Reaction No.2Gültig 02.09.2014 – 27.10.2014

2 ReAction No.2 Mycoplasmen

Die Präsenz von Mycoplasmen im Zellkulturlabor bleibt eine ständige Bedrohung. Die parasitären zellwandlosen Bakterien sind eine ernstzunehmende Gefahr, sowohl in Hinblick auf Forschungsergeb nisse, als auch in Hinblick auf biopharmazeutische Produkte wie Impfstoffe oder Zelltherapeutika. Die gute Nachricht gleich zu Beginn: Mit einfachen Verhaltensregeln und Vor-sichtmaßnahmen lassen sich die Plagegeister aus dem Labor verbannen. Der Schlüssel zur mycoplasmenfreien Zellkultur liegt dabei in der angewandten guten Laborpraxis, umfassender Prävention und regelmäßiger Kontrolle.

Zellkultur-basierende Forschung: Neue Standards für’s Publizieren!

Mycoplasmen-Kontrolle im Zellkulturlabor

Ein sauberes Labor ist essentiell für die Vermeidung von Konta minationen jeglicher art, ganz gleich, ob es sich um Bakterien oder Pilze handelt. Das Säubern und Desinfi zieren von Oberfl ächen, Geräten und natürlich der Hände ist un-erlässlich – und zwar vor und nach jedem Experiment.

Während die meisten Oberfl ächen relativ leicht zu reinigen sind (glatte Beschaffenheit und gute Zugänglichkeit), sieht es bei vielen Geräten mit der lupenreinen Sauberkeit eher schlecht aus. Vor allem das feucht-warme Klima im Inkubator bietet leider auch besonders gute Bedingungen für die Be-siedlung durch verschiedenste Keime. Die Lösung: Incubator-Clean™-Spray.

Das Produkt beugt effektiv dem Wachstum von Pilzen (ein-schließlich Sporen), Bakterien (einschließ lich Sporen, Myco-plasmen und Tuberkulose-Bak terien) und Viren (inklusive HIV und Hepatits B) vor. Bei der aktiven Komponente handelt es sich um drei verschiedene quaternäre Benzylammonium-Verbindungen, ungiftig und biologisch abbaubar. Die Lösung enthält weder Quecksilber noch Formaldehyd, kein Phenol und keinen alkohol. Incubator-Clean™ wirkt nicht korrosiv

gegen aluminium, zinnbeschichtetes Eisen, Chrom, Nickel, Stahl, Edelstahl und Kupfer und beeinfl usst so die Lebens-dauer des Gerätes nicht. Um einer Verkeimung des Inkubators vorzubeugen, sollte dieser alle zwei Wochen ausgesprüht werden. Dabei ist es nicht einmal notwendig, den Inkubator vor dem Einsprühen auszuräumen: da die aktiven Subs tanzen nicht fl üchtig sind, nehmen die Zellkulturen keinen Schaden durch die Behandlung.

Ein weiterer Bonus: auch die Sterilbank lässt sich mit Incubator-Clean™ keimfrei halten. Einfach einsprühen, trocknen lassen und fertig.

Bleibt nur noch ein Problemkind beim Namen zu nennen: das Inkubator-Wasserreservoir. Warmes Wasser ist eine potentielle Quelle für Kontamina tionen, die sich schnell im gesamten Inkubator ausbreiten können. Um dieses Wasser zu desinfi -zieren, benötigt man ein Desinfektionsmittel, das die Edelstahl-wanne nicht angreift. Es sollte natürlich nicht toxisch (sprich unbedenklich zu entsorgen), nicht fl üchtig und sehr wirksam sein. Wir empfehlen daher Incuwater-Clean™, ein Konzentrat, welches dem Wasserbad zugesetzt wird. Incuwater-Clean™

ist für die anwendung im CO2-Inkubator optimiert. Der darin erhaltene Konservierungsstoff ist unbedenklich für Mensch und Umwelt, hemmt aber effektiv das Wachstum von Schimmel-pilzen, Hefen und Bakterien.

