Verfahrenskontrollen „ungültig“ sind, ist die Patientenprobe mit einer neuen Testkassette erneut zu testen.


Quantitative Ergebnisse:

Ungültige Ergebnisse:

EINSCHRÄNKUNGEN Die Nichtbefolgung des Testverfahrens kann die Testleistung stark beeinflussen bzw. das Testergebnis

ungültig machen. Wenn keine präzise Messung der Patientenprobe verwendet wird, kann kein genaues Ergebnis erzielt

werden.

Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein ungültiges Ergebnis an. HINWEIS: Wenn der Test „ungültig“ ist, muss die Patientenprobe mit einer neuen Testkassette erneut getestet werden.

Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein gültiges quantitatives Ergebnis.

Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein Ergebnis, das unterhalb des quantitativen Bereichs des Assays liegt.

Zum Beispiel: Dieser Bildschirm zeigt ein Ergebnis, das oberhalb des quantitativen Bereichs des Assays liegt.


ERWARTETE WERTE Insgesamt wurden 332 Serumproben von offensichtlich gesunden Personen im Alter von 18 bis 79 Jahren gesammelt. 53,6 % der Teilnehmer waren männlich, 46,4 % weiblich, 32 % der Teilnehmer waren dunkler Hautfarbe. Die Proben wurden im Spätsommer/Herbst und im Winter (ungefähr 55 % Sommer/Herbst und 45 % Winter) aus drei unterschiedlichen Regionen der USA gesammelt, um ein breites Spektrum von UV-Lichtexposition in der Zielpopulation abzubilden. Die Proben wurden mit Sofia analysiert. Der Referenzbereich der Gesamtpopulation lag bei 6,1 – 68,1 ng/ml, berechnet mit einem 95 % Referenzintervall (2,5-te bis 97,5-te Perzentile).

LEISTUNGSCHARAKTERISTIKA Genauigkeit Die Genauigkeit des quantitativen Vitamin D FIA für Sofia wurde an einem internen Standort überprüft. Zwei auf zwei (2) Vitamin D-Spiegel (~10 und ~20 ng/ml) ausgerichtete humane Serumpools wurden mit drei (3) unterschiedlichen Kassetten-Chargen getestet. Die Tests fanden an vier (4) aufeinander folgenden Tagen statt.

Berechnet wurden die Varianzkomponenten zwischen den Tagen, zwischen den Kassetten-Chargen, innerhalb der Kassetten-Chargen sowie die Gesamtgenauigkeit. Die Ergebnisse sind nachfolgend in Tabelle 1 zusammengefasst.

Tabelle 1. Genauigkeit Sofia Vitamin D FIA

Humaner Serumpool mit

Vitamin D-Konzentration

(ng/ml)

N

Zwischen Tagen

Zwischen Kassetten-

Chargen

Innerhalb Kassetten-

Chargen Gesamtgenauigkeit

SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV

12,2 60 0 0 1,46 11,9 1,14 9,3 1,85 15,1 21,2 60 0 0 1,82 8,6 1,68 8 2,48 11,7

Linearität Der lineare Bereich des quantitativen Vitamin D FIA für Sofia wurde zwischen 10 und 100 ng/ml nachgewiesen.

Methodenvergleich Klinische Leistungsfähigkeit Sofia vs LC-MS/MS Referenzmethode Insgesamt 104 humane Serumproben aus dem CDC, die mit der LC-MS/MS Referenzmethode der CDC geprüft worden waren, wurden an einem internen Standort über drei (3) Tage und durch drei (3) Bediener getestet. Für jede einzelne Probe wurde von jedem Bediener ein quantitatives Ergebnis in ng/ml erzielt, was drei Replikaten pro Probe entspricht. Für die Methodenvergleichsanalyse wurde der Durchschnitt jeder Probe verwendet. Die Passing-Bablok-Regression ergab einen Korrelationskoeffizienten (R) von 0,908, eine Steigung von 1,02 und einen y-Schnittpunkt von -1,82 (siehe Tabelle 2 und Abbildung 1).

Tabelle 2. Korrelationszusammenfassung Sofia vs. CDC LC-MS Vitamin D Assay

Parameter Ergebnis Steigung (95 % CI) 1,02 (0,917 bis 1,13)

y-Schnittpunkt (95 % CI) -1,82 (-4,84 – 1,10) R (95 % CI) 0,908 (0,867 bis 0,937)

Wertebereich 11,7 – 99,8 ng/ml


Abbildung 1. Passing-Bablok Regressionsanalyse von Sofia vs. CDC LC-MS/MS Vitamin D Werte (ng/ml). In die von der CDC zur Verfügung gestellten Gesamtwerte waren die 3-Epi-25(OH)D3-Konzentrationen

(ng/ml) mit eingeschlossen.

Störsubstanzen Die folgenden Substanzen (Tabelle 3) zeigen bei den folgenden Konzentrationen keine Interferenz mit dem quantitativen Vitamin D FIA für Sofia (bestimmt durch Bias zwischen bestückten und nicht bestückten Proben ≤10%).

Tabelle 3. Störsubstanzen

Störsubstanz Geprüfte Konzentration Konjugiertes Bilirubin 5 mg/dl

Unkonjugiertes Bilirubin 15 mg/dl Biotin 1 µg/ml

Cholesterol 500 mg/dl Hämoglobin 90 mg/dl

IgG/Gesamtprotein 9 g/dl Triglyzeride 500 mg/dl

Rheumafaktor 480 IU/ml

25-O

H-Vi

tam

in D

(ng/

m) S

ofia

FIA

Pearson’s r=0,908

25-OH-Vitamin D (ng/ml) CDC LC-MS/MS

Passing Bablok Regressions-Fit (n=104) -1,82 + 1,02 * 25-OH-Vitamin D (ng/ml) CDC LC-MS/MS Übereinstimmung


Kreuzreaktivität Die Kreuzreaktivität wurde bei zwei (2) Konzentrationen geprüft. Die folgenden Substanzen zeigen bei der in Tabelle 4 angegebenen Konzentration im Vitamin D FIA-Test für Sofia keine Kreuzreaktivität (≤15 %). Vitamin D2, Vitamin D3, 24,25 (OH)2 Vitamin D2 und 24,25 (OH)2 Vitamin D3.

Tabelle 4. Substanzen, die im Vitamin D-Test für Sofia keine Kreuzreaktivität zeigen

Substanz Konz. (%) % Kreuzreaktivität Niedrige Probe

% Kreuzreaktivität hohe Probe

Vitamin D2 (Ergocalciferol) 500 ng/ml 0,2 -0,3 Vitamin D3 (Cholecalciferol) 500 ng/ml -0,1 -0,3

24,25 (OH)2 Vitamin D2 20 ng/ml 5,4 1,0 24,25 (OH)2 Vitamin D3 20 ng/ml -0,1 -13,9

Die folgenden Substanzen zeigen in der in Tabelle 5 angegebenen Konzentration eine Kreuzreaktivität: 25(OH) Vitamin D2, 25(OH) Vitamin D3, 1,25 (OH)2 Vitamin D2, 1,25 (OH)2 Vitamin D3, 3-epi-25(OH) Vitamin D2, 3-epi-25(OH) Vitamin D2, 3-epi-25(OH) Vitamin D3 und Paracalcitol.

Tabelle 5. Substanzen, die im Vitamin D-Test für Sofia eine Kreuzreaktivität zeigen

Substanz Konz. (%) % Kreuzreaktivität Niedrige Probe

% Kreuzreaktivität Hohe Probe

25(OH) Vitamin D2 30 ng/ml 129,1 97,5 25(OH) Vitamin D3 30 ng/ml 103,2 97,0

1,25 (OH)2 Vitamin D2 20 ng/ml 179,7 174,1 1,25 (OH)2 Vitamin D3 20 ng/ml 97,7 88,8

3-epi-25(OH) Vitamin D2 20 ng/ml 102,8 71,4 3-epi-25(OH) Vitamin D3 20 ng/ml 74,0 70,5

Paracalcitol 10 ng/ml 161,0 188,6

Empfindlichkeit Die Empfindlichkeit des quantitativen Vitamin D FIA für Sofia wurde mittels des Grenzwerts des Blindwerts (LOB), der Nachweisgrenze (LOD) und der unteren Quantifizierungsgrenze (LLOQ) bestimmt. Der LOB beträgt 3,1 ng/ml. Die LOD wurde, basierend auf 300 Bestimmungen mit 5 Proben mit niedrigen Spiegeln auf 5,2 ng/ml festgelegt. Die LLOQ wurde mit 9,9 ng/ml berechnet. Der prozentuale Gesamtfehler bei der LLOQ betrug ≤45 %, die beobachtete Ungenauigkeit (% CV) lag bei <20 %. Der Messbereich des quantitativen Vitamin D FIA für Sofia wurde zwischen 10 ng/ml und 100 ng/ml festgelegt.

HILFE Falls Sie Fragen zur Verwendung dieses Produkts haben oder ein Testsystemproblem melden möchten, wenden Sie sich bitte an den technischen Support von Quidel unter 800.874.1517 (in den USA) oder 858.552.1100, Montag bis Freitag, 7 bis 17 Uhr pazifische Zeit. Falls Sie sich außerhalb der USA befinden, kontaktieren Sie Ihren lokalen Händler oder [email protected]. Testsystemprobleme können ferner der FDA über das MedWatch-Programm gemeldet werden (Tel.: 800.FDA.1088; fax: 800.FDA.0178; http://www.fda.gov/medwatch). LITERATUR 1. NIH factsheet , http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/ 2. Holick M.F., Vitamin D deficiency: a worldwide problem with health consequences, Am J Clin Nutr

2008;87(suppl):1080S–6S.

http://www.fda.gov/medwatch

http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/


3. Holick M.F., High Prevalence of Vitamin D Inadequacy and Implications for Health, Mayo Clin Proc., March 2006;81(3):353-373

4. Pilz S, Vitamin D, cardiovascular disease and mortality, Clin Endocrinol (Oxf). 2011 Nov;75(5):575-84. 5. Kienreich K, Vitamin D, arterial hypertension & cerebrovascular disease, Indian J Med Res. 2013 April;

137(4): 669–679. 6. Holick MF, Binkley NC, Bischoff-Ferrari HA, Gordon CM, Hanley DA, Heaney RP, Murad MH, Weaver CM,

Endocrine Society. Evaluation, treatment, and prevention of vitamin D deficiency: an Endocrine Society clinical practice guideline. J Clin Endocrinol Metab. 2011 Jul;96(7):1911-30.

7. Institute of Medicine (IOM), Food and Nutrition Board. Dietary Reference Intakes for Calcium and Vitamin D. Washington, DC: National Academy Press (2011).

8. Jones G. Pharmacokinetics of vitamin D toxicity. Am J Clin Nutr 2008;88:582S-6S. 9. Cranney C, Horsely T, O’Donnell S, Weiler H, Ooi D, Atkinson S, et al. Effectiveness and safety of vitamin D.

Evidence Report/Technology Assessment No. 158 prepared by the University of Ottawa Evidence-based Practice Center under Contract No. 290-02.0021. AHRQ Publication No. 07-E013. Rockville, MD: Agency for Healthcare Research and Quality, 2007.

10. Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357:266-81. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th Edition. U.S. Department of Health and Human

Services, CDC, NIH, Washington, DC (2007).

20282 Sofia Quantitative Vitamin D FIA – 25 Tests

MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Deutschland

Quidel Corporation 10165 McKellar Court San Diego, CA 92121 USA quidel.com

1282220DE00 (02/19)

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Kienreich%20K%5Bauth%5D


Sofia Quantitative Vitamin D FIA Pagina 1 di 13

PER L’USO CON L’ANALIZZATORE SOFIA

Per uso diagnostico in vitro.

USO PREVISTO Il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia è un dosaggio a flusso laterale basato su immunofluorescenza concepito per il rilevamento quantitativo della 25-OH vitamina D (25-idrossi-vitamina D) totale in campioni di siero. Il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia è previsto per l’uso come ausilio nella valutazione della sufficienza di vitamina D.

