IV. Spezielle Anwendungsgebiete

Referate Spezielle Anwendungsgebiete: 4. Biologisches Material 161

pheny lend iamin und 2, 2 ' T h i o b i s - ( 4 - m e t h y l - 6 - t e r t . - butylphenol) wi rd nach d t i n n s c h i c h t - c h r o m a t o g r a p h i - s c h e r T rennung an K i e s e l g e l G/A1203 (1:1) mi t CHC13 und S i ch tba rmachung im J 2 " D a m p f die abge - k r a t z t e Substanz mi t Hilfe e ines I R - S p e k t r u m s iden t i - f i z i e r t und U V - s p e k t r o m e t r i s c h b e s t i m m t . Zur Durch - ffihrung e i n e r Ana lyse de r AO in P o l y m e r e n wie Po ly - ~thylen, - p r o p y l e n o d e r - ( 4 -me thy lpen t en ) w i rd die Ex t rak t ion e i n e r 2 - 5 g - P r o b e mi t 50 ml CH2C1 ~ oder CHC13 empfoh len . Es sind noch 200/~g A O / g P o l y m e r b e s t i m m b a r . I s o m e r e AO werden ge t r enn t . Die Methode i s t zur Iden t i f i z i e rung yon AO in S c h m i e r - 61en geeignet.

Analyst 9._99, 724-728 (i 974). Australian Post Office Res. Labor., Little Collins Street, Melbourne (Australien) B. Sei fe r t

4. B io log i s ches M a t e r i a l

Bioava i lab i l i ty f r o m p h a r m a c e u t i c a l dosage f o r m s . J . B. Stenlake.

Bes t . de r Biolog. Ver f f igbarke i t yon P h a r m a z e u t . Produkten ; Uberb l i ck .

Es wi rd ein 0 b e r b l i c k gegeben fiber M6gl ichkei ten und Methoden zur B e s t i m m u n g de r b io log i schen und p h a r m a k o l o g i s c h e n Verf f igbarke i t yon A r z n e i m i t t e l n . Fak to ren , die d i e s e Verffigba~:keit w e s e n t l i c h bee in - f lussen , s ind neben de r phys ika l i s chen F o r m tier F o r m u l i e r u n g und der Ar t de r Appl ikat inn z . B . die P ro te inb indungs f~h igke i t in Blut , P l a s m a ode r Ge- webe, W a s s e r - ode r Fe t t l 6 s l i chke i t , die F~higkei t , L i p i d s c h r a n k e n und ande re K b r p e r m e m b r a n e n zu p a s s i e r e n sowie Selektivi tf i t und Reakt iv i ta t gegen- fiber den Subs t r a t en des S to f fwechse l s . Unter Be- r f i cks ich t igung d i e s e r Z u s a m m e n h ~ n g e wurden bio- ana ly t i s che Methoden e r a r b e i t e t , yon denen u. a. M e s s u n g des ze i t l i chen Ablaufs der R e s o r p t i o n durch B e s t i m m u n g d e r K o n z e n t r a t i o n s ~ n d e r u n g mi t d e r Zei t in Blur und a n d e r e n Kbrpe r f l f i s s i gke i t en , M e s - sung d e r K o n z e n t r a t i o n s u n t e r s c h i e d e in v e r s c h i e d e - hen Organen und a n d e r e n Ze l lve rb~nden du tch Radio- i so topenana ly se sowie die B e s t i m m u n g des qua l i ta - t iven und quant i ta t iven Ver lau f s d e r Exkre t ion ange- ffihrt w e r d e n . Hinweise auf 68 L i t e r a t u r s t e l l e n e r - g~nzen die U b e r s i e h t .

Ana lys t 9._99, 824-837 (1974). Dept. P h a r m . C h e m . , Univ. S t ra thc lyde , Glasgow (Gro~bri tannien)

W. Czysz

Affinity chromatography. Bioselective adsorption on inert matrices. W.H. Scouten.

Binchemische Analyse / Chromatographie, Affinit~t; Wechselwirkung Makormolekiil, Ligand und Matrix.

Verf. gibt eine EinfQhrung in das Prinzip der Affini- t~ts-Chromatographie im Hinblick auf die Einsatz- m6glichkeit zur Isolation und Reinigung yon Makro- molektUen wie Enzymen, Proteinen und Hormonrecep-

t o ren . Die P r o b l e m e bei de r Auswahl g e e i g n e t e r L i - ganden w e r d e n d i sku t i e r t . E ingehend b e s p r o c h e n w e t - den e ine Reihe yon M a t r i c e s (porbse Glaskugeln , Aga - r o s e , Ce l lu lose , P o l y a c r y l a m i d und v e r n e t z t e Dex- t rane) , be i denen genau geprt if t w e r d e n mu~, ob und in w e l c h e r Weise s ie mi t dem se l ek t iv zu a d s o r b i e - r en d en Makromolekf i l und auch mi~ dem Liganden in W eeh s e l w i rk u n g t r e t e n .

In te rna t . Lab. 1974, 13-29. W. Czysz

Gel e n t r a p m e n t of ant ibody: A new s t r a t e g y for f ac i l i t - a t ing both manual and au tomated r a d i o i m m u n o a s s a y . S. J . Updike, J . D. S immons , D.H. Grant , J . A . Magnu- son, and T. L. Goodfr iend.

Rad io immunolog ie ; Beladung yon P o l y a c r y l a m i d - gel mit Antik6rper.

Belfidt man Polyacrylamidgel mit Antik6rper und zerkleinert und trocknet (Alkohol oder Lyophili- sieren), so erhfilt man ein Festphasenantikbrper- system, das in Mikros~ulen (Tuberkulinspritze) viele Vorteile aufweist: hochmolekulare Verbindun- gen stbren nicht, Pipettieren und Zentrifugieren entf~llt, und das System ist bei Raumtemperatur sehr lange haltbar. Ungebundene und gebundene Radi0aktivit~t kbnnen getrennt eluiert und bestimmt werden. Das Verfahren bew~hrt sich hei der Bestim- mung yon Angiotensin Iund Insulin und kann manuell und automatisch durchgeffihrt werden.

Clin. Chem. 19___, 1339-1344 (1973). Dept. Med., Univ. Wisconsin, Center Health Sci., Madison, Wis. (USA) E. Mfiller, M a r b u r g

Use od horseradish peroxidase in identification of serum antibodies and immune complexes. W.M. Murphy, S .D. Deodhar , and L. P. Cawley.

Bes t . yon A n t i k 6 r p e r n in Se rum; mi t M e e r r e t t i c h - p e r o x i d a s e .

Verff . v e r g l e i c h e n k~ufliche mi t M e e r r e t t i c h p e r - ox idase m a r k i e r t e A n t i s e r e n und die t ibl ichen mi t F l u o r e s c e i n m a r k i e r t e n , die im a l l g e m e i n e n e m p - f ind l i cher s ind. Bei d e r B e s t i m m u n g yon A n t i k e r n - und A n t i m i t o c h o n d r i e n a n t i k b r p e r l i e f e r t die P e r - o x i d a s e m e t h o d e s e h r gute Wer te . Wegen g r 6 f l e r e r Ha l tba rke i t de r F~rbung so l l s i e w e l t e r en twicke l t w e rd en .

Clin. Chem. 19__ 2 1370-1373 (1973). Dept. Immunology, Cleveland Cl in . , Cleveland, Ohio (USA)

E. Mfil ler , M a r b u r g

The simultaneous collection of data from, two automated amino-acid analysers and processing of the data by computer. J. Davidson, A. W. Boyne, W.R. Hep- burn and N. L. Mackie.

Bes t . yon Aminos f iu ren ; Au toana ly sa to r / Compute r ; Sammlung und A u s w e r t u n g yon Daten.

Es w i rd ein Sys t em zur Sammlung und A u s w e r t u n g de r yon zwei Au toAna lyze rn mi t u n t e r s c h i e d l i c h e r A n a l y s i e r g e s c h w i n d i g k e i t a u s g e g e b e n e n Daten en t -

162 Z. Anal. Chem., Band 275, Heft 2 (1975)

wicke l t . Die Daten w e r d e n auf L o e h s t r e i f e n g e s a m - m e l t und z u s a m m e n mi t Z u s a t z i n f o r m a t i o n e n von L o c h k a r t e n in e i n e m Compu te r a u s g e w e r t e t ; die E r - g e b n i s s e w e r d e n a u s g e d r u c k t . Die an a l len Ste l len des S y s t e m s (sowohl A n a l y s a t o r - a l s auch d a t e n v e r - a r b e i t e n d e Teile) mdg l i chen F e h l e r und i h r e B e h e - bung w e r d e n ausf f ih r l i ch d i sku t i e r t .

Ana lys t 9__9, 670-682 (1974). Rowet t Res . I n s t . , Bucksburn , A b e r d e e n (Grof lbr i tannien) B. Se i fe r t

A m i c r o pCO 2 e l e c t r o d e . C .R . Caf l i sch and N. W. C a r t e r .

B e s c h r e i b u n g e i n e r E l ek t rode , pCO2; B i o c h e m i s c h e Ana lyse ; M i k r o b e r e i c h .

Die yon N. W. C a r t e r , F. C. Rec to r , j r . , D.S . Campion und D. W. Seldin (Clin. Inves t . 46, 920 (1967)) en t - wicke l t e p H - G l a s e l e k t r o d e wi rd in das kon i sche Ende e ines R o h r e s gegeben, das mi t N a t r i u m h y d r o g e n - c a r b o n a t l S s u n g geftil l t und mi t e i n e r T e f l o n - M e r n b r a n v e r s c h l o s s e n i s t . Der in die N a t r i u m h y d r o g e n c a r b o - n a t - d i f f u n d i e r e n d e Kohlens tof fd ioxid e rg ib t eine pH-t~mderung, die mt t d e r p H - E l e k t r o d e g e m e s s e n und auf den pCO2-Wer t bezogen w e r d e n kann. Die Ste i lhe i t d e r E l e k t r o d e l i eg t bei 38 mV.

Anal . B iochem . 60, 252-257 (1974). Dept. In t e rna l M e d . , Univ. Texas Southw. Med. School, Dal las , Tex. (USA) K. Henning

I m p r o v e d pen ic i l l in s e l e c t i v e enzyme e l e c t r o d e . L. F . Cullen, J . F . Rusl ing, A. Sch l e i f e r , and G. J . P a p a r i e l l o .

Bes t . yon Pen ic i l l i nen ; E n z y m e l e k t r o d e n .

F r o m a s y s t e m a t i c eva lua t ion of s e v e r a l bas i c pen i - c i l l i na se e l e c t r o d e conf igura t ions , a pen ic i l l in s e l e c t i v e enzyme e l e c t r o d e has been deve loped wi th c h a r a c t e r i s t i c s s u p e r i o r to an e a r l i e r des ign , In p r e p a r i n g th is i m p r o v e d e l e c t r o d e conf igura t ion , pen i c i l l i na se is i m m o b i l i z e d by a d s o r p t i o n onto a f r i t t ed g l a s s d isc which is aff ixed to the end of a f l a t - s u r f a c e pH g l a s s e l e c t r o d e . The hydrogen ions p roduced by the p e n i c i l l i n - p e n i c i l l i n a s e enzyma t i c r e a c t i o n a r e s e n s e d by the g l a s s e l e c t r o d e . The s t e a d y - s t a t e p o t e n t i o m e t r i c r e s p o n s e deve loped is p r o p o r t i o n a l to the l o g a r i t h m of the in tac t pen ic i l l in c o n c e n t r a t i o n . The p r o c e d u r e is app l i cab le to the a n a l y s i s of pen ic i l l i n s in the 3 .5 - 1100 p g / m l r ange with a method p r e c i s i o n of + 3% at the 100 p g / m l leve l . In e x e m p l i f y i n g the ana ly t i ca l u t i l i ty of th is e l e c t r o d e conf igura t ion , the a n a l y s e s of pen ic i l l in capsu le f o r m u l a t i o n s and f e r m e n t a t i o n b r o t h s a r e d e s c r i b e d .

Anal. Chem. 46, 1955-1961 (1974). Anal . P h y s . Chem. S e c t . , Wyeth L a b s . , Ph i l ade lph ia , Pa . (USA)

Automat i c s a m p l e i n j e c t o r . I ts appl ica t ion in the ana ly s i s of a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t e . R. Johnson , J . H. Gent le and S. Chee r .

Ana lyse yon A d e n o s i n t r i p h o s p h a t mi t P r o b e n i n j e k t o r , au tomat . ; L u m i n e s c e n z a n a l y s e .

Zur a u t o m a t i s e h e n P r o b e n d o s i e r u n g wi rd e in pneu- m a t i s c h a r b e i t e n d e s I n j e k t i o n s s y s t e m b e s c h r i e b e n , um 10 p1 des A d e n o s i n t r i p h o s p h a t e x t r a k t e s zu 100 p1 des v i s k o s e n Luciferin/Lueiferase-Pr~parates do- s i e r e n zu kdnnen. Ffir den K o n z e n t r a t i o n s b e r e i e h yon 10 -7 b is 10 -5 p g / p l w e r d e n z u f r i e d e n s t e l l e n d e E r g e b - n i s s e e rha l t en .

Anal . B ioehem. 60, '115-121 (1974). Nat. Mar ine Wate r Quali ty L a b . , E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n Agency , N a r r a g a n s e t t , Rhode Is land (USA)

K. Henning

Act iva t ion an a l y s i s of b io logica l m a t e r i a l with r u t h e n i u m as a m u l t i - i s o t o p i c c o m p a r a t o r . R. Van Der Linden , F. De Cor te and J . Hos te .

Bes t . yon E l e m e n t e n in Biolog. Mate r i a l ; Aktivierung~, ana lyse ; Ru a l s V e r g l e i c h s p r o b e .

Die E l e m e n t e Fe , Zn, Se, Rb und Co wurden in NBS R i n d e r l e b e r (SRM 1577) durch z e r s t b r u n g s f r e i e A k - t i v i e r u n g s a n a l y s e b e s t i m m t . Ru wurde a ls T r i p l e - V e r g l e i c h s e l e m e n t e i n g e s e t z t . Vor de r B e s t r a h l u n g wi rd die R i n d e r l e b e r , wie in dern S t a n d a r d v e r f a h r e n b e s c h r i e b e n , v o r b e r e i t e t . Die R u - V e r g l e i c h s p r o b e n w e r d e n g l e i chze i t i g mi t d e r P r o b e b e s t r a h l t . Nach e i n e r Abkl ingdauer von 1 Monat wurde g e m e s s e n . Die E r g e b n i s s e w e r d e n mi t d e r o f f iz ie l len S tandard - me thode v e r g l i c h e n und mi t e i n e r Methode, die auf e inem M e h r - E l e m e n t - S e r u m - S t a n d a r d beruh t . Die U b e r e i n s t i m m u n g e n w a r e n a u s g e z e i c h n e t . Die Schluf l folgerungen der F e h l e r t h e o r i e mi t de r V e r - g l e i c h s m e t h o d e wurden e x p e r i m e n t e l l bes t~t ig t .

Anal. Chim. Acta 71, 263-275 (1974). Inst . Nucl. Sc i . , Ri jksuniv. Gent (Belgien) R .H. S t e r z e l

High p r e c i s i o n h i g h - s p e e d an a l y s i s for ca l c ium and m a g n e s i u m in s e r u m and ur ine . R . E . Hurs t .

Bes t . von Calc ium und Magnes ium in S e r u m und Harn; A u t o an a l y s a t o r / S p e k t r a l p h o t o m e t r i e , A t o m - abso rp t i on ; neue Ger~ tekombina t ion .

Verb inde t man e inen s p e z i e l l h e r g e r i c h t e t e n P r o b e n - h a l t e r des A u t o A n a l y ze r s du rch eine 7 cm n ich t f iber- s c h r e i t e n d e Sch lauchverb indung mi t e i n e m A t o mab- s o r p t i o n s s p e k t r o p h o t o m e t e r ( P e r k i n - E l m e r Model 303) kann m a n in 240 Blut- o d e r H a r n p r o b e n / h C a l - c ium und Magnes ium mi t e i n e r Genauigkei t yon m i n - d e s t e n s _+ 0, 05 mVal /1 b e s t i m m e n .

Clin. Chim. Acta 45....~, 105-107 (1973). Dept. P a t h o l . , Wal te r Reed G en e ra l H o s p . , Washington, D .C. (USA ',

E. Mfiller, M a r b u r g

I n t e r f e r e n c e f r o m c i t r a t e us ing Mann ' s dye method for m a g n e s i u m d e t e r m i n a t i o n . J . L . Caddel l and D. D a m r o n g s a k .

Bes t . yon Magnes ium in S e r u m und P l a s m a ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i c , A t o m a b s o r p t i o n , F a r b m e t h o d e nach Mann; C i t r a t s t b ru n g .

Es wurden M g - K o n z e n t r a t i o n e n yon v e r s c h i e d e n v o r - behande l t en B l u t s e r u m - und B l u t p l a s m a p r o b e n mi t


der M a n n ' s c h e n F a r b m e t h o d e und mi t Hilfe de r A t o m a b s o r p t i o n s s p e k t r o p h o t o m e t r i e b e s t i m m t und v e r g l i c h e n . B l u t s e r u m und mi t A m m o n i u m h e p a r i n v e r s e t z t e s B l u t p l a s m a zeigen ~hnliche Wer te mi t beiden B e s t i m m u n g s m e t h o d e n . G e r i n g e r e M g - K o n z e n - t r a t i onen ze igen s i ch bei d e r M a n n ' s c h e n Methode, wenn den P l a s m a p r o b e n e ingedampf te A C D - L b s u n g ( D e x t r o s e - H y d r a t 2, 45 g /100 ml , N a - C i t r a t 2, 2 g / 100 ml, w a s s e r f r e i e Citronens~iure 0, 73 g/100 ml) z u g e s e t z t wurde . Ein z u s ~ t z l i c h e r Verdf innungs- effekt t r i t t auf mi t f l f i s s ige r ACD-Lbsung . Es bi ldet s i ch ein M g - C i t r a t - K o m p l e x , d e r in EtOH geniigend un lSs l i ch is t , um die Fa rben tw ick lung zu s tS ren . Zur B e s t i m m u n g yon Mg in Ci t ra tb lu t i s t die Mann- sche Methode n ich t gee ignet .