Fazit: das Dreamteam Incubator-Clean™ und Incuwater-Clean™ ist die optimale Lösung für einen keimfreien Inkubator! Hochaktiv gegenüber unerwünschten Kontaminanten - und gleichzeitig ungiftig, nicht-korrosiv und biologisch abbaubar.

Trotz aller Sauberkeit und Vorsichtsmaßnahmen ist es prak-tisch unmöglich, Mycoplasmen-Kontamina tionen völlig aus-zuschließen. Der Grund: Im Labor arbeiten Menschen. Eine der häufi gsten Zellkultur-kontaminierenden Mycoplasmenspezies, Mycoplasma orale, entstammt ursprünglich der menschlichen Mundhöhle. Regelmäßiges Testen von Zelllinien sollte daher

selbstverständlich sein; solche Tests sind deswegen obligatorisch im indust-riellen Quali täts-Management (und wie oben beschrieben auch in der wissenschaftlichen Gemeinschaft!). Sensitiv und spezifi sch sollte dieser Test sein, zuverlässig, einfach in der Durchführung, ohne große Investi tionen durchführbar und natürlich schnell! Und so einen Test gibt es tatsächlich: der PCR-basierte Mycoplas-men-Nachweis. Erhältlich als Kit so-wohl für die Standard PCR, als auch in der Variante für den qPCR Cycler.Die penetrante anwesenheit von Mycoplasmen in unseren

Zellkultur-Laboren ist und bleibt eine Herausforderung für den Forscher. Der winzige Parasit stellt ein nicht zu unter-schätzendes Problem in den Zell kultur-verwandten Berei-chen von Wissenschaft und Industrie dar. Unglücklicher-weise scheinen sich nach wie vor einige Forscher nicht darüber im Klaren zu sein, wie schnell eine Zelllinie durch Mikroorganismen oder andere Zelltypen kontaminiert wird. Unvorsich tige Handhabung und ein Mangel an regel-mäßiger Testung sind die Hauptursachen für infi zierte Zelllinien und verschleppte Kontaminationen. Durch den regen austausch von Zellen und Materialien zwischen

Zellkultur-Laboren konnten sich kontaminierte und /oder falsch identifi zierte Zelllinien in der Vergangenheit leicht ausbreiten – und sie tun dies bis heute! Da scheint es ein längst überfälliger Schritt, dass immer mehr Wissen-schaftsverlage und Gutachter explizit nach authentifi zie-rung und Kontaminationsfreiheit der verwendeten Zellen fragen.

Interesse an weiteren Infos zu diesem Thema? Kontaktieren Sie uns unter service@de.applichem.com

Mycoplasmen-KontrolleBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €

Incubator-Clean™ Sterile Desinfektionslösung für Inkubatoren und Sterilarbeitsplätze, Lagerung bei RT

A5230,0500 500 ml 52,40

A5230,1000 1 L 84,50

A5230,5000RF 5 L 331,70

Incuwater-Clean™ 100X konzentrierte Desinfektionslösung für Inkubator-Wasserbäder, Lagerung bei 2-8 °C

A5219,0100 100 ml 19,60

PCR Mycoplasmen – Testkit II Lyophilisierter PCR-Mix für den Nachweis von Mycoplasmen in Zellkultur mittels konventioneller PCR. Benötigt zusätzlich Hotstart Taq Polymerase (z. B. unsere a5231)

A8994,0025 25 Tests 162,70

A8994,0050 50 Tests 327,80

A8994,0100 2 x 50 Tests 586,50

qPCR Mycoplasmen – Testkit Lyophilisierter PCR-Mix für den Nachweis von Mycoplasmen in Zellkultur mittels qPCR. Benötigt zusätzlich Hotstart Taq Polymerase (z. B. unsere a5231)

A9019,0025 25 Tests 317,60

A9019,0100 100 Tests 871,10

SuperHot Taq-DNA-Polymerase A5231,0200 200 U 99,90

PCR Mycoplasmen – Testkit I Lyophilisierter PCR-Mix für den Nachweis von Mycoplasmen in Zellkultur mittels konventioneller PCR, inklusive Hotstart Taq Polymerase und interner amplifi katiions-Kontrolle

A9753,0025 25 Tests 199,00

Mycoplasmen ReAction No.2 3

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4 ReAction No.2 Antibiotika

Wie funktionieren die PCR-basierten Mycoplasmen-Testkits?

