Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse. Gliederung Überblick Transgene Mäuse...

Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse

Gliederung

Überblick Transgene Mäuse Rückkreuzungen Keimbahn-„Knockout“-Mäuse Konditionelle „Knockout“-Mäuse Zusammenfassung

Überblick

Ziel: Charakterisierung bestimmter Gene aufgrund von Genveränderungen

Transgene Mäuse: zusätzliche oder veränderte Gene im Genom

„knockout“ Mäuse: ein Gen wird komplett deletiert

Aufteilung in Keimbahn- und konditioneller Knockout

Erstellung transgener Mäuse

Auslösung einer Superovulation und Paarung

Entnahme der befruchteten Eizelle und Injektion der DNA

Übertragung der behandelten Eier in eine scheinträchtige Maus

Integration des Gens in einige Nachkommen

Quelle: Janeway

Rückkreuzungen

Einschleusen der Transgene

Nachkommen sind genetisch heterogen

Rückkreuzung mit gewünschtem Stamm

Fortgesetzte Rückkreuzung

Quelle: Janeway

„Knockout“-Mäuse

Gen

Einbau AB-Resistenz

Keine IntegrationAbtöten der Zelle durch AB

Einbau HSV-tk an den Enden

Integration an beliebiger StelleAbtöten durch Ganciclovir

Einbau an der richtigen Stelle durch homologe RekombinationResistenz

Quelle: Janeway

Züchtung „Knockout“-Mäuse

Transfektion von ES-Zellen mit Knockout- Konstrukt

Injektion der ES-Zellen in Blastocysten

Reimplantation in eine scheinträchtige Maus

Enstehung einiger chimärer Mäuse

Quelle: Janeway

Konditionelle „Knockout“-Mäuse

Problem: Deletion eines Gens, das fürs Überleben essentiell ist (rezessiv letales Gen)

Erstellung homozygoter Tiere nicht möglich

Verwendung RAG--Mäuse Nutzung Cre-loxP-System

Verwendung von RAG-defekten Mäusen

Injektion der ES-Zellen in RAG--Blastocyste

Chimäre Maus, deren Lymphozyten von den ES-Zellen abstammen

RAG--Maus: keine B- und T-Zellen

Quelle: Janeway

Cre-loxP-SystemGen wird von loxP flankiert

Cre-Rekombinase schneidet das Gen raus

Quelle: Janeway

Zusammenfassung

Transgene Mäuse:-zusätzliches oder verändertes Gen-Injektion in Eizelle, Einbau unspezifisch Knockout Mäuse:-Keimbahn: Deletion eines Gens in allen

Zellen, Einbau über homologe Rekombination (AB-Resistenz, HSV-tk)

-Konditionell: Gewebespezifisch oder induziert, RAG-, Cre-loxP

Vielen Dank für die Aufmerksamkeit