Clin. Chim. Acta 4...44, 273-276 (1973). Fac . Med . , Univ . , Chiang Mai (Thailand); Dept. P e d i a t r i c s and B i o c h e m . , Univ. School M e d . , St. Louis , M i s s . (USA)

C. Mar t in

Zum qua l i t a t iven Nachweis des Q u e c k s i l b e r s in de r Toxikologie . W. K i s s e r .

Nachw. yon Q u e c k s i l b e r in Biolog. Mate r i a l ; Toxi- ko log i sche Ana lyse ; F a r b t e s t .

A r b e i t s w e i s e . 100 ml Ur in w e r d e n nach Zugabe yon 20 rnl konz. HNO 3 auf 50-70 ml e ingeeng t und in K je ldah l -Ko lben t iberff ihrt . Organauf sch l t i s se w e r d e n v o r h e r yon F e t t s t o f f e n a b f i l t r i e r t . Dann dampf t man nach V e r s e t z e n mi t 20 ml konz. HNO 3 un te r m e h r - m a l i g e r Zugabe yon 0, 5 ml P e r h y d r o l auf etwa 10 rnl ein. I s t v ie l Hg vorhanden , kann nach e n t s p r e c h e n - der Verdlinnung de r d i r ek t e Nachweis geft ihrt w e r d e n . Zur A n r e i c h e r u n g wi rd auf 120 - 150 ml verdi innt , mi t 4 rnl 2 t i g e r K J - L S s u n g v e r s e t z t , a u s g e s c h i e d e - nes Jod mi t 1 - 2 m l .Na2SO3-Lbsung (3%ig) r e d u z i e r t und 2 real mi t 15 ml Ather ausgeschf i t t e l t . Nach Trocknen und V e r d a m p f e n des I t h e r s l b s t man den R(ickstand un te r k u r z e m E r h i t z e n in 1 ml W a s s e r . Zur Durchff ihrung des H g - N a c h w e i s e s wi rd ein 5 - 8 cm langes G l a s r o h r (2-3 m m I n n e n d u r c h m e s s e r ) senkrecht auf ein mit CuJ imprfigniertes Filterpapier aufgesetzt. Dann gibt man 0, 1 - 0, 2 ml der Probe- 10sung in das Glasrohr und l~t yon dem CuJ-Papier aufsaugen. Bei Anwesenheit yon Hg entsteht ein kreisrunder, orangeroter Fleck yon Cu2(HgJ4) , des- sen Farbintensitfit eine halbquantitative Absch~tzung der Hg-Menge erlaubt.

Beitr. gerichtl. Med. 30, 211-213 (1973). Inst. f. geriehtl. Med. d. Univ., 5020 Salzburg (0sterreich)

W. H. Mennicke

Ana lys i s for t r a c e l eve l s of boron by ion e x c h a n g e - hollow cathode e m i s s i o n . E . H . Daughtrey, j r . , and W. W. H a r r i s o n .

Bes t . yon Bor in Biolog. M a t e r i a l und W a s s e r ; I o n e n a u s t a u s c h / S p e k t r o m e t r i e .

Die B e s t i m m u n g yon ~ 100 ppm B in b i o l o g i s c h e m Ma te r i a l sowie in na t i i r l i chen W~issern wi rd e m i s - s i o n s s p e k t r o s k o p i s c h un te r Verwendung der yon den Verf f . b e s c h r i e b e n e n A r b e i t s w e i s e m i t t e l s Hohl-

ka thoden lampe durchgef f ih r t CAnal. Chim. Acta 67, 253 (1973)). H ie rzu wi rd das bei l l 0 ~ getroc~-nete b io log i sche M a t e r i a l v e r a s c h t , in e in igen Tr . 1 0 t - i ge r Salzs~iure ge l6s t und mi t W a s s e r verdfinnt . An- schl ief lend wi rd ein a l i quo te r Tel l von 1 ml mi t 5 ml A m b e r l i t e IR 4B(OH-) und 2 ml Dowex 50 W-X8 (w~fl- r i ge A u f s ch l ~mmu n g mit etwa 40% W as s e r ) v e r - m i s c h t und 0, 1 m l zur w e i t e r e n Ana lyse ve rwende t . Die E m i s s i o n s i n t e n s i t ~ t wi rd bei 249, 8 nm e r m i t t e l t .

Anal . Chim. Acta 72, 225-230 (1974). Dept. C h e m . , Univ. Virgin ia , Cha r lo t t e sv i l l e , Virg. (USA)

K. Henning

Atomic abso rp t i on s p e c t r o m e t r i c d e t e r m i n a t i o n of c a d m i u m and lead in denta l m a t e r i a l by a tomiza t i on d i r e c t l y f r o m the sol id s t a t e . F . J . L a n g m y h r , A. Sundli and J . J o n s en .

Bes t . yon Cadmium und Blei in Z~hnen, Biolog. Mate r i a l ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e , A t o m a b s o r p t i o n .

Zur d i r ek t en B e s t i m m u n g yon Cd und Pb w e r d e n 0, 5 - 3 m g p u l v e r i s i e r t e s P r o b e m a t e r i a l in dem yon F . J . L a n g m y h r und Y. T h o m a s s e n (diese Z. 264, 122 (1973)) b e s c h r i e b e n e n Graphi to fen 60 sec bei 150~ g e t r o c k - net , danach 60 sec bei 350oc v e r a s c h t und a n s c h l i e - ~end 30 bzw. 60 sec bei 1400 bzw. bei 1600~ ange - r eg i . G e m e s s e n wi rd bei 228, 8 bzw. 283, 3 nm. Bei 0, 09 ppm Cd bzw. 0, 12 ppm Pb be t r~g t die r e l a t i ve S tandardabweinhung 37 bzw. 11%.

Anal . Chim. Acta 73, 81-85 (1974). Dept. C h e m . , Univ . , Oslo (Norwegen) - - K. Henning

The d e t e r m i n a t i o n of lead in blood by a tomic f l u o r e s - cence f l ame s p e c t r o m e t r y . H . G . C . Human and E. Norval .

Bes t . yon Blei in Blut; A t o m f l u o r e s c e n z - S p e k t r o - m e t r i e ; s p e z i e l l e Pb -Hoh lka thoden l ampe .

F(ir die d i r ek t e B e s t i m m u n g big zu 0, 0012 ppm Pb in Blur m i t t e l s A t o m f l u o r e s c e n z s p e k t r o s k o p i e wi rd eine s p e z i e l l en twicke l t e B le ihoh lka thoden lampe v e r - wendet . Zur H e r s t e l l u n g d i e s e r L a m p e wi rd in e inen K u p f e r t i e g e l (i. D. 10 ram) Pb e i n g e s c h m o l z e n , dann e ine zen t r a l geff ihrte Bohrung yon 8 m m angebrach t , so daf~ die Ble ihohlkathode eine L~nge yon 10 m m auf- we i s t . Die Anregung e r fo lg te in e i n e r F l a m m e aus 6, 5 1 / m i n Argon, 0, 8 l / r a in Saue r s to f f und 3, 5 l / r a i n W a s s e r s t o f f be i 1780~ Die E m i s s i o n wurde bei 404, 4 - 404, 7 nm g e m e s s e n . Die S tbrung du rch Na wurde durch Zugabe yon S t an d a rd men g en e l i m i n i e r t . Der l i n e a r e A r b e i t s b e r e i c h r e i ch t bis 40 ppm Pb.

Anal . Chim. Acta 73, 73-80 (1974). Nat. P h y s . Res . L a b . , Council Sci. and In---d. R e s . , P r e t o r i a (Stidafrika)

K. Henning


Nitrate and ammonium ion-selective electrodes as sensors. Part I. In bacterial growth curves for isolation of nitrate and nitrite reductases from escheris- chia coll. W.R. Hussein and G. G. Guilbault.

Best. yon Ammonium und Nitrat in Bakterien; Elek- troden, ionenselektive.

Zur Bestimmung der Reduktase-Aktivit~t in Versu- chen zum Bakteriumwachstum werden fur Nitrat- und Ammoninmionen selektive Elektroden eingesetzt, so dal] sowohl die Abnahme an Nitrationen als auch die Zunahme an Ammoniumionen bestimmt werden kbnnen. Benutzt wird die fur Nitrationen selektive Elek- trode Typ 92-07 von Orion bzw. die fur Ammonium- ionen selektive Elektrode nach den Angaben yon R. P. Scholer und W. Simon (Chimia 2_~4, 372 (1972)).

Anal. Chim. Acta 72___, 381-390 (I 974). Dept. Chem., Univ. New Orleans, La. (USA) K. Henning

Di rec t s e r u m ino rgan ic phospha te d e t e r m i n a t i o n . E. S. Baginski , S .S . Mar ie and B. Zak.

Bes t . von Phospha t in Se rum; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; C i t r a t - A r s e n i t - M e t h o d e ffir trUbe P r o b e n .

Das e in fache V e r f a h r e n zur B e s t i m m u n g yon Mikro - m engen a n o r g a n i s c h e n P h o s p h a t e s im Se rum umgeh t die P r o t e i n - F f i l l u n g . Getrf ibte P r o b e n l a s s e n s i ch eben fa l l s a n a l y s i e r e n . - Man p ipe t t i e r t 50 p1 H20, S e r u m u nd P h o s p h a t - S t a n d a r d ge t r enn t in R e a g e n s - r b h r c h e n , ffigt j ewe i l s 1, 0 ml A s c o r b i n s ~ u r e - S c h w e - f e l s f i u r e - R e a g e n s (20 g + 8, 0 ml konz. H2SO4/1)hin- zu und d u r c h m i s c h t gut. Dann w e r d e n 0, 25 ml Teepol (mit H20 , 1:1) und 0, 5 ml A m m o n i u m - M o l y b d a t in E s s i g s ~ u r e (5 g + 20 ml E i s e s s i g / 1 ) und nach Mischen sowie e i n e r g e w i s s e n Ze i t spanne 1, 0 ml A r s e n i t - Ci t ra t in DMSO (20 g N a - A r s e n i t + 20 g N a - C i t r a t in 300 rnl H20 w e r d e n mi t 20 ml E i s e s s i g in 400 ml DMSO v e r s e t z t und mi t H20 zu 11 aufgeffillt) h inzu- geffigt. 10 min spa r e r b e s t i m m t man die A b s o r p t i o n des S t anda rds und de r P r o b e n gegen die Bl indprobe bei 700 nm. Das Z e i t s c h e m a d e r Zugabe yon A m m o - n i u m - M o l y b d a t in E s s i g s ~ u r e und A r s e n i t - C i t r a t w u r - de genau u n t e r s u c h t . Wie s i ch zeigt , i s t die En twick- lung de r F a r b e Uber m e h r e r e Stunden kons tant . Die E r g e b n i s s e des V e r f a h r e n s s t i m m t e n mi t Resu l t a t en e i n e r P r o t e i n : F ~ l l u n g s m e t h o d e , e r h a l t e n an de r g le i - chen P robe , gut Uberein.

M i c r o c h e m . J . 1_._99, 285-294 (1974). Dept. P a t h o l . , St. J o s e p h M e r c y H o s p . , Pon t iac , Mich. (USA)

A. E. BUhler

A simplified method for determining arsenic and antimony by the hydride evolution-atomic absorption method. J.C. VanLoon and E. J. Brooker.

Best. von Arsen und Antimon in Biolog. Material; vereinfachter Hydridgenerator.

A plastic disposable syringe hydride generator and aspirator system coupled with atomic absorption spectroscopy is shown to give results comparable to complex systems costing many times more. Details of operation, sensitivity, range of linearity and de-

tection limits are outlined. Analyses performed on National Bureau of Standards Orchard Leaves and Bovine Liver are given and the results compared with NBS provisional values.

Anal. Letters --7, 505-513 (I 974). Depts. Geol. Chem., Univ. Toronto, Ontario (Kanada)

D e t e r m i n a t i o n of the vanadium con tes t of p ro te in so - lu t ions by e l e c t r o n p a r a m a g n e t i c r e s o n a n c e . J . J . F i t z g e r a l d and N. D. Chas teen .

Bes t . yon Vanadium in P r o t e i n e n ; S p e k t r o m e t r i e , EPR.

V kann im K o n z e n t r a t i o n s b e r e i c h yon 10 -3 - 10 -5 M, be i e i n e r N a c h w e i s g r e n z e yon 25 ppb, in P ro t e in l6sun gen d u t c h p a r a m a g n e t i s c h e E l e k t r o n e n r e s o n a n z s p e k - t r o s k o p i e b e s t i m m t w e rd en . Ffir d i e sen K o n z e n t r a - t i o n s b e r e i c h e rg ib t s i ch in s a l z s a u r e r L6sung, die e twas A s c o r b i n s ~ u r e enth~lt , zwischen der Konzen-

an VO(H20)52+ und dem p a r a m a g n e t i s c h e n t r a t i on f i r s t - d e r i v a t i v e E l e k t r o n e n r e s o n a n z - S i g n a l eine l i ne - a r e Abh~ingigkeit. Die Genauigkei t betrf igt -+ 3%.

Anal. B i o ch em. 6__00, 170-180 (1974). Dept. c h e m . , P a r s o n s Hall, Univ. New H a m p s h i r e , Durham, New H a m p s h i r e (USA) K. Henning

Determination of tellurium in biological material by atomic absorption spectrophotometry. J.T. Cheng and W. F. Agnew.

Best. yon Tellur in Bio!og. Material; Spektralphoto- metrie, Atomabs orption.

Die Bestimmungen werden nach der "Microsampling Boat"-Technik unter Anwendung des Additionsverfah- tens durchgeffihrt. Zu verschiedenen L6sungen glei- chen Gehaltes yon naf~ veraschtem biologischem Ma- terial wird Na2TeO 4 in verschiedenen Konzentratio- nen zugegeben; diese Lbsungen werden nach der ge- nannten Technik unter Verwendung der Te-Linie 214, 3 nm analysiert. Wegen der St6rung durch die Matrix der Lbsung und das Rauschen der Te-Hohlka- t hoden lampe l iegt die k le ins te s igni f ikant f es t s t e l lba r~ Zugabemenge bei 0, 03 }lg T e / g Gewebe (na~). Bei Z u g a b e m e n g e n zwischen 0, 03 und 1 pg T e / g w e rden 80 - 130% der zugegebenen Menge wiede rge funden . Bei h b h e r e n Zugaben kbnnen b e s s e r e 0 b e r e i n s t i m m u n gen e r w a r t e t w e rd en .

Atom. A b s o r p t . Newsle t t . 13___, 123-124 (1974). Hunting ton Inst . of Med. R e s . , Pa sadena , Calif. (USA)

L. Schmitz

Enzyma t i c ana lys i s by m e a n s of the a i r - g a p e l e c t r o - de. D e t e r m i n a t i o n of u rea in blood. E . H . Hansen and J. Rt~i~ka.

Bes t . yon Harns to f f in Blut; E l ek t roden , i o n e n s e l e k - rive; A i r - g a p - E l e k t r o d e fa r NH 4.

o v . , ~ Die yon J. Ruzlcka und E. H. Hansen (Anal. Chim. Acta 69, 129 (1974)) en twicke l t e A i r - g a p - E l e k t r o d e , die ffir A m m o n i u m se l ek t iv is t , wi rd zur B e s t i m m u n g yon 0, 01 - 0, 0001 M Harns to f f in Blur und S e r u m an-


gewendet , i n d e m n a c h e n z y m a t i s c h e m U m s a t z mi t U r e a s e die s p e z i f i s c h geb i lde ten A m m o n i u m i o n e n be - s t i m m t w e r d e n . P r o t e i n e und Blu tze l len s t b r e n nicht . Die r e l a t i ve S tandardabweichung l iegt un te r 2, 4%.

Anal. Chim. Acta 72, 353-364 (1974). Chem. Dept. A, TU Denmark , Lyngby (D~nemark) K. Henning

An i m p r o v e d d i m e t h y l a m i n o b e n z a l d e h y d e p r o c e d u r e for d e t e r m i n i n g u rea . L . G . Morin and J. P rox .

Bes t . von Harns to f f in S e r u m mi t D i m e t h y l a m i n o - benza ldehyd ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; Modifikat ion.

L b s t man p - D i m e t h y l a m i n o b e n z a l d e h y d in Dimethy l - f o r m a m i d und benutz t a ls zwe i t e s Reagens konz. S chw efe l s au re + E i s e s s i g , kann m a n die Reakt ion in 0, 1 ml S e r u m ohne Ente iwei~en durchf f ihren und be- r e i t s nach 2 min bei 435-(450) nm p h o t o m e t r i e r e n . Die genau b e s c h r i e b e n e Modif ikat ion l i e f e r t r e p r o d u - z i e r b a r e , gut s t i m m e n d e Wer te .

Clin. Chim. Acta 4.__77, 27-31 (1973). Dept. C h e m . , Res . Sect ion, K i e s s I n s t r u m e n t s , I n c . , Miami , F la . (USA)

E. Mfil ler , M a r b u r g

De t e rmina t i o n of u r ic acid u t i l i z ing u r i c a s e - p e r o x i d - a se s y s t e m coupled with 4 - m e t h o x y - 1-naphthol . T. Kinoshi ta , F . I inuma, B. Yamanoha, A. Tsuj i and M. Kato.

Bes t . yon H a r n s ~ u r e mi t 4 - M e t h o x y - l - n a p h t h o l ; E n z y m a t i s c h e Ana lyse ; U r i c a s e - P e r o x i d a s e s y s t e m .

A method for the d e t e r m i n a t i o n of u r ic acid in which u r i c a s e - p e r o x i d a s e s y s t e m coupled with 4 - m e t h o x y - 1-naphthol (4 MN) as a co lo r r e a g e n t is d e s c r i b e d . P r o c e d u r e : Color r e a g e n t is p r e p a r e d by mix ing 10 ml of 0: 1% 4 MN in me thy l ce l lo so lve and 60 ml of aqueous solut ion conta in ing 12, 5 mg of u r i c a s e , 0, 1 mg of POD and 4 g of NaHCO 3 and the r e s u l t a n t solut ion is made up to 100 ml with wa t e r . F o r a s s a y of u r ic acid, to 1, 0 ml of a s amp le solut ion con ta in - ing 5 to 70 ~ g / m l of Uric acid is added the co lo r r e - agent and the a b s o r b a n c e is m e a s u r e d at 620 nm a f t e r s t and ing the m i x t u r e for 20 rain. Human ur ine can be d i r ec t l y a s s a y e d a f t e r 4 0 - t i m e s dilut ion.