RIASSUNTO E SPIEGAZIONE La vitamina D è una vitamina liposolubile che contribuisce al mantenimento delle concentrazioni sieriche di calcio e fosfato e svolge un ruolo importante nella mineralizzazione ossea. La vitamina D facilita inoltre la modulazione della crescita cellulare, la funzione neuromuscolare, la funzione immunitaria e allevia l’infiammazione.1 Di conseguenza, la carenza di vitamina D è stata correlata a un maggior rischio di diverse patologie, tra cui, fra gli altri, tumori, patologie ossee, patologie cardiovascolari e ipertensione.2,3,4,5 I bambini di età pari o inferiore a 18 anni con carenza di vitamina D possono andare incontro a rachitismo con la conseguente marcata diminuzione della crescita e dello sviluppo osseo, compreso un impatto negativo sia sulla densità, sia sulla massa ossea di picco.6 Durante gli anni della pubertà adolescenziale, in cui si verificano rapidi scatti di crescita, c'è un notevole aumento della necessità di vitamina D per mantenere il fabbisogno metabolico per la crescita.6

La prevalenza di insufficienza di vitamina D negli esseri umani in tutto il mondo è elevata. Le cause principali dell’insufficienza di vitamina D includono la mancanza di esposizione diretta della pelle alla luce del sole senza l’uso di protezioni come indumenti o crema solare, il numero limitato di alimenti che contengono naturalmente la vitamina D, e l’inadeguatezza degli alimenti arricchiti con vitamina D a soddisfare il relativo fabbisogno.2,3

La 25-OH vitamina D totale è il miglior indicatore dello stato della vitamina D. Rispecchia la vitamina D prodotta per via cutanea, ottenuta da alimenti e integratori,7 e ha un’emivita abbastanza lunga di 15 giorni.8 La vitamina D endogena prodotta nella pelle o ottenuta da fonti dietetiche viene metabolizzata nel fegato in 25-OH vitamina D. Infine, viene convertita nei reni nella sua forma biologicamente attiva, 1,25-(OH)2 vitamina D. A differenza della 25-OH vitamina D, la 1,25-(OH)2 vitamina D circolante non è un buon indicatore dello stato della vitamina D perché ha un’emivita molto breve (15 ore) e le concentrazioni nel siero dipendono strettamente dalla regolazione attuata dall’ormone paratiroideo, dal calcio e dal fosfato.8 I livelli di 1,25 (OH)2 vitamina D non diminuiscono solitamente fino a quando la carenza di vitamina D è grave.9,10 La 25-OH vitamina D totale è il metodo migliore per determinare la sufficienza di vitamina D e, pertanto, può essere impiegata per facilitare la determinazione del trattamento per la prevenzione e il ripristino dei livelli di vitamina D negli esseri umani.2,3


PRINCIPIO DEL TEST Il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia è un dosaggio a flusso laterale basato su immunofluorescenza concepito per l’uso con Sofia per il rilevamento quantitativo rapido della 25-OH vitamina D totale. Per eseguire il test, viene prelevato dal paziente un campione di sangue da cui si ottiene il siero. Il campione viene trattato in modo che le molecole di 25-OH vitamina D vengono liberate dalle proteine che si legano alla vitamina D. Il campione trattato viene posto nel pozzetto per campioni della cassetta di test. Dal pozzetto di campione, il campione migra attraverso la striscia di test. La striscia di test contiene diversi ambienti chimici unici che producono un segnale fluorescente indicativo della concentrazione della 25-OH vitamina D totale nel campione del paziente. Il segnale fluorescente non è visibile a occhio nudo e va interpretato per mezzo di Sofia.

L’analizzatore Sofia esegue quindi la scansione della striscia di test e analizza il segnale fluorescente utilizzando algoritmi specifici del metodo. Sofia mostra infine il risultato del test (livello quantitativo di 25-OH vitamina D totale) sullo schermo e consente, facoltativamente, di stamparlo su una stampante integrata.

REAGENTI E MATERIALI FORNITI Kit per 25 test: Cassette di test confezionate singolarmente (25): anticorpi monoclonali di pecora anti-25-OH vitamina D Flaconi di reagente contenenti 0,6 ml di soluzione di reagente rosa (25) Foglietto illustrativo (1) Guida rapida di riferimento (1) Scheda CQ (sulla scatola del kit) Carta per stampante (1)

MATERIALI NECESSARI MA NON INCLUSI NEL KIT Analizzatore Sofia Cassetta di calibrazione (fornita con il pacchetto di installazione dell’analizzatore Sofia) Set di controllo per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia Micropipetta calibrata – per la misurazione di volumi da 100 µl e 120 µl Provette per prelievo di sangue

AVVERTENZE E PRECAUZIONI Per uso diagnostico in vitro. Non usare il contenuto del kit oltre la data di scadenza stampata sull’esterno della confezione. Adottare le dovute precauzioni durante il prelievo, il trattamento, la conservazione e lo smaltimento dei

campioni dei pazienti e del contenuto dei kit usati.11 Si raccomanda l’uso di guanti di nitrile o lattice (o equivalenti) per manipolare i campioni dei pazienti.11 Non riutilizzare le cassette di test usate. Aprire il sacchetto laminato della cassetta di test, esponendola all’ambiente, soltanto al momento dell’uso. Smaltire e non utilizzare la cassetta di test o altri componenti del kit qualora danneggiati. Attenersi alle istruzioni del foglietto illustrativo per ottenere risultati accurati. Per assicurare un risultato quantitativo accurato è necessario fare uso di un campione misurato con

precisione. Fare uso di una micropipetta calibrata per misurare i campioni dei pazienti o i controlli. La cassetta di calibrazione va conservata nell’apposito sacchetto fornito fra un utilizzo e l’altro. Il prelievo, la conservazione e il trasporto non corretti o inadeguati dei campioni possono causare risultati

dei test errati. Non utilizzare o analizzare campioni di siero che mostrino segni di emolisi.


Interferenza HAMA: alcuni individui hanno anticorpi umani antimurini (HAMA), che possono causare interferenze nei dosaggi immunologici che impiegano anticorpi di origine murina.

Non scrivere sul codice a barre della cassetta di test. Esso viene utilizzato da Sofia per identificare il tipo di test in esecuzione e la singola cassetta di test al fine di evitare che l’analizzatore la legga una seconda volta.

Poiché il reagente di rilevamento è un composto fluorescente, non si otterranno risultati visibili sulla striscia di test. Per l’interpretazione dei risultati è necessario utilizzare l’analizzatore Sofia.

Eseguire il test in un locale adeguatamente aerato. Smaltire i contenitori e i contenuti non utilizzati in conformità con la normativa locale, regionale, federale e

statale. Indossare idonei indumenti protettivi, guanti e protezione per gli occhi/il viso quando si manipola il

contenuto del kit. Lavarsi accuratamente le mani dopo la manipolazione.

CONSERVAZIONE E STABILITÀ DEL KIT Conservare il kit a temperatura ambiente a 15-30 °C (59-86 °F), al riparo dalla luce diretta del sole. Il contenuto del kit è stabile fino alla data di scadenza riportata sulla scatola esterna. Non congelare. CONTROLLO QUALITÀ L’analizzatore Sofia e la cassetta di test vengono sottoposti a tre tipi di controllo di qualità: procedura di controllo calibrazione per l’analizzatore Sofia, caratteristiche di controllo procedurale incorporate e controlli esterni.

Procedura di controllo calibrazione dell’analizzatore Sofia Nota: questa è una procedura di “Controllo calibrazione”. La procedura di controllo calibrazione è una funzione necessaria che controlla il gruppo ottico e i sistemi di calcolo dell’analizzatore Sofia con l’ausilio di una cassetta di calibrazione specifica. La cassetta di calibrazione è fornita con il pacchetto di installazione dell’analizzatore Sofia.

Importante: assicurarsi che, dopo ogni utilizzo, la cassetta di calibrazione sia tenuta all’interno dell’apposito sacchetto fornito per proteggerla dall’esposizione alla luce.

1. Per verificare la calibrazione dell’analizzatore Sofia, selezionare “Calibrazione” dal menu principale.

2. Seguendo i messaggi, inserire la cassetta di calibrazione nell’analizzatore Sofia e chiudere il cassetto. L’analizzatore Sofia esegue automaticamente il controllo calibrazione senza intervento dell’utente.


L’analizzatore indica quando il controllo calibrazione è terminato. Selezionare OK per tornare al menu principale.

NOTA: se il controllo calibrazione non viene completato con successo, informare il supervisore sul posto o contattare l’assistenza tecnica Quidel dal lunedì al venerdì, dalle 7:00 alle 17:00, fuso orario del Pacifico, al numero 858.552.1100 (fuori dagli Stati Uniti); fax: 858.455.4960; [email protected] (assistenza clienti); [email protected] (assistenza tecnica); oppure contattare il distributore locale.

Controlli procedurali incorporati La striscia di test del FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia contiene caratteristiche di controllo procedurale incorporate. A ogni analisi, Sofia legge le caratteristiche di controllo della striscia di test e i risultati vengono visualizzati sullo schermo dell’analizzatore Sofia.

Per il controllo giornaliero, il produttore raccomanda di documentare i risultati dei controlli procedurali incorporati per il primo campione analizzato ogni giorno. Questa documentazione viene inoltre registrata automaticamente nell’analizzatore Sofia con il risultato di ogni test.

Un risultato valido ottenuto con i controlli procedurali dimostra che il test si è svolto correttamente e che l’integrità funzionale della cassetta di test è stata mantenuta. I controlli procedurali vengono interpretati dall’analizzatore Sofia in corrispondenza della fine del dosaggio. Se la soluzione non è fluita correttamente, l’analizzatore Sofia indicherà che il risultato è nullo. Ove ciò si verifichi, riesaminare la procedura e ripetere il test con una nuova cassetta di test.

Controlli di qualità esterni Per verificare la performance dei reagenti e la correttezza della procedura di dosaggio, è necessario utilizzare dei controlli esterni.

Quidel consiglia di eseguire i controlli: una volta per ciascun operatore non addestrato;

Esempio: questa schermata mostra un risultato nullo.


una volta per ciascuna nuova consegna di kit, a condizione che venga analizzato ogni lotto diverso incluso nella consegna;

come ritenuto necessario dalle procedure interne di controllo qualità e secondo la normativa nazionale e locale in vigore o i requisiti di accreditamento.

Per l’esecuzione dei controlli esterni è necessario disporre del Set di controllo per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia (fornito a parte). Nel Set di controllo sono inclusi due flaconi di ciascuna soluzione di controllo. Le soluzioni di controllo vanno preparate per l’analisi per mezzo della procedura per Controlli esterni contenuta nel foglietto illustrativo del Set di controllo per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia. Preparare una cassetta di test per ciascuna soluzione di controllo. Per completare un ciclo di test CQ saranno necessarie due cassette.

Al termine del test CQ, verrà visualizzato un valore quantitativo nonché “Riuscito” o “Fallito” per ciascuno dei controlli eseguiti.

Non eseguire test paziente o refertare risultati di test in caso di mancata riuscita di uno o entrambi i test di CQ. Ripetere il test oppure contattare l’assistenza tecnica di Quidel prima di analizzare i campioni dei pazienti.

PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEI CAMPIONI Siero Raccogliere e trattare il siero attenendosi alle procedure standard. Il gel polimerico e il silicone sono compatibili con il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia. I campioni possono essere conservati a temperatura ambiente fino a 10 ore, in frigorifero (2-8 °C) fino a 48 ore o congelati fino a 24 ore. Assicurarsi che i campioni siano a temperatura ambiente prima di farne uso nel test. Nel caso di campioni precedentemente refrigerati, miscelare bene invertendo 10 volte la provetta con il siero. PROCEDURA DI TEST Precauzioni NON aprire il sacchetto laminato che contiene la cassetta di test finché non si è pronti ad analizzare il campione. Collocare la cassetta di test su una superficie pulita e piana.

I test con il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia vanno eseguiti a una temperatura da 18 °C a 27 °C (65 °F - 80 °F) e tutti i campioni vanno conservati a temperatura ambiente prima di iniziare il dosaggio.

Prima dell’uso, controllare la data di scadenza riportata sulla confezione di ciascun test o all’esterno della scatola. Non usare i test oltre la data di scadenza indicata sull’etichetta. 1. Riempire una micropipetta calibrata con 100 μl del campione di siero del

paziente.

Campione del paziente


2. Aggiungere il campione del paziente al flacone con il reagente.

3. Capovolgere 2 volte il flacone di reagente per miscelarlo. È anche possibile vorticare il flacone di reagente per miscelarlo.

4. Lasciare riposare il campione nel flacone del reagente per 5 minuti.

Mentre il campione del paziente si trova nel flacone con il reagente, portare a termine le fasi 5 e 6. Proseguire con la fase 7 subito dopo l’incubazione di 5 minuti.

5. Dal menu principale dell’analizzatore Sofia, selezionare “Esegui test”.

6. Inserire l’ID utente e l’ID paziente oppure il N. ordine.

a) Inserire l’ID utente utilizzando lo scanner di codici a barre o digitando manualmente i dati dal tastierino.

b) Inserire l’ID paziente o il N. ordine utilizzando lo scanner di codici a barre o digitando manualmente i dati dal tastierino.

c) Premere “Avvia test” e il cassetto dell’analizzatore Sofia si aprirà automaticamente.

NOTA: se si scansiona erroneamente il codice a barre errato, è sufficiente eseguire nuovamente la scansione con il codice a barre corretto. La scansione precedente risulta sovrascritta con il nuovo codice a barre.


7. Subito dopo l’incubazione di 5 minuti, riempire una micropipetta calibrata con 120 µl di soluzione trattata del flacone di reagente.

8. Versare il contenuto della micropipetta nel pozzetto per campioni della cassetta di test.

9. Inserire la cassetta di test preparata nel cassetto. Chiudere delicatamente il cassetto per avviare il timer. NOTA: indipendentemente dalla modalità attualmente selezionata, il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia utilizza automaticamente la modalità WALK AWAY dopo l’inserimento della cassetta di test e la chiusura del cassetto.

10. L’analizzatore Sofia si avvia automaticamente e visualizza lo stato di avanzamento. I risultati del test saranno visualizzati sullo schermo in circa 5 minuti. Vedere “Interpretazione dei risultati” per ulteriori informazioni.

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Una volta completato il test, i risultati verranno visualizzati sullo schermo dell’analizzatore Sofia. I risultati possono essere stampati automaticamente con la stampante integrata se è stata selezionata questa opzione. Le linee di test, fluorescenti, non sono visibili a occhio nudo.

Lo schermo dell’analizzatore Sofia visualizzerà i risultati dei controlli procedurali come “validi” o “nulli” e fornirà un risultato quantitativo per la determinazione del livello totale di 25-OH vitamina D. Se il controllo procedurale è “nullo”, ripetere il test del campione del paziente con una nuova cassetta di test.


Risultati quantitativi:

Risultati nulli:

LIMITAZIONI Se la procedura di test non viene seguita come indicato, l’efficacia del test può essere compromessa e/o il

risultato può essere nullo. Se non viene utilizzata una misurazione precisa del campione del paziente, il risultato ottenuto potrebbe

non essere accurato.

