IV. Spezielle Anwendungsgebiete

406 Z. Anal. Chem., Band 270, Heft 5 (1974)

~Jber die d f i n n s c h i c h t - c h r o m a t o g r a p h i s c h e B e s t i m - m u n g yon L y s e r g i d ( L y s e r g s ~ u r e ) n e b e n a n d e r e n M u t t e r k o r n a l k a l o i d e n w i rd b e r i c h t e t . So w u r d e n 15 Alka lo ide auf 6 v e r s c h i e d e n e n P l a t t e n , die t e i l s yon M e r c k , t e i l s yon E a s t m a n - K o d a k und t e l l s s e l b s t h e r - g e s t e l l t w o r d e n w a r e n , geprfif t . A l s L a u f m i t t e l w u r - den 17 v e r s c h i e d e n e Mi t t e l benu t z t . Ff i r a l l e d i e s e B e d i n g u n g e n s ind die R f - W e r t e a n g e g e b e n . W e t t e r w u r d e n die K o r r e l a t i o n s k o e f f i z i e n t e n ffir S i l i c a g e l / C h l o r o f o r m - M e t h a n o l (9 : 1) ffir P l a t t e n v e r s c h i e d e - n e r H e r s t e l l u n g b e r e c h n e t . E b e n s o w u r d e n die K o r - r e l a t i o n s k o e f f i z i e n t e n ffir n e u t r a l e und m i t NaOH a l - k a l i s i e r t e P l a t t e n b e r e c h n e t . Aus den V e r s u c h e n g ing h e r v o r , dal~ ffir R o u t i n e u n t e r s u c h u n g e n die S y s t e m e S i l i cage l F254 M e r c k - A c e t o n und A l u m i n i u m o x i d F254 M e r c k - A c e t o n a m b e s t e n g e e i g n e t w a r e n . Die C h r o m a t o g r a m m e m i t v e r s c h i e d e n e n S y s t e m e n s ind abgeb i lde t . A l s e i n z i g e r Nach t e i l w i rd die Z e i t d a u e r z u r E r l a n g u n g e i n e r L a u f s t r e c k e yon 10 c m b e t r a c h - te t .

J . C h r o m a t o g . 72, 351-357 (1972). H o m e Off ice C e n - t r a l Res . E s t a b l . , A l d e r m a s t o n , Read ing , B e r k s h i r e (Grof ib r i i ann ien) B. Rof imann

Determination of scopolamine in scopolamine-n-butyl bromide. T. Minarnikawa and N. Yamagishi.

Best. yon Scopolamin in Scopolamin-n-butylbromid Spektralphotometrie, UV.

In order to examine the amount of scopolamine con- tained as inpurity in scopolamine-n-butyl bromide (BSB), determination metinod employing ultraviolet absorption was studied. About 2 g of BSB was dissolved in water, 1 ml of ammonia test solution added, saturated with salt, and extracted with mixture of carbon tetrachloride and chloroform (i : 2). The residue after evaporation was extracted carbon tetrachloride, the extract filtered and evaporated to remove the sol- vent as complete as possible. The residue, dissolved in ethanol, evaporated again, dissolued and diluted served as test solution. The absorptions at 205 nm of the test solution and a standard solution were mea- sured using I. 5% of ethanol as a blank. Weight of scopolamine (mg) was calculated.

Japan Analyst 2__22, 1058-1061 (1973) (Japanisch, mit engl. Zus. fass.). Central Res. Lab. Hokuriku Pharm. Co., Inokuchi, Katsuyama-shi, Fukui (Japan)

Spectrophotometric method for estimation of 7ohim- bine in tablets. Y.A. Mohamed and M. A. M. El-Sayed.

Best. yon Johimbin in Pharmazeut. Produkten mit Methylorange; Spektralphotometrie.