Japan Ana lys t 23_.__, 1217-1221 (1974) ( Japanisch , mi t engl. Zus . f a s s . ). School P h a r m . Sc i . , Showa Univ. Hatanodai , Shinagawa-ku, Tokio (Japan)

F l u o r o m e t r i c ana ly s i s of N- of - m e t h y l a m i n o ac ids us ing f l u o r e s c a m i n e . A . M . Fe l ix and G. T e r k e l s e n .

Bes t . yon A m i n o s ~ u r e n mi t F l u o r e s c a m i n , F l u o r i - m e t r i c ; N- c~-Methyl -AS.

Sekund~ire Aminos~iuren k6nnen nach M. Weigele , S. L. de B e r n a r d o und W. L e i m g r u b e r (Biochem. Bio- phys. Res . Commun. 50._._, 352 (1973)) durch oxidat ive D e c a r b o x y l i e r u n g mi t N - C h l o r s u c c i n i m i d in p r i m ~ r e Amine umgewande l t we rden . Diese r e a g i e r e n mi t F l u o r e s c a m i n ( 4 - P h e n y l s p i r o [ furan-2-(3H) , l ' - p h t h a - l a n ] - 3 , 3 ' -d ion) zu in tens iv f l u o r e s c i e r e n d e n P y r r o - l inonen. P r i m ~ r e Aminos~uren , welche mi t F l u o r e s c -

amin ebenfa l l s f l u o r e s c i e r e n d e Verbindungen e r g e - ben, ze igen nach Behandlung mi t N - C h l o r s u c c i n i m i d nur noch etwa 5% de r ohne Oxidat ion e r h a l t e n e n F luo- r e s c e n z . Daher kbnnen p r i m ~ r e und sekund~re A m i - nos~uren an de r g le ichen A u s t a u s c h e r s ~ u l e ge t r enn t und d u t c h s imu l t ane Ana lyse mi t und ohne Oxidat ion du tch N - C h l o r s u c c i n i m i d f l u o r i m e t r i s c h b e s t i m m t w e rd en . N- G - M e t h y l a m i n o s ~ u r e n , welehe am f~-C- Atom d i s u b s t i t u i e r t s ind, ze igen jedoch nu t ge r inge F l u o r e s c e n z . -

Anal . B iochem. 6._00, 78-87 (1974). Chem. Res . Dep t . , Hof fmann-La Roche Inc . , Nutley, New J e r s e y (USA)

A. Niemann

Nuc lea r magne t i c r e s o n a n c e s tud ies of the m i c r o - scopic p ro tona t ion of L - c y s t e i n e . D.B. W a l t e r s and D. E. Leyden .

Un te r suchung yon L - C y s t e i n ; S p e k t r o m e t r i e , KMR.

Dureh K MR-Sp ek t ro s k o p i e w i rd das P r o t o n e n s c h e m a yon L - C y s t e i n un t e r such t , wobei s ich ftir L - C y s t e i n , L - C y s t e i n m e t h y l e s t e r und S - M e t h y l - L - C y s t e i n in Ab- h~ngigkei t vom p H - W e r t c h e m i s c h e V e r s c h i e b u n g e n e rg eb en . Mit Hilfe der L - C y s t e i n d e r i v a t e kann de r P ro tonene f f ek t von A m i n o - , Su l fhydry l - und Carbo- xy lg ruppen auf die c h e m i s c h e V e r s c h i e b u n g der CH- und C H 2 - P r o t o n e n b e s t i m m t werden .

Anal. Chim. Acta 72, 275-283 (1974). Chem. Dep t . , Univ. Georgia , Athens , Ga. (USA) K. Henning

I s o e l e c t r i c focus ing of p ro t e i n s exposed to sod ium dodecy l su l fa te . D.W. Mi l l e r and S. C. R. Elgin.

Ana lyse yon P r o t e i n e n in Na-dodecy l su l f a t l b sung ; E l e k t r o p h o r e s e ; i s o e l e k t r . F o k u s s i e r u n g .

Die Ana lyse yon P r o t e i n e n kann in n a t r i u m d o d e c y l - su l fa tha l t igen L6sungen durch i s o e l e k t r i s c h e F o k u s s i e - rung ohne Schwie r igke i t en durchgef f ihr t w e rd en , wenn v o r h e r eine Dia lyse gegen e inen 0berschuf l an 10 M Harns to f f lb sung v o r g e n o m m e n wi rd . H i e r d u r c h wi rd der gr6flte Tel l des N a t r i u m d o d e c y l s u l f a t e s abge t r enn t .

Anal. B iochem. 6__00, 142-148 (1974). Div. B io l . , Cal i - fornia Ins t . Techno l . , Pasadena , Calif. (USA)

K. Henning

Automated m i c r o s e q u e n c e an a l y s i s in the p r e s e n c e of a syn the t ic " c a r r i e r " . J . S i lver and L. E. Hood.

Sequenzana lyse yon P r o t e i n e n ; Sequenator ; s u ce iny - l i e r t e s Po lyorn i th in a l s T r~g e r .

Bei de r a u t o m a t i s c h e n Sequenzana lyse yon ge r ingen Mengen P r o t e i n wi rd ein s ign i f ikan te r Ante i l an P r o - te in w~Lhrend der v e r s c h i e d e n e n Stufen a u s g e w a s c h e n . Durch den Einschlufl e ines T r ~ g e r s , s u c c i n y l i e r t e m Po lyo rn i th in (SPO), wi rd die Auswaschung w e s e n t l i c h h e r a b g e s e t z t . Der T r w e r m b g l i c h t auch die Sequenz- ana lyse yon M i k r o m e n g e n P r o t e i n in Gegenwar t von N a t r i u m d o d e c y l s u l f a t . - Wenn P r o t e i n e in Gegenwar t e ines T r ~ g e r s s e q u e n t i e r t w e r d e n so l len , gibt man 5-7 m g SPO, ge lbs t in 200 }11 W a s s e r in den Sequen-


a t o r und l~l~t dami t zwei komple t t e Sequenzzyklen durch lau fen . Dann w e r d e n 50-100 p g de r P r o t e i n p r o - be in 200 p1 W a s s e r ge lSs t und in den Sequena to r geffillt. E i n z e l h e i t e n fiber die Durchff ihrung wurden be - f e l t s von L. Hood, D. McKean, V. F a r n s w o r t h und M. P o t t e r ( B i o c h e m i s t r y 1._~2, 741 (1973)) und O. Smi th i e s , D. M. Gibson, E . M . Fanning, R . M . Goodf l iesh , J . G . Gi lman und D. L. Ba l lan tyne ( B i o c h e m i s t r y 10__, 4912 (1971)) b e s c h r i e b e n . -

Anal . B iochem . 60_._, 285-292 (1974). Div. B io l . , Calif . Ins t . T e c h n o l . , P a s a d e n a , Ca l i f . (USA)

A. Niemann

D e t e r m i n a t i o n of to ta l u r i n a r y p ro te in , combin Ing L o w r y s e n s i t i v i t y and b i u r e t spec i f i c i t y . K. Doe t sch and R. H. Gadsden .

Bes t . yon P r o t e i n e n in Harn; Au toana lysa to r ; B i u r e t - R e a k t i o n , L o w r y - V e r f a h r e n .

Bei d e r 1V[ethode hande l t es s i c h um eine Kombina t ion d e r B i u r e t r e a k t i o n mi t dem V e r f a h r e n yon Lowry . Mit e i n e r e r s t e n Ge l f i l t r a t i on w e r d e n s t 6 r e n d e Sub- s t anzen bese i t i g t , so da~ dann nur Pep t idb indungen die B i u r e t r e a k t i o n bed ingen . Uber e ine zwei te Gel - f i l t r a t ion wi rd f iberschEiss iges Kupfer a u s g e s c h a l t e t und das an P r o t e i n gebundene mi t D i~ thy ld i th ioca rba - ma t be i 440 nm mi t dem Au toAna lyze r b e s t i m m t . Mit de r s p e z i f i s c h e n Methode i s t noch 1 m g / d l b e s t i m m - b a r . E i n z e l h e i t e n s ind angegeben .

Clin. Chem. 19, 1170-1178 (1973). Dept. B i o c h e m . Clin. P a t h o l . , Med. Univ. South Caro l ina , S .C . (USA)

E. Mfiller, M a r b u r g

Amino acid ana ly s i s with f l u o r e s c a m i n e of s ta ined p ro t e in bands f r o m p o l y a c r y l a m i d e ge ls . S. Stein, C. H. Chang, P. B6hlen, K. Imai , S. Udenf r i end .

Bes t . yon A m i n o s ~ u r e n in P r o t e i n e n ; E l ek ' t r opho re - s e / A S - A n a l y s a t o r ; mi t F l u o r e s c a m i n .

Die B e s t i m m u n g von A m i n o s ~ u r e n mi t Ninkydr in aus P r o t e i n p r o b e n , die in P o l y a c r y l a m i d g e l e n (PAA) ge- t r enn t wurden , wi rd du rch den hohen A m m o n i a k g e - hal t s e h r e r s c h w e r t . Bei Verwendung yon F l u o r e s c - amin a l s N a c h w e i s r e a g e n s ffir A m i n o s ~ u r e n nach S. Stein, P. B6hlen, J . Stone, W. D a i r m a n und S. Uden- f r i end (Arch. B iochem. Biophys . 155, 202 (1973); vgl. d i e s e Z. 270, 253 (1974)) sowie A. M. Fe l ix und G. T e r k e l s e n (Arch. B iochem. Biophys . 15___77, 177 (1973); vgl. d i e se Z. 270, 408 (1974)) w i r d mi t A m - moniak nur noch e ine ge r inge F l u o r e s c e n z e r h a l t e n . Ausf f ih r l i che B e s c h r e i b u n g d e r Methode im Or ig ina l .

Anal. B iochem. 60, 272-277 (1974). Roche Inst . Mo- l e c u l a r Biology, Nutley, N . J . (USA) A. Niemann

D e t e r m i n a t i o n of t ryp tophan and indole s u b s t a n c e s by a c o l o r i m e t r i c d i azo t i s a t ion me thod . A . K . Goswami .

Bes t . von Tryp tophan und Indo lde r iva t en in P r o t e i n - hyd ro ly sa t en ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; nach Diazo t i e rung .

Es w e r d e n V e r s u c h e durchgeff ihr t , um Grtinde f(ir die Schwie r igke i t en aufzuf inden, die bei d e r photo-

m e t r i s c h e n B e s t i m m u n g yon Tryptophan (T.) in P r o - t e i n h y d r o l y s a t e n nach Diazo t i e rung au f t r e t en . Es w i rd f e s t g e s t e l l t , da~ die s e l ek t ive N i t r o s i e r u n g von T. am b es t en bei 20 - 35~ in 1-1, 2 M Sa lzs~ure ab- l~uft. Die D iazo t i e rung so l l t e be i ~ 10~ v o r g e n o m - men w e r d e n . Da NaC1 die N i t r o s i e r u n g s r e a k t i o n in e r h e b l i c h e m Ausma8 s t6 r t , so l l t en die S tandard l6sun- gen NaC1 in d e r s e l b e n Menge wie die P ro b e l Ss u n gen en tha l ten . 22 A m i n o s ~ u r e n s t 6 r e n die F a r b r e a k t i o n nicht , Indol und se ine Der iva t e dagegen ze igen die g le iche Reakt ion. Phenole und K r e s o l e sowie a r o m a - t i s ch e Amine s t 6 r e n ebenfa l l s .

Ana lys t 9__99, 657-660 (1974). Dept. Soil Sci. and C h e m . , H imacha l P r a d e s h Univ . , P a l a m p u r , H . P . (Indien)

B. Se i fe r t

A new acid h y d r o l y s i s me thod for d e t e r m i n i n g t r y p - tophan in pep t ides and p r o t e i n s . B. Penke , R. F e - r e n c z i and K. Kov&cs.

Bes t . yon Tryptophan in Pep t iden und P r o t e i n e n ; neue H y d r o l y s e m e t h o d e .

Bei de r E r m i t t l u n g de r A m i n o s ~ u r e z u s a m m e n s e t z u n g yon Pep t iden und P r o t e i n e n durch To ta lhydro lyse in s a u r e r L6sung wird s t e t s ein zu n i e d r i g e r T ryp tophan- w e r t e r h a l t e n . Verf f . haben Mercap to~ thansu l fon - s~u re a ls s a u t e s Agens ffir die Hydro lyse einges~*zt und dabei W i e d e r f i n d u n g s r a t e n yon ca. 95% ffir T r y p - tophan e r z i e l t . Wei t e rh in entffillt bei dem V e r f a h r e n das E indampfen des H y d r o l y s a t e s . - Ausffihrung: 0, 5 - 2 m g P r o t e i n w e r d e n mi t 1 ml 3 N M e r c a p t o - a thansu l fons~ure ( h e r g e s t e l l t v. Union Chimique Belge, Brf i sse l ) im dickwandigen z u g e s c h m o l z e n e n Rohr 24 h auf 110oc + 2 e rh i t z t . Das abgekfihlte Hydro lysa t wi rd mi t 2 ml N Nat ronlauge g e m i s c h t und mi t Was- s e r auf 5 ml e rg~nz t . Je 1 ml d i e s e r L6sung w e r d e n ffir d ie Ana lyse in d e r I o n e n a u s t a u s c h e r s ~ u l e v e r w e n - det . Verf f . benfi tzten das Ger~t SNP, Model l HD 1200-E, w e l c h e s in de r S~ule ffir n eu t r a l e und s a u r e A m i n o s ~ u r e n (50 x 0, 8 cm) den A u s t a u s c h e r Ch romex KG-53 enth~lt . Die Elut ion wird mi t 0, 2 N N a t r i u m - c i t r a t p u f f e r pH 3, 28 fiber 2 h, 0, 2 N N a t r i u m c i t r a t - puf fer pH 4, 25 ffir 40 rain und 0, 35 N N a t r i u m c i t r a t - puffer pH 5, 28 ffir 40 rain ausgeff ihr t ; Tryptophan und b a s i s c h e A m i n o s ~ u r e n w e r d e n an de r zwei ten Sfiule (15 x 0, 6 cm) mi t N a t r i u m c i t r a t p u f f e r pH 4, 25 fiber 40 rain und pH 5, 28 fiber 100 rain e lu i e r t . - Die Wirkung a n d e r e r s a u r e r Agent ien wi rd zum V e r g l e i c h h e r a n g e z o g e n . Bei Verl~ingerung de r H y d r o l y s e n d a u e r t r i t t in j e d e m Fa l l e ine V e r m i n d e r u n g de r T ryp tophan- w e r t e ein.

Anal . B iochem. 60, 45-50 (1974). Inst . Organ ic C h e m . , J 6 z s e f At t i la Un~-v., Szeged (Ungarn) A. Niemann

D e t e r m i n a t i o n of the a r~ in ine content of p r o t e i n s by the Sakaguchi p r o c e d u r e . G. T o m l i n s o n a n d T. V i s - wanatha .

Bes t . yon Arg in in in P r o t e i n e n ; E n z y m a t i s c h e Ana- lyse ; k r i t i s c h e r Me thodenve rg le i ch :

Wenn man den A r g i n i n - G e h a l t v e r s c h i e d e n e r P r o t e i n - p roben nach d e r Sakaguch i -Methode (S. Sakaguchi, J .


Biochem. (Tokyo) 5_,..25 (1925)) b e s t i m m t , e rh~l t m a n Wer te , die in gu te r U b e r e i n s t i m m u n g mi t denen aus der I o n e n a u s t a u s c h e r - M e t h o d e nach D. H. Spackman, W. H. Stein und S. Moore (Anal. Chem. 30, 1190 (1958)) s t ehen . Bei O~-Chymotryps in wi rd jedoch nach Akt i - v i e rung des Z y m o g e n s ein h 6 h e r e r Wer t ffir Arg in in nach Sakaguchi e rha l t en . Auch zwei a n d e r e S e r i n - E s t e r a s e n , T ryps in und Subt i l i s in ze igen die g le iche E r s c h e i n u n g . MSgliche Grfinde h ie r f f i r we rden d i sku- t i e r t , s ind a b e r noch nieht sch l f i s s ig . V o r a u s s e t z u n g ffir das Gel ingen de r Sakaguch i -Reak t ion in der yon J. P . G r e e n s t e i n und M. Winitz ( C h e m i s t r y of the A m i - no Acids , Wiley New York, 1961, Vol. 3, S. 1847) be - s c h r i e b e n e n Modif ikat ion i s t die genaue Einhal tung der Zugabe d e r Reagen t i en : Zu 1 ml Tes t lSsung mi t 0, 1 bis 1, 0 pMol Arg in in gibt man 1 ml 0, l%ige LS- sung yon C(-Naphthol in 50%igem i i thanol und 1 ml 10%ige Kal i lauge . Nach guter V e r m i s c h u n g gibt man 1 ml 5%ige Harns to f f l6 sung zu, m i s c h t und gibt s chne l l 2 ml K a l i u m h y p o b r o m i t l 6 s u n g zu (0, 64 ml Br 2 in 100 ml 5%iger Kal i lauge) . D i e s e r Schr i t t i s t e x t r e m k r i t i s c h . Nach 20 rain Stehen bei R a u m t e m p e r a t u r wird die Ext inkt ion bei 520 nm g e m e s s e n . Eine Re- agen t i enb l ind l6sung wird g l e i chze i t i g h e r g e s t e l l t und geme s sen .

Anal . B iochem. 60, 15-24 (1974). Dept. C h e m . , Univ. Water loo , Onta r io (Kanada) A. Niemann

The i n t e r ac t i on of bovine p l a s m a a lbumin with ca t ion- ic d e t e r g e n t s at pH 9. K. Aoki and K. H i r a m a t s u .

Einflufl yon Tens iden auf Albumin; E l e k t r o p h o r e s e , Gel; T e t r a d e c y l t r i m e t h y l a m m o n i u m b r omid.