Esempio: questa schermata mostra un risultato superiore all’intervallo quantitativo del dosaggio.

Esempio: questa schermata mostra un risultato nullo. NOTA: se il risultato è “nullo”, ripetere il test del campione del paziente con una nuova cassetta di test.

Esempio: questa schermata mostra un risultato quantitativo valido.

Esempio: questa schermata mostra un risultato inferiore all’intervallo quantitativo del dosaggio.


VALORI ATTESI È stato prelevato un totale di 332 campioni di siero da individui apparentemente sani di età compresa tra i 18 e i 79 anni. I soggetti rappresentati erano per il 53,6% di sesso maschile e per il 46,4% di sesso femminile, di cui il 32% di carnagione scura. I campioni sono stati raccolti in tre diverse regioni degli Stati Uniti durante la tarda estate/autunno e l’inverno (circa il 55% durante l’estate/autunno e il 45% durante l’inverno) per rappresentare un ampio spettro di esposizione alla luce UV nella popolazione di uso previsto. I campioni sono stati dosati sull’analizzatore Sofia. L’intervallo di riferimento per la popolazione totale era di 6,1 – 68,1 ng/ml, calcolato per mezzo dell’intervallo di riferimento del 95% (dal 2,5° al 97,5° percentile). CARATTERISTICHE DI PERFORMANCE Precisione La precisione del FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia è stata valutata presso un centro interno. Sono stati analizzati due pool di siero umano mirati a due (2) livelli di vitamina D (~10 e ~20 ng/ml) con tre (3) diversi lotti di cassette. I test sono stati eseguiti nell’arco di quattro (4) giorni consecutivi.

Sono stati calcolati i componenti di varianza tra giorni, tra lotti di cassette e all’interno di un lotto di cassette, nonché la precisione totale. I risultati complessivi sono riepilogati nella Tabella 1 qui sotto.

Tabella 1. Precisione del FIA per la determinazione della vitamina D per Sofia

Pool di siero umano con concentr. di

vitamina D (ng/ml) N

Tra giorni Tra lotti di cassette

All’interno di un lotto di cassette

Precisione totale

DS %CV DS %CV DS %CV DS %CV 12,2 60 0 0 1,46 11,9 1,14 9,3 1,85 15,1 21,2 60 0 0 1,82 8,6 1,68 8 2,48 11,7

Linearità È stato dimostrato che l’intervallo lineare del FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia rientra tra 10 e 100 ng/ml. Comparazione dei metodi Prestazioni cliniche dell’analizzatore Sofia rispetto al metodo di riferimento LC-MS/MS È stato analizzato un totale di 104 campioni di siero umano ottenuti dal CDC, utilizzando il metodo di riferimento CDC LC-MS/MS, in un centro interno nell’arco di tre (3) giorni e con tre (3) operatori. Per ogni singolo campione è stato ottenuto da ogni operatore un risultato quantitativo in ng/ml per un totale di tre duplicati per campione. La media di ogni campione è stata utilizzata nell’analisi di comparazione dei metodi. La regressione di Passing-Bablok ha prodotto un coefficiente di correlazione (R) di 0,908, una pendenza di 1,02 e un’intercetta sull’asse y di -1,82, come mostrato nella Tabella 2 e Figura 1.

Tabella 2. Sintesi della correlazione del dosaggio della vitamina D tra l’analizzatore Sofia e CDC LC-MS

Parametro Risultato Pendenza (IC 95%) 1,02 (da 0,917 a 1,13)

Intercetta sull’asse y (IC 95%) -1,82 (da -4,84 a 1,10) R (IC 95%) 0,908 (da 0,867 a 0,937)

Intervallo dei valori Da 11,7 a 99,8 ng/ml


Figura 1. Analisi di regressione Passing-Bablok per i valori della vitamina D (ng/ml) di Sofia rispetto a CDC LC-MS/MS. Nei valori totali (ng/ml) forniti dal CDC erano incluse concentrazioni di 3-epi-25(OH)D3.

Sostanze interferenti Le seguenti sostanze (Tabella 3) non interferiscono con il FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia alle concentrazioni indicate, come determinato dal bias tra i campioni fortificati e non fortificati ≤10%.

Tabella 3. Sostanze interferenti

Sostanza interferente Concentrazione analizzata Bilirubina coniugata 5 mg/dl

Bilirubina non coniugata 15 mg/dl Biotina 1 µg/ml

Colesterolo 500 mg/dl Emoglobina 90 mg/dl

IgG/Proteine totali 9 g/dl Trigliceridi 500 mg/dl

Fattore reumatoide 480 UI/ml

25-O

H vi

tam

ina

D (n

g/m

l) So

fia F

IA

Regressione con aggiustamento Passing-Bablock (n = 104) -1,82 + 1,02 * 25-OH vitamina D (ng/ml) CDC LC-MS/MS id tità

r di Pearson = 0,908

25-OH vitamina D (ng/ml) CDC LC-MS/MS


Reattività crociata La reattività crociata è stata valutata a due (2) concentrazioni. Le seguenti sostanze non mostrano reattività crociata (≤15%) nel test FIA per la determinazione della vitamina D per Sofia secondo le concentrazioni indicate nella Tabella 4: vitamina D2, vitamina D3, 24,25 (OH)2 vitamina D2 e 24,25 (OH)2 vitamina D3.

Tabella 4. Sostanze che non mostrano reattività crociata nel test della vitamina D per Sofia

Sostanza Concentr. % reattività

crociata campione basso

% reattività crociata campione

alto Vitamina D2 (ergocalciferolo) 500 ng/ml 0,2 -0,3 Vitamina D3 (colecalciferolo) 500 ng/ml -0,1 -0,3

24,25 (OH)2 vitamina D2 20 ng/ml 5,4 1,0 24,25 (OH)2 vitamina D3 20 ng/ml -0,1 -13,9

Le seguenti sostanze evidenziano una reattività crociata alle concentrazioni indicate nella Tabella 5: 25(OH) vitamina D2, 25(OH) vitamina D3, 1,25 (OH)2 vitamina D2, 1,25 (OH)2 vitamina D3, 3-epi-25(OH) vitamina D2, 3-epi-25(OH) vitamina D2, 3-epi-25(OH) vitamina D3 e paracalcitolo.

Tabella 5. Sostanze che mostrano reattività crociata nel test della vitamina D per Sofia

Sostanza Concentr. % reattività

crociata campione basso

% reattività crociata

campione alto 25(OH) vitamina D2 30 ng/ml 129,1 97,5 25(OH) vitamina D3 30 ng/ml 103,2 97,0

1,25 (OH)2 vitamina D2 20 ng/ml 179,7 174,1 1,25 (OH)2 vitamina D3 20 ng/ml 97,7 88,8

3-epi-25(OH) vitamina D2 20 ng/ml 102,8 71,4 3-epi-25(OH) vitamina D3 20 ng/ml 74,0 70,5

Paracalcitolo 10 ng/ml 161,0 188,6

Sensibilità La sensibilità del FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia è stata determinata per mezzo del limite del bianco (LOB), del limite di rilevamento (LOD) e del limite inferiore di quantificazione (LLOQ). L’LOB è stato stabilito pari a 3,1 ng/ml. L’LOD è stato determinato pari a 5,2 ng/ml in base a 300 determinazioni con 5 campioni di basso livello. L’LLOQ è stato calcolato pari a 9,9 ng/ml. All’LLOQ, l’errore totale % era ≤45% e l’imprecisione osservata (%CV) <20%. L’intervallo di misurazione del FIA per la determinazione quantitativa della vitamina D per Sofia è stato stabilito tra 10 ng/ml e 100 ng/ml.

ASSISTENZA In caso di domande sull’uso di questo prodotto o per segnalare un problema con il sistema di test, chiamare l’assistenza tecnica di Quidel al numero 800.874.1517 (se si chiama dagli Stati Uniti) oppure 858.552.1100, da lunedì a venerdì, dalle 7:00 alle 17:00, fuso orario del Pacifico. Negli altri paesi contattare il distributore di zona di Quidel oppure [email protected]. I problemi con il sistema di test possono anche essere segnalati alla FDA attraverso il programma di segnalazione per i prodotti medicali MedWatch (tel.: 800.FDA.1088; fax: 800.FDA.0178; http://www.fda.gov/medwatch).



BIBLIOGRAFIA 1. NIH factsheet, http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/ 2. Holick M.F., Vitamin D deficiency: a worldwide problem with health consequences, Am J Clin Nutr

2008;87(suppl):1080S– 6S. 3. Holick M.F., High Prevalence of Vitamin D Inadequacy and Implications for Health, Mayo Clin Proc., March

2006;81(3):353-373 4. Pilz S, Vitamin D, cardiovascular disease and mortality, Clin Endocrinol (Oxf). Novembre 2011;75(5):575-84. 5. Kienreich K, Vitamin D, arterial hypertension & cerebrovascular disease, Indian J Med Res. aprile 2013;


Endocrine Society. Evaluation, treatment, and prevention of vitamin D deficiency: an Endocrine Society clinical practice guideline. J Clin Endocrinol Metab. luglio 2011;96(7):1911-30.



Evidence Report/Technology Assessment N. 158 preparato dall’Evidence-based Practice Center dell’Università di Ottawa nell’ambito del N. di contratto 290-02.0021. Pubblicazione AHRQ N. 07-E013. Rockville, MD: Agency for Healthcare Research and Quality, 2007.

10. Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357:266-81. 11. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5a edizione. U.S. Department of Health and

Human Services, CDC, NIH, Washington, DC (2007).

20282 Sofia Quantitative Vitamin D FIA – 25 test

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Sofia Quantitative Vitamin D FIA Page 1 sur 13

POUR UNE UTILISATION AVEC L’ANALYSEUR SOFIA

Pour diagnostic in vitro.

UTILISATION PRÉVUE Le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia est un test de chromatographie sur membrane avec immunofluorescence pour déterminer la concentration totale de vitamine D 25-OH (vitamine D 25-hydroxy) dans des échantillons de sérum. Le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia est conçu pour aider à évaluer la suffisance en vitamine D.

RÉSUMÉ ET EXPLICATIONS La vitamine D est une vitamine liposoluble qui aide à maintenir les concentrations de calcium et de phosphate sériques et qui joue un rôle important dans la minéralisation osseuse. La vitamine D facilite également la modulation de la croissance des cellules, la fonction neuromusculaire et soulage l’inflammation.1 Par conséquent, une corrélation entre une carence en vitamine D et un risque accru de divers problèmes de santé a été établie y compris, sans s’y limiter, le cancer, les maladies des os, les maladies cardiovasculaires et l’hypertension.2,3,4,5 Les enfants âgés de 0 à 18 ans qui présentent une carence en vitamine D peuvent être atteints de rachitisme, ce qui provoque une diminution marquée de la croissance et du développement des os, y compris un impact négatif sur la densité et la masse osseuse maximale.6 Pendant la puberté où l’adolescent connaît des poussées de croissance rapides, on observe une augmentation nette du besoin en vitamine D pour répondre aux exigences métaboliques liées à la croissance.6

La prévalence mondiale de l’insuffisance en vitamine D chez l’homme est élevée. Les principales causes de l’insuffisance en vitamine D incluent le manque d’exposition directe de la peau au soleil sans protection solaire comme des vêtements ou un écran solaire, un nombre limité d’aliments contenant naturellement de la vitamine D et l’insuffisance en aliments enrichis en vitamine D pour satisfaire les besoins en vitamine D.2,3

Le taux total de vitamine D 25-OH est le meilleur indicateur du taux de vitamine D. Il reflète la vitamine D produite par la peau, obtenue par les aliments ou les compléments alimentaires,7 et a une demi-vie en circulation assez longue de 15 jours.8 La vitamine D produite de façon endogène dans la peau, ou obtenue par les aliments, est métabolisée en vitamine D 25-OH dans le foie. Finalement, dans les reins, elle est convertie dans sa forme biologiquement active, la vitamine D 1,25-(OH)2. Contrairement à la vitamine D 25-OH, la vitamine D 1,25-(OH)2 qui circule n’est pas un bon indicateur du taux de vitamine D, car elle a une demi-vie courte de 15 heures et les concentrations sériques sont étroitement réglementées par la parathormone, le calcium et le phosphate.8 Les taux de vitamine D 1,25(OH)2 ne diminuent généralement pas avant que la carence en vitamine D soit grave.9,10 La détermination du taux total de vitamine D 25-OH est la meilleure méthode pour déterminer la suffisance en vitamine D et peut donc être utilisé pour aider à choisir un traitement pour la prévention et la restauration des taux adéquats de vitamine D chez les humains.2,3


PRINCIPE DU TEST Le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia est un test d’immunochromatographie sur membrane basé sur l’immunofluorescence qui s’utilise avec l’analyseur Sofia pour la quantification rapide du taux total de vitamine D 25-OH. Pour effectuer le test, un échantillon de sang est prélevé chez le patient, puis transformé en sérum. L’échantillon est traité de façon à ce que des molécules de vitamine D 25-OH soient libérées des protéines de liaison à la vitamine D. L’échantillon traité est versé dans le puits à échantillon de la cassette de test. L’échantillon migre du puits à échantillon à travers la bandelette de test. La bandelette de test contient différents environnements chimiques uniques qui produisent un signal fluorescent indiquant la concentration totale en vitamine D 25-OH dans l’échantillon du patient. Le signal fluorescent n’est pas visible à l’œil nu et doit être interprété avec l’analyseur Sofia.

L’analyseur Sofia scanne ensuite la bandelette de test et analyse le signal fluorescent à l’aide d’algorithmes propres à la méthode. Puis l’analyseur Sofia affiche le résultat du test (taux quantitatif total en vitamine D 25-OH) sur l’écran et imprime les résultats sur l’imprimante intégrée, si désiré.

