Die nächste Generation der N-Glykan-Probenvorbereitung und ...€¦ · Dänemark +45 46 59 8080 Finnland +358 9 5659 6288 Frankreich +33 1 30 48 72 00 Deutschland +49 6196 400 600

[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]

Die nächste Generation der N-Glykan-Probenvorbereitung und -Analyse

3

[LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE] [LÖSUNGEN FÜR DIE GLYKAN-ANALYSE]

ANALYSE ABGESPALTENER

GLYKANE

BESTIMMUNG DER MONOSACCHARID-

ZUSAMMENSETZUNG

Kom

plex

ität d

er M

etho

dik

Erhöhung des Informationsgehalts

ANALYSE VON UNTEREINHEITEN

GLYKOPEPTID-MAPPING

ANALYSE VON INTAKTEN PROTEINEN

Kombination komplementärer Methoden zur Optimierung der Glykan-AnalyseWaters bietet komplette, Workflow-basierte Ansätze für die Analyse von Glykoproteinen auf allen Strukturebenen.

¡ Glykoprotein-Profiling ¡ Charakterisierung und routinemäßige Überprüfung

¡ Analyse von Untereinheiten abgespaltener Glykane

¡ Glykopeptid-Mapping ¡ Bestimmung der Monosaccharid-Zusammensetzung

2

Wie wäre es, wenn… Ihre N-Glykan-Analytik einfacher und

vom Ergebnis her empfindlicher liefe?

Endlich ein intelligenter Workflow ohne Kompromisse!

5


Workflow zur Analyse von intakten Proteinen

INJEKTION FÜR DIE LC-ANALYSE

MassPREP™ Entsalzungskartusche oder ACQUITY UPLC® BEH C4, 300Å Säule,

MassPREP Proteinstandardgemisch, und Intact Mass Analysis Kit

ANALYSE PER LCMIT TUV-DETEKTOR

ACQUITY UPLC Systeme

BESTÄTIGUNG DER MASSE MIT QTof MSXevo® G2-XS QTof MSSYNAPT® G2-Si HDMS

GLYKOPROTEIN

Intact mAb Mass Check Standard

Workflow zur Analyse von Untereinheiten

Workflow zum Glykopeptid-Mapping

Workflow zur Bestimmung der Monosaccharid-Zusammensetzung


ACQUITY UPLC Protein BEH C4, 300Å Säule


Umkehrphasen- oder Waters BEH Amide Säule

MARKIERUNG MIT EINEM FLUOROPHOR

ANALYSE PER LCMIT UV-DETEKTORAlliance® HPLC oder

ACQUITY UPLC

ANALYSE PER LC MIT TUV-DETEKTOR

ACQUITY UPLC Systeme

Injektion für die LC-Analyse

ACQUITY UPLC BEH C18, 130Å, 1,7-μm,

2,1 x 100 mm Säule

IdeS ENZYMATISCHER VERDAU MIT OPTIONALER REDUKTION

REDUKTION, ALKYLIERUNG UND ENZYMVERDAU

Glykosylierte und nicht-glykosylierte Peptidfragmente

FREISETZUNG DER MONOSACCHARIDE

saure Hydrolyse

GLYKOPROTEIN

GLYKOPROTEIN

GLYKOPROTEIN



3

5


DATENVERARBEITUNGUNIFI® und

MassLynx® SoftwareMasse

147700 148000 148300 148600 148900 149200

F0G/F0

G

F1G/F0

G

F2G/F0

G ,F1G/F1

G

F2G/F1

G

F2G/F2

G

Dekonvuliertes ESI-TOF MS-Spektrum

m/z2000 2500 3000 3500

+51

+48+54

ESI-TOF MS-Spektrum eines mAb

BESTÄTIGUNG DER MASSE MIT QTof MS

Xevo G2-XS QTof MS SYNAPT G2-Si HDMS

PEPTID-MAPPING-ANALYSE MIT QTof MS

Xevo G2-XS QTof SYNAPT G2-Si HDMS

LC-FLR-Analyse

Alliance HPLC oderACQUITY UPLC

DATENVERARBEITUNGMassLynx Software

DATENVERARBEITUNGMassLynx und UNIFI Software

DATENVERARBEITUNGEmpower® 3 Software

0,00

0,06

0,12

0,18

0,24

6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 min

A21

4

Fc/2 +Glykane

LC Fd’

50

45

40

35

30

25

20

EU

15

10

5

0

10 15 20 25 30 min-5

1

2

3 4 5

6

1. N-Acetylglucosamin (GlcNAc)2. N-Acetylgalactosamin (GalNAc)3. Galactose (Gal)4. Mannose (Man)5. Glucose (Glc)6. Fucose (Fuc).