Es Wird de r gegense i t i ge Einflufl yon Albumin aus R i n d e r p l a s m a und T e t r a d e c y l t r i m e t h y l a m m o n i u m - b rom id bei pH 10 in Abh~ngigkei t yon den Molve rh~ l t - n i s s e n auf die G e l e l e k t r o p h o r e s e u n t e r s u c h t . Bei e inem Molve rhg l tn i s yon 1:12 w e r d e n 5 Zonen e r h a l - ten, wobei Zone 1 m o n o m e r und Zone 2 d i m e r v o r l i e - gen. Die ~ibrigen Zonen s t e l l en ebenfa l l s A lbumin- agg rega t e dar , und un te r b e s t i m m t e n Bedingungen sind auch Ausf~l lungen m6gl ich . Mit w a c h s e n d e r Koh- l ens to f fke t t e des ka t ion i schen T e n s i d s (un te rsuch t wurde eine Ket ten l~nge yon C6-C12) mach t s i ch wach- s e n d e r Einflufl auf das Albumin b e m e r k b a r .

Anal. B iochem. 6._00, 213-225 (1974). Dept. Synth. C h e m . , Givu Univ . , Kagan igaha ra , Gifu P r e f . , (Japan) K. Henning

The use of an E n z a c r y l AA de r iva t ive fo r aff ini ty c h r o m a t o g r a p h y of sex h o r m o n e binding globulin. R. Hampl, O. Taborsky , J . Musi l and L. Starka .

A n r e i c h e r u n g von S e x u a l h o r m o n - b i n d e n d e m Globulin; C h r o m a t o g r a p h i e , Affinitf i ts ; an E n z a c r y l AA.

Ein P o l y m e r e s vom P o l y a c r y l a m i d - T y p mi t Se i ten- ket ten, die f r e i e Aminogruppen am B e n z o l r i n g en tha l - ten (Enzac ry l AA), mi t kovalent gebundenem 3 -H~mi - succ ina t yon 5 0 ( - A n d r o s t a n - 3 0 ( , 178-diol wurde zur A f f i n i t ~ t s - C h r o m a t o g r a p h i e von S e x u a l h o r m o n - b i n d e n - dem Globulin v e r w e n d e t . Nach Waschen yon Puf fe rn mi t w a c h s e n d e r Ionens t / i rke wurde P r o t e i n durch Be-

handlung mi t e i n e r gepuf fe r t en T e s t o s t e r o n l 6 s u n g f r e i g e s e t z t . Dadurch konnte eine 63- fache A n r e i c h e - rung an P r o t e i n e r r e i c h t w e r d e n . Das ge re in ig t e P r o - te in wurde d u t c h se ine B indungse igenscha f t en und du rch i s o e l e k t r i s c h e F o k u s s i e r u n g c h a r a k t e r i s i e r t .

J . Chromatog . 97_._, 57-63 (1974). Res . I n s t . , Endo- c r i n o l . , P r a g und Med. Fac . Clin. Chem. B i o c h e m . , Cha r l e s Univ . , P r a g (Tschechos lowake i )

R. H. S t e r z e l

Sens i t ive o - to lu id ine r e a g e n t for g lucose a s s a y at m o d e r a t e l y e l eva ted t e m p e r a t u r e s . K. Takahara , M. Sasaki , A . J . T o mi s ek and S. Nate l son .

Bes t . yon Glucose in Se rum; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; Au toana lysa to r .

Bei e i n e r hohen B o r s f i u r e k o n z e n t r a t i o n e rg ib t o - T o - luidin in E i s e s s i g ein emp f i n d l i ch e s N a c h w e i s r e a g e n s ffir Glucose . Die H e r s t e l l u n g der ffir die B e s t i m m u n g notwendigen L6sungen wi rd im e inze lnen b e s c h r i e - ben. P r o t e i n e und Lip ide b le iben un te r den V e r s u c h s - bedingungen in L6sung. Die F a r b e , die be i 635 nm g e m e s s e n wird , entwickel t s i ch schon bei 37~ P l a s - m a p r o t e i n e b e s c h l e u n i g e n die F a r b r e a k t i o n bei t i e f e - t e n T e m p e r a t u r e n , was bei den G l u c o s e s t a n d a r d s d u t c h Verwendung yon 6%iger AlbuminlSsung s i m u - l i e r t w e r d e n kann. H~moglobin und Bi l i rub in l i e f e r n b e i m E r h i t z e n auf 55~ e twas zu hohe G l u c o s e w e r t e . Die A n a l y s e n e r g e b n i s s e , die bei d e r Un te r suchung e i n i g e r Se ren mi t v e r s c h i e d e n e n A n a l y s a t o r e n e r h a l - ten wurden , s ind in e i n e r Tabel le zusammengefaBt . Das o - T o l u i d i n - R e a g e n s kann auch zur Iden t i f i z i e rung von v e r s c h i e d e n e n Zucke rn mi t fihnlichen R f - W e r t e n h e r a n g e z o g e n werden , wenn man die Df innschicht - C h r o m a t o g r a m m e nach dem Bespr t ihen z u e r s t auf 37oc, dann auf 100~ e rh i t z t .

M i c r o c h e m . J . 19, 319-329 (1974). Dept. B i o c h e m . , Japan Monoploy C o r p . , Hosp. Tokyo, Tokyo (Japan); Dept. B i o e h e m . , Michae l R e e s e Med. Cen te r , Chica- go, Ill. (USA) W.H. Mennicke

Rapid, s imp l i f i ed con t inuous- f low c o l o r i m e t r y of s e r u m t r i g l y c e r i d e s . W.R. Holub.

Bes t . yon T r i g l y c e r i d e n in Se rum; Au toana lysa to r .

Ver f . m o d i f i z i e r t die Methode yon G. Schu t t r i nge r (Clin. Chem. 19._ 2 6 7 3 (1973)), auch appa ra t i v mi t F l i e S d i a g r a m m , bei d e r die H a n t z s c h - R e a k t i o n a u s - g e w e r t e t wird , d e r a r t , da~ 50-60 P r o b e n / h a n a l y s i e r t w e r d e n k6nnen. Tro tz Vere in faehung l i e f e r t das V e r - f ah ren r e p r o d u z i e r b a r e , s t i m m e n d e Wer te .

Clin. Chem. i__99, 1391-1393 (1973). New York Med. L a b s . , A Damon L a b . , Grea t Neck, N.Y. (USA)

E. Miil ler , M a r b u r g

Grad ien t gel e l e c t r o p h o r e s i s of human p l a s m a l ipo- p r o t e i n s . G . J . Bautovich, M . J . Dash, W . J . Hens ley and J . R. Tur t l e .

Bes t . yon L i p o p ro t e i d en in P l a s m a ; E l e k t r o p h o r e s e , Gel.

Auf A c r y l a m i d g e l - B 1 6 e k e n mi t 4-26% A c r y l a m i d g e h a l -


ten und Puf fe rn pH 9 wi rd 5-6 h mi t 150 V bei 4 -1 0 ~ e l e k t r o p h o r e t i s i e r t . Man t r e n n t so v e r s c h i e d e n e K l a s - s en yon L ipop ro t e iden , die s i c h vo r a l l e m bei d e r U l t r a z e n t r i f u g a t i o n in i h r e r Dichte u n t e r s e h e i d e n . Bei e rh6h ten S e r u m c h o l e s t e r i n g e h a l t e n konnte man eine Zunahme n o r m a l a u f t r e t e n d e r L i p o p r o t e i d e ge - r i n g e r Dichte beobachteno w~hrend bei H y p e r l i p a m i e neue L i p o p r o t e i d f r a k t i o n e n s e h r g e r i n g e r Dichte auf - t r e t e n .

Clin. Chem. 19.__, 415-418 (1973), Dept. M e d . , Univ. Sydney (Aus t ra l ien) H. Rf isse l

Studies on a spec i f i c co lour r e a c t i o n for the d e t e r - m

ruination of t e s t o s t e r o n e . E. Fahmy, D.A. Y a s s a and N. Wahba.

Bes t . yon T e s t o s t e r o n ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; V e r - b e s s e r u n g de r F a r b r e a k t i o n .

Bei d e r bekannten , ffir T e s t o s t e r o n s p e z i f i s c h e n F a r b - reak t ion , w i rd nach Bildung e ines Chrornogens durch Behande ln mi t konz. H2SO 4 die F a r b e n t w i c k l u n g un- t e r Beih i l fe e ines Meta l l ions a l s K a t a l y s a t o r e r r e i c h t . Es wi rd ein e in f aches und s p e z i f s c h e s neues V e r f a h - t e n b e s c h r i e b e n , bei dem eine s t ab i l e Grfinf~rbung durch Behande ln des mi t konz. H2SO 4 geb i lde ten C h r o m o g e n s mi t e i n e r w ~ r i g e n , ges~ t t ig ten P i k r i n - s ~ u r e l 6 s u n g (Aufkochen !) e r z i e l t wi rd . Die grfine LS- sung ze ig t A b s o r p t i o n s m a x i m a bei 470 und 640 nm, wobei un te r den angegebenen Bedingungen die HShen de r Maxima ein etwa kons t an te s Verh~ l tn i s haben (2, 8 - 2, 96). Bei be iden Wellenl~ingen wi rd das B e e r - s c h e G e s e t z ffir 125 - 250jug T e s t o s t e r o n erff i l l t . Die m o l a r e n Ex t ink t ionskoe f f i z i en t en yon T e s t o s t e r o n und e in igen s e i n e r E s t e r s t imrnen p r a k t i s c h f iberein. An- d e r e S te ro ide geben t e i l w e i s e auch e ine F a r b r e a k t i o n , k6nnen j edoch wegen d e r u n t e r s c h i e d l i c h e n Lage ih- r e r A b s o r p t i o n s m a x i m a u n t e r s c h i e d e n w e r d e n .

Ana lys t 9._99, 759-764 (1974). Soc. M i s t pour l ' Ind . P h a r m . , P o s t E1 Zeitoun, K a i r o (VAR) B. Se i fe r t

A rap id gas c h r o m a t o g r a p h i c - m a s s s_p.ectrometric me thod for p ro s t ag l and in a n a l y s i s at p i comole l ev e l s . S. Nicos ia and G. Galli .

Bes t . yon P r o s t a g l a n d i n e n ; C h r o m a t o g r a p h i e , G a s / M a s s e n s p e k t r o m e t r i e ; p M o l - B e r e i c h .

Zur Ana lyse wi rd die P r o b e in 0, 3 ml Methanol ge- 16st, mi t D iazome than l6sung in ~ t h e r v e r s e t z t und im S t i c k s t o f f s t r o m zur Trockne e ingeeng t . Dann wi rd rnit e i n e r 1 : 1 - M i s c h u n g aus N - T r i m e t h y l s i l y l i m i d a z o l und P i p e r i d i n v e r s e t z t (20 ~1/10 pg) und nach wenigen s e c auf eine s i l a n i s i e r t e S~ule {200 x 0, 3 crn) aus 1% SE-30 ode r 3% OV-17 auf 100-120 m e s h G a s C h r o m P bei 255~ i n j i z i e r t . I den t i f i z i e r t wi rd e n t w e d e r m i t - t e l s F l a m m e n i o n i s a t i o n s d e t e k t o r ode r m a s s e n s p e k - t r o m e t r i s c h , wobei im l e t z t e n F a l l die Bes t i r nmung bis zum p M o l - B e r e i c h m6gl i eh i s t . Im e inze lnen w e r d e n PGE1, E2, FI~ X und F 2 ~ b e s t i m m t .

A n a l B iochem . 6...~1, 192-199 (1974). Ins t . P h a r m a c o l . and P h a r m a c o g n o s y , Univ. Mailand (Italien)

K. Herming

An i m p r o v e d p r o c e d u r e for the enzymat i c an a l y s i s of p r o s t a g l a n d i n s in the nanograrn range . F . M . Matsch insky , D. Shanahan and J . E l l e r m a n .

Bes t . yon P r o s t a g l a n d i n e n in Biolog. Ma te r i a l ; E n z y m a t i s c h e Ana lyse ; n g - B e r e i c h .

Zur e n z y m a t i s c h e n B e s t i m m u n g yon P r o s t a g l a n d i n e n im n g - B e r e i c h wi rd P r o s t a g l a n d i n d e h y d r o g e n a s e v e r - wendet . Diese wi rd aus Rinder lunge gewonnen, wobei zur Reinigung ein e n t s p r e c h e n d e s E x t r a k t i o n s v e r f a h - r en fiber m e h r e r e Stufen (Dialyse, F r a k t i o n i e r u n g d u t c h Ace tonzugabe , Ge l f i l t r a t ion und An ionenaus - t a u s c h - C h r o m a t o g r a p h i e ) angewende t wi rd .

Anal . B iochem. 60, 188-199 (1974). Washington Univ. Med. School, Dept. P h a r m a c o l . , St. Louis , Mis s . (USA) K. Henning

Imp ro v ed s t ab le d iazonium sa l t p r o c e d u r e for d e t e r - mina t ion of tota l s e r u m bi l i rubin . L . G . Mor in .

Bes t . yon Bi l i rub in in Se rum; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; s t ab i l e s D i a z o r e a g e n s .

Benutzt man s t a t t D iazoro t RC nach V. Kulhanek und J. Appel t (Clin. Chim. Acta 2.~0, 29 (1968)) D i a z o - N ' - b u t y l - 4 - m e t h o x y m e t a n i l a m i d (Fas t Red PDC, Sigma) und an s t e l l e yon C i t ro n en s ~u re Ma le insw k o m m t man mi t e i n e m r e l a t i v ha l t ba r en Reagens aus. G le i ch - ze i t ig wi rd die Empf ind l i chke i t e rh6ht .

Clin. Chim. Acta 4_~7, 111 - 112 (1973). Chem. Dep t . , Res . Sect ion, K i e s s I n s t r u m e n t s I n c . , Miami, Fla , (USA) E. Mfiller, M a r b u r g

R e c o v e r y of p y r i m i d i n e - b a s e d e r i v a t i v e s in gas c h r o m a t o g r a p h y . V. Rehak and V. Pacakova .

Bes t . yon Urac i l und Thymin a l s TMS-Der iva t e ; C h r o m a t o g r a p h i e , Gas .

Zur B e s t i m m u n g yon Urac i l und Thymin wi rd mit e i n e m 50- fachen m o l a r e n 0 b e r s c h u ~ an BSTFA bei 150~ w~hrend 45 rnin zu den T r i m e t h y l d e r i v a t e n u m - g e s e t z t und an e i n e r Glass~inle (100 x 0, 4 cm) aus 10% OV-101 an 60-80 m e s h C h r o m o s o r b W bei 130~ c h r o m a t o g r a p h i e r t .

Anal. B iochem. 6_~1, 294-297 (1974). Dept. Agr i c . C h e m . , Fac . Sc i . , Cha r l e s Univ . , P r a g ( T s c h e c h o - s lowakei) K. Henning

F a c t o r s a f fec t ing the s a tu r a t i on a s s a y of cyc l ic AMP in b io log ica l s y s t e m s . J . D . M, Albano, G .D. B a r n e s , D. V. Maudsley , B . L . Brown and R. P. E tk ins .

Bes t . yon Adenos inmonophospha t ; S~t t igungsmethode; Bl indwer te inf lu~ , cycl . AMP.

Es w e r d e n Un te r suchungen fiber den Einflu~ des Bl ind- w e r t e s bei d e r B e s t i r n m u n g von cycl . AMP naeh der S~it t igungsmethode durchgeff ihr t . U n s p ez i f i s ch e Bl ind- w e r t e i n f l f i s s e h~ngen sowohl yon de r P r i m ~ r r e a k t i o n zw i s eh en cycl . AMP und dem r e a g i e r e n d e n P r o t e i n a ls auch yon d e r W i r k s a m k e i t des angewende ten T r e n n - v e r f a h r e n s ab. E n t s c h e i d e n d is t vor a l l em, da/~ die

Referate SpezieUe Anwendungsgebiete: 4. Biologisches Material 169

B l i n d w e r t k o r r e k t u r s t a r k yon der j e w e i l s e i n g e s e t z - ten Nuc leo t idmenge abhfingt und somi t keine g e n e r e l l e B l i n d w e r t k o r r e k t u r fa r al le Konzent ra t iormn m6gl ich i s t .

Anal. B iochem. 60, 130-141 (1974). Inst . Nucl. Med. The Midd lesex Hosp. Med. School, London (Groflbr i - tannien) K. Henning

Improved m e thods for A T P a n a l y s i s . S. Cheer , J . H . Gent i le and C. S. Hegre .

Bes t . von A d e n o s i n t r i p h o s p h a t in W a s s e r , Pf lanzen , Algen, Bakte r ien ; E n z y m a t i s c h e A n a l y s e / S z i n t i l l a - t i o n s m e s s u n g .

Verf f . haben die A r b e i t s b e d i n g u n g e n abe rp ra f t , mi t denen A T P in m a r i n e n S y s t e m e n a n a l y s i e r t w e rd en karm. Die A T P - B e s t i m m u n g s e l b s t e r fo lg t mi t dem L u c i f e r i n / L u c i f e r a s e - S y s t e m , f a r das DuPont e inen R e a g e n t i e n s a t z h e r s t e l l t . Die L i e h t e m i s s i o n , die d e r Konzen t r a t i on an A T P p ropo r t i ona l i s t , wi rd yon e i n e m F la s s i g - Sz in t i l l a t ions s pekt rophot o m e t e r g e m e s s e n . (Packard T r i C a r b Mod. 3380). Wesen t l i che V e r b e s s e - rungen der Genauigkei t wurden e r r e i e h t , indem die P r o b e n mi t T r o c k e n e i s ode r mi t f l a s s i g e m St ieks tof f e i n g e f r o r e n , die Reagen t i en bei 0~ aufbewahr t , und die Reaktion s e l b s t in e inem Kahlgef~fl v o r g e n o m m e n wurden . Die P roben , welche feldm~flig und du reh F i l t r a t i on gewonnen wurden , wurden so fo r t mi t ko- c h e n d e m T r i s - P u f f e r pH 7, 75 e x t r a h i e r t , um jede e n z y m a t i s c h e Spaltung zu un te rb inden .

