Blutbank und Immunhämatologie I Serologische Grundlagen, Methoden und Besonderheiten Guido Heymann

Blutbank und Immunhämatologie I

Serologische Grundlagen, Methoden und Besonderheiten

Guido Heymann

Der ganze Aufwand wofür ?

• Geltende deutsche Richtlinien, TFG

• Um gefährliche Antikörper zu erkennen

• Um Probleme vorab zu erkennen:– immer positive X-Probe– großer Aufwand, passende Konserven zu

finden

Was sind Blutgruppen?

• Antigene auf der Oberfläche von Blutzellen– aber auch Organe, Thrombos, Leukos…

• Polymorphismus, Verteilung, Immunogenität

• Vererblichkeit (genetische Anlage)

Wer ist verantwortlich?

Was können die tun?

Wie tun sie es?

Komplementaktivierung durchAntikörper

Komplementaktivierende Antikörper:

IgMIgG3IgG1

Häufigkeiten

Frequenz Quotient

85% 0,11

8% 0,092

80% 0,008

29% 0,0234

99,8% 0,00003

98% 0,0003

66% 0,0017

68% 0,0064

77% 0,00023

55% 0,00036

74% 0,000078

89% 0,000066

Eigene Daten: 1.6. – 30.10.06

AKS 5204 AKS+ 248 4,8 %

Anti-DAnti-D 19 0,365 % 7,661 % 0,11

Anti-K 7 0,135 % 2,823 % 0,092

Anti-c 2 0,038 % 0,806 % 0,008

Anti-E 21 0,406 % 8,468 % 0,0234

Anti-e 0 0,0003

Anti-Fy(a) 5 0,096 % 2,016 % 0,0017

Anti-C 6 0,115 % 2,419 % 0,0064

Anti-Jk(a) 3 0,058 % 1,21 % 0,00023

Anti-S 1 0,019 % 0,403 % 0,00036

Anti-Jk(b) 1 0,019 % 0,403 % 0,000078

Rationelles Vorgehen I

Probe

Bg bekannt? Bg bestimmen

AKSAKS aktuell?

weiter, wie Anforderung

AKS negativ?

ja

ja

ja

nein

nein

nein

S1- S2- S3- EA+

1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper

- EA ist diagnosebedingt positiv (C3d, Lupus)

- EA ist durch Medikamente positiv (z.B. Gelatine)

2.) Pat. hat Autoantikörper

- Auto-Ak sind nur enzymsensitiv (Ansatz mit Enzym)

- schwache Kälteautoantikörper (Röhrchentest bei 4°)

3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper

- z.B. Jk, (M, Fy) u.a. (Vortransfusion?, Eluat)

- medikamentabh. Ak (Gabe zuvor mit Abstand)

S1+/- S2+/- S3+/- EA-

1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper

- Einzelantikörper (Relevanz?) oder Ak-Gemisch (Differenzierung mit größerem Panel)

2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper

- Auto-Ak mit Pseudospezifität (Rhesus)

- Kälteantikörper (I, HI) (Röhrchentest bei 4° mit Cordzelle)

3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper

- Gelröhrchen

- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen)

- Suchzelle Coombs+?! oder verkeimt

S1+ S2+ S3+ EA-

1.) Pat. hat spezifische antierythr. Antikörper

- Hochfrequenzantikörper (Relevanz?) oder Ak-Gemisch (Differenzierung mit größerem Panel)

2.) Pat. hat „unspezifische“ Antikörper

- Auto-Ak (EA teilweise nur im Enzym +, mDCT)

- Kälteantikörper (I, HI, H) (Röhrchentest bei 4° mit Cordzelle und A1(B)-Zellen)

3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper

- Gelröhrchen

- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen)

- Suchzellen verkeimt oder vermischt?!

S1+ S2+ S3+ EA+

1.) Pat. hat Auto-Antikörper- Wärmeautoantikörper (Diff. und mDCT/Eluat)

- Kälteautoantikörper (Diff. Röhrchen streng bei 37° und 4°)

- Ak-Mischungen (gr. Diff., Auto-Absorbtion o. WARM, Absorbtion-Elution)

- medikamentabh. Ak (Medikation?, Serumdialysat)

2.) Pat. hat Allo-Antikörper mit Vortransfusion- Ak-Gemisch (s.o.)

3.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper

- Gelröhrchen, Zentrifugenfehler, ausgeronnen?....