Das Alkaloid Yohimbin gibt mit Methylorange eine absorbierende Verbindung, mit deren Hilfe eine quantitative Bestimmung mSglich ist. Die in den Tablet- ten enthaltenen Ffillstoffe wie Lactose, St~rke, Gela- tine oder Calciumcarbonat st6ren die Bestimmung nicht. Man wiegt etwa soviel Tabletten ein wie 0, 05 g Yohimbinhydrochlorid entsprechen, 15st in Wasser und ffillt auf 50 ml auf. Ein aliquoter Anteil wird noch- reals auf 50 ml verdfinnt. 2 ml werden in einem Schei-

detrichter mit 2 ml PufferlSsung yon pH 4, 0 und 1 ml MethylorangelSsung versetzt und dann mit Chloroform extrahiert. Die gesammelten Chloroformextrakte werden auf 25 ml aufgeffillt und bet 421 nm wird die Ab- sorption gemessen. Die PufferlSsung wird aus 1 M CH3COONal und I N HCI so gewonnen, da~ der Wert von pH 4, 0 erreieht wird. Die MethylorangelSsung wird aus 0, 1 g Methylorange, das mit 20%igem Atha- nol auf i00 ml aufgeffillt wird, erhalten. 1 ml Me- thylorangelSsung und 2 ml PufferlSsung entsprechen 560,4 + 11,9 ffir Ecl~.

Pharmazie 27, 673 (1972). Dept. Anal. Chem. Fac. Pharm., Univ. Alexandria (~gypten)

B. Ro~mann

4. B i o l o ~ i s c h e s M a t e r i a l

U s e of s e q u e n t i a l c o l u m n s of m i c r o r e t i c u l a r and pe l - l i c u l a r i o n - e x c h a n g e r e s i n s in h i g h - r e s o l u t i o n s e p a - r a t i o n of c o m p l e x b i o c h e m i c a l m i x t u r e s . C . D . Scot t and N. E. L e e .

T r e n n . yon Biolog. M a t e r i a l an M i k r o r e t i c u l a r - und P e l l i c u l a r h a r z e n ; C h r o m a t o g r a p h i e , S~ulen; komb. System.

Die spezifischen Eigenschaften yon a) Microreticu- lar-Austauseherharzen (homogene Matrix mit eng- maschigem Netz kleinster Peren) und b) Pellicular- Harzen (fester Kern mit einem dfinnen Film aktiver Austausehersubstanz), n~mlich hohe Kapazit~t + gro- I~es AuflSsungsvermSgen auf Kosten einer geringen Trenngeschwindigkeit (a) bzw. seharfe Trennungen bet geringer Kapazit~t aber gro~er Durchlaufge- schwindigkeit (b) werden yon den Verff. so kombiniert, daI~ optimale Trennungen komplexer biologischer LS- sungen erreicht werden. In dem beschriebenen Dop- pels~ulenger~t l~uft das zu trennende Gemisch bet 4000 p. s.i. zun~ehst fiber eine 50 x 0, 22 cm-S~ule mit Aminex A-27 (12 - 15 /~m, Bio-Rad Lab., Rich- mond), die yen 25 auf 40~ programmiert ist, mit Ammoniumacetat-Essigs~urepuffer pH 4, 4 (Acetat- konz. 0,015 M bis 6 M ansteigend). Im on-line-Be- trieb geht das Eluat auf die 150 x 0, 22 cm-Pellicu- lars~ule (z. B. Pellionex AS, 45 pro, Reeve Angel, Clifton) fiber, wo die weitere Auftrennung bet ether von 25 auf 60~ ansteigenden Temp. erfolgt. An der Analyse yon Normal- und pathologisehem Ham wird die Leistungsf~ihigkeit dieser Methode gezeigt. Die Detektien erfolgt UV-spektrometrisch.