Anal . B iochem. 6.~0, 102-114 (1974). Nat. Mar ine Wa- t e r Quality L a b . , E n v i r o n m e n t a l P r o t e c t i o n Agency, N a r r a g a n s e t t , Rhode Is land (USA) A. Niemann

Guanosine t r i p h o s p h a t e ana lys i s : PEI - t h in l aye r pur i - f icat ion and l u c i f e r i n - l u c i f e r a s e liquid sc in t i l l a t ion quant i ta t ion. M . S . P . Manandhar and K. van Dyke.

Bes t . yon Guanos in t r iphospha t in Biolog. Mate r i a l ; C h r o m a t o g r a p h i e , Dfinns ch i ch t /Sz in t i l l a t i ons me s sung.

W e s e n t l i e h e s Kennze i chen is t die c h r o m a t o g r a p h i s c h e Abt rennung des GTP yon a n d e r e n Nucleot iden auf e ine r PEI -Df innsch ich t und die naehfo lgende B e s t i m - mung mi t dem L u c i f e r i n - L u c i f e r a s e - S y s t e m . - A u s - f fihrun_g. Die in m o d i f i z i e r t e m K r e b s - H e n s e l e i t - P u f - f e r (M. S. P. Manandhar und K. van Dyke (Anal. Bio- chem. im Druck) ge lSs ten N u c l e o t i d - P r o b e n (0, 5 rag / ml) w e r d e n auf Dfinnschicht (MN P o l y g r a m , CEL 300 P E I / u v 254) a b e r t r a g e n und inne rha lb 50 rain zun~chst mi t W a s s e r und dann mi t 1, 4 M L i th iumch lo r i d l Ss u n g in de r g le ichen Richtung entwickel t . Nach L o k a l i s a - t ion un te r UV-L ich t (260 nm) w e r d e n die gewfinsch- ten Nucleo t id f lecke a u s g e s c h n i t t e n und mi t 0, 5 ml 0, 08 N K a l i u m c a r b o n a t l 6 s u n g e lu ie r t , mi t dem Ge- m i s c h 10 mM Ka l iumdihydrogenphospha t , 4 mM Mag- n e s i u m s u l f a t , pH 7, 4 ve rdann t und fa r den E n z y m t e s t v e r w e n d e t o d e r t i e f g e f r o r e n . Man gibt zu 0, 4 ml Nu- c l eo t id l6sung in e i n e m Z ~ h l r o h r 7, 4 m l ob ige r P h o s - pha tpuf fe r lSsung und s t a r t e t die Reakt ion durch Zu- gabe yon 0, 2 L u c i f e r i n - L u c i f e r a s e - L 6 s u n g nach M. S. P. M.anandhar und K. van Dyke (1. c. ). 20 sec nach dem Star t beginnt die Z~hlung im Sc in t i l l a t i ons -

m e s s e r . Die e inze lnen Nucleot ide ze igen einen cha- r a k t e r i s t i s c h e n und s p e z i f i s c h e n Ver lau f de r L i ch t - e m i s s i o n s k u r v e in Abh~_ngigkeit yon de r Zei t . Bei GTP l iegt das Maximum 2 min nach dem Star t . Die u n t e r s c h i e d l i c h e E m i s s i o n wi rd ausf f ihr l ich d i sku t i e r t . AMP h e m m t s e h r deut l ich die E m i s s i o n .

Anal. B iochem. 60_..., 122-129 (1974). Dept. P h a r m a c o l . , Univ. Med. Cente r , Morgantown, W. Vi. (USA)

A. Niemann

F r a c t i o n a t i o n of high m o l e c u l a r - w e i g h t duplex DNA m o l e c u l e s on di lute a g a r o s e gels . G. Henckes , M. Croche t , B. Labedan and J . L e g a u l t - D e m a r e .

F r a k t i o n i e r u n g yon Nuc le ins~uren ; E l e k t r o p h o r e s e , S~ulen; h o c h m o l e k u l a r e DNS, ve rd . A g a r o s e g e l .

Zur F r a k t i o n i e r u n g yon h o c h m o l e k u l a r e r DNS wi rd die E l e k t r o p h o r e s e in e i n e r S~ule mi t 6 cm Bet th6he an 0, 05 - 1% A g a r o s e g e l ausgeff ihr t . Durch Z i rku la - tion mi t w a r m e m W a s s e r yon 65~ wi rd das Gel ge- s c h m o l z e n gehal ten . Die Trennung von T4- und T7- DNS kann mi t 0, 05 - 0, l%igem Gel e r r e i c h t w e rden .

Anal . B iochem. 60, 1-14 (1974). ins t . R a d i u m - F o n - dation Curie , Univ. P a r i s , Ctr . d' O r s a y ( F r a n k r e i c h )

K. Henning

T h e r m a l elut ion c h r o m a t o g r a p h y and the r e s o l u t i o n of nuc le ic ac ids on hydroxy lapa t i t e . H.G. Mar t i n son and E. B. Wagenaar .

Trenn . yon Nueleins~uren an Hydroxylapa t i t ; Chro - ma tog raph i e , S~ulen; Elut ion bei 20-60~

Bei d e r Trennung yon e in - und doppels t r f ihn igen Nu- c le ins f iu ren wi rd un te r Verwendung des n o r m a l e n Hy- d roxy lapa t i t e s Bio-Rad HTP und e ines N a t r i u m p h o s - p h a t - G r a d i e n t e n zur Elut ion im B e r e i c h yon 20-80~ das op t imale E r g e b n i s e r z i e l t . Die Aufs te l lung und p r a k t i s c h e Auswer tung yon w i n d o w - D i a g r a m m e n zur N u e l e i n s ~ u r e - T r e n n u n g wi rd e r S r t e r t .

Anal. B iochem. 61_.._, 144-154 (1974). Dept. Biol. S c i . , Univ . , L e t h b r i d g e , A lbe r t a (Kanada) K. Henning

Separation of t-RNAs by two-dimensional polyacryl- amide gel electrophoresis. M. Stein and F. Varricehio.

Trenn. von Nucleins~uren an PAA-Gel; Elektropho- rese; t-RNS.

Gearbeitet wird mit 15%igen Polyaerylamid-Gelen (15 x 0, 6 cm), zu deren Herstellung 37, 5 ml einer w~flrigen Lbsung aus 19% Acrylamid, 1% N', N-Me- thylen-bis-aerylamid und 48% Harnstoff (A), I, 5 ml i, 6%iger AmmoniumpersulfatlSsung (B), I, 5 ml 6, 4%iger 3-Dimethylaminopropionitrillbsung (C), 5 ml einer Lbsung aus 17% 2-N-Morpholin~thansulfon- s~iure und 2, 1% Citronens~ure (D) und 4, 5 ml Wasser vermiseht und mit Natronlauge auf pH 5, 8 eingestellt werden. Dann wird ausgegossen, mit Wasser aber- schichtet und nach 12 h mit 0, 4 ml einer Lbsung ver- setzt, die 2 mlLSsungA, 1 ml LSsung D und 7 ml Wasser enth~it, und mit 0, 5 ml 0, 02%iger Ribofla-


v in l6sung v e r s e t z t wurde . Des w e i t e r e n wi rd mi t 0, 4 ml d i e s e r L6sung sowie mi t W a s s e r f ibe r sch ich te t . Zu r Trennung wi rd die R N A - P r o b e in 8 M H a r n s t o f f - 16sung aufgegeben . E. col i t r a n s f e r - R N A w e r d e n in 15 Banden au fge t renn t . Durch E l e k t r o p h o r e s e in zwe i - t e r D imens ion bei pH 8, 3 w e r d e n E. c o l i - t - R N A in w e i t e r e 20 F l e c k e n aufge te i l t .

Anal . B iochem . 61, 112-119 (1974). M e m o r i a l S loam K e t t e r i n g C ance r C t r . , New York, N .Y. (USA)

K. Henning

Sf iu len -Chrorna tograph ie yon 5 ' -Nuc l eo t i den am A n i o n e n a u s t a u s c h e r Sephadex A-25 rnit e i n e m L i - n e a r g r a d i e n t e n aus Amrnon iu rnb ica rbona t und A m m o - n i n m c a r b a m a t . H. -D. Hunger und H. Reinbothe .

T renn . yon 5 ' -Nuc l eo t i den an D E A E - S e p h a d e x A-25; C h r o m a t o g r a p h i e , S~iulen; Grad ien te lu t ion .

Eine Methode zur T rennung yon 5 ' - N u c l e o t i d e n wi rd en twicke l t , be i d e r d e r dureh die V o r t r e n n u n g (Pu r i n - und P y r i m i d i n b a s e n ) bed ing te s e p a r a t e A r b e i t s g a n g ent - ffillt und die ums t~nd l i che E n t s a l z u n g d e r P r o b e (LiC1) v e r m i e d e n wi rd u n t e r Be ibeha l tung d e r p r i n z i p i e l l e n V o r t e i l e d e r G r a d i e n t e n e l u t i o n m i t LiC1). In e inem A r - b e i t s g a n g e r fo lg t an d e r 60 x 0,9 cm-S~u le (DEAE- Sepha- dex A-25, 40-120 ~m) zun~chst e ine V o r f r a k t i o n i e - rung d e r G e m i s c h e in b ides t . W a s s e r und dann die Elut ion mi t e inern L i n e a r g r a d i e n t e n aus (NH4HCO 3 + NH2COONH 4) bei e i n e m p H - W e r t von 7-9 (42 m/h ) . Die E lua t f r ak t ionen (15 rain Abstand) w e r d e n nach E inengen im R o t a t i o n s v e r d a m p f e r be i 30~ so fo r t de r D f i n n s c h i c h t - C h r o m a t o g r a p h i e (PEI -Ce l l u lo se ) zuge- ffihrt. Die E lu t ionsvo lumina yon 38 mi t d i e s e m V e r - f ah ren u n t e r s u c h t e n Verb indungen s ind t a b e l l i e r t .

J . Chromatog . 9..~7, 273-276 (1974). Sektion B i o w i s s e n - scha f t en , M a r t i n - L u t h e r Univ. H a l l e - W i t t e n b e r g , 402 Halle (DDR) R .H . S t e r z e l

Rapid s e p a r a t i o n of t i s s u e nuc l eo t i de s on conven t io - na l a n i o n - e x c h a n g e r e s i n s at low p r e s s u r e s . J . X. Khyrn.

Trenno yon 5 ' - N u c l e o t i d e n an Aminex-A27 ; C h r o m a - tog raph ie , S~ulen; Grad ien te lu t ion .

Die T rennung yon R i b o n u c l e o s i d - 5 ' - m o n o - , - d i - und - t r i - p h o s p h a t e n wird b e s c h r i e b e n . Es w i rd mi t e i a e r 0, 62 x 10 cm A m i n e x - A 2 7 - S g u l e ( C i t r a t - F o r m ) ge- a r b e i t e t . Die Elut ion e r fo lg t rnit e i n e m konvexen Grad ien ten aus 25 ml 0, 025 M N a t r i u m c i t r a t und 0, 5 M Ci t r a t l 6 sung (beide vom pH 8, 3) mi t e i n e r r e l a t i v l a n g s a m e n Durchf luf lgeschwindigke i t von 0, 6 m l / r n i n . Es w i rd bei 70~ S ~ u l e n t e m p e r a t u r und e i n e m A r - b e i t s d r u c k yon 40 ps i mi t e i n e m U V - A n a l y s a t o r ffir die R e g i s t r i e r u n g des Eff lua ts g e a r b e i t e t , Die V e r - wendung des konvent ione l len I o n e n a u s t a u s c h e r h a r z e s e r l aub t die Verwendung h 6 h e r e r T e r n p e r a t u r e n , bei denen s c h a r f e P e a k s e r h a l t e n w e r d e n .

J . Chrornatog. 97, 277-279 (1974). Biol. Div . , Oak Ridge L a b . , Oak Ridge, Tenn. (USA) R .H . S t e r z e l

A n i c o t i n a m i d e - a d e n i n e d inuc leo t ide a s s a y u t i l iz ing l i v e r a lcohol dehFdrogenase . M. P. Schulman, N.K. Gupta, A. Omaehi , G. Hoffman and W. E. Mar sha l l .

Bes t . yon NAD mit A lkoho ldehydrogenase ; Enzyrna- t i s c h e Ana lyse .

Zur e n z y m a t i s c h e n Bes t i rnmung yon NAD wird die Ox ido reduk ta se -Ak t iv i t~ t de r L e b e r a l k o h o l d e h y d r o - genase h e r an g ezo g en . Die zwischen ~ thanol und Lac ta ldehyd au f t r e t ende Kopp lungs reak t ion wi rd dadurch e i n s e i t i g g e s t e u e r t , daft Ace ta ldehyd in e i n e r S e m i c a r b a z i d l 6 s u n g e l i m i n i e r b a r i s t . H i e r d u r c h e r - gibt s i ch eine l i n e a r e Abh~ngigkei t zwischen de r Ex- t inkt ion ffir A c e t a l d e h y d s e m i c a r b a z o n und d e r NAD- K o n zen t r a t i o n .

Anal. B iochem. 60._, 302-311 (1974). Dept. Pha r rnaco l . and P h y s i o l . , Univ. Ill, at the Med. C t r . , Chicago, Ill. (USA} K. Henning

Affinity chrornatograph~(..on immobilised adenosin-5'- monophosphate. Some kinetic parameters involved in the binding of group-sPecific enzymes. C. R. Lowe, M. J. Harvey and P. D. G. Dean.

Trenn. yon Enzymen; Chromatographie, Sfiulen; Affinitfits-Chromatograph an AMP-Sepharose.

In dieser Arbeit wurden die kinetischen Pararneter ffir die Zwischenreaktion yon gruppenspezifisehen Enzymen mit N6-(6-Arninohexyl)-5'-AMP-Sepharose unter s~ulenchromatographisehen Bedingungen er- mittelt. Die Adsorptionsisotherme wurde mit einer mit i0 mM KH2PO4.KOH-L6sung vom pH 7, 5 ver- dfinnten Fermentprobe aufgestellt, wobei die L6sung 0, 02% NaN 3 enthielt. Inkubiert wurde 0, 5 g N6-(6- Aminohexyl)-5'-AMP-Sepharose (0, 125 pM 5'-AMP/ ml) f[ir 16 h bei 4, 5~ nach Lowe (Eur. J0 Biochem. 4_.!1 , 341 (1974)). Die Ki-Werte wurden sodann auch in Gegenwart des kornpetitiven Hemmstoffes NADH abge le i t e t . Es b e s t e h t e ine g e w i s s e Abh~ngigkei t yon d e r NADH-Konzen t ra t ion und dem Verh~l tn i s yon E lu t ionsvo lumen und Inh ib i to rkonzen t ra t ion .

Eur . J , B iochem. 42, 1-6 (1974). Dept. B i o c h e m . , Univ. L i v e r p o o l (Groflbr i tannien) U. G e r h a r d t

E s t i m a t i o n of b inding p a r a m e t e r s of e n z y m e - l i g a n d complex f r o m f l u o r o m e t r i c data by a curve f i t t ing p r o c e d u r e : s e r y l - t R N A s .ynthe tase- tRNA s e r complex , G. Engel .

Bes t . yon B indungsg le i chgewich ten in E n z y r n - L i g a n d - Kornplexen; A u s w e r t u n g yon F l u o r e s c e n z l 6 s c h u n g s - kurven .

In Anwendung d e r yon G. Engel , H. Heider , A. Mae- l icke , F. yon de r Haar und F. C r a m e r (Eur. J . Bio- chem. 29___, 257 (1972)) m i tge t e i l t en Gle ichung zu r Be- s t i m m u n g des B indungsg le i chgewich te s in F l u o r e s - c e n z t i t r a t i o n s - K u r v e n yon S e r y l - t R N A - S y n t h e t a s e aus Hefe mi t tRNA Se t wurde e ine T i t r a t i o n s - M e t h o d e e r m i t t e l t , die die F l u o r e s c e n z l 6 s c h u n g in d iese rn Sy s t em anhand e i n e r Kurve du rch C o m p u t e r r e c h n u n g a u s w e r t e t . Ffir die A s s o z i a t i o n s k o n s t a n t e K wi rd in d i e s e m Sys t em ein Wer t yon 2 , 4 0 5 . 1 0 6 M -1 e r m i t t e l t


Fr i r n e r r e c h n e t s i c h e in W e r t yon 0 , 9 9 9 , wobe i 1 / n die Z a h l d e r B i n d u n g s s t e l l e n a m E n z y m d a r s t e l l t .

Ana l . B i o c h e m . 61, 184-191 (1974). M a x - P l a n c k - I n s t . ffir e x p e r i m e n t e l l e M e d . , Abt . C h e m . , GGtt ingen

K. Henning

T e c h n i q u e s f o r m e a s u r i n g a m y l a s e s e c r e t i o n f r o m p i e c e s of m o u s e p a n c r e a s . ~ . ~ ~

Bes t . von A m y l a s e in Biolog. M a t e r i a l ; S p e k t r a l p h o - t o m e t r i e .

Die A m y l a s e - S e k r e t i o n in Stricken (2-5 rag) yon M~u- s e - P a n k r e a s w i r d in e i n e m m i t O2-CO 2 b e g a s t e n In- kuba t ionsge f~S m i t v e r s c h i e d e n e n T e s t s u b s t a n z e n i n - k u b i e r t . D a n a c h w e r d e n die Stricke h o m o g e n i s i e r t und 10jul m i t 10 p / S t ~ r k e - L S s u n g (200 m g in 10 ml) be t 25uC 10 ra in i n k u b i e r t , 20 p1 3, 5 - D i n i t r o s a l i c y l s ~ u r e zugegeben , 10 ra in zum Sieden e r h i t z t und die r o t e F ~ r b u n g , e n t s t a n d e n d u r c h Reak t ion des Re agens m i t den be t d e r H y d r o l y s e e n t s t a n d e n e n r e d u z i e r e n d e n Gruppen , be t 530 n m g e m e s s e n .

Anal . B i o c h e m . 59, 220-234 (1974). Dept . H i s t o l . , Univ . Ume~ ( S c ~ e d e n ) J . B .

An a u t o m a t e d a s s a y f o r Na-K A T P a s e k i n e t i c s . L . J o s p h s o n , J, Mangold and S. Simon.