Das zugrundeliegende System ist einfach: Mithilfe eines spezifi schen Primer-Sets wird ausschließlich Mycoplasmen-DNa amplifi ziert, und zwar aus dem hoch-konservierten 16S rRNa Operon. Nur wenn Mycoplasmen-DNa in der Probe (in der Regel der Zellkultur-Überstand) vorliegt, erhält man ein Mycoplasmen-spezifi sches PCR-Produkt von defi nierter Größe (270 bp). Dieses DNa-Fragment wird mittels agarosegelelektrophorese, oder im Fall des qPCR-Testkits direkt über den FaM-Detektionskanal, nachgewiesen. Die gesamte Prozedur des Mycoplasmen-Nachweises dauert nur etwa 2–3 Stunden und liefert absolut zuverlässige Ergeb-nisse. Dafür verantwortlich ist nicht nur die hohe Sensitivität und Spezifi tät des Kits, sondern auch eine interne Kontrolle-DNa, die den PCR-Reaktionen beigesetzt wird: Dank der internen Kontrolle kann der Erhalt falsch- negativer Ergebnisse (zum Beispiel hervorgerufen durch eine Hemmung der PCR-Reaktion) ausge-schlossen werden. PCR Mycoplasmen Testkit

a8994,0025

AntibiotikaBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €Amphotericin B reinst Ph. Eur. a7009,0001 1 g 177,20

Blasticidin S – Hydrochlorid BioChemicaa3784,0005 5 mg 26,60

a3784,0025 25 mg 106,90

CellCultureGuard Sterile 100X Lösung neuartiger antibiotika zur Prevention von Kontamination in der Zellkultur. Wirksam gegen Bakterien (einschließlich Mycoplasmen), Pilze und Protozoen.

a8906,0050 50 ml 136,80

Ciprofl oxacin – Hydrochlorid reinst Ph. Eur. a4556,0005 5 g 76,60

Gentamycinsulfat reinst Ph. Eur. a4854,0025 25 g 115,90

G418 – Disulfat – Lösung, sterila6798,0020 20 ml 59,30

a6798,0050 50 ml 111,20

Hygromycin B – Lösunga2175,0005 5 ml 32,70

a2175,0025 25 ml 139,20

Nystatin – Dihydrat BioChemicaa3811,0005 5 g 26,50

a3811,0025 25 g 97,40

Penicillin – Streptomycin (100X) für die Zellkultur a8943,0100 100 ml 11,10

Polymyxin B – Sulfat BioChemicaa0890,0005 5 g 110,50

a0890,0010 10 g 221,40

Puromycin – Dihydrochlorid BioChemicaa2856,0010 10 mg 23,10

a2856,0100 100 mg 180,80G418 – Disulfat – Lösung a6798,0050

Zellkultur ReAction No.2 5

Produkte für die ZellkulturBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €

AC-Trypsin – Lösung für die Zellkultur Ready-to-use Lösung zum ablösen adherenter Zellen. Enthält additive zum Schutz der Zelllwand.

a8336,0500 500 ml 87,20

D(+)-Glucose wasserfrei für die Zellkultur a0883,1000 1 kg 17,70

a0883,5000 5 kg 63,55

D(+)-Saccharose für die Zellkultur a2188,1000 1 kg 22,70

Eisen(III)-citrat – Hydrat für die Zellkultur a5175,0100 100 g 15,50

Fibronectin – Lösung für die Zellkultur a8350,0005 5 ml 157,40

Glycerin wasserfrei für die Zellkultur a3092,0500 500 ml 23,80

L-Alanyl-L-glutamin für die Zellkultur a3198,0100 100 g 243,70

L-Glutamin für die Zellkultur a3704,0100 100 g 24,10

Linolsäure für die Zellkultur a4778,0010 10 g 142,10

Natriumchlorid – Lösung (0,9 %), sterila1671,0500 500 ml 30,10

a1671,1000 1 L 46,90

Natriumchlorid für die Zellkultur a4256,1000 1 kg 16,80

Natriumhydrogencarbonat für die Zellkultur a0384,1000 1 kg 15,10

a0384,5000 5 kg 39,90

Eisen(III)-citrat – Hydrat a5175,0100

6 ReAction No.2 Puffer und Salze Instrumentelle Analytik ReAction No.2 7

Puffer und SalzeBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €PBS – Puffer (1 x Dulbecco’s) – Pulver a0964,9050 50 L 26,80