A

B

5 10 510 20 25 30 35 40 45 min

Glykopeptide

MS-BPI

6-fach vergrößert

4-fach vergrößert

UV 280 nm

Ergebnisse

Ergebnisse

Ergebnisse

Ergebnisse

RapiFluor-MS markierte N-Glykane,

gemessen auf einem ACQUITY UPLC

H-Class Bio-System mit FLR-Detektion

und dem ACQUITY QDa Detektor – für

die Bestätigung bekannter Strukturen

und massengenaue Daten für nicht

zugeordnete Peaks.

0

240

480

min10 15 20 25 30

Inte

nsitä

t

0

1,6x106

3,2x106

min10 15 20 25 30

EU

MS

FLR


ROUTINEMÄSSIGE ÜBERPRÜFUNG

Entdecken Sie Ihre Möglichkeiten

Aufgrund der hohen Ionisierungseffizienz und dank der höheren Protonenaffinität von RapiFluor-MS ist die

Massendetektion von Glykanen mit dem ACQUITY QDa Detektor möglich.

¡ Bisher unerreichte empfindliche FLR- und MS-Detektion.

¡ FLR-Peaks können jetzt massenspektrometrisch bestätigt werden.

¡ Reduziert die Chromatographie-Analysezeiten beim gezielten MS-Glykan-Profiling für eine schnelle

Prozessentwicklung.

¡ Ist dank Empower 3 Software leicht in bestehende GMP-konforme UPLC-Workflows integrierbar.

Glykan-Überprüfung mit ACQUITY UPLC H-Class Bio-System mit FLR- und ACQUITY QDa Detektion

13

6


Entdecken Sie den GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit

Waters als Innovationsführer für die Analytik von Biotherapeutika hat den Workflow für die Analyse abgespaltener

N-Glykane neu erfunden. Unser neues Reagenz, RapiFluor-MS™, ermöglicht erheblich empfindlichere MS-Messungen.

Deglykosylierung und Markierung laufen innerhalb von Minuten ab.

Sie müssen sich nun nicht mehr zwischen schneller Markierung und MS-Empfindlichkeit entscheiden. Keine

arbeitsintensiven, fehleranfälligen Verfahren mehr,

keine Kompromisse zwischen Schnelligkeit und Empfindlichkeit, sondern höhere Verlässlichkeit der gewonnenen Daten.

FLR-QUANTIFIZIERUNGMS-LEISTUNGSCHNELLIGKEIT/DURCHSATZ

Gehen Sie mit Waters neue Wege bei der N-Glykan-Analytik.

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DATENVERARBEITUNG

UNIFI, MassLynx und Empower Software

GLYKOPROTEIN

ABGESPALTENE N-GLYKANE

ANALYSE PER LCMIT FLR-DETEKTOR

Alliance HPLC oderACQUITY UPLC

CHARAKTERISIERUNG ODER MASSENBESTÄTIGUNG

ACQUITY® QDa® Detektor Xevo G2-XS QTof MSSYNAPT G2-Si HDMS

0,0E+0

1,2E+6

10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min

0,0E+0

1,2E+6

10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min

MS

FLR

Ergebnisse

ABGESPALTENE N-GLYKANE NACH

DEGLYKOSYLIERUNG

GlycoWorks™ Rapid PNGase F plus Puffer und

Tensid RapiGest™ SF

MARKIERTE GLYKANE

Markierung mit GlycoWorks

RapiFluor-MS

AUFGEREINIGTE GLYKANE

GlycoWorks HILIC µElutionsplatte oder

-kartuschen


Glycan BEH Amide Säule, Glykan Performance Standard und

Dextran-Kalibrationsleiter

GLYKOPROTEIN


Was steckt dahinter?

Der hohe Informationsgehalt einer N-Glykan-Analytik erschloss

sich bisher nur über aufwändige Methoden der Probenvorbereitung.

Nachdem die N-Glykane mithilfe von PNGase F abgespalten sind,

werden diese markiert, im Trennung und Detektion zu ermöglichen.

Mit dem neuen Protokoll von Waters verfügen Sie nun über einen

vielseitigen Workflow für die:

¡ Glykan-Identifizierung ¡ Glykan-Strukturanalyse

¡ Glykan-Monitoring

Den wissenschaftlichen Hintergrund des NEUEN GlycoWorks RapiFluor-MS Reagenz erläutert ein Video unter waters.com/SeeTheScience.


ABGESPALTENE N-GLYKANE

GlycoWorks Rapid PNGase F plus Puffer und Tensid

RapiGest SF

MARKIERTE GLYKANE

Markierung mit GlycoWorks RapiFluor-MS

GLYKOPROTEIN


AUFGEREINIGTE GLYKANE

GlycoWorks HILIC µElutionsplatte oder

-kartuschen

Wäre Ihnen mit einer schnellen und einfachen Probenvorbereitung für N-Glykane geholfen?