Bes t . yon A d e n o s i n t r i p h o s p h a t a s e ; A u t o a n a l y s a t o r ; Na, K- a k t i v i e r t .

Z u r a u t o m a t i s c h e n B e s t i m m u n g yon Na- und K - a k t i - v i e r t e r A T P a s e w i rd e in V e r f a h r e n m i t t e l s AutoAna- l y z e r en twicke l t , wobei die d u t c h Nuc leo t ide h e r v o r - g e r u f e n e F a r b s t 6 r u n g des P h o s p h o m o l y b d a t - K o m p l e - x e s d u t c h Z u s a t z yon M a g n e s i u m c b l o r i d e l i m i n i e r t w i r d . D u r c h Modi f ika t ion des V e r f a h r e n s l a s s e n s i c h auch k i n e t i s c h e M e s s u n g e n du rch f i i h r en .

Anal . B i o c h e m . 60, 312-318 (1974). Dept. B i o c h e m . , S ta te Univ . New York , Stony Brook , N .Y. (USA)

K. Henning

geben , nach Z u g a b e des S e r u m wi rd 11 s e c gut d u r c h - g e m i s c h t und d a n a c h s o f o r t die Ex t ink t ion g e m e s s e n . Mit d i e s e r n e u e n Methode , die genau und s c h n e l l a t - be t te r , ben6 t ig t m a n n u r 10% des Z e i l a u f w a n d e s d e r k o n v e n t i o n e l l e n Methode .

Cl in . C h e m . 20, 45-50 (1974). P e d i a t r i c M i c r o c h e m . L a b . , Univ . D e n v e r , Colo. (USA) U. G e r h a r d t

C a t h e p s i n B2 m e a s u r e m e n t by s e n s i t i v e f l u o r o m e t r i c a m m o n i a a n a l y s i s . S. T a y l o r , V. Nin joor , D .M. Dowd and A. L. Tappe l .

Bes t . yon C a t h e p s i n B2; F l u o r i m e t r i e ; e n z y m a t . F r e i - s e t zung yon NH 3.

C a t h e p s i n B2 s e t z t aus dem s y n t h e t i s c h e n S u b s t r a f B e n z o y l - a r g i n i n a m i d A m m o n i a k f r e t . Die U m s e t z u n g des A m m o n i a k s m i t P h t h a l a l d e h y d und M e r c a p t o - a thanol zu e i n e m F l u o r o c h r o m kann ohne v o r h e r i g e A b t r e n n u n g v o r g e n o m m e n werden . Sic i s t v i e r m a l e m p f i n d l i c h e r a l s die Reak t ion m i t N inhydr in . - Ausfr ihrung. C a t h e p s i n w i r d m i t 0, 1 M C i t r a t - P h o s - pha[-15uff-e-r pH 5, 6 und dem s y n t h e t i s c h e n S u b s t r a t umgese%zt. Fr i r die f l u o r i m e t r i s c h e B e s t i m m u n g be - nSt ig t m a n e inen A n s a t z yon 0, 5 m l und s topp t die Reak t ion d u r c h Z u g a b e yon 0, 5 m l 1 0 t i g e r T r i c h l o r - e s s i g s ~ u r e . Zu 0, 1 m l d i e s e s A n s a t z e s bzw. e t h e r S t a n d a r d - A m m o n i a k l G s u n g bzw. W a s s e r gibt m a n 2, 9 m l des g e p u f f e r t e n F l u o r e s c e n z - S t e a g e n s , l~(~t die M i s c h u n g 45 ra in be t Z i m m e r t e m p e r a t u r s t e h e n , reg% an m i t d e r We l l en i~nge 410 n m und mi~ t die F l u o r e s c e n z be t 470 n m . - Die h S c h s t e n W e r t e e r h ~ l t m a n m i t N a t r i u m p h o s p h a t p u f f e r und M e r c a p t o ~ t h a n o l . T r i s - P u f f e r drr ickf die F l u o r e s c e n z e r h e b l i c h . - F luo re scenz - l= t eagens : 4, 5 ml e i n e r L ~ s u n g yon 750 m M P h t h a l a l d e h y d in Athano l und 4, 5 m l e i n e r LS- sung yon 72 m M M e r c a p t o ~ t h a n o l in Athanol gibt m a n zu 81 ml 0, 2 M N a t r i u m p h o s p h a t p u f f e r pH 7, 4.

Ana l . B i o c h e m . 60, 153-162 (1974). Dept. Food Sci. and T e c h n o l . ,Un iv . C a l i f o r n i a , Davis , Cal i f . (USA)

A. N i e m a n n

S o u r c e s of e r r o r in s p e c t r o p h o t o m e t r i c m e a s u r e - m e n t of a s p a r t a t e a m i n o t r a n s f e r a s e and a l a n i n e a m i n o t r a n s f e r a s e a c t i v i t i e s in s e r u m . D.O. Rodge r - son and I. M. O s b e r g .

Bes t . yon A s p a r t a t a m i n o t r a n s f e r a s e und A l a n i n a m i n o - t r a n s f e r a s e in S e r u m ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; i m Dop- p e l s t r a h l g e r ~ t .

Be ide E n z y m a k t i v i t ~ t e n k6nnen in e i n e m B e c k m a n - K u r z i n t e r v a l l - E n z y m a k t i v i t ~ t s a n a l y z e r m i t e i n e m D o p p e l s t r a h l s p e k t r a l p h o t o m e t e r g e m e s s e n werden . Die F e r m e n t r e a k t i o n w i rd a u s g e l S s t d u r c h Zugabe d e r S e r u m p r o b e z u r k o m p l e t t e n l t e a g e n s m i s c h u n g . Be i Anwendung des D o p p e l s t r a h l s p e k t r o p h o t o m e t e r s w e r d e n die fo lgenden F e h l e r a u s g e s c h a l t e t , die s o n s t be i d e r k o n v e n t i o n e l l e n Mef imethode v o r h a n d e n s ind a) A n w e s e n h e i t e n d o g e n e r S u b s t r a t e fi ir die L a c t a t - d e h y d r o g e n a s e b) die Reak t ion yon 2 - O x o g l u t a r a t m i t d e r S e r u m - G l u t a m a t d e h y d r o g e n a s e und NH4 + in e i n e r K u p p l u n g s r e a k t i o n . Z u r M e s s u n g w i r d in e ine Ktivet- te d e r T e s t - , in die a n d e r e t ie r R e f e r e n z a n s a t z ge-

Thin-layer chromatographic assay method for cyclo- propane s~nthetase. L.A. Halper and S.J. Norton.

Best. yon Cyclopropan-Synthetase; Chromatographie, Drinnschicht; radiochem. Auswertung.

Ein dfinnschicht-chromatographisehes Verfahren zur Bestimmung yon Cyclopropansynthetase (CPS) wurde entwickelf. Das Verfahren wurde zur Bestimmung von CPS in Lactobacillus plantarum (ATCC 8014) ange- wandt. Eine typische Misohung zur CPS-Bestimmung bestand aus 0, I-I0 mg Proteinextrakt, 70 pg Lipid- extrakt, 20 nMol Na-Dodeeylsulfat, 50 nMol (0, 5 }iCi) ~ 3 H ] M e t h y l - S - a d e n o s y l m e t h i o n i n und 6, 8 ~Mol K a l i u m p h o s p h a t p u f f e r (pH 7). Nach 30 ra in Inkuba t ion be t 30~ w i r d die Reak t ion d u r c h Z u s a f z e i n e s g l e i - chen V o l u m e n s e i n e r ges~t t . N a O H / M e t h a n o l - L O s u n g a b g e b r o c h e n . Die M i s e h u n g wi rd d u r c h 15 ra in E r - h i t z e n auf 60~ v e r s e i f t . Dann w i r d d u r c h Z u s a t z von 3 N HC1 auf pH 1 e i n g e s t e l l t . Ansch l i eBend wi rd m i t M e t h y l e n c h l o r i d e x t r a h i e r t . De r E x t r a l ~ w i r d dfinn- s c h i c h t - c h r o m a t o g r a p h i s c h auf S i l i cage l - P l a f t e n m i t


P e t r o l ~ t h e r (60- 90~ / D i ~ t h y l ~ t h e r / E i s e s s i g (90:10:1) ge t re rmt . D e r N a c h w e i s e r f o l g t m i t Joddampf . Die den F e t t s g u r e n e n t s p r e c h e n d e n F l e c k e n w e r d e n e lu- i e r t und die Rad i oak t i v i t ~ t b e s t i m m t . E s w u r d e f e s t - g e s t e l l t , dab die E n z y m r e a k t i o n l i n e a r z u r Z e i t - und P r o t e i n k o n z e n t r a t i o n ve r lgu f t .

J . C h r o m a t o g . 97 , 159-163 (1974). Dept . C h e m . , N o r t h T e x a s Sta te U n i v . , Denton , T e x a s (USA)

R. H. S t e r z e l

E l e k t r o p h o r e s e von 2, 3 - D i p h o s p h o g l y c e r a t - E r ' / t h r o c y t - M u t a s e auf A m i d o n g e l . Studie des Ph~no typs be i 170 F r a n z o s e n . J . -L . V i v e s - C o r r o n s , A. Kahn , J . Hak im und P . Boiv in .

T r e n n . yon 2, 3 - D i p h o s p h o g l y c e r a t - M u t a s e aus E r y - t h r o c y t e n ; E l e k t r o p h o r e s e .

Die 2, 3- D i p h o s p h o g l y c e r a t - E r y t h r o c y t - M u t a s e w i rd e l e k t r o p h o r e t i s c h auf A m i d o n g e l in d r e i K o m p o n e n t e n a u f g e t r e n n t ( m i t t l e r e Hauptbande und zwei s e h m a l e r e N e b e n b a n d e n ) . Die T r e n n u n g yon g e r e i n i g t e r M u t a s e i s t b e s s e r a l s d ie des H ~ m o l y s a t s . H ~ m o l y s a t e yon 170 P e r s o n e n w u r d e n u n t e r s u c h t , a l l e z e i g t e n den g l e i c h e n P h~notyp.

Cl in . C h i m . Ac ta 4_~8, 91-95 (1973). E s c u e l a de H e m a - t o l o g i a , P r o f . R 0 z m a n c / C a s a n o v a , 143, B a r c e l o n a 11 (Spanien) und Dept . H e m a t o l . , F a c . M e d . , Univ . P a r i s , Hopi ta l B e a n j a n , C l i c h y ( F r a n k r e i c h )

C. M a r t i n

P u r i f i c a t i o n of h u m a n p l a c e n t a l 0 ~ - L - f u c o s i d a s e by a f f in i ty c h r o m a t o g r a p h y . J . A . Alhadef f , A. L. M i l l e r and J . S. O" B r i e n .

Re in igung yon F u c o s i d a s e ; C h r o m a t o g r a p h i e , S~ulen; Af f in i t~ t s - C.

Z u r Re in igung w i r d die in e i n e r M i s c h u n g aus 50 m M K a l i u m p h o s p h a t p u f f e r , pH 7, 0 und 40% G l y c e r i n h o m o - g e n i s i e r t e P r o b e 30 ra in m i t 2000 g z e n t r i f u g i e r t , die O b e r p h a s e auf 40% G l y c e r i n e i n g e s t e l l t und 20 h gegen i0 m M N a t r i u m p h o s p h a t p u f f e r , pH 5, 5, m i t 0, 02% NaN 3 d i a l y s i e r t . A n s c h l i e ~ e n d w i r d 30 ra in m i t 48 000 g z e n t r i f u g i e r t und die O b e r p h a s e z u r A f f i n i t ~ t s - C h r o m a t o g r a p h i e in e i n e r S~ule (12, 5 x 0, 35 era) aus A g a r o s e- e p s i l o n - c a p r o y l - fucos a rn in- Gel (Fa . Mi les Yeda L t d . ) gegeben . E l u i e r t w i r d auf- e i n a n d e r f o l g e n d z u n ~ e h s t m i t e i n e r L 6 s u n g aus 400 m l i0 m M N a t r i u m p h o s p h a t p u f f e r , pH 5, 5, m i t 0, 02% NAN3, danach m i t 200 m l d e s s e l b e n P u f f e r s u n t e r Z u s a t z yon 5 MM L - F u c o s e und a b s c h l i e S e n d m i t 250 m l P h o s p h a t p u f f e r u n t e r Z u s a t z von 200 m M NaCI und 0, 02% NaN 3. J e w e i l s 4, 5 m l - F r a k t i o n e n w e r d e n a b g e n o m m e n und a n a l y s i e r t . Die F r a k t i o n e n m i t d e r h b c h s t e n Ak t iv i t~ t b e f i n d e n s i e h in den N u m m e r n 92- 115.

Ana l . B i o c h e m . 60, 424-430 (1974). Dept. N e u r o s c i . , School M e d . , Univ . C a l i f o r n i a at San Diego, L a J o l l a , Cal i f . (USA) K. I Ienning

I d e n t i f i c a t i o n of r a t hepa t i c g l u c o k i n a s e a f t e r po ly- a c r y l a m i d e d i sc e l e c t r o p h o r e s i s . S .H. G r o s s m a n and V. R. P o t t e r .

Nachw. yon G l u c o k i n a s e ; E l e k t r o p h o r e s e , Gel .

F t i r die I d e n t f f i z i e r u n g und S i c h t b a r m a c h u n g yon Glu- c o k i n a s e in Ge len w i r d e in P o l y a c r y l a m i d g e l v e r w e n - deC, das ohne P e r s u l f a t in G e g e n w a r t yon R ibo f l av in p o l y m e r i s i e r t wurde . Al s S t a b i l i s a t o r f i i r das E n z y m w e r d e n 50/uM G l u c o s e in das Gel e i n g e a r b e i t e t . R a t - t e n i e b e r - G l u c o k i n a s e ze ig t e ine e twa g l e i che e l e k t r o - p h o r e t i s c h e B e w e g l i c h k e i t wie H e f e - H e x o k i n a s e . Auch die i s o e l e k t r i s c h e n P u n k t e b e i d e r E n z y m e , b e s t i m m t d u r c h i s o e l e k t r i s c h e F o k u s s i e r u n g s ind m i t 4, 7 ~hn- l i ch .

Ana l . B i o c h e m . 5__9, 54-62 (1974). Mc A r d l e Lab . C a n c e r R e s . , U n i v . , Mad i son , Wisc . (USA) J . B .

P u r i f i c a t i o n of ~ - G l u c o s i d a s e a c t i v i t i e s f r o m bov ine s p l e e n by aff in i ty c h r o m a t o g r a p h y . J . N . K a n f e r , R. A. M u m f o r d , S.S. R a g h a v a n and J . Byrd .

A b t r e n n . yon 2 - G l u c o s e o x i d a s e aus Biolog. M a t e r i a l ; C h r o m a t o g r a p h i e , Aff in i t~ t ; a n G l u c o n a t - S e p h a r o s e .

M i t t e l s G l u c o n a t - S e p h a r o s e - Sgu len , C h r o m a t o g r a p h i e (J. N. K a n f e r , G. P e t r o v i c h und R .A . M u m f o r d , Anal . B i o c h e m . 55 , 301 (1973); vgl . d i e s e Z. 27! , 414 (1974)} l a s s e n s i c h / 1 - G l u c o s i d a s e a k t i v i t ~ t e n aus Rin- d e r m i l z t r e n n e n und r e i n i g e n . E l u i e r t w i rd z u n ~ c h s t m i t 0, 1 M C i t r a t l b s u n g , pH 4, 5, wobe i B - D - N - A c e - t y l g l u c o s a m i n i d a s e , O ( - D - G a l a k t o s i d a s e , o ( - D - M a n n o - s i d a s e , S ~ u r e p h o s p h a t a s e und o ( - D - G l u c o s i d a s e e lu- i e r t w e r d e n . Ansch l i e I l end w i r d m i t 0, 1 M C i t r a t - 16sung, pH 4, 5, die 1% T r i t o n X- 100 enth~ilt, d ie E lu t i on f o r t g e s e t z t , wobei G l u c o s y l c e r a m i d : B-D- G l u c o s i d a s e , G l u c o s y l s p h i n g o s i n : 2- D - G l u c o s i d a s e und 2 - D - G l u c o s i d a s e - A k t i v i t ~ t e n e l u i e r t w e r d e n .

Anal . B i o c h e m . 60 , 200-205 (1974). E u n i c e Kennedy S h r i v e r C i r . , W a l t e r E. F e r n a l d Sta te School , Wal t - h a m , MA (USA) K. Henning

D e t e r m i n a t i o n of g l y c e r o l d e h y d r a t a s e a c t i v i t y by the coupled enzymic method. M.I. Yakusheva, A.A. NIalahov, A.A. Poznanskaya, und V. A. Yakovlev.

Bes t . yon G l y c e r i n d e h y d r a t a s e ; E n z y m a t i s c h e A n a - l y s e / S p e k t r a l p h o t o m e t r i e .

P r i n z i p d e r B e s t i m m u n g : G l y c e r i n , 1, 2 - P r o p a n d i o l o d e r ~ t h y l e n g l y k o l w e r d e n d u t c h G l y c e r i n d e h y d r a t a s e (GDH), z . B . aus B a k t e r i e n , in die e n t s p r . A ldehyde /~ -Hydroxyprop iona ldehyd , P r o p i o n a l d e h y d und A c e t a l d e h y d k o n v e r t i e r t und die A ldehyde in G e g e n - w a r t yon A l k o h o l d e h y d r o g e n a S e und NADH 2 r e d u z i e r t . Die A b n a h m e yon NADH 2 w i r d n a c h b e k a n n t e m Sche- m a p h o t o m e t r i s c h o d e r die ~ n d e r u n g des p H - W e r t e s m i t e i n e r e m p f i n d l i c h e n E l e k t r o d e g e m e s s e n .

Ana l . B i o c h e m . 60, 293- 301 (1974). I n s t . V i t a m i n R e s . , M o s k a u (UdSSR) A. N i e m a n n

Referate SpezieUe Anwendungsgebiete: 4. Biologisches Material 173

A s l i c e d gel a s s a y f o r s o m e e n z y m e s which u t i l i ze 8~uanine as s u b s t r a t e . A . L . B i e b e r .