PBS – Puffertabletten pH 7,4 (für 1 L) a9201,0100 100 Tabs 398,40

Tris Pufferqualität a1379,1000 1 kg 40,40

HEPES Pufferqualitäta1069,0250 250 g 51,40

a1069,1000 1 kg 131,90

MOPS Pufferqualitäta1076,0250 250 g 55,30

a1076,0500 500 g 102,90

MES – Monohydrat Pufferqualität a1074,0250 250 g 77,60

CAPS Pufferqualität a1063,0100 100 g 38,90

Ammoniumacetat BioChemica a3674,1000 1 kg 31,10

Ammoniumsulfat BioChemica a1032,1000 1 kg 14,90

Natriumacetat – Trihydrat BioChemica a1045,1000 1 kg 22,50

Natriumhydroxid – Plätzchen BioChemica a3910,1000 1 kg 17,80

Magnesiumsulfat – Heptahydrat BioChemica a4101,1000 1 kg 24,40

di-Kaliumhydrogenphosphat wasserfrei BioChemica a1042,1000 1 kg 31,00

Kaliumchlorid BioChemica a1039,1000 1 kg 23,60

Natriumchlorid BioChemica a1149,5000 5 kg 39,80

Immer das optimale Ambiente…

PBS - Puffertabletten pH 7,4 (für 1 L) a9201,0100

Lösemittel und Reagenzien abgestimmt auf Ihre Analyse

Lösungsmittel der Qualität „für die HPLC“ sind für den Ein-satz in der modernen instrumentellen analytik optimiert und unterliegen strengsten Qualitätsrichtlinien. Unsere Qualitäts-kontrolle beinhaltet die aufnahme von IR- und UV-Spektren, um die Eignung für die IR-Spektroskopie, HPLC und UV- Spek-tro skopie-anwendungen zu überprüfen. Wir garantieren einen sehr hohen Gehalt (in der Regel 99,9 %) bei minimalem Verdampfungsrückstand und Wasser gehalt. alle Lösungs-mittel werden fi ltriert (0,2 Mikro meter), um ein minimales Partikelniveau zu garantieren und, zum Erhalt der Qualität während der Lagerung, unter Stickstoff abgefüllt.

Die Qualität „zur Pestizidanalyse“ wurde exklusiv für die analyse von Pestizidspuren in Lebensmittel und Umwelt-proben (z. B. in Wasser- oder Bodenproben) entwickelt und mittels Gaschromato graphie (unter Verwendung von ECD und FID Detektoren) kontinuierlich überprüft. auch bei der Wahl der Verpackung wird höchste Qualität gewährleistet; alle Pro-dukte für die Rückstandsanalyse kommen ausschließlich mit Glas und Tefl on in Kontakt.

als Ergebnis der kontinuierlichen Verbesserungen der Techno-logie erlaubt die UHPLC (Ultra High Performance Liquid Chroma tography) gegenüber der herkömmlichen HPLC eine signifi kante Steigerung in Bezug auf analysegeschwindigkeit, Empfi ndlich keit und aufl ösung. Um die herausragende ana-lyseleistung des teuren Gerätes zu garantieren und zu er-halten, sollten Produkte der Qualität „für die UHPLC Super-gradient“ verwendet werden, die sich durch eine weitere Reduktion nicht-fl üchtiger Bestandteile, verbesserter Trans-parenz bei nie drigen Wellenlängen und Kontrolle des baseline drifts auszeichnen.

Für die Flüssigchromatographie mit Massenspek trometrie-Kopplung wurde eine weitere Produkt gruppe optimiert: Löse-mittel der Qualität „für LC-MS“ zeichnen sich durch eine minimierte Metallkonzentration (<100 ppb für Natrium und Kalium) und herausragendes Signal-Rausch-Verhältnis aus.