- diluentabhängige Reaktionen (Zellen mit NaCl waschen)

- Vorbehandlung mit sensiblen Medikamenten (Gelatine, HAES, ATG…)

aber: S1- S2- S3- EA-

1.) Pat. hat keine antierythr. Antikörper

2.) Ansatz wurde fehlerhaft durchgeführt- Serum verdünnt oder Plasma bei best. Ak

- zu wenig Serum oder zu viel Suchzellsuspension

- Verwechslung

3.) Pat. hat antierythrozytäre Antikörper, aber:- Antigen in Suchzellen nicht vorhanden

- Suchzellen sind fehlerhaft oder zu alt

- HTR mit kompletter Bindung der Ak, aber Coombs-

- medikamentenabh. Ak ohne aktuelle Gabe

- Ak nur im Enzym nachweisbar (IgM)

BegriffsklärungAntigen/Zelle 1 2 3 4 5 6

D + + + - - -

C + - + - - -

c + + - + + +

Fya - + + - + -

Fyb + - + + + -Anti-D allein 3 3 3 0 0 0

Anti-D mit unterliegendemAnti-C 3 3 3 0 0 0

Anti-Fy(a) allein 0 3 3 0 3 0Anti-Fy(a) allein mit Homozygoteneffekt 0 3 0 0 0 0Anti-Fy(a) im Enzym 0 0 0 0 0 0

Antithetische AntigeneAntigen antithet. Ag Homozygoteneffekt Enzym

D - - +

C c (+) +

c C (+) +

E e (+) +

e E (+) +

K k - ~

k K - ~

Kp(a) Kp(b) - ~

Jk(a) Jk(b) ++ ~

Jk(b) Jk(a) ++ ~

Fy(a) Fy(b) + ---

Fy(b) Fy(a) + ---

Le(a) - - ~

Le(b) - - ~

M N ++ ---

N M + ---

S s + -

s S + -

P1 - - ~

Beispiel

L/C

33002204

03

0

EN

00000000

00

0

XX XXX X ? XX

Anti-Fy(a), mgl. Anti-N

Weiteres Vorgehen:- 4°C Ansatz im Röhrchen-weitere N+ Zellen aus anderen Panels-Antigenbestimmung

typisches Vorgehen

1. Ansatz von auffälligem Serum mit Diff-Panel auf L/C Karte

2. Ergebnis genau abgestuft ablesen (+/-, 1,2,3,4, MF) und übertragen

3. Antigenausschluß nach folgendem Verfahren:->

Antigenausschluß

1. Sicherer Ausschluß bei negativem Ergebnis von zwei homozygoten Zellen

2. Antigene des Patienten lassen zumindest keinen Alloantikörper zu

3. Mäßig sicherer Ausschluß bei negativem Ergebnis mit einer homozygoten Zelle

4. fraglicher Ausschluß bei negativem Ergebnis mit heterozygoten Zellen

Reaktionsformen

• Enzymsensitivität: z.B. Fy und MN(S)

• Reaktionssmuster: komplette Agglutination, „schlierige“ 1-2fache Reaktion, Mischfeldreaktion

• Nur homozygote Zellen reagieren

Ein Wort zum Titer

• Wie wird Titer bestimmt?– homozygote, „stärkste“ Zelle– gleiche Reaktionsbedingungen

• Ein hochtitriger Ak kann irrelevant sein – ein Ein hochtitriger Ak kann irrelevant sein – ein niedrigtitriger Ak kann relevant seinniedrigtitriger Ak kann relevant sein……

• Wann ist Titer notwendig (meine Meinung)

– in der Schwangerschaft– zur Ak-Differenzierung (HTLA)– Verlauf nach Transfusionsreaktion– nach Transplantation / KMT

Z.B.: HTLA

High titre – low avidity

-„schlierige“, mischfeldige und ungleichstarke Reaktionen-alle Zellen pos.-Titer meist > 1:64

-aber: völlig irrelevant-stören X-Probe

Ak, immer relevant

• A und B, H bei Bombay

• Duffy (Fy), Kell, Kidd (Jk), Rhesus

• S, s, U

• P, PP1Pk

• Vel, Diego

Ak, manchmal relevant

• Lan, Landsteiner-Wiener (Lw)

• Cartwright (Yt), Cromer, Dombrock

• Colton, Gerbich, Scianna

• Junior (Jr), Indian

• At(a)

Ak, relevant, wenn reaktiv bei 37°C

• A1

• H

• M, N, P1

• Lewis a (Le(a))

• Lutheran (Lu)

• Sid (Sd(a))

• KAK (Transfusion?)

Ak, immer irrelevant

• Lewis b (Le(b))

• HLA (Bg(a-c))

• HTLA: Chido, Rodgers, Knops, McCoy, Cost

• JMH(?)

• WAK (für Transfusion)