Bes t . yon G u a n i n a r n i n o h y d r o l a s e und I M P - G M P : P y - r o p h o s p h a t p h o s p h o r i b o s y l t r a n s f e r a s e; E l e k t r o p h o r e - se , Gel ; f l u o r i m e t r . A u s w e r t u n g d e r P A A - G e l s c h e i b - chen.

Z u r L o k a l i s i e r u n g yon G u a n i n a m i n o h y d r o l a s e und I M P - G M P : P y r o p h o s p h a t p h o s p h o r i b o s y l t r a n s f e r a s e irn Anschluf i an die P o l y a c r y l a r n i d g e l e l e k t r o p h o r e s e w i r d das Gel z e r s c h n i t t e n und e in S c h e i b c h e n in Arn- rnoniaklGsung (1+9) f l u o r i r n e t r i s c h a u s g e w e r t e t . I I i e r - zu w i rd be i 285 nrn a n g e r e g t und die F l u o r e s c e n z a b - n a h m e yon Guan in n a c h e n t s p r e c h e n d e r I n k u b a t i o n s - z e i t be i 345 nrn e r r n i t t e l t .

Ana l . B i o c h e m . 60, 206-212 (1974). Dept . C h e m . , A r i z o n a Sta te U n i v . , T e m p e , A r i z o n a (USA)

K. Henning

A u t o m a t e d a s s a y of h e x o s a r n i n i d a s e s in s e r u m . J . A. Lowden, M . A . Skornorowski , F. H e n d e r s o n and M. Kaback .

Bes t . yon H e x o s a r n i n i d a s e n in S e r u m ; A u t o a n a l y s a - tor.

Irn Serum kSnnen 2 Arten yon Hexosarninidasen nach- gewiesen werden. Eine davon ist hitzelabil, und ist irn Serum yon Kindern, die an der Tay-Sachs-Krank- heir leiden, inaktiv. Die aktive Form (irn Serum von Gesunden) kann durch Erhitzen auf 60~ ffir 5 rnin nach E. E. Delvin, C. R. Scriver, A. Pottier, C.L. Clow und R. C o l e m a n (Union Med. Can. 101, 683 (1972)) i n a k t i v i e r t w e r d e n . - Die rnanue l l e B e s t i r n - rnungs rne thode l e h n t s i c h an das V e r f a h r e n yon S. Okada und J. S. O ' B r i a n (Sc ience 16.__~5, 698 (1969)) an. 50 }11 S e r u m w e r d e n rn i t I m l C i t r a t - P h o s p h a t - P u f f e r (40 m M C i t r a t , rn i t P h o s p h a t auf pH 4, 1 e inges t e l l t ) ve rdf inn t . Davon w e r d e n 100 pl m i t 100 ~1 P u f f e r - Subs t r a t lGsung v e r r n i s c h t und i n k u b i e r t . Z u r M e s s u n g des h i t z e s t a b i l e n A n t e i l s w i r d das S e r u r n - P u f f e r - G e - m i s c h 5 rn in auf 60~ e r h i t z t , dann rn i t S u b s t r a t - P u f - f e r - G e r n i s c h v e r s e t z t und 30 rn in be i 37, 5~ inku- b i e r t . Die Reak t ion w i rd ges !oppt d u r c h Zugabe yon 3 rnl 2 - A r n i n o - 2 - r n e t h y l - p r o p a n o l - 1 (pH 10, 4, 0, 1 Mol/1) und die F l u o r e s c e n z be i 450 nrn nach A n r e g u n g m i t d e r Wel l en l~nge 365 nrn g e m e s s e n . Ff i r e ine ha lb - a u t o m a t i s c h e und e ine v o l l a u t o r n a t i s c h e Ausf f ihrung w e r d e n die F l i e ~ s c h e r n a t a aufgeff ihr t . A l s S u b s t r a t ffir a l l e M e t h o d e n w i r d 4 - M e t h y l u m b e l l i f e r y l - ~ - D - N - a c e t y l - g l u c o s a m i n i d v e r w e n d e t und ffir die S t a n d a r d - 15sung w e r d e n 17, 7 nag 4 - M e t h y l u m b e l l i f e r o n in 100 m l E i s e s s i g ge lSs t und m i t P u f f e r l S s u n g verdf inn t .

Cl in . Chern . 19__, 1345-1349 (1973). Res . I n s t . , Hosp. Sick C h i l d r e n , T o r o n t o (Kanada) A. N ie rnann

The d e t e c t i o n of h y a l u r o n i d a s e on e l e c t r o p h o r e s i s m e m b r a n e s . J . K . Herd , J. T s c h i d a and L. Motycka .

Nachw. yon H y a l u r o n i d a s e auf C e l l u l o s e a c e t a t r n e r n - b r a n ; E l e k t r o p h o r e s e ; m i t A l c i a n b l a u .

Irn A n s c h l u ~ an die E l e k t r o p h o r e s e auf C e l l u l o s e a e e - t a t - M e r n b r a n e n in 0, 1 M P h o s p h a t / C i t r a t - P u f f e r , pH

4-7 , be i 250 V w ~ h r e n d 20 m i n w i rd f iber das Gel e ine zwe i t e C e l l u l o s e a c e t a t - M e r n b r a n , die m i t Hya- l u r o n s ~ u r e (1 m g / m l in 0, 05 M P h o s p h a t / C i t r a t - P u f f e r , pH 5, e n t h a l t e n d 0, 15 M N a t r i u m c h l o r i d ) ge- t r ~ n k t wurde , aufgedr f ick t , dann e ine G l a s p l a t t e aufge leg t und in f e u c h t e r A t m o s p h e r e be i 37~ w ~ h r e n d 30 rnin i n k u b i e r t . Dann w i r d die zwe i t e M e r n b r a n an de r Luf t g e t r o c k n e t , m i t 1 t i g e r A l c i a n b l a u - L S s u n g in 7 t i g e r E s s i g s ~ u r e w~hrend 1 rn in ange f~ rb t , rn i t W a s s e r g e w a s c h e n und g e t r o c k n e t . Es e n t s t e h e n weiSe F l e c k e n auf b lauern Grund .

Anal . Biochern . 61, 133 -143 (1974). C r e i g h t o n Univ. School M e d . , Dept. P e d i a t r i e s , O m a h a , N e b r a s k a (USA) K. Henning

S e p a r a t i o n of t i s s u e and s e r u m c r e a t i n e k i n a s e i s o - z [ r n e s by i o n - e x c h a n g e c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y . D. W. M e r c e r .

Bes t . yon K r e a t i n k i n a s e in Biolog. M a t e r i a l ; C h r o - m a t o g r a p h i e , Saulen, I o n e n a u s t a u s e h ; M B - I s o z y r n .

Die B e s t i r n m u n g d e r K r e a t i n - K i n a s e - A k t i v i t ~ t z u r Diagnose des H e r z i n f a r k t e s e r f o r d e r t die F r a k t i o - n i e r u n g in die I s o e n z y m e MM, MB und BB. Die auf- wendige e l e k t r o p h o r e t i s e h e T r e n n u n g wi rd d u t c h die I o n e n a u s t a u s c h e r - C h r o r n a t o g r a p h i e rn i t D E A E - S e p h a - dex e r s e t z t . E s w i r d e ine op t i rna le T r e n n u n g (10 F r a t d i o n e n ) d u r c h d i s k o n t i n n i e r l i c h e E r h 5 h u n g d e r N a C 1 - K o n z e n t r a t i o n (50, 100, 200 und 300 m M NaC1) in 0, 05 M T r i s - P u f f e r , pH 8, 2 b e s c h r i e b e n . Die I sozy rne w a r e n e l e k t r o p h o r e t i s e h r e in ; die A k t i v i t a t wurde n a c h R o s a l s k i be s t i rn rn t . Das V e r f a h r e n eig- ne t s i ch gut ffir k l in . R o u t i n e b e s t i r n m u n g e n . K r e a t i n - K i n a s e MB i s t c h a r a k t e r i s t i s c h ffir den H e r z i n f a r k t und w i r d be i a n d e r e n E r k r a n k u n g e n rni t e rhGhtern K r e a t i n - K i n a s e - S p i e g e l n i ch t ge funden (71 Se ru rn - P r o b e n ) .

Cl in . C h e m . 20, 36-40 (1974). Dept. P a t h o l . , School M e d . , Univ . P i t t s b u r g h , P a . , 15213 (USA)

E. H. R e i m e r d e s

A convenient method for isolation of routine ery- throcyte catalase by gel filtration and DEAE cellulose chrornato~raph~. C.K. Grieshaber and H.A. Hoffman.

Abtrenn. von Murinerythrocyten-Katalase; Chrornato- graphie, S~ulen, Gel.

Zur Gewinnung yon Murinerythrocyten-Katalase wird das Erythrocytenlysat gel-chrornatographisch an einer S~ule aus Sephadex G-100 mit 0, 01 M Phosphat- pufferlGsung, pH 7, 1, in 0, 5 M Athanol getrennt. Anschlie~end werden die Fraktionen, in denen Kata- laseaktivit~ten errnittelt w~rden, vereinigt und an einer S~ule ans DEAE-Cellulose rnit dern gleiehen Flie~mit~el eluiert. AnsehlieSend werden die Frak- tionen, die Katalase enthalten, vereinigt und unter Stiekstoffatmosph~re gegen UM- 10- Membrane kon- zentriert.

Anal. Biochern. 6__00, 537-544 (1974). Lab. Biol., Nat. C a n c e r I n s t . , B e t h e s d a , Md. (USA) K. Henning


D e t e c t i o n of n i t r o g e n a s e c o m p o n e n t s and o t h e r non - h e i n e i r o n p r o t e i n s in po l~racr~ lamide ge l s . W . J . B r i l l , J . W e s t p h a l , M. S t i e g h o r s t , L . C . Dav i s , V .K. Shah.

T r e n n . d e r P r o t e i n k o m p o n e n t e n yon N i t r o g e n a s e ; E l e k t r o p h o r e s e ; an P A A - G e l .

N i t r o g e n a s e b e s t e h t aus zwei e i s e n h a l t i g e n , a b e r n i c h t - h ~ m a r t i g e n P r o t e i n k o m p o n e n t e n , d ie d u r c h P A A - G e l - E l e k t r o p h o r e s e g e t r e n n t und anhand i h r e s E i s e n g e h a l t s d a r i n n a c h g e w i e s e n w e r d e n . Das V e r - f a h r e n i s t auch auf a n d e r e e i s e n h a l t i g e P r o t e i n e an- w e n d b a r . - Aufg rund d e r h o h e n S a u e r s t o f f e m p f i n d l i c h - ke i t d e r N i t r o g e n a s e e n t h a l t e n die P u f f e r r e s e r v o i r e ffir die E l e k t r o p h o r e s e 0, 3 m g / l N a t r i u m d i t h i o n i t . Die E x t r a k t e m t i s s e n u n t e r S t i cks to f f a u f b e w a h r t w e r d e n . Naeh d e r E l e k t r o p h o r e s e w e r d e n die Gele s u b m e r s in e ine LGsung yon 0, 7% C~, ~ - D i p y r i d y l und 8% M e r - c a p t o e s s i g s ~ u r e g e b r a c h t . L e t z t e r e m a e h t das Gel a u f n a h m e f ~ h i g f~ir O(, 0 ( -Dipyr idy l . I n n e r h a l b yon 10 rn in w e r d e n die r o s a Zonen , die d e n F e ( I I ) - h a l t i - gen P r o t e i n z o n e n e n t s p r e c h e n , s i c h t h a r .

Ana l . B i o c h e m . 6_00, 237-241 (1974). Dept . B a c t e r i o l . , Un iv . W i s c o n s i n , Mad i son , Wisc . (USA)

A. N i e m a n n

1, N 6- e theno- 2- a z a - a d e n o s i n e 3", 5 ' - m o n o p h o s p h a t e : a new f l u o r e s c e n t s u b s t r a t e f o r cyc l e n u e l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e . K . C . Tsou~ K. F. Yip and K. W. Lo.

Bes t . von N u c l e o t i d p h o s p h o d i e s t e r a s e , cycl . m i t 1, N 6 - E t h e n o - 2 - a z a - a d e n o s i n , 2 - A z a - E - a d e n o s i n ; E n z y m a t . A n a l y s e ; f l u o r e s c i e r e n d e s S u b s t r a t .

Das yon K. C. Tsou , K. F. Yip, E. E. M i l l e r und K. W. Lo (Nucle ic A c i d s Res . i m Druck (1974)) p r ~ p a r i e r - t e R e a g e n s k a n n a l s F l u o r e s c e n z s u b s t r a t z u r Be - s t i r n m u n g yon c y c l i s c h e r N u c l e o t i d p h o s p h o d i e s t e r a s e n a c h d e r A r b e i t s w e i s e von R. W. B u t c h e r und E . W . S u t h e r l a n d (J. Biol . C h e m . 237, 1244 (1962)) e inge - s e t z t w e r d e n . F t i r c y c l i s c h e s A M P wi rd e ine urn 75% g e s t e i g e r t e Ak t iv i t~ t e r h a l t e n . F t i r R i n d e r h e r z - e n z y m w e r d e n be i 503 und 15 ~M K m - W e r t e e r m i t - t e l t .

Ana l . B i o c h e m . 60, 1 6 3 - 1 6 9 (1974). H a r r i s o n Dept . S u r g i c a l R e s . , School M e d . , Univ . P e n n s y l v a n i a , P h i l a d e l p h i a , P e n n s y l v a n i a (USA) K. Henning

S e p a r a t i o n of L - c y s t i n y l - d i - ~- n a p h t h y l a m i d e h~rdro- l a s e (ox~toc inase) i s o e n z y m e s of h u m a n a m n i o t i c f lu id by a c r y l a r n i d e gel e l e c t r o p h o r e s i s . H. K l e i n e r and M. B r o u e t - Y a g e r .

T r e n n . yon O x y t o k i n a s e n in Biol . F l f i s s i g k e i t e n ; E l e k t r o p h o r e s e , Gel .

N o r m a l e und m e c o n i u m h a l t i g e A m n i o n f l t i s s i g k e i t , V e r d a u u n g s o r g a n e und D a r m s e k r e t e e n t h a l t e n L - C y - s t i n y l d i - ~ - n a p h t h y l a m i d h y d r o l a s e , Oxy tok inase j und L - L e u c y l - 8 - n a p h t h y l a m i d h y d r o l a s e wie E l e k t r o p h o - r e s e an A c r y l a m i d g e l e r g i b t . Das b i e r g l e i che n a c h - g e w i e s e n e e r s t g e n a r m t e E n z y m u n t e r s c h e i d e t s i c h yon dem des S c h w a n g e r e n s e r u m s . Da es auch i m Me- con ium e n t h a l t e n i s t , s t a m m t es in d e r A m n i o n f l t i s -

s i g k e i t aus dem f e t a l e n V e r d a u u n g s t r a k t . Wegen s e i - ne s f a s t u b i q u i t ~ r e n V o r k o m m e n s s o l l t e m a n den Na- m e n Oxy tok ina se f a l l e n l a s s e n .

Cl in . C h i m . A c t a 45, 109-112 (1973). Lab . Gyn~col . Rech. R e p r o d u c t i o n H u m a l n e , Lab . Ch im. P a t h o l . , F a c . M e d . , Univ . L i b r e B r t i s s e l (Belgien)

E. Mt i l l e r , M a r b u r g

A s e n s i t i v e f l u o r o m e t r i c a s s a y fo r p l a s m i n o g e n , p l a s m i n and s t r e p t o k i n a s e . P . H . Be l l , C . T . Dz iob- kowski and M. E. E n g l e r t .

Bes t . yon P l a s m i n , P l a s m i n o g e n , S t r e p t o k i n a s e ; F l u o r i m e t r i e ; f i b r i no ly t . S y s t e m .

Z u r B e s t i m m u n g b i s zu 10 .6 M P l a s m i n o g e n w i rd in 0, 05 M P h o s p h a t p u f f e r , pH 7, u n t e r Z u s a f z yon 5% D i m e t h y l f o r m a m i d be i 25~ g e a r b e i t e t , wobei das aus dem 0 ( - N - M e t h y l - ~ X - N - t o s y l - L - l y s i n - ~ - n a p h t h o l . e s t e r in F r e i h e i t g e s e t z t e ~ -Naph tho l f l u o r i m e t r i s c h be i 420 n m d u r c h A n r e g u n g be i 320 nm e r f a 2 t wi rd . Ana log w i r d auch z u r B e s t i m m u n g yon P l a s m i n ge- a r b e i t e t . Dagegen w i r d ffir S t r e p t o k i n a s e e in P u f f e r aus 0, 05 M N - A t h y l m o r p h o l i n a c e t a t , pH 7, 0~ u n t e r Z u s a t z von 5% D i m e t h y l f o r m a m i d be i 30~ a n g e w e n - def.

Ana l . B i o c h e m . 6._~1, 200-208 (1974). C a r d i o v a s c u l a r - Rena l D i s e a s e Res . S e c t . , L e d e r l e L a b s . ~ P e a r l R i v e r , N .Y . (USA) K. Henning

P r e p a r a t i o n of ~ - t r ~ p s i n by af f in i ty c h r o m a t o g r a p h y of e n t e r o k i n a s e - a c t i v a t e d bov ine t r ~ p s i n o g e n . J. J . L i e p n i e k s and A. L igh t .

D a r s t e l l u n g von f i - T r y p s i n ; C h r o m a t o g r a p h i e , S~uler Af f in i t~ t s - C.