RÉACTIFS ET MATÉRIEL FOURNIS Kit de 25 tests : Cassettes de test conditionnées individuellement (25) : Anticorps monoclonal de mouton anti vitamine D

25-OH Flacons de réactif, remplis de 0,6 ml de solution de réactif rose (25) Notice (1) Guide de référence rapide (1) Carte CQ (située sur la boîte du kit) Papier pour imprimante (1)

MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI DANS LE KIT Analyseur Sofia Cassette d’étalonnage (fournie avec le pack d’installation de l’analyseur Sofia) Kit de contrôle quantitatif de vitamine D pour Sofia Micropipette étalonnée – pour mesurer les volumes de 100 et 120 µl Tubes de prélèvement sanguin

AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS Pour diagnostic in vitro. Ne pas utiliser le contenu du kit au-delà de la date de péremption imprimée sur l’emballage. Respecter les précautions nécessaires pour le prélèvement, la manipulation, le stockage et l’élimination

des échantillons patients et des éléments usagés du kit.11 Il est recommandé de porter des gants en nitrile ou en latex (ou l’équivalent) lors de la manipulation des

échantillons patients.11 Ne pas réutiliser les cassettes de test. La pochette de la cassette de test ne doit jamais être ouverte par l’utilisateur et exposée au milieu ambiant

avant que la cassette de test ne soit prête à être utilisée immédiatement. Jeter toute cassette de test endommagée ou tout autre composant du kit endommagé sans les utiliser. Pour obtenir des résultats précis, suivre attentivement les instructions de la notice de l’emballage. Une mesure précise de l’échantillon doit être effectuée pour garantir un résultat quantitatif précis. Utiliser

une micropipette étalonnée pour mesurer les échantillons patients ou les contrôles. Entre deux utilisations, la cassette d’étalonnage doit être conservée dans la pochette prévue à cet effet. Le prélèvement, le stockage ou le transport inadéquat ou inadapté d’un échantillon pourrait engendrer

des résultats de test erronés. Ne pas utiliser ou tester un échantillon de sérum qui présente de l’hémolyse.


Interférence avec les AHAM : certaines personnes ont des anticorps humains anti-anticorps murins (AHAM) qui peuvent entraîner des interférences dans les immuno-essais qui utilisent des anticorps dérivés de souris.

Ne pas écrire sur le code à barres de la cassette de test. Il est utilisé par l’analyseur Sofia pour identifier le type de test réalisé et la cassette de test afin d’éviter qu’une cassette de test ne soit lue une seconde fois par le même analyseur Sofia.

Le réactif de détection étant un composé fluorescent, aucun résultat visible ne se formera sur la bandelette de test. L’analyseur Sofia doit être utilisé pour l’interprétation des résultats.

Les tests doivent être réalisés dans une pièce suffisamment ventilée. Mettre les récipients et leur contenu non utilisé au rebut conformément aux réglementations locales et

nationales. Porter des vêtements de protection, des gants et un dispositif de protection des yeux/du visage adéquats

lors de la manipulation du contenu de ce kit. Se laver soigneusement les mains après la manipulation.

STOCKAGE ET STABILITÉ DU KIT Conserver le kit à température ambiante, entre 15 °C et 30 °C (59 °F et 86 °F), à l’abri de la lumière directe du soleil. Le contenu du kit est stable jusqu’à la date de péremption imprimée sur l’emballage. Ne pas congeler.

CONTRÔLE QUALITÉ Il existe trois types de contrôle qualité pour l’analyseur Sofia et la cassette de test : la procédure de contrôle d’étalonnage de l’analyseur Sofia, la fonction de contrôle procédural intégré et les contrôles externes.

Procédure de contrôle d’étalonnage de l’analyseur Sofia Remarque : il s’agit d’une procédure de « contrôle d’étalonnage ». La procédure de contrôle d’étalonnage est une fonction requise qui contrôle les composants optiques et les systèmes de calcul de l’analyseur Sofia à l’aide d’une cassette d’étalonnage spécifique. Une cassette d’étalonnage est livrée avec le pack d’installation de l’analyseur Sofia.

Important : S’assurer que la cassette d’étalonnage est conservée entre chaque utilisation dans la pochette de rangement fournie afin de la protéger des rayons du soleil.

1. Pour contrôler la calibration de l’analyseur Sofia, sélectionner « Étalonnage » dans le menu principal.

2. Après avoir reçu les invites du système, insérer la cassette d’étalonnage dans l’analyseur Sofia et fermer le tiroir. L’analyseur Sofia effectue le contrôle d’étalonnage automatiquement, sans que l’utilisateur ait besoin de faire quoi que ce soit.


L’analyseur Sofia indique quand le contrôle d’étalonnage est terminé. Sélectionner OK pour revenir au menu principal.

REMARQUE : Si le contrôle d’étalonnage échoue, informez le superviseur du centre ou contactez l’assistance technique de Quidel du lundi au vendredi de 7 h 00 à 17 h 00 heure du Pacifique au 858.552.1100 (en dehors des États-Unis), télécopie : 858.455.4960 ; [email protected] (Service client) ; [email protected] (Assistance technique) ; ou contactez votre distributeur local.

Contrôles de procédure intégrés La bandelette du test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia contient des fonctions intégrées de contrôle de procédure. Chaque fois qu’un test est effectué, l’analyseur Sofia scanne les caractéristiques de contrôles de la bandelette de test, et les résultats sont affichés sur l’écran de l’analyseur Sofia.

Le fabricant recommande un contrôle quotidien pour documenter le résultat des contrôles de procédure intégrés pour le premier échantillon testé chaque jour. Cette documentation est également automatiquement consignée dans l’analyseur Sofia avec chaque résultat de test.

Un résultat valide obtenu avec les contrôles de procédure indique que le test s’est déroulé correctement et que l’intégrité fonctionnelle de la cassette de test a été préservée. Les contrôles de procédure sont interprétés par l’analyseur Sofia de façon simultanée à la fin du dosage. Si la solution ne s’est pas écoulée correctement, l’analyseur Sofia indiquera que le résultat est invalide. Si c’est le cas, revoir la procédure et recommencer le test avec une nouvelle cassette de test.

Contrôles qualité externes Des contrôles externes devraient être utilisés pour démontrer que les réactifs et la procédure de test fonctionnent correctement.

Quidel recommande que les contrôles soient effectués : Une fois pour chaque opérateur novice Une fois pour chaque nouvel envoi de kits, à condition que chaque lot reçu dans l’envoi soit testé comme jugé nécessaire par vos procédures de contrôle qualité interne et conformément aux

réglementations locales, nationales et fédérales ou aux exigences d’accréditation

Exemple : Cet écran signale un résultat non valide.


Le kit de contrôle du test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia (fourni séparément) est requis pour effectuer les contrôles externes. Deux flacons de chaque solution de contrôle sont fournis dans le kit de contrôle. Les solutions de contrôle doivent être préparées pour effectuer les tests en utilisant la procédure pour les contrôles externes qui se trouve dans la notice du kit de contrôle quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia. Préparer un cassette de test pour chaque solution de contrôle. Deux cassettes seront nécessaires pour effectuer un test CQ complet.

Une fois le test CQ effectué, une valeur quantitative sera affichée, de même que « Passed » (Réussi) ou « Failed » (Échec) pour chacun de contrôles effectués.

Ne pas effectuer de tests patients ni rapporter de résultats de test de patients si l’un ou l’autre des tests de CQ affichent des résultats au statut « Échec ». Répéter le test ou contacter l'assistance technique de Quidel avant de tester les prélèvements de patients.

PRÉLÈVEMENT ET STOCKAGE D’ÉCHANTILLONS Sérum Prélever et traiter le sérum conformément aux procédures standard. Le gel polymère et le silicone sont compatibles avec le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia. Les échantillons peuvent être conservés à température ambiante pendant 10 heures maximum, gardés au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) pendant 48 heures maximum ou gardés au congélateur pendant un maximum de 24 heures. S’assurer que les échantillons sont à température ambiante avant d’utiliser le test. Pour les échantillons qui ont déjà été réfrigérés, bien mélanger en retournant le tube de sérum à 10 reprises.

PROCÉDURE DE TEST Précautions NE PAS ouvrir la pochette contenant la cassette de test jusqu’à ce que l’échantillon soit prêt à être analysé. Placer la cassette de test sur une surface plane et propre. Le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia doit être effectué entre 18 °C et 27 °C (65 °F et 80 °F) et tous les échantillons doivent être conservés à température ambiante avant de commencer l’essai. Vérifier la date de péremption figurant sur chaque test conditionné individuellement ou sur l’emballage extérieur avant utilisation. N’utiliser aucun test au-delà de la date de péremption figurant sur l’étiquette. 1. Remplir une micropipette étalonnée de 100 μL d’échantillon de sérum du patient.

2. Ajouter l’échantillon patient dans le flacon de réactifs.

Échantillon patient


3. Retourner le flacon de réactifs à deux reprises pour mélanger. Le flacon de réactifs peut également être agité au vortex pour mélanger.

4. Laisser reposer l’échantillon dans le flacon de réactifs pendant 5 minutes.

Pendant que l’échantillon patient repose dans le flacon de réactifs, effectuer les étapes 5 et 6. Passer immédiatement à l’étape 7 après la période d’incubation de 5 minutes.

5. Sélectionner « Run Test » (effectuer un test) depuis le menu principal sur l’analyseur Sofia.

6. Saisir l’identifiant d’utilisateur et l’identifiant patient ou le n° de commande.

a) Saisir l’identifiant d’utilisateur à l’aide du lecteur de code à barres ou saisir manuellement les données à l’aide du clavier.

b) Saisir l’identifiant patient ou le nº de commande à l’aide du lecteur de code à barres ou saisir manuellement les données à l’aide du clavier.

c) Appuyer sur « Start Test » (démarrer le test) et le tiroir de l’analyseur Sofia s’ouvrira automatiquement.

REMARQUE : Si le mauvais code à barres est scanné par erreur, il suffit de scanner à nouveau en utilisant le bon code à barres. Le code à barres précédent sera écrasé par le nouveau code à barres.

7. Immédiatement après l’incubation de 5 minutes, remplir une micropipette étalonnée de 120 µl de la solution traitée du flacon de réactifs.


8. Distribuer le contenu de la micropipette dans le puits de l’échantillon de la cassette de test.

9. Introduire la cassette de test préparée dans le tiroir. Refermer ensuite délicatement le tiroir pour démarrer la minuterie. REMARQUE : Peu importe le mode actuellement sélectionné, le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia sera effectué automatiquement en mode WALK AWAY (différé) une fois que la cassette de test sera insérée et que le tiroir sera fermé.

10. L’analyseur Sofia démarrera automatiquement et affichera la progression. Les résultats du test s’afficheront à l’écran après environ 5 minutes. Consulter « Interprétation des résultats » pour de plus amples informations.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS Lorsque le test est terminé, les résultats seront affichés sur l’écran de l’analyseur Sofia. Les résultats seront imprimés automatiquement sur l’imprimante intégrée si cette option est sélectionnée. Les lignes de test fluorescentes ne sont pas visibles à l’œil nu.

L’écran de l’analyseur Sofia affichera les résultats des contrôles de procédure comme étant « valid » (valides) ou « invalid » (invalides) et fournira un résultat quantitatif pour le taux total de vitamine D 25-OH. Si le contrôle procédural est « invalide », recommencer le test de l’échantillon patient avec une cassette de test neuve.

Résultats quantitatifs :

Exemple : Cet écran affiche un résultat quantitatif valide.


Résultats invalides :

LIMITES Le non-respect de la procédure de test peut nuire aux performances du test et/ou invalider le résultat du

test. Si une mesure précise de l’échantillon patient n’est pas effectuée, un résultat exact ne peut pas être

obtenu.

VALEURS ATTENDUES Un total de 332 échantillons de sérum ont été prélevés auprès d’individus apparemment sains, âgés de 18 à 79 ans. Les sujets représentés étaient 53,6 % des hommes et 46,4 % des femmes dont 32 % avaient la peau foncée. Les échantillons ont été prélevés dans trois différentes régions des États-Unis pendant la fin de l’été/automne et l’hiver (environ 55 % pendant l’été/automne et 45 % pendant l’hiver) pour représenter un large spectre d’exposition aux rayons ultraviolets (UV) dans la population utilisée prévue. Les échantillons ont été analysés sur l’analyseur Sofia.

La plage de référence pour la population totale était de 6,1 à 68,1 ng/ml, calculée en utilisant un intervalle de référence de 95 % (2,5e à 97,5e percentile).

Exemple : Cet écran signale un résultat non valide. REMARQUE : Si le test est invalide, recommencer le test de l’échantillon patient avec une cassette de test neuve.

Exemple : Cet écran affiche un résultat qui est inférieur à la plage quantitative de l’essai.

Exemple : Cet écran affiche un résultat qui est supérieur à la plage quantitative de l’essai.


CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCES Précision La précision du test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia a été évaluée sur un site interne. Deux pools de sérum humain ciblant deux (2) taux de vitamine D (~10 et ~20 ng/ml) ont été testés avec trois (3) différents lots de cassettes. Le test a eu lieu pendant quatre (4) jours consécutifs.

Les composantes de variance pour entre les jours, entre le lot de cassettes, dans le lot de cassettes de même que la précision totale ont été calculées. Les résultats globaux sont résumés dans Tableau 1 ci-dessous.