J. Chromatog. 8__33, 383-393 (1973). Oak Ridge Nat. Lab., Oak Ridge, Tenn. (USA) W. Czysz

Referate Spezielle Anwendungsgebiete: 4. Biologisches Material 407

t i be r A r t h r o p o d e n a b w e h r s t o f f e LIX. Auf t re rmung d e r P y g i d i a l d r f i s e n s u b s t a n z e n von G~rinus na t a to r mi t Hi l fe d e r H o c h d r u c k - F l f i s s i g k e i t s - C h r o m a t o g r a p h i e . H. Schi ldknecht und B. T a u s c h e r .

A na ly se yon Biolog. F l f i s s igke i t en ; C h r o m a t o g r a p h i e , S~ulen; K ~ f e r d r f i s e n s e k r e t .

Das R o h s e k r e t d e r P y g i a l d r f i s e n des T a u m e l k ~ f e r s Gyr inus n a t o r l ~ t s i ch in dem Sys t em C h l o r o f o r m - E s s i g e s t e r (4 : 1) an M e r c k o s o r b SI 60 bet 156 m l / h und 153 k p / c m 2 (UV-De tek to r 254 nm) gut in 3 K o m - p0nenten auf t rennen . E ine davon i s t auf Grund des I n f r a r o t s p e k t r u m s i d e n t i s c h mi t Gyr ina l nach H. Schi ldknecht , H. N e u m a i e r und B. T a u s c h e r (Lieb igs Ann. Chem. 756, 155 (1972)).

C h e m i k e r - Z , 9__7, 621-623 (1973). O r g . - C h e m . Ins t . U n i v . , H e i d e l b e r g E. Mfil ler , M a r b u r g

A d i a c e t y l m o n o x i m e - t h i o s e m i c a r b a z i d e s p r a y r e a g e n t fo r the de t ec t ion of u r e a in u r ine . S. Ohkuma, M. Ko- no and K. Akutagawa.

Nachw. von H a r n s t o f f in Harn; D i a c e t y l m o n o x i m - t h i o - s e m i c a r b a z i d ; neues Reagens .

A pink spo t is r e v e a l e d s e l e c t i v e l y by s p r a y i n g the r e a g e n t of d i a c e t y l m o n o x i m e - t h i o s e m i c a r b a z i d e - p h o s - p h o r i c acid to the u r e a which is i s o l a t e d f r o m s e v e r a l u r ine componen t s by e i t h e r p a p e r o r t h i n - l a y e r p la te c h r o m a t o g r a p h y . A l t e r d e v e l o p m e n t of the c h r o m a t o - g r a m s , the r e a g e n t is s p r a y e d on the c h r o m a t o - g r a m s , and then they a r e hea ted at 80~ for 30 minu te s in the c a s e of p a p e r , o r hea t ed at 105~ for 30 minutes in the case of thin-layer plate. The identification limit of urea is 3 ~g. N-Monoalkyl and N-monoaryl derivatives of urea are also de- tected with the reagent as pink spots at a level of 3 - i0 pg. Preparation of the spray is described in the full summary.

Japan Analyst 22, 1075-1076 (1973) (Japanisch, mit engl. Zus. fass. ), National Res. Inst. of Police Sci. 6, Sanban-cho, Chiyoda-ku, Tokyo (Japan)

Richtigkeit und Pr~zision bet verschiedenen Metho- den zum Nachweis von Fructose im Sperma. G. Pe- ter und V. Hauenstein.

Best. yon Fructose in Sperma; Methodenvergleich.

tlberprfifung bekannter Methoden zur Bestimmung yon Fructose im Sperma ergibt gleich gute Pr~zision und Richtigkeit ffir das enzymatische Verfahren, das Ver- fahren mit Resorcin und das mit Diphenylamin, w~h- rend solche mit Anthron (allein und mit Thioharnstoff) schlechte Werte liefern. Immer ist es besser, fiber einen Standard als fiber Eichkurven auszuwerten.

Z. Klin. Chem. Klin. Biochem. i_~0, 569-572 (1972). Biochem. Abt., Dermatol. Klin. Univ., Wfirzburg

E. Mfiller, Marburg