¡ N-Glykan-Proben schnell und einfach aufgearbeitet

¡ Minimierung von Fehleranfälligkeit und Probenverlust

¡ Einfache Handhabung und einfacher Methodentransfer von Labor zu Labor

3 SCHRITTE, 30 MINUTEN

< 15 Minuten

10 Minuten

5 Minuten

SCHRITT 1 SCHRITT 2 SCHRITT 3

Sehen Sie sich ein 2-minütiges Demo-Video zum RapiFluor-MS N-Glykan-Kit an.

www.waters.com/RapiFluorMS

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Wäre Ihnen mit einer bisher unerreichten FLR- und MS-Empfindlichkeit geholfen?

¡ Vergleichbar empfindliche FLD- und MS-Signale ermöglichen zuverlässigere Zuordnung und Identifizierung bisher nicht erkannter Peaks

¡ Entscheidungen können schneller gefällt werden

¡ Leichtere Identifizierung niedrig konzentrierter N-Glykane

BISHER UNERREICHTE EMPFINDLICHKEIT

14-fach erhöhtes Fluoreszenz- und 160-fach erhöhtes MS-Signal im Vergleich zu herkömmlichen Markern (2-AB und Procainamid). 2-fach erhöhtes Fluoreszenz- und 1.000-fach erhöhtes MS-Signal im Vergleich zum Instant Labeling.

*Basierend auf veröffentlichten theoretischen Werten.

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80

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Rel

ativ

e Si

gnal

stär

ke (%

)

52,5

7,00,1 0,6

30,0*

7,0*

Fluoreszenz MS (Basispeakintensität, BPI)

2X

1000X

3X

160X14X

mit Instant AB markiert

mit RapiFluor-MS markiert

mit 2-AB markiert

mit Procainamid markiert

NH

O

NH

NNH

O

N

Glykan

NH

O

NHGlycan

O

NH2

NHGlycan

NH2O

NHGlycan

O

NHN

Proc

aina

mid*

RapiFluor

-MS

2-AB

Instan

t AB

RapiFluor

-MS

2-AB

Instan

t AB

Proc

aina

mid*

Sehen Sie, welche Möglichkeiten sich für Ihre täglichen Analysen bieten.

www.waters.com/XevoG2XS

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0,0E+0

1,2E+6

10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min

0,0E+0

1,2E+6

10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 min

MS

FLR

Die erhöhte Ionisierungseffizienz von RapiFluor-MS ermöglicht die Fluoreszenzquantifizierung in Kombination mit Massendetektion mittels ACQUITY QDa Detektor.

Wäre Ihnen mit massenspektrometrischer Bestätigung Ihrer N-Glykan-Analytik geholfen?

¡ Zuverlässigere Ergebnisse mit routinemäßiger Massendetektion

¡ Rasch verfügbare Informationen zu prozessbedingten Veränderungen

¡ Schnelle Klärung von Problemen bei Methodenentwicklung und -transfer

VERTRAUEN

N-Glykan-Profiling eines monoklonalen Antikörpers

Sehen Sie in einem 1-minütigen Video, wie einfach Massendetektion sein kann

www.waters.com/QDa

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Komplettkits für die Probenvorbereitung

Beschreibung Teilenr.

GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Starterkit

Inhalt des Kits: GlycoWorks Deglykosylierungsmodul, GlycoWorks Markiermodul, GlycoWorks Aufarbeitungsmodul, GlycoWorks Probenahmemodul, ACQUITY UPLC Glycan BEH Amide, 1,7-μm, 2,1 x 150 Säule, Mobile Phase-Konzentrat: Ammoniumformiat

176003635

GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit

Inhalt des Kits: GlycoWorks Deglykosylierungsmodul, GlycoWorks Markiermodul, GlycoWorks Aufarbeitungsmodul, GlycoWorks Probenahmemodul

176003606

Bestellinformationen

Standards und Zubehör

Beschreibung Menge Teilenr.

RapiFluor-MS Dextran Kalibrierleiter 50 μg/Vial 186007982

RapiFluor-MS Glykan-Leistungsteststandard 400 pmol gesamt/Vial 186007983

Ammoniumformiatlösung zur Glykan-Analyse — 186007081

Einlegeböden für die Vakuumstation — 186007986

Einlegeböden für Überdruckstation für den Einsatz mit GlycoWorks RapiFluor-MS N-Glykan-Kit

— 186007987

176003635 176003606

Die neue Methodik über Mittag schnell erklärt

Möchten Sie sehen, wie der RapiFluor-MS N-Glykan-Kit und der ACQUITY QDa Massendetektor Ihre Glykan-Analyse verbessern können? Wir zeigen Ihnen gern, wie es geht: in einem „Lunchtime“-Seminar bei Ihnen. Wenn Sie mehr über das „Lunch- & Label“-Seminar erfahren oder sich dazu anmelden möchten, besuchen Sie uns unter waters.com/GlycansForLunch.