Unsere Qualitätskontrollen stellen sicher, dass alle Produkt-spezifi kationen zu jeder Zeit erfüllt werden.

Acetonitril für UHPLC Supergradient 221881.1612

8 ReAction No.2 Instrumentelle Analytik

Lösemittel für die instrumentelle AnalytikBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €

Aceton zur Pestizidanalyse 321007.1612 2,5 L 70,50

Acetonitril zur Pestizidanalyse 321881.1612 2,5 L 128,20

Cyclohexan zur Pestizidanalyse 321250.1612 2,5 L 111,30

n-Hexan 95 % zur Pestizidanalyse 323242.1612 2,5 L 89,80

Methanol zur Pestizidanalyse 321091.1612 2,5 L 48,90

Aceton für die HPLC 361007.1612 2,5 L 51,10

Cyclohexan für die HPLC 361250.1612 2,5 L 96,95

Dichlormethan für die HPLC, stabilisiert mit ~ 20 ppm Amylen

361254.1612 2,5 L 73,50

Methanol für die HPLC 361091.1612 2,5 L 29,40

2-Propanol für die HPLC 361090.1612 2,5 L 74,60

Wasser für die HPLC 361074.1612 2,5 L 21,65

Acetonitril für UHPLC Supergradient221881.1611 1 L 44,80

221881.1612 2,5 L 86,10

Methanol für UHPLC Supergradient221091.1611 1 L 19,85

221091.1612 2,5 L 39,30

Wasser für UHPLC Supergradient 221074.1612 2,5 L 24,10

Acetonitril für LC-MS701881.1611 1 L 77,60

701881.1612 2,5 L 125,60

Methanol für LC-MS 701091.1612 2,5 L 42,30

Wasser für LC-MS 701074.1612 2,5 L 34,45

Was ist 4K? Das „K“ steht für die anzahl der Kristallisationsschritte, die wir zur Reinigung unserer hohen acrylamid und Bisacrylamid- Qualität einsetzen. 4K-Qualität ist vier Mal umkristallisiert; bei jedem Schritt werden unerwünschte Spuren wie acryl-säure oder Schwermetalle weiter reduziert – bis nichts mehr übrig ist, was die Elektrophorese stört.

Run Gel Run! Alles für die Polyacrylamid-Gel-Elektrophorese

SDS-PAGEBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €Acrylamid 4K – Lösung (30%) – Mix 29 : 1 a0951,0500 500 ml 34,10

Acrylamid 4K – Lösung (40%) – Mix 29 : 1 a0950,1000 1 L 66,50

Acrylamid 4K – Lösung (30%) – Mix 37,5:1 a1672,0500 500 ml 32,00

Acrylamid 4K – Lösung (30%) – Mix 37,5:1 a1672,1000 1 L 53,25

Acrylamid 4K – Lösung (40%) – Mix 37,5:1 a1577,1000 1 L 61,30

Ammoniumpersulfat BioChemica a1142,0250 250 g 17,30

TEMED a1148,0100 100 ml 20,00

TEMED a1148,0250 250 ml 40,20

SDS – Lösung (10 %) für die Molekularbiologie a0676,1000 1 L 47,70

SDS – Lösung (20 %) für die Molekularbiologie a0675,0500 500 ml 47,60

SDS – Tris – Glycin – Puffer (10X) BioChemica a1415,1000 1 L 27,10

Tris – Glycin – Puffer (10X) BioChemica a1418,1000 1 L 36,40

DTT BioChemica a1101,0010 10 g 54,50

β-Mercaptoethanol BioChemica a4338,0250 250 ml 18,50

Coomassie Brillantblau G-250 (C.I.42655) a3480,0010 10 g 15,70

…und die beliebten Proteinmarker von PanReac AppliChem

Protein Marker I (14 – 116) a5238,0500 500 µl 36,40

Protein Marker II (6,5 – 200) prestained a5418,0250 250 µl 82,50

Protein Marker III (6,5 – 200) a4402,0001 1 ml 82,50

Protein Marker IV (10 – 150) a3993,0500 500 µl 98,90

Protein Marker VI (10 – 245) prestained a8889,0500 500 µl 82,10

Abschätzung der apparenten Molekularmasse mit der SDS-PAGE:

für eine möglichst präzise Größenbestimmung sind ungefärbte Protein-Marker wie unser Protein Marker III zu empfehlen, da das Laufverhalten von gefärbten Pro-teinen (die also zusätz lich zum Protein-anteil ein Chromo-phor tragen) viel stärker von den Puffer-Bedingungen beeinfl usst wird.