Tableau 1. Précision du test de vitamine D par FIA pour Sofia

Pool de sérum humain avec

concentration de vitamine D (ng/ml)

N Entre les jours Entre le lot de

cassettes Dans le lot de

cassettes Précision

totale

SD %CV SD %CV SD %CV SD %CV

12,2 60 0 0 1,46 11,9 1,14 9,3 1,85 15,1 21,2 60 0 0 1,82 8,6 1,68 8 2,48 11,7

Linéarité Il a été démontré que la plage linéaire du test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia se situe entre 10 et 100 ng/ml.

Comparaison des méthodes Performance clinique de l’analyseur Sofia versus la méthode de référence LC-MS/MS Au total 104 échantillons de sérum humain obtenus auprès du CDC en utilisant la méthode de référence LC-MS/MS du CDC ont été testés dans un site interne, sur une période de trois (3) jours par trois (3) opérateurs. Pour chaque échantillon individuel, un résultat quantitatif exprimé en ng/ml a été obtenu pour chaque opérateur, donnant lieu à trois copies par échantillon. La moyenne de chaque échantillon a été utilisée dans l’analyse de la comparaison des méthodes. La régression Passing-Bablok a donné comme résultat un coefficient de corrélation (R) de 0,908, une pente de 1,02 et un point d’intersection avec l’axe y de -1,82, comme illustré dans Tableau 2 et Figure 1.

Tableau 2. Les résultats de la comparaison entre Sofia Résumé de la corrélation des essais CDC LC-MS pour la vitamine D

Paramètre Résultat Pente (IC 95 %) 1,02 (0,917 à 1,13)

Point d’intersection avec l’axe y (IC 95 %) -1,82 (-4,84 à 1,10) R (IC 95 %) 0,908 (0,867 à 0,937)

Plage des valeurs 11,7 à 99,8 ng/ml


Figure 1. Analyse de la régression Passing-Bablok de l’analyseur Sofia versus les valeurs de la vitamine D de LC-MS/MS du CDC (ng/ml). Des concentrations 3-Epi-25(OH)D3 étaient incluses dans les valeurs totales

(ng/ml) fournies par le CDC.

Substances interférentes Les substances suivantes (Tableau 3) n’interfèrent pas avec le test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia aux concentrations suivantes, tel que déterminé par le biais observé entre les échantillons enrichis et non enrichis ≤10 %.

Tableau 3. Substances interférentes

Substance interférente Concentration testée Bilirubine conjuguée 5 mg/dl

Bilirubine non conjuguée 15 mg/dl Biotine 1 µg/ml

Cholestérol 500 mg/dl Hémoglobine 90 mg/dl

IgG/protéines totales 9 g/dl Triglycérides 500 mg/dl

Facteur rhumatoïde 480 IU/ml

Ajustement de la régression Passing-Bablok (n = 104) Vitamine D 25-OH (ng/ml) -1,82 + 1,02 * LC-MS/MS du CDC identité

Vita

min

e D

25-O

H (n

g/m

l) te

st d

e vi

tam

ine

D pa

r FIA

pou

r Sof

ia

Pearson’s r = 0,908

Vitamine D 25-OH (ng/mL) LC-MS/MS du CDC


Réactivité Croisée La réactivité croisée a été évaluée pour deux (2) concentrations. Les substances suivantes ne présentent pas de réactivité croisée (≤15 %) dans le test de vitamine D par FIA pour Sofia pour la concentration précisée dans le tableau 4 : vitamine D2, vitamine D3, vitamine D2 24,25 (OH)2 et vitamine D3 24,25 (OH)2.

Tableau 4. Substances qui ne présentent pas de réactivité croisée dans le test de vitamine D pour Sofia

Substance Conc.

% de réactivité croisée

Échantillon de faible

concentration

% de réactivité croisée, échantillon

de concentration élevée

Vitamine D2 (Ergocalciférol) 500 ng/ml 0,2 -0,3 Vitamine D3 (Cholécalciférol) 500 ng/ml -0,1 -0,3

Vitamine D2 24,25 (OH)2 20 ng/ml 5,4 1,0 Vitamine D3 24,25 (OH)2 20 ng/ml -0,1 -13,9

Les substances suivantes présentent une réactivité croisée pour la concentration précisée dans le tableau 5 : Vitamine D2 25(OH) , vitamine D3 25(OH), 1,25 (OH)2 vitamine D2, 1,25 (OH)2 vitamine D3, 3-epi-25(OH) vitamine D2, 3-epi-25(OH) vitamine D2, 3-epi-25(OH) vitamine D3 et Paracalcitol.

Tableau 5. Substances qui présentent une réactivité croisée dans le test de vitamine D pour Sofia

Substance Conc.


Échantillon de faible concentration


Échantillon de concentration élevée

Vitamine D2 25 (OH) 30 ng/ml 129,1 97,5 Vitamine D3 25 (OH) 30 ng/ml 103,2 97,0

Vitamine D2 1,25 (OH)2 20 ng/ml 179,7 174,1 Vitamine D3 1,25 (OH)2 20 ng/ml 97,7 88,8

Vitamine D2 3-epi-25(OH) 20 ng/ml 102,8 71,4 Vitamine D3 3-epi-25(OH) 20 ng/ml 74,0 70,5


Sensibilité La sensibilité du test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia a été déterminée en utilisant la limite du blanc (LB), la limite de détection (LD) et la limite inférieure de quantification (LIQ). La LB a été établie à 3,1 ng/ml. La LD a été déterminée à 5,2 ng/ml d’après 300 déterminations avec 5 échantillons de faible concentration. La LIQ a été calculée à 9,9 ng/ml. À la LIQ, le % d’erreur total était ≤ 45 %, et l’imprécision observée (% CV) était < 20 %. La plage de mesure du test quantitatif de vitamine D par FIA pour Sofia a été établie entre 10 ng/ml et 100 ng/ml.

ASSISTANCE Pour toute question concernant l’utilisation de ce produit ou si vous souhaitez signaler un problème concernant le système de test, veuillez appeler le service technique de Quidel au 800.874.1517 (depuis les États-Unis) ou 858.552.1100, du lundi au vendredi, de 7 h 00 à 17 h 00, heure du Pacifique. Si vous appelez en dehors des États-Unis, contactez votre distributeur local ou [email protected]. Les problèmes concernant le système de test peuvent également être signalés à la FDA via le programme de signalement des produits médicaux MedWatch (téléphone : 800.FDA.1088 ; télécopie : 800.FDA.0178 ; http://www.fda.gov/medwatch).



RÉFÉRENCES 1. NIH-factsheet, http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/ 2. Holick M.F., Vitamin D deficiency: a worldwide problem with health consequences, Am J Clin Nutr


2006;81(3):353-373 4. Pilz S, Vitamin D, cardiovascular disease and mortality, Clin Endocrinol (Oxf). 2011 Nov;75(5):575-84. 5. Kienreich K, Vitamin D, arterial hypertension & cerebrovascular disease, Indian J Med Res. 2013 April;






10. Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357:266-81. 11. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th Edition. U.S. Department of Health and

Human Services, CDC, NIH, Washington, DC (2007).

20282 Sofia Quantitative Vitamin D – 25 tests

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Sofia Quantitative Vitamin D FIA Página 1 de 15

PARA USO CON EL SISTEMA SOFIA

Para uso diagnóstico in vitro

USO PREVISTO El fluoroinmunoanálisis (FIA) de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia es un ensayo de flujo lateral basado en la inmunofluorescencia diseñado para la determinación cuantitativa de la 25-OH vitamina D total (25-hidroxivitamina D) en muestras de suero. El FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia está indicado para usarse como una ayuda en la evaluación de la suficiencia de vitamina D. RESUMEN Y EXPLICACIÓN La vitamina D es una vitamina soluble en grasa que ayuda a mantener las concentraciones de calcio y fosfato en suero y desempeña un papel importante en la mineralización ósea. La vitamina D también facilita la modulación del crecimiento celular, la función neuromuscular y la función inmunitaria y alivia la inflamación.1 Por tanto, la carencia de vitamina D se ha asociado con un aumento del riesgo de diversos problemas médicos, incluidos entre otros, cáncer, enfermedad ósea, enfermedades cardiovasculares e hipertensión.2,3,4,5 Los niños desde el nacimiento hasta los 18 años con carencia de vitamina D pueden presentar raquitismo, lo que provoca una disminución marcada del crecimiento y el desarrollo óseo, incluido un impacto negativo en la densidad ósea y la masa ósea máxima.6 Durante los años de pubertad adolescente, en los que se producen rachas de crecimiento rápido, existe un notable aumento de la necesidad de vitamina D para mantener las exigencias metabólicas del crecimiento.6

La prevalencia de la insuficiencia de vitamina D en los seres humanos es alta. Las principales causas de insuficiencia de vitamina D incluyen la falta de exposición directa de la piel al sol sin protección solar, como ropa o protector solar, la cantidad limitada de alimentos que contienen vitamina D de forma natural y la deficiencia de alimentos fortificados con vitamina D para satisfacer las exigencias de vitamina D.2,3

La 25-OH vitamina D total es el mejor indicador del estado de la vitamina D. Refleja la vitamina D producida cutáneamente, obtenida de los alimentos y los suplementos7 y tiene una semivida circulante bastante larga de 15 días.8 La vitamina D producida de forma endógena en la piel u obtenida de fuentes alimentarias, se metaboliza en 25-OH vitamina D en el hígado. Por último, en los riñones, se convierte en su forma biológicamente activa, 1,25-(OH)2 vitamina D. En contraste con la 25-OH vitamina D, la 1,25-(OH)2 vitamina D circulante no es un buen indicador del estado de la vitamina D, porque tiene una semivida corta de 15 horas y las concentraciones en suero están reguladas estrechamente por la hormona paratiroidea, el calcio y el fosfato.8 Las concentraciones de 1,25(OH)2 vitamina D no disminuyen habitualmente hasta que la carencia de vitamina D es intensa.9,10 La 25-OH vitamina D total es el mejor método para determinar la suficiencia de la vitamina D y, por tanto, se puede emplear para ayudar a determinar el tratamiento para la prevención y el restablecimiento de las concentraciones de vitamina D en seres humanos.2,3


PRINCIPIO DE LA PRUEBA El FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia es una prueba de flujo lateral basada en la inmunofluorescencia para usar con el sistema Sofia para la cuantificación rápida de la 25-OH vitamina D total. Para realizar la prueba, se extrae una muestra de sangre del paciente, luego se procesa en suero. La muestra se trata de forma que las moléculas de 25-hidroxivitamina D se liberen de las proteínas de unión a la vitamina D. La muestra tratada se dispensa en el pocillo de muestra del casete de prueba. Desde el pocillo de muestra, la muestra migra a través de la tira de prueba. La tira de prueba contiene diversos ambientes químicos singulares que generan una señal de fluorescencia indicativa de la concentración de 25-hidroxivitamina D total en la muestra de paciente. La señal de fluorescencia no es visible a simple vista y debe interpretarse con el sistema Sofia.

El sistema Sofia escaneará la tira de prueba y analizará la señal de fluorescencia utilizando algoritmos específicos del método. El sistema Sofia luego muestra el resultado de la prueba (concentración cuantitativa de 25-hidroxivitamina D total) en la pantalla y, opcionalmente, imprime los resultados en la impresora integrada.

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS Kit para 25 pruebas: Casetes de prueba envasados individualmente (25): Anticuerpo monoclonal de oveja anti-25-OH

vitamina D Viales de reactivo con 0,6 ml de solución de reactivos rosa (25) Prospecto (1) Instrucciones de consulta rápida (1) Tarjeta de CC (ubicada en la caja del kit) Papel de impresora (1)

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS EN EL KIT Sistema Sofia Casete de calibración (suministrado con el paquete de instalación del sistema Sofia) Conjunto de control Sofia para la determinación cuantitativa de vitamina D Micropipeta calibrada: para medir volúmenes de 100 µl y 120 µl Tubos de recogida de sangre

ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagnóstico in vitro. No utilice el contenido del kit una vez superada la fecha de caducidad impresa en el exterior de la caja. Utilice las precauciones adecuadas al obtener, manipular, conservar y eliminar muestras de paciente y el

contenido del kit utilizado.11 Se recomienda utilizar guantes de nitrilo o látex (o equivalente) al manipular muestras de paciente.11 No reutilice los casetes de prueba. El usuario nunca debe abrir la bolsa de aluminio del casete de prueba, exponiéndolo al medio ambiente,

hasta que el casete de prueba esté listo para su uso inmediato. Deseche y no utilice cualquier casete de prueba u otro componente del kit dañado. Para obtener resultados precisos, se deben seguir las instrucciones que aparecen en el prospecto. Se debe utilizar una medición precisa de la muestra para asegurar un resultado cuantitativo preciso. Utilice

una micropipeta calibrada para medir las muestras de paciente o los controles.


Entre un uso y otro, guarde el casete de calibración en la bolsa suministrada. Unos procedimientos inadecuados o inapropiados de obtención, conservación y transporte de muestras

pueden provocar resultados incorrectos en la prueba. No utilice ni analice ninguna muestra de suero que presente hemólisis. Interferencia de anticuerpos humanos antimurinos (HAMA): algunas personas tienen anticuerpos contra

las proteínas murinas (HAMA), lo que puede generar interferencias en los inmunoensayos que emplean anticuerpos derivados del ratón.

No escriba en el código de barras del casete de prueba. El sistema Sofia lo utiliza para identificar el tipo de análisis que se está ejecutando y para identificar el casete de prueba individual, de modo que se evite que el mismo sistema Sofia efectúe una segunda lectura del casete de prueba.

Puesto que el reactivo de detección es un compuesto fluorescente, no se formarán resultados visibles en la tira de prueba. Debe usarse el sistema Sofia para interpretar los resultados.