„Lunch- & Label“-Seminar

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5,5 10,0 15,0 20,0 25,0 min

Glykane aus 10 µg ProteinHerkömmlicher Marker 2-AB

1,5 Tage für die Probenvorbereitung

RapiFluor-MSGlykane aus 0,1 μg Protein < 1 Stunde für die Probenvorbereitung

1: TOF MS ES+BPI

6.93e6

1: TOF MS ES+BPI

6.93e6

z/m 0061008

FA2G2Ga11130,9423, 2+

Fucose

GlcNAc

Mannose

Galactose

O NH

ON

O

NHN

N

O

O

RapidFluoreszenz

MS

NHS-Carbamat-Rapid-Tagging-Gruppe Chinolinyl-Fluorophor

Markiert mit tertiärem Amin

Die nächste Generation der Glykan-Markierung

Basierend auf dem Expertenwissen von Waters in der

schnellen Fluoreszenz-Markierung von Aminosäuren wurde

RapiFluor-MS für die N-Glykan-Analytik entwickelt. In 5 Minuten

markiert RapiFluor-MS enzymatisch abgespaltene

Glykosytamine.

¡ Schnelle Markierung

¡ Effiziente Fluoreszenz

¡ Bisher unerreicht hohes MS-Signal


Identifizieren Sie niedrig konzentrierte N-Glykane zuverlässiger

RapiFluor-MS in Kombination mit den erstklassigen Massenspektrometern Xevo G2-XS

QTof oder SYNAPT G2-Si HDMS ermöglicht bisher unerreicht hohe MS- und MS/

MS-Empfindlichkeiten.

Glykan-Charakterisierung mittels UPLC® FLR-Detektion im Xevo G2-XS QTof Massenspektrometer

Vergleich von LC-MS-Chromatogrammen von mit 2AB und mit RapiFluor-MS markierten N-Glykanen des gleichen monoklonalen Antikörpers. Bei der mit RapiFluor-MS markierten Probe ist ein 100-fach erhöhtes ESI+ MS-Signal zu beobachten. Ein MS-Spektrum (siehe Abbildung) zeigt das addierte Spektrum für ein gering konzentriertes Glykan in der Probe.

CHARAKTERISIERUNG

RapiFluor-MS Reagenz

GlycoWorks RapiFluor-MS

Waters, T he Science of What’s Possible, ACQUITY UPLC, UPLC, Alliance, ACQUITY, QDa, UNIFI, SYNAPT, Empower, Xevo, MassPREP und MassLynx sind eingetragene Marken der Waters Corporation. RapiFluor-MS, GlycoWorks und RapiGest sind eingetragene Marken der Waters Corporation.

©2015 Waters Corporation. Gedruckt in den USA.Februar 2015 720005271DE KP-SIG

www.waters.com/Glykane

VERTRIEBSNIEDERLASSUNGEN:

Österreich +43 1 877 18 07

Australien +61 2 9933 1777

Belgien und Luxemburg +32 2 726 1000

Brasilien +55 11 4134 3788

Kanada +1 800 252 4752

China +86 21 6156 2666

Tschechische Republik +420 2 617 11384

Dänemark +45 46 59 8080

Finnland +358 9 5659 6288

Frankreich +33 1 30 48 72 00

Deutschland +49 6196 400 600

Hongkong +852 2964 1800

Ungarn +36 1 350 5086

Indien +91 080 49292200 03

Irland +353 1 448 1500

Israel +9723 3731391

Italien +39 02 265 0983

Japan +81 3 3471 7191

Republik Korea +82 2 6300 9200

Mexiko +52 55 52 00 1860

Niederlande +31 76 508 7200

Norwegen +47 6 384 6050

Polen +48 22 101 5900

Portugal +351 21 893 61 77

Puerto Rico +1 787 747 8445

Russland/GUS +7 495 727 4490 / 336 7000

Singapur +65 6593 7100

Spanien +34 93 600 9300

Schweden +46 8 555 115 00

Schweiz +41 56 676 7000

Taiwan +886 2 2508 5500

UAE 971 4 214 62 38

Großbritannien +44 208 238 6100

USA +1 800 252 4752

Waters Corporation 34 Maple Street Milford, MA 01757, USA. Tel.: +1 508 478 2000 Fax: +1 508 872 1990 www.waters.com

Documents

Die nächste Generation der N-Glykan-Probenvorbereitung und ...€¦ · Dänemark +45 46 59 8080 Finnland +358 9 5659 6288 Frankreich +33 1 30 48 72 00 Deutschland +49 6196 400 600