Die H e r s t e l l u n g von ~ - T r y p s i n kann in e i n f a c h e r Wei se d u r c h h y d r o l y t i s c h e Spal tung von R i n d e r t r y p s i n o - gen m i t t e i l w e i s e g e r e i n i g t e r E n t e r o k i n a s e d u r c h g e - f t ihr t w e r d e n . H i e r b e i w i r d d u r c h Z u s a t z von STI- S e p h a r o s e die B i ldung von C ( - T r y p s i n vo l l s t~nd ig u n t e r d r t i c k t , i n d e m das d u r c h s p e z i f i s c h e Spa l tung von L y s i n 6 - I s o l e u c i n 7 geb i lde t e ~ - T r y p s i n k o m p l e x gebunden wi rd . B e i s p i e l s w e i s e w e r d e n 12 m l STI- S e p h a r o s e , 2, 4 m l T r y p s i n o g e n (12, 5 m g / m l in 1 m M HC1), 0, 6 m l E n t e r o k i n a s e (500 E i n h e i t e n / m l ) und 9 m l 0 ,1 M T r i s , p H 8 , e n t h a l t e n d 0, 05 M C a l - c i n m c h l o r i d be i 35~ u n t e r S t icks tof fbe l t i f tung 1 h i n k u b i e r t . Ansehl ie[~end w i r d m i t t e l s Sau lena f f in i - t ~ t s - C h r o m a t o g r a p h i e g e r e i n i g t , i n d e m z u n ~ c h s t m i t 0, 1 M F o r m i a t p u f f e r , pH 4, 5, e n t h a l t e n d 0, 05 M C a l c i u m c h l o r i d , i n e r t e s P r o t e i n und V e r u n r e i n i g u n - gen und dann m i t dem auf pH 2 ,6 g e s e n k t e n P u f f e r ~ - T r y p s i n e l u i e r t w e r d e n . Die A u s b e u t e l i e g t be i 70-75%.

Anal . B i n c h e m . 60, 395-404 (1974). Dept . C h e m . , P u r d u e U n i v . , W. L a f a y e t t e , Ind. (USA)

K. Henn ing


P e r f o r m a n c e evaluat ion in the toxicolog 7 l a b o r a t o r y . J . K. J o n e s .

Toxikolog. Ana lyse ; 0 b e r s i c h t .

De r Autor r e f l e k t i e r t die Entwicklung de r A n fo rd e - rungen, die in den l e t z t en J a h r e n an se in F a c h ge- s t e l l t wurden . Durch v i e r haup t s~ch l i che Grfinde haben s i c h die A n f o r d e r u n g e n in den l e t z t en zwanz ig J a h r e n ve rv i e l f ach t : s t e igende Analysenflu{ ffir off i- z ie l le Stel len, P e r s o n a l k n a p p h e i t du t ch ungenfigende Ausbi ldung, ze i t l i che B e a n s p r u c h u n g du rch E i n s t e l - lung auf s t~ndig neue I n s t r u m e n t e und die " D r o g e n - exp los ion" de r S e c h z i g e r J a h r e . Der Res t des A r t i - ke l s handel t yon V o r s c h l ~ g e n zur t lberpr f i fung de r Genauigkei t und Verl~l~lichkeit e ines L a b o r s durch l a b o r a t o r i u m s e i g e n e ode r - f r e m d e S tandards , durch R i n g v e r s u c h e und ~hnliche Un te rnehmungen .

J . Ch roma tog . Sci. 1_.~2, 254-255 (1974). Geo rg i a C r i m e L a b . , At lanta , Ga. (USA) H. Reif

K o m b i n i e r t e Anwendung s p e k t r o s k o p i s c h e r Methoden in der f o r e n s i s c h e n Ana lyse am B e i s p i e l de r Iden t i f i - z i e r u n g e ines unbekannten T a b l e t t e n w i r k s t o f f e s . G. Bohn und G. Rficker.

E insa t z de r S p e k t r o m e t r i e , Spek t r a lpho tome t r i e , M a s s e n s p e k t r o m e t r i e in der F o r e n s i s c h e n Ana lyse .

Durch Kombina t ion yon UV-, IR- , NMR- und M a s s e n - s p e k t r u m i d e n t i f i z i e r e n Verf f . e inen unbekannten A r z n e i m i t t e l w i r k s t o f f . Das Moleku la rgewich t w i rd m a s s e n s p e k t r o m e t r i s c h e r m i t t e l t , so da6 s i ch aus der CH-Ana lyse die S u m m e n f o r m e l e r r e c h n e n l~6t. Die funkt ionel len Gruppen e r g e b e n s i ch aus dem IR- Spekt rum, das N M R - S p e k t r u m zeigt die Anwesenhe i t yon m i n d e s t e n s zwei a r o m a t i s c h e n Ringen, die sub- s t i t u i e r t s ind. Aufgrund de r s p e k t r o m e t r i s c h e n Daten mu6 die unbekannte Substanz ein Dibenzo- (b , e)-(1, 4)- d i a z e p i n - D e r i v a t se th , woffir auch das U V - S p e k t r u m s p r i c h t . Durch V e r g l e i c h yon Schmelzpunkt und S u m m e n f o r m e l mi t denen yon b e s c h r i e b e n e n Dibenzo- d iazep inen e r w e i s t s i eh die Substanz a ls 8 - C h l o r - l l - (4' -me thy l ) - p ipe r az ino- 5- d ibenzo (b, e) - (1, 4) - dia zepin.

B e i t r . ge r i ch t l . Med. 3._00, 12-16 (1973). Ins t . f. ge r i ch t l . Med. und Ins t . P h a r m . C h e m . , Univ . , Mfinster

W. H. Mennicke

A review of some GLC-FID derivatization techniques found usefull in forensic toxieolo~. G. Cimbura and J. Kofoed.

Forensische Analyse / Chromatographie, Gas; Deri- vatisierungste ehniken.

Anhand yon 4 Verfahren, a) Acetylierung, b) Methy- lierung, c) Reduktion und d) Bromierung wird die Be- deutung yon Derivatisierungen ffir die forensische Analyse mittels GLC-FID zusammengefaf~t. Die ein- zelnen Vorsehriften werden an ausgesuchten Beispie- len, a)Amphetarnin, Morphiurn, b)Diphenylhydantoin, c) Athylenglykol via Formaldehyd und d) Dimethyl- phenol beschrieben. (17 Zitate. )

J. Chromatog. Sei. 12, 261-264 (1974). Tox. Seet. Centre Forensic Sci., Toronto (Kanada)

E. H. Reimerdes

Schne l lp robe zur B e s t i m m u n g des Alkohol~ehal tes im Le ichenb lu t mi t Hilfe yon A l c o t e s t - P r f i f r S h r c h e n . G. Bauer und W. St radal .

Bes t . von ~ thanol in Blur; A leo te s t ; Le ichenblu t .

Mi t te l s A l c o t e s t - P r f i f r S h r e h e n is t es m~gl ieh , den Alkoholgehal t im Le iehenb lu t r a s c h zu e r m i t t e l n . Da- zu w e r d e n 50 rnl Blut in den 1 1 f a s s e n d e n Me6beute l des A l c o t e s t - G e r ~ t e s (Fa. Dr~ger , Lfibeck) eingeffil l t , d e r danach p ra l l mi t Luft geffillt und t e s t v e r s c h l o s - s en wi rd . Man inkubie r t 20 rain b is 37~ p re~ t 700 ml Luft durch das A l c o t e s t - R 6 h r c h e n und l i e s t ab. Die d u r c h g e p r e ~ t e Luft w i rd am Ende des Pr f i f - r 6 h r e h e n s in e inern zwei ten 1 l-Mef~beutel aufgefan- gen, de r mi t 300 ml Luft geffillt i s t . L ieg t de r Alko- holgehal t fiber 0, 8 %o, w i rd das Blur je nach Alkohol- gehal t mi t w a r m e m W a s s e r auf das Doppelte bzw. V ie r f ache verdfinnt und de r g le iche Vorgang w i e d e r - holt . Dureh die Ab leseungenau igke i t des T e s t r S h r - chens l ~ t s i ch mi t d i e s e r Schne l lme thode der Blut - alkohol nur g r 6 ~ e n o r d n u n g s m ~ i g b e s t i m m e n . In e i n e r Tabel le s ind die mi t de r b e s c h r i e b e n e n Schnel l - methode e r m i t t e l t e n Alkoho lwer te yon 50 Blu tp roben den g a s - c h r o m a t o g r a p h i s c h e r m i t t e l t e n Werden ge- genf ibe rges te l l t .

Be i t r . ge r i eh t l . Med. 30, 7-11 (1973). Inst . f. ge r i ch t l . Med . , Univ . , Wien (~ss terre ieh) W.H. Mennicke

Separation and analysis of o, p'-DDD and its lipophilic metabolite, o, p'-DDE, in tissue, faeces and plasma. J. Kvalv~g and J. Stenersen.

Best. yon o, p'-DDD und o, p'-DDE in Biolog. Material; Chromatographic, Gas; komb. mit DC und MS.

Zur Bestimmung des Cytostaticums o, p'-DDD (2-(2- Chlor phenyl)- 2 - (4 - chlorphenyl) - 1, I - dichlor ~ihan), seines Metaboliten o, p'-DDE (das I, 1-Dtchlorfithylen- derivat) und einiger anderer ~hnlich strukturierter Derivate in biologischem Material werden mehrere Verfahren beschrieben, die je nach besonderer Auf- gabenstellung eingesetzt werden. Zur Bestimrnung in Plasma trennt man die Substanzen an ether H2SO4/ Celite-545-S~ule ab, eluiert mit Petrol~ther und in- jiziert 5 pal auf eine gas-chromatographische S~ule (Glas, 150 cm x 3 mm) rnit 2% QF-I auf Celite 545 (DCDMS), I00 - 120 mesh. Temperaturen: S~ule 165~ Einspritzblock 205~ Detektor (ECD, 3H) 200~ N2-Tr~gergas 65 ml/min. Zur Identifizierung und Quantifizierung werden je 0, 5 ng Reinsubstanzen eingesetzt. Gewebeproben und Faeces (I g) werden fiber Naeht mit H2SO4/Petrolfither digeriert und der Gesarntansatz dann auf die Reinigungssfiule gegeben. Wetter sind im Original Arbeitsvorsehriften ffir eine dfinnschieht-chromatographisehe Identifizierung sowie ffir kombinierte Gas-Chromatographie/Massenspektro- metrie aufgeffihrt.

Anal. Letters 7_, 697-707 (1974). Chem. Res. Lab., Agricult. Univ. Norway, As-NLH (Norwegen)

W. Czysz


D e t e r m i n a t i o n of su l fony lu r ea s and m e t a b o l i t e s by p y r o l y s i s gas c h r o m a t o g r a p h y . V. Agga rwa l and I. Sunshine .

Bes t . yon S u l f o n y l h a r n s t o f f - D e r i v a t e n in Biolog. F l i i s s igke i t en ; C h r o m a t o g r a p h i e , Gas.

Es i s t e ine e in fache und s chne l l e Methode zur B e - s t i m m u n g von Su l fony lharns to f f in b io log i s chen F l f i s - s igke i t en en twicke l t worden , be i de r keine I n t e r f e - r e n z e n du rch Metabol i te au f t r e t en . 3 ml P l a s m a , das mi t 1 ml P h o s p h o r s ~ u r e a n g e s ~ u e r t wurde , w e r - den mi t 5 ml Toluol e x t r a h i e r t , in dem als i n n e r e r S tandard A p r o b a r b i t a l ge lSs t i s t . Aus 4 ml d e r k la- r e n Toluo lphase wi rd de r Su l fony lharns to f f in e ine m e t h a n o l i s c h e T r i m e t h y l a n i l i n h y d r o x i d l S s u n g f iber - ffihrt. 3 p1 de r o r g a n i s c h e n LSsung w e r d e n sodann inne rha lb yon 10 sec in den G a s - C h r o m a t o g r a p h e n in, j izier t und a u s g e w e r t e t . R e p r o d u z i e r b a r k e i t und L i n e a r i t ~ t b e s t e h e n ffir Tolbutamid, C h l o r p r o p a m i d und To lazamid im B e r e i c h yon 0, 5 b is 100 p g / m l .

Clin. Chem. 20..._, 200-204 (1974). Ins t . P a t h o l . , Univ., Cleveland, Ohio (USA) U. G e r h a r d t

C o r r e l a t i o n of the "EMIT" u r ine b a r b i t u r a t e a s s a y with a s p e c t r o p h o t o m e t r i c s e r u m b a r b i t u r a t e a s s a y in s u s p e c t e d o v e r d o s e . C .B . Walberg .

Bes t . yon B a r b i t u r a t e n in S e r u m und Harn ; Spek t r a l - p h o t o m e t r i e , UV / E m i t - T e s t ; Me thodenve rg l e i ch .

Es wurde e ine V e r g l e i c h s u n t e r s u c h u n g mi t S e r u m - p roben yon 203 Pa t i en t en durchgef f ihr t , die un te r V e rdach t de r E innahme e i n e r 0 b e r d o s i s yon B a r b i - t u r a t en e i n g e l i e f e r t worden wa ren . Die S e r u m p r o b e n wurden n a c h d e r UV-Methode yon L. Goldbaum (Anal. Chem. 24, 1604 (1952)), die U r i n p r o b e n mi t dem "EMIT' -r~'-Reagentiensatz u n t e r s u c h t , de r nach dem V e r f a h r e n yon R. S. Schne ide r , P. L indquis t , E. Tong- in Wong, K . E . Rubens t e in und E. F. Ul lman (Ctin. Chem. 19, 821 (1973)) aufgebaut i s t . Ein Gehal t yon 1, 5 m g ~ , bezogen auf Secobarb i t a l , w i rd a ls u n t e r e K o n z e n t r a t i o n fiir e inen pos i t iven Ausfa l l des E m i t - T e s t e s a n g e s e h e n . Unte r den 203 P r o b e n w a r e n 90 nach be iden Methoden posi t iv , 100 nach be iden Me- thoden negat iv und der R e s t j ewe i l s p o s i t i v / n e g a t i v . 16 d e r pos i t iven P r o b e n en th ie l t en m e h r a l s 50 mg/1 B a r b i t u r a t , de r Res t 1, 7 - 50 rag/1. Die e n t s p r e c h e n - den S e r u m p r o b e n en th ie l t en 3 - 138 mg/1 B a r b i t u r a t . - Der " E M I T " - T e s t (Syva Co. , Pa lo Alto, Calif . ) kann dahe r a ls n i i t z l iches und s c h n e l l e s Sys t em zum Nach- we i s yon B a r b i t u r a t e n im Urin nach e i n e r v e r m u t e t e n 0 b e r d o s i e r u n g d i e s e r Droge v e r w e n d e t w e r d e n .

Clin. Chem. 20, 305-306 (1974). Sect . Labs . and Pathol . Los Ange le s Coun ty -Univ . , South. Calif . Med. Cente r , Los Angeles, Calif. (USA) A, Niemann

An acy la ted de r iva t i ve of me thy lphen ida t e with high de tec t ion s e n s i t i v i t y is f o r m e d fol lowing a r educ t i on p r o c e d u r e wi th LiAIH 4. The de r iva t i ve is ana lyzed by gas - l i qu id c h r o m a t o g r a p h y us ing an e l e c t r o n cap- t u re d e t e c t o r . The p r e p a r a t i o n of the de r iva t i ve is rap id and s i m p l e . Drugs such as cocaine , a t rop ine , and indomethac in a l so f o r m s e n s i t i v e d e r i v a t i v e s when sub jec t ed to " r e d u c t i v e f r a g m e n t a t i o n " fol - lowed by acyla t ion , as d e s c r i b e d in th is p a p e r .

J . Chromatog . Sci. 12, 382 (1974). Dept. Vet. Cl in ica l S c i . , Ohio State Univ . , Columbus, OH (USA)

Zum Nachweis yon Methypry lon in O r g a n t e i l e n . G. Boelcke und A. Kohl.

Nachw. yon Methypry lon in Biolog. Mate r i a l ; C h r o - m a t o g r a p h i e , Gas.

Du tch z w e i m a l i g e s G e f r i e r e n ( f l i i ss iger St ickstoff) und P u l v e r i s i e r e n entf~illt E m u l s i o n s b i l d u n g bei C h l o r o f o r m e x t r a k t i o n (1 - 2 g Gewebe) . Aufnahme des T r o c k e n r i i c k s t a n d e s in 2 ml W a s s e r e l i m i n i e r t Lipide , so daft R e i n i g u n g s s c h r i t t e s i ch e r i ib r igen . 1 ~1 de r w ~ f r i g e n L6sung gelangt zur g a s - c h r o m a t o - g r a p h i s c h e n B e s t i m m u n g . Die Ausbeu te b e t rg g t 95,2 +_ 8,6%.

Arch . Toxikol. 31_, 193-196 (1973). Ins t . P h a r m a k o l Tox iko l . , Univ. G6tt ingen E. Miil ler , M a r b u r g

Thin l a y e r c h r o m a t o g r a p h i c iden t i f i ca t ion of c r i m i - dine in an i ma l s t o m a c h con ten t s in e x p e r i m e n t a l l y induced c a s t r i x poisoning. E. G. Hoskam and H. van Beek.

Bes t . yon Cr imid in in Biolog. Ma te r i a l ; C h r o m a t o - g raph ie , Diinnschicht .

C r imid ine ( 2 - c h l o r o - 4 - d i m e t h y l a m i n o - 6 , m e t h y l - pyr imid ine ) , the ac t ive i ng red i en t of the r o d e n t i c i d e Cas t r ix , is e x t r a c t e d f r o m an ima l s t o m a c h or g iz - z a r d con ten t s with c h l o r o f o r m in an a lka l ine med ium. The e x t r a c t is used for thin l a y e r c h r o m a t o g r a p h y on a s i l i ca gel or po lyamid s h e e t conta in ing a f luores - cent ind ica to r ; wa t e r -30% a m m o n i a (100+2) or w a t e r - me thano l -30% a m m o n i a (8_0+20+2) is the mobi le s o l - vent . A f t e r drying, c r i m i d i n e a p p e a r s unde r u l t r a - v io le t l ight as a dark spot on a f l u o r e s c e n t back- ground. Amoun t s of 5 jug c r i m i d i n e a r e c l e a r l y v i s ib le ; the p u r p l e - r e d dye p r e s e n t in Cas t r i x k e r n e l s r e m a i n s on the b a s e l i n e .

J . A s s o c . Offic. Anal. C h e m i s t s 57, 1226-1227 (1974). Cent r . Vet. I n s t . , R o t t e r d a m (Niede r l ande )

Methy lphen ida te blood p l a s m a l eve l s in the h o r s e de - t e r m i n e d by d e r i v a t i v e ga s - l i qu id ch roma tog rap h y - - e l e c t r o n cap tu re . R. Huffman, J . W . Blake, R. Ray, J . Noonan, and P . W . Murdick .

Bes t . yon Methy lphen ida t in P l a s m a ; C h r o m a t o g r a - phie, Gas; ECD.

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IV. Spezielle Anwendungsgebiete