La prueba se debe realizar en una zona bien ventilada. Deseche los envases y el contenido que no se utilice conforme a las normativas nacionales, regionales y

locales. Utilice ropa de protección, guantes y protección ocular/facial adecuados cuando manipule el contenido del

kit. Lávese bien las manos después de su manipulación.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL KIT Almacene el kit a temperatura ambiente, de 15 °C a 30 °C, alejado de la luz solar directa. El contenido del kit es estable hasta la fecha de caducidad impresa en el exterior de la caja. No congelar.

CONTROL DE CALIDAD Hay tres tipos de control de calidad para el sistema Sofia y el casete de prueba: Procedimiento de verificación de calibración del sistema Sofia, funciones de control de procedimiento incorporadas y controles externos.

Procedimiento de verificación de calibración del sistema Sofia Nota: Se trata de un procedimiento de “verificación de calibración”. El procedimiento de verificación de calibración es una función necesaria que comprueba los sistemas ópticos y de cálculo del sistema Sofia utilizando un casete de calibración específico. Se envía un casete de calibración con el paquete de instalación del sistema Sofia.

Importante: Entre un uso y otro, asegúrese de guardar el casete de calibración en la bolsa suministrada para protegerlo de la exposición a la luz.

1. Para verificar la calibración del sistema Sofia, seleccione “Calibración” en el Menú principal.


2. Siguiendo las indicaciones, inserte el casete de calibración en el sistema Sofia y cierre el compartimento. El sistema Sofia realiza la verificación de calibración automáticamente sin que el usuario tenga que hacer nada.

El sistema Sofia indica cuándo se ha completado la verificación de calibración. Seleccione Aceptar para volver al Menú principal.

NOTA: Si la verificación de la calibración no es satisfactoria, notifique al supervisor del centro o póngase en contacto con el servicio técnico de Quidel para recibir asistencia de lunes a viernes, de 7:00 a. m. a 5:00 p. m., hora del Pacífico, llamando al (+1) 858.552.1100 (desde fuera de EE. UU.); fax: (+1) 858.455.4960; [email protected] (atención al cliente); [email protected] (servicio técnico) o póngase en contacto con su distribuidor local.

Controles de procedimiento incorporados La tira de prueba del FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia contiene funciones incorporadas para control del procedimiento. Cada vez que se ejecuta una prueba, el sistema Sofia escanea las funciones de control de la tira de prueba y los resultados se visualizan en la pantalla del sistema Sofia.

La recomendación del fabricante para el control diario es documentar los resultados de los controles de procedimiento incorporados de la primera muestra analizada cada día. Esta documentación se registra también automáticamente en el sistema Sofia con cada resultado de la prueba.

Un resultado válido obtenido con los controles de procedimiento demuestra que la prueba se realizó correctamente y la integridad funcional del casete de prueba se mantuvo. El sistema Sofia interpreta los controles de procedimiento de forma simultánea con el final del ensayo. Si la solución no fluyó correctamente, el sistema Sofia indicará que el resultado no es válido. En caso de que ocurra esto, revise el procedimiento y repita la prueba con un nuevo casete de prueba.

Por ejemplo: Esta pantalla muestra un resultado no válido.


Control de calidad externo Los controles externos se deben usar para demostrar que los reactivos y el procedimiento del ensayo funcionan correctamente.

Quidel recomienda ejecutar los controles: Una vez por cada usuario inexperto. Una vez por cada nuevo envío de kits, siempre que se analice cada lote diferente recibido en el envío. Todas las veces que se considere necesario según sus procedimientos de control de calidad internos y

conforme a las normativas nacionales, regionales o locales, o los requerimientos de acreditación.

Se necesita el conjunto de control de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia (que se proporciona por separado) para analizar los controles externos. En el conjunto de control se proporcionan dos viales de cada solución de control. Las soluciones de control deben prepararse para su análisis siguiendo el procedimiento para controles externos que se incluye en el prospecto del conjunto de control de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia. Prepare un casete de prueba para cada solución de control. Se necesitarán dos casetes para completar una prueba de CC.

Cuando finalice la prueba de CC, se mostrará un valor cuantitativo, así como un “No aprobado” o “Aprobado” para cada uno de los controles que se ejecutaron.

No realice pruebas del paciente ni informe de resultados de pruebas de pacientes si alguno de los resultados de la prueba de CC no fue aprobado. Repita la prueba o póngase en contacto con el servicio técnico de Quidel antes de analizar las muestras de paciente.

OBTENCIÓN Y CONSERVACIÓN DE MUESTRAS Suero Obtenga y procese suero conforme a los procedimientos estándar. El gel polimérico y la silicona son compatibles con el FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia. Las muestras se pueden conservar a temperatura ambiente durante un máximo de 10 horas, mantener refrigeradas (2-8 °C) durante un máximo de 48 horas o congeladas un máximo de 24 horas. Asegúrese de que las muestras estén a temperatura ambiente antes de utilizarlas en la prueba. En el caso de muestras que se hayan refrigerado previamente, mezcle bien invirtiendo el tubo de suero 10 veces.

PROCEDIMIENTO DE PRUEBA Precauciones NO abra la bolsa de aluminio que contiene el casete de prueba hasta que esté listo para analizar la muestra. Coloque el casete de prueba en una superficie limpia y nivelada. La prueba de FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia se debe realizar a entre 18 °C y 27 °C y todas las muestras deben estar a temperatura ambiente antes de empezar el ensayo. Compruebe la fecha de caducidad en el exterior de cada una de las cajas o paquetes antes de utilizarlos. No utilice ninguna prueba después de la fecha de caducidad impresa en la etiqueta.


1. Llene una micropipeta calibrada con 100 μl de la muestra de suero del paciente.

2. Añada la muestra de paciente al vial de reactivo.

3. Invierta el vial de reactivo dos veces para mezclar. El vial de reactivo también se puede agitar en un vórtex para mezclarlo.

4. Deje reposar la muestra en el vial de reactivo durante 5 minutos.

Mientras la muestra de paciente reposa en el vial de reactivo, complete los pasos 5 y 6. Continúe con el paso 7 inmediatamente después de la incubación de 5 minutos.

5. Seleccione “Ejecutar prueba” en el menú principal del sistema Sofia.

Muestra del


6. Introduzca la identificación del usuario y la identificación del paciente o el n.º de orden.

a) Introduzca la identificación del usuario utilizando el escáner de códigos de barras o introduzca manualmente los datos utilizando el teclado.

b) Introduzca la identificación del paciente o n.º de orden utilizando el escáner de códigos de barras o introduzca manualmente los datos utilizando el teclado.

c) Pulse “Comenzar prueba” y el compartimento del sistema Sofia se abrirá automáticamente.

NOTA: Si, por error, escanea el código de barras equivocado, simplemente vuelva a escanear utilizando el código de barras correcto. El anterior se sobrescribirá con el nuevo código de barras.

7. Inmediatamente después de terminar el período de incubación de 5 minutos, llene una micropipeta calibrada con 120 µl de la solución tratada del vial de reactivo.

8. Vierta el contenido de la micropipeta en el pocillo de muestra del casete de prueba.

9. Inserte el casete de prueba preparado en el compartimento del sistema Sofia. A continuación, cierre suavemente el compartimento para poner en marcha el cronómetro. NOTA: Con independencia del modo actual seleccionado, el FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia se ejecutará automáticamente en el modo WALK AWAY una vez que se inserte el casete de prueba y se cierre el compartimento.


10. El sistema Sofia se iniciará automáticamente y mostrará el progreso. Los resultados de la prueba aparecerán en la pantalla en aproximadamente 5 minutos. Consulte la sección “Interpretación de los resultados” para obtener más información.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Cuando la prueba finalice, los resultados se visualizarán en la pantalla del sistema Sofia. Los resultados se imprimirán automáticamente en la impresora integrada si se ha seleccionado esta opción. Las líneas de prueba, que son fluorescentes, no se pueden ver a simple vista.

La pantalla del sistema Sofia mostrará los resultados de los controles de procedimiento como “válidos” o “no válidos” y proporcionará un resultado cuantitativo para la determinación de la concentración de 25-hidroxivitamina D total. Si los controles de procedimiento son “no válidos”, vuelva a analizar la muestra de paciente con un nuevo casete de prueba.

Resultados cuantitativos:

Por ejemplo: Esta pantalla muestra un resultado cuantitativo válido.

Por ejemplo: Esta pantalla muestra un resultado que está por debajo del intervalo cuantitativo del ensayo.

Por ejemplo: Esta pantalla muestra un resultado que está por encima del intervalo cuantitativo del ensayo.


Resultados no válidos:

LIMITACIONES Si no se sigue el procedimiento de prueba, podría resultar afectado negativamente el rendimiento de la

prueba y/o invalidarse el resultado de la prueba. Si no se utiliza una medición precisa de la muestra de paciente, es posible que no se obtenga un resultado

exacto. VALORES PREVISTOS Se obtendrán un total de 332 muestras de suero de personas aparentemente sanas, de entre 18 y 79 años. Los sujetos representados eran un 53,6 % hombres y un 46,4 % mujeres, con un 32 % de piel oscura. Las muestras se obtuvieron de tres regiones distintas de EE. UU. durante las temporadas pasadas de verano/otoño e invierno (aproximadamente un 55 % en verano/otoño y un 45 % en invierno) para representar un amplio espectro de exposición a la luz UV en la población de uso previsto. Las muestras se analizaron en el sistema Sofia.

El intervalo de referencia para la población total fue de 6,1 – 68,1 ng/ml, calculado utilizando el intervalo de referencia del 95 % (del percentil 2,5 al 97,5). CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Precisión La precisión del FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia se evaluó en un centro interno. Se analizaron dos mezclas de sueros humanos centradas en dos (2) concentraciones de vitamina D (~10 y ~20 ng/ml) con tres (3) lotes de casetes diferentes. Los análisis se realizaron durante cuatro (4) días seguidos.

Se calcularon tanto la varianza de los componentes, entre días, entre lotes de casetes y dentro de un lote de casetes, así como la precisión total. Los resultados generales se resumieron en la Tabla 1 a continuación.

Tabla 1. Precisión del FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia

Mezcla de sueros humanos con conc.

de vitamina D (ng/ml)

N Entre días Entre lotes de

casetes Dentro de un

lote de casetes Precisión

total

DE % CV DE % CV DE % CV DE % CV

12,2 60 0 0 1,46 11,9 1,14 9,3 1,85 15,1 21,2 60 0 0 1,82 8,6 1,68 8 2,48 11,7

Linealidad Se demostró que el rango lineal del FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia estaba entre 10 y 100 ng/ml.

Por ejemplo: Esta pantalla muestra un resultado no válido. NOTA: Si la prueba es no válida, vuelva a analizar la muestra de paciente con un nuevo casete de prueba.


Comparación de métodos Rendimiento clínico del sistema Sofia en comparación con el método de referencia de cromatografía líquida-espectrometría de masas/espectrometría de masas (LC-MS/MS) En un centro interno tres (3) usuarios analizaron un total de 104 muestras de suero humano obtenidas de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) utilizando el método de referencia de LC-MS/MS de los CDC, a lo largo de tres (3) días. Cada usuario proporcionó un resultado cuantitativo, en ng/ml, para cada una de las muestras individuales, obteniéndose tres réplicas por muestra. Se utilizó el promedio de cada muestra en el análisis de comparación de métodos. La regresión de Passing-Bablok generó un coeficiente de correlación (R) de 0,908, una pendiente de 1,02 y una ordenada en el origen de -1,82, tal como se muestra en la Tabla 2 y la Figura 1.

Tabla 2. Resumen de la correlación entre el ensayo de vitamina D del sistema Sofia en comparación con la técnica de LC-MS de los CDC

Parámetro Resultado Pendiente (IC del 95 %) 1,02 (de 0,917 a 1,13)

Ordenada en el origen (IC del 95 %) -1,82 (-4,84 – 1,10) R (IC del 95 %) 0,908 (de 0,867 a 0,937)

Intervalo de valores De 11,7 a 99,8 ng/ml


Figura 1. Análisis de regresión de Passing-Bablok de los valores de vitamina D (ng/ml) del sistema Sofia en comparación con la técnica de LC-MS/MS de los CDC. Se incluyeron concentraciones 3-epi-25(OH)D3 en los

valores totales (ng/ml) proporcionados por los CDC.

Sustancias interferentes Las siguientes sustancias (Tabla 3) no interfieren con el FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia a las siguientes concentraciones, según se determine mediante sesgo entre las muestras enriquecidas y las no enriquecidas ≤10 %.

Ajuste de regresión de Passing Bablok (n=104) -1,82 + 1,02 * 25-hidroxivitamina D (ng/ml) mediante la técnica de LC-MS/MS de los CDC identidad

25-h

idro

xivi

tam

ina

D (n

g/m

l)

R de Pearson=0,908

25-hidroxivitamina D (ng/ml) mediante la


Tabla 3. Sustancias interferentes

Sustancia interferente Concentración analizada Bilirrubina conjugada 5 mg/dl

Bilirrubina no conjugada 15 mg/dl Biotina 1 µg/ml

Colesterol 500 mg/dl Hemoglobina 90 mg/dl

IgG/proteína total 9 g/dl Triglicéridos 500 mg/dl

Factor reumatoide 480 UI/ml Reactividad cruzada La reactividad cruzada se evaluó a dos (2) concentraciones. Las siguientes sustancias no muestran reactividad cruzada (≤15 %) en la prueba FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia, conforme a la concentración especificada en la Tabla 4: vitamina D2, vitamina D3, 24,25 (OH)2 vitamina D2 y 24,25 (OH)2 vitamina D3.