Protein Masse [kDa]Myosin 212

ß-Galactosidase 116

BSA 66

Ovalbumin 45

Carbonic anhydrase 29

Trypsin inhibitor (Soja) 20

Lysozyme 14

Aprotinin (Rind) 6,5Protein Marker III (6,5 – 200) (a4402) auf einem

Tris-Glycin-Gradientengel (4 -20 % aa)

SDS-PAGE ReAction No.2 9

10 ReAction No.2 Histologie

Reagenzien für die klinische Diagnostik Histologie, Hämatologie und Mikrobiologie

Paraffi n-Pastillen (Smp. 55 –58°C) mit DMSO für die klinische Diagnostik (256993)

HistologieBezeichnung Bestell-Nr. Menge Preis in €

Formaldehyd 3,7–4,0 %, gepuffert pH 7 und stabilisiert mit Methanol für die klinische Diagnostik

252931.1214 5 L 43,25

252931.1315 10 L 67,10

Histofi x® Konservierungsmittel gebrauchsfertig für die klinische Diagnostik, 3,7– 4,0 %ige Formaldehyd-Lösung

256462.0955 44 x 20 ml 33,05

256462.0962 45 x 30 ml 37,40

256462.0961 45 x 40 ml 40,85

256462.0967 24 x 75 ml 23,85

256462.0943 16 x 125 ml 43,30

Xylol, Isomerengemisch für die klinische Diagnostik

251769.2711 1000 ml 21,90

251769.2714 5 L 65,00

Paraffi n - Pastillen (Smp. 55 – 58°C) mit DMSO für die klinische Diagnostik

256993.0933 6 x 1 kg 77,00

256993.0415 10 kg 99,00

Beispiel: Histofi x®Hierbei handelt es sich um 3,7 – 4,0 %ige Formaldehyd-Lösungen, optimiert für die Verwendung als Konservierungsmittel/ Fixativ in der pathologischen anatomie. Wir bieten diese als vordosierte Formaldehyd-Lösungen in praktischen Polypropylen- Gefäßen an. Perfekt luftdicht verschließbar, um den besten Schutz für Proben zu gewährleisten. Die Lösungen sind außerdem neutral (pH 7) mit Natriumphosphat gepuffert und mit Methanol stabilisiert, um mögliche Oxidations-Phänomene zu verhindern.

Histofi x® Konservierungsmittel gebrauchsfertig für die klinische Diagnostik (256462): der obere Teil der Polypropylen-Behälter hat einen Sicherheitsring, der einfaches ausgießen ermöglicht und gleichzeitig Tropfen auf der außenseite verhindert. CE gekennzeichnet für die in-vitro Diagnostik.

Beispiel: Paraffi neappliChem PanReac Einschlussmittel umfassen zahlreiche Paraffi ne mit unterschiedlichen Schmelzpunkten; etwa: Paraffi n – Pastillen mit DMSO

Histologie ReAction No.2 11

Unser Sortiment enthält anwenderfreundliche Formulierungen für alle Schritte der Probenbehandlung: die Fixierung, Entwässerung, den Einschluss in Paraffi n, die Färbung und Einbettung.

Weitere Broschüren und AppliCations unter

www.applichem.com

Lieferbedingungen in Deutschland Bei einem auftragswert bis 50 € berechnen wir eine Frachtkosten pauschale von 12,50€.

Diese reduziert sich bei einem Warenwert von > 50 bis 100 € auf 8,50€, und entfällt bei Bestellungen mit einem Wert von > 100 €. Die Trockeneispauschale beträgt 18,50 €. Getroffene Rabattvereinbarungen

gelten nicht für die aktionspreise. Preise freibleibend netto in Euro.

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