Tabla 4. Sustancias que no muestran reactividad cruzada en el análisis de vitamina D del sistema Sofia

Sustancia Conc. % de reactividad

cruzada muestra baja

% de reactividad cruzada muestra

alta Vitamina D2 (ergocalciferol) 500 ng/ml 0,2 -0,3 Vitamina D3 (colecalciferol) 500 ng/ml -0,1 -0,3

24,25 (OH)2 vitamina D2 20 ng/ml 5,4 1,0 24,25 (OH)2 vitamina D3 20 ng/ml -0,1 -13,9

Las siguientes sustancias muestran reactividad cruzada, conforme a la concentración especificada en la Tabla 5: 25(OH) vitamina D2, 25(OH) vitamina D3, 1,25 (OH)2 vitamina D2, 1,25 (OH)2 vitamina D3, 3-epi-25(OH) vitamina D2, 3-epi-25(OH) vitamina D2, 3-epi-25(OH) vitamina D3 y paracalcitol.

Tabla 5. Sustancias que muestran reactividad cruzada en el análisis de vitamina D para el sistema Sofia

Sustancia Conc. % de reactividad

cruzada muestra baja

% de reactividad cruzada

muestra alta 25(OH) vitamina D2 30 ng/ml 129,1 97,5 25(OH) vitamina D3 30 ng/ml 103,2 97,0

1,25 (OH)2 vitamina D2 20 ng/ml 179,7 174,1 1,25 (OH)2 vitamina D3 20 ng/ml 97,7 88,8

3-epi-25(OH) vitamina D2 20 ng/ml 102,8 71,4 3-epi-25(OH) vitamina D3 20 ng/ml 74,0 70,5


Sensibilidad La sensibilidad del FIA de determinación cuantitativa de la vitamina D para el sistema Sofia se determinó utilizando el límite de blanco (LdB), el límite de detección (LdD) y el límite inferior de cuantificación (LIC). Se estableció que el LdB era de 3,1 ng/ml. Se determinó que el LdC era de 5,2 ng/ml, tomando como base 300 determinaciones con 5 muestras de nivel bajo. Se calculó que el LIC era de 9,9 ng/ml. En el LIC, el % de error total era ≤45 % y la imprecisión observada (% CV) era < 20 %. El intervalo de medición del FIA para determinación cuantitativa de la vitamina D mediante el sistema Sofia se estableció en 10 ng/ml a 100 ng/ml.


ASISTENCIA Si tiene alguna pregunta respecto al uso de este producto o si usted desea comunicar un problema del sistema de prueba, llame al servicio técnico de Quidel al 800.874.1517 (en EE. UU.) o al 858.552.1100, de lunes a viernes de 7:00 h a 17:00 h (hora del Pacífico). Si está fuera de EE. UU., póngase en contacto con su distribuidor local o [email protected]. Los problemas del sistema de prueba también se pueden comunicar a la FDA a través del programa de notificación de productos sanitarios MedWatch (teléfono: 800.FDA.1088; fax: 800.FDA.0178; http://www.fda.gov/medwatch). BIBLIOGRAFÍA 1. NIH factsheet , http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/ 2. Holick M.F., Vitamin D deficiency: a worldwide problem with health consequences, Am J Clin Nutr








10. Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357:266-81. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th Edition. U.S. Department of Health and Human Services, CDC, NIH, Washington, DC (2007).

20282 Sofia Quantitative Vitamin D FIA – 25 pruebas

MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Alemania





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1282220ES00 (02/19)



PARA UTILIZAÇÃO COM O ANALISADOR SOFIA

Para uso em diagnóstico in vitro

USO PRETENDIDO O FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia é um ensaio de fluxo lateral baseado em imunofluorescência concebido para a determinação quantitativa dos níveis totais de 25-OH-vitamina D (25-hidroxivitamina D) em amostras de soro. O ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia destina-se a utilização como auxiliar na avaliação da deficiência em vitamina D.

RESUMO E EXPLICAÇÃO A vitamina D é uma vitamina lipossolúvel que ajuda a manter as concentrações séricas de cálcio e fosfato e que desempenha um papel importante na mineralização óssea. A vitamina D também facilita a modulação do crescimento celular, a função neuromuscular, a função imunológica, e atenua a inflamação.1 Consequentemente, a deficiência em vitamina D tem sido correlacionada com um aumento do risco de vários problemas de saúde, incluindo, mas não só, cancro, doenças ósseas, doenças cardiovasculares e hipertensão.2,3,4,5 Crianças até aos 18 anos de idade com deficiência em vitamina D podem apresentar raquitismo, que resulta numa diminuição acentuada no crescimento e no desenvolvimento ósseo, incluindo um impacto negativo na densidade e no pico de massa óssea.6 Durante os anos da puberdade na adolescência, em que ocorrem surtos de crescimento rápido, verifica-se um aumento acentuado nas necessidades de vitamina D de modo a assegurar os requisitos metabólicos do crescimento.6

A prevalência de insuficiência de vitamina D no ser humano à escala mundial é alta. As principais causas de insuficiência de vitamina D incluem a falta de exposição direta da pele à luz do sol sem proteção solar, como vestuário ou protetor solar, o número limitado de alimentos que contenham naturalmente vitamina D, e insuficiência de alimentos enriquecidos com vitamina D para satisfazer as necessidades de vitamina D.2,3

A 25-OH-vitamina D total é o melhor indicador do nível de vitamina D. Reflete a vitamina D que é produzida por via cutânea e obtida a partir da alimentação e de suplementos,7 e possui uma semivida na circulação bastante longa de 15 dias.8 A vitamina D produzida endogenamente na pele, ou obtida de fontes alimentares, é metabolizada em 25-OH-vitamina D no fígado. Finalmente, é convertida nos rins na sua forma biologicamente ativa, 1,25-(OH)2-vitamina D. Ao contrário do que se verifica para a 25-OH-vitamina D, a 1,25-(OH)2-vitamina D circulante não é um bom indicador do nível de vitamina D porque possui uma semivida curta de 15 horas e as concentrações séricas são estritamente reguladas pela hormona paratiroide e pelos níveis de cálcio e fosfato.8 Tipicamente, os níveis de 1,25(OH)2-vitamina D não diminuem até que a deficiência em vitamina D atinja um grau grave.9,10 A 25-OH-vitamina D total é o melhor método para determinar se os níveis de vitamina D são suficientes, e como tal pode contribuir para definir o tratamento para prevenção e restituição dos níveis de vitamina D em humanos.2,3


PRINCÍPIO DO TESTE O ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia é um teste de fluxo lateral baseado em imunofluorescência para utilização com o analisador Sofia na quantificação rápida dos níveis totais de 25-OH-vitamina D. Para realizar o teste, uma amostra de sangue é colhida do doente e processada até se obter o soro. A amostra é tratada de modo que as moléculas de 25-OH-vitamina D sejam libertadas das proteínas que se ligam à vitamina D. A amostra tratada é colocada no poço de amostra na Cassete de Teste. A amostra migra desde o poço de amostra através da tira-teste. A tira-teste contém vários ambientes químicos únicos que produzem um sinal fluorescente indicativo da concentração de 25-OH-vitamina D total na amostra do doente. O sinal fluorescente não é visível a olho nu e deve ser interpretado utilizando o analisador Sofia.

O Sofia examina a tira-teste e analisa o sinal fluorescente usando algoritmos específicos do método. Em seguida, o analisador Sofia exibe o resultado do teste (nível quantitativo de 25-OH-vitamina total) no ecrã e, opcionalmente, imprime os resultados na impressora integrada.

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS Kit de 25 testes: Cassetes de teste embaladas individualmente (25): Anticorpo monoclonal de ovelha anti-25-OH-vitamina D Tubos de Reagente, cheios com 0,6 mL de solução reagente rosa (25) Folheto Informativo (1) Instruções de Referência Rápida (1) Cartão de CQ (fornecido na caixa do kit) Papel de impressora (1)

MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS NO KIT Analisador Sofia Cassete de Calibração (fornecida com o Pacote de Instalação do analisador Sofia) Kit de Controlo Quantitativo de Vitamina D Sofia Micropipeta calibrada – para medir volumes de 100 µL e 120 µL Tubos para colheita de sangue

ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES Para uso em diagnóstico in vitro. Não utilize o conteúdo do kit após a data de validade impressa na parte exterior da caixa. Tome as devidas precauções na recolha, manuseamento, armazenamento e eliminação de amostras de

doentes e do conteúdo usado do kit.11 Recomenda-se o uso de luvas de nitrilo ou látex (ou equivalente) para manusear as amostras dos

doentes.11 Não reutilize Cassetes de Teste usadas. O utilizador nunca deve abrir a bolsa de papel de alumínio da Cassete de Teste, expondo-a ao ambiente,

até a Cassete de Teste estar pronta para uso imediato. Elimine e não use nenhuma Cassete de Teste ou outros componentes do kit que se encontrem danificados. Para obter resultados precisos, devem ser seguidas as instruções do Folheto Informativo. A amostra deve ser medida com precisão de forma a garantir a exatidão do resultado quantitativo. Use

uma micropipeta calibrada para medir as amostras dos doentes ou os Controlos. A Cassete de Calibração deve ser conservada entre utilizações selada dentro da bolsa de armazenamento

fornecida.


A recolha, armazenamento e transporte de amostras realizados de forma inadequada ou inapropriada poderá originar resultados incorretos.

Não use ou teste nenhuma amostra de soro que exiba sinais de hemólise. Interferência HAMA: alguns indivíduos possuem anticorpos contra proteínas de rato (HAMA), que podem

causar interferência em imunoensaios que utilizem anticorpos derivados de ratos. Não escreva sobre o código de barras da Cassete de Teste. Este é usado pelo analisador Sofia para

identificar o tipo de teste a executar, e para identificar a Cassete de Teste individual a fim de evitar uma segunda leitura da Cassete de Teste pelo mesmo analisador.

Uma vez que o reagente de deteção é um composto fluorescente, não se formarão resultados visíveis na tira-teste. É necessário utilizar o analisador Sofia para interpretar os resultados.

Os testes devem ser realizados num local com ventilação adequada. Elimine recipientes e conteúdos não usados de acordo com os requisitos regulamentares federais, estatais

e locais. Use vestuário de proteção, luvas e proteção ocular/facial adequados quando manusear o conteúdo deste

kit. Lave bem as mãos após o manuseamento.

ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DO KIT Armazene o kit à temperatura ambiente, entre 15°C e 30°C, fora do alcance de luz solar direta. O conteúdo do kit é estável até à data de validade impressa na caixa exterior. Não congele.

CONTROLO DE QUALIDADE Existem três tipos de Controlo de Qualidade para o analisador Sofia e para a Cassete de Teste: Procedimento de Verificação da Calibração do analisador Sofia, Funções de Controlo de Procedimentos Integradas e Controlos Externos.

Procedimento de Verificação da Calibração do analisador Sofia Nota: Este é um procedimento de “Verificação da Calibração”. O Procedimento de Verificação da Calibração é uma função necessária que verifica os sistemas óticos e de cálculo do analisador Sofia usando uma Cassete de Calibração específica. A Cassete de Calibração é fornecida com o Pacote de Instalação do analisador Sofia.

Importante: Certifique-se de que a Cassete de Calibração é armazenada entre utilizações dentro da bolsa de armazenamento fornecida a fim de protegê-la da exposição à luz.

1. Para verificar a calibração do analisador Sofia, selecione «Calibração» a partir do Menu principal.


2. Seguindo as instruções, insira a Cassete de Calibração no analisador Sofia e feche a gaveta. O analisador Sofia realiza a Verificação da Calibração automaticamente sem necessidade de qualquer ação por parte do utilizador.

O analisador Sofia indica quando a Verificação da Calibração está concluída. Selecione OK para voltar ao Menu principal.

NOTA: Se a Verificação da Calibração não passar o teste, notifique o supervisor no local ou contacte a Assistência Técnica da Quidel para obter ajuda, de segunda a sexta-feira das 07:00 às 17:00, horário do Pacífico, através do n.º 858.552.1100 (fora dos EUA); fax: 858.455.4960; [email protected] (Apoio ao Cliente); [email protected] (Assistência Técnica); ou contacte o seu distribuidor local.

Controlos de Procedimento Integrados A tira-teste FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia contém funções de controlo de procedimentos integradas. Sempre que um teste é executado, o analisador Sofia examina as funções de controlo na tira-teste e os resultados são exibidos no ecrã do analisador Sofia.

A recomendação do fabricante relativamente ao controlo diário é documentar os resultados dos controlos de procedimento integrados para a primeira amostra testada em cada dia. Esta documentação também é automaticamente registada no analisador Sofia com cada resultado de teste.

Um resultado válido obtido a partir dos controlos de procedimento demonstra que o teste decorreu corretamente e que a integridade funcional da Cassete de Teste foi mantida. Os controlos de procedimento são interpretados pelo analisador Sofia simultaneamente no final do ensaio. Se a solução não fluir corretamente, o analisador Sofia irá indicar que o resultado é inválido. Se tal ocorrer, reveja o procedimento e repita o teste com uma nova Cassete de Teste.

Controlo de Qualidade Externo Os Controlos Externos devem usados para demonstrar que os reagentes e o procedimento do ensaio funcionam corretamente.

Por exemplo: Este ecrã apresenta um resultado inválido.


A Quidel recomenda que os Controlos sejam analisados: Uma vez para cada operador não qualificado Uma vez para cada nova remessa de kits – desde que se teste cada lote diferente recebido na remessa Conforme considerado necessário, de acordo com os procedimentos de controlo de qualidade

internos e de acordo com os regulamentos locais, estatais e federais ou com os requisitos de acreditação

O Kit de Controlo Quantitativo de Vitamina D Sofia (fornecido separadamente) é necessário para executar os Controlos Externos. O Kit de Controlo inclui dois frascos de cada Solução de controlo. As Soluções de controlo devem ser preparadas para análise seguindo o procedimento de Controlos Externos incluído no Folheto Informativo do Kit de Controlo Quantitativo de Vitamina D Sofia. Prepare uma Cassete de Teste para cada Solução de controlo. Serão necessárias duas Cassetes para realizar um teste de CQ.

Quando o teste de CQ estiver concluído, será exibido um valor quantitativo, bem como «Passou» ou «Falhou» para cada um dos Controlos executados.

Não realize testes de doentes nem comunique resultados de testes de doentes se qualquer um dos resultados dos testes de CQ falhar. Repita o teste ou entre em contacto com a Assistência Técnica da Quidel antes de testar amostras de doentes.

RECOLHA E ARMAZENAMENTO DE AMOSTRAS Soro Faça a colheita e processe o soro de acordo com os procedimentos padrão. Gel polímero e silicone são compatíveis com o ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia. As amostras podem ser conservadas à temperatura ambiente durante até 10 horas, refrigeradas (2-8°C) durante até 48 horas, ou congeladas até 24 horas. Certifique-se de que as amostras estão à temperatura ambiente antes de as testar. Para amostras que tenham sido previamente refrigeradas, misture bem invertendo o tubo de soro 10 vezes.

PROCEDIMENTO DO TESTE Precauções NÃO abra a bolsa de papel de alumínio que contém a Cassete de Teste até estar pronto para testar a amostra. Coloque a Cassete de Teste sobre uma superfície limpa e nivelada.

O teste FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia deve ser realizado a uma temperatura entre 18°C e 27°C, e todas as amostras devem estar à temperatura ambiente antes do início do ensaio.

Verifique a data de validade em cada embalagem individual de testes ou na caixa exterior antes de usar. Não utilize nenhum teste após a data de validade indicada no rótulo. 1. Encha uma micropipeta calibrada com 100 μL da amostra de soro do

doente.

Amostra do


2. Adicione a amostra do doente ao Tubo de Reagente.

3. Inverta o Tubo de Reagente 2 vezes para misturar. O Tubo de Reagente também pode ser agitado em vórtex para misturar.

4. Deixe a amostra a repousar no Tubo de Reagente durante 5 minutos.

Enquanto a amostra do doente se encontra a repousar no Tubo de Reagente, execute os Passos 5 e 6. Avance para o Passo 7 imediatamente após a incubação de 5 minutos.

5. Selecione «Executar Teste» no Menu Principal do analisador Sofia.

6. Introduza a ID do Utilizador e a ID do Doente ou o N.º de pedido.

a) Introduza a ID do Utilizador usando o leitor de códigos de barras ou insira manualmente os dados usando o teclado.

b) Introduza a ID do Doente ou o N.º de pedido usando o leitor de códigos de barras ou insira manualmente os dados usando o teclado.

c) Pressione «Iniciar Teste» e a gaveta do analisador Sofia abrirá automaticamente.

NOTA: Se por engano ler um código de barras incorreto, simplesmente repita a leitura usando o código de barras correto. A leitura anterior será substituída pelo novo código de barras.


7. Imediatamente após a conclusão do período de incubação de 5 minutos, encha uma micropipeta calibrada com 120 µL da solução tratada do Tubo de Reagente.

8. Deite o conteúdo da micropipeta no poço de amostra da Cassete de Teste.

9. Insira a Cassete de Teste preparada na gaveta. Em seguida, feche cuidadosamente a gaveta para iniciar o temporizador. NOTA: Independentemente do modo que se encontra selecionado, o teste FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia será executado automaticamente no modo WALK AWAY assim que a Cassete de Teste for inserida e a gaveta for fechada.

10. O analisador Sofia iniciará automaticamente e apresentará o progresso. Os resultados do teste serão mostrados no ecrã em aproximadamente 5 minutos. Consulte a secção «Interpretação de resultados» para obter mais informações.

INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS Quando o teste terminar, os resultados serão apresentados no ecrã do analisador Sofia. Os resultados serão automaticamente impressos na impressora integrada se esta opção estiver selecionada. As Linhas de Teste, que são fluorescentes, não podem ser vistas a olho nu.

O ecrã do analisador Sofia apresentará os resultados dos controlos de procedimento como «válido» ou «inválido» e fornecerá um resultado quantitativo para a determinação dos níveis de 25-OH-vitamina D total. Se os controlos de procedimento forem «inválidos», teste novamente a amostra do doente com uma Cassete de Teste nova.


Resultados Quantitativos:

Resultados Inválidos:

LIMITAÇÕES O não cumprimento do Procedimento de Teste poderá afetar negativamente o desempenho do teste e/ou

invalidar o resultado do mesmo. Se não for usada uma medição precisa da amostra do doente, poderá não ser obtido um resultado preciso.

Por exemplo: Este ecrã apresenta um resultado inválido. NOTA: Se o teste for inválido, teste novamente a amostra do doente com uma Cassete de Teste nova.

Por exemplo: Este ecrã apresenta um resultado que está acima do intervalo quantitativo do ensaio.

Por exemplo: Este ecrã apresenta um resultado quantitativo válido.

Por exemplo: Este ecrã apresenta um resultado que está abaixo do intervalo quantitativo do ensaio.


VALORES ESPERADOS Um total de 332 amostras de soro foram colhidas de indivíduos aparentemente saudáveis, com idades compreendidas entre os 18 e 79 anos. Os indivíduos representados eram 53,6% homens e 46,4% mulheres, com 32% com tom de pele escuro. As amostras foram colhidas em três regiões diferentes dos EUA no final do verão/outono e inverno (aproximadamente 55% no verão/outono e 45% no inverno) para representar um leque amplo de exposição à luz UV na população à qual se destina o ensaio. As amostras foram testadas no analisador Sofia.

O Intervalo de Referência para a população total foi de 6,1 – 68,1 ng/mL, calculado usando o Intervalo de Referência de 95% (percentil 2,5 a 97,5).

CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO Precisão A precisão do ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia foi avaliada num centro interno. Dois conjuntos de soros humanos agregados com dois (2) níveis de Vitamina D (~10 e ~20 ng/mL) previstos foram testados com três (3) lotes de cassetes diferentes. Os testes foram realizados em quatro (4) dias consecutivos.

Foram calculados componentes de variação entre dias, entre lotes de cassetes e no mesmo lote de cassetes, bem como a precisão total. Os resultados globais são resumidos na Tabela 1 abaixo.

Tabela 1. Precisão do ensaio FIA Vitamina D Sofia

Agregado de Soros Humanos com

Conc. de Vitamina D (ng/mL)

N Entre dias Entre lotes de

cassetes No mesmo lote

de cassetes Precisão

total

DP %CV DP %CV DP %CV DP %CV

12,2 60 0 0 1,46 11,9 1,14 9,3 1,85 15,1 21,2 60 0 0 1,82 8,6 1,68 8 2,48 11,7

Linearidade Demonstrou-se que o Intervalo de Linearidade do ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia se encontra entre 10 e 100 ng/mL.

Comparação dos métodos Desempenho Clínico do Analisador Sofia vs. Método de Referência de LC-MS/MS Um total de 104 amostras de soro humano obtidas do CDC usando o Método de Referência LC-MS/MS do CDC foram testadas num centro interno, ao longo de três (3) dias e por três (3) operadores. Para cada amostra individual, obteve-se um resultado quantitativo em ng/mL para cada operador, resultando em três réplicas por amostra. A média de cada amostra foi utilizada na análise comparativa do método. A implementação de uma regressão de Passing-Bablok resultou num coeficiente de correlação (R) de 0,908, declive de 1,02 e ordenada na origem de -1,82, conforme indicado na Tabela 2 e Figura 1.

Tabela 2. Resumo dos Resultados de Correlação do Analisador Sofia com o Ensaio de Vitamina D do CDC por LC-MS

Parâmetro Resultado Declive (IC de 95%) 1,02 (0,917 a 1,13)

Ordenada na origem (IC de 95%) -1,82 (-4,84 a 1,10) R (IC de 95%) 0,908 (0,867 a 0,937)

Gama de Valores 11,7 a 99,8 ng/mL


Figura 1. Análise de Regressão de Passing-Bablok para os Valores de Vitamina D (ng/mL) obtidos pelo analisador Sofia vs. CDC LC-MS/MS. As concentrações de 3-Epi-25(OH)D3 foram incluídas nos valores totais

(ng/mL) fornecidos pelo CDC.

Substâncias interferentes As seguintes substâncias (Tabela 3) não interferem com o ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia nas concentrações que se seguem, conforme determinado pelo enviesamento entre amostras enriquecidas e não enriquecidas ≤10%.

Tabela 3. Substâncias interferentes

Substância interferente Concentração testada Bilirrubina conjugada 5 mg/dL

Bilirrubina não conjugada 15 mg/dL Biotina 1 µg/mL

Colesterol 500 mg/dL

Ajuste da Regressão de Passing-Bablok (n=104) -1,82 + 1,02 * 25-OH-Vitamina D (ng/mL); CDC LC-MS/MS Identidade

25-O

H-Vi

tam

ina

D (n

g/m

L); F

IA

R de Pearson=0,908

25-OH-Vitamina D (ng/mL) CDC LC-MS/MS


Substância interferente Concentração testada Hemoglobina 90 mg/dL

IgG/Proteína Total 9 g/dL Triglicerídeos 500 mg/dL

Fator reumatoide 480 IU/mL Reatividade cruzada A reatividade cruzada foi avaliada para duas (2) concentrações. As seguintes substâncias não exibem reatividade cruzada (≤15%) no teste FIA Vitamina D Sofia, conforme as concentrações especificadas na Tabela 4: Vitamina D2, Vitamina D3, 24,25(OH)2-Vitamina D2 e 24,25(OH)2-Vitamina D3.

Tabela 4. Substâncias que não exibem reatividade cruzada no Teste de Vitamina D Sofia

Substância Conc. % Reatividade

cruzada Amostra baixa

% Reatividade cruzada Amostra

alta Vitamina D2 (Ergocalciferol) 500 ng/mL 0,2 -0,3 Vitamina D3 (Colecalciferol) 500 ng/mL -0,1 -0,3

24,25(OH)2-Vitamina D2 20 ng/ml 5,4 1,0 24,25(OH)2-Vitamina D3 20 ng/ml -0,1 -13,9

As seguintes substâncias exibem reatividade cruzada, conforme as concentrações especificadas na Tabela 5: 25(OH)-Vitamina D2, 25(OH)-Vitamina D3, 1,25(OH)2-Vitamina D2, 1,25(OH)2-Vitamina D3, 3-epi-25(OH)-Vitamina D2, 3-epi-25(OH)-Vitamina D2, 3-epi-25(OH)-Vitamina D3 e Paracalcitol.

Tabela 5. Substâncias que exibem reatividade cruzada no Teste de Vitamina D Sofia

Substância Conc. % Reatividade

cruzada Amostra baixa

% Reatividade cruzada

Amostra alta 25(OH)-Vitamina D2 30 ng/mL 129,1 97,5 25(OH)-Vitamina D3 30 ng/mL 103,2 97,0

1,25(OH)2-Vitamina D2 20 ng/ml 179,7 174,1 1,25(OH)2-Vitamina D3 20 ng/ml 97,7 88,8

3-epi-25(OH)-Vitamina D2 20 ng/ml 102,8 71,4 3-epi-25(OH)-Vitamina D3 20 ng/ml 74,0 70,5

Paracalcitol 10 ng/mL 161,0 188,6

Sensibilidade A sensibilidade do ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia foi determinada usando o Limite de Branco (LB), o Limite de Deteção (LD) e o Limite de Quantificação Inferior (LQI). O LB for estabelecido em 3,1 ng/mL. O LD for determinado em 5,2 ng/mL, com base em 300 determinações com 5 amostras de nível baixo. O LQI for calculado em 9,9 ng/mL. No LQI, a % Erro Total foi ≤45%, e a imprecisão observada (%CV) foi <20%. O intervalo de medição do ensaio FIA Quantitativo de Vitamina D Sofia foi estabelecido em 10 ng/mL a 100 ng/mL. ASSISTÊNCIA Se tiver alguma pergunta sobre o uso deste produto ou se pretender comunicar um problema do sistema de teste, ligue para o número de Assistência Técnica da Quidel, 800.874.1517 (nos EUA) ou 858.552.1100, de segunda a sexta-feira, das 7h00 às 17h00, horário do Pacífico. Se estiver fora dos Estados Unidos, contacte o distribuidor local ou [email protected]. Os problemas do sistema de teste também podem ser comunicados à FDA através do programa de comunicação MedWatch para produtos médicos (telefone: 800.FDA.1088; fax: 800.FDA.0178; http://www.fda.gov/medwatch).



REFERÊNCIAS 1. NIH factsheet, http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminD-HealthProfessional/ 2. Holick M.F., Vitamin D deficiency: a worldwide problem with health consequences, Am J Clin Nutr








10. Holick MF. Vitamin D deficiency. N Engl J Med 2007;357:266-81. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5th Edition. U.S. Department of Health and Human Services, CDC, NIH, Washington, DC (2007).

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Package Inserts - quidel.com02... · VERWENDUNGSZWECK Der quantitative Vitamin D FIA für Sofia ist ein Immunfluoreszenz-basierter Lateral -Flow-Test, der für die quantitative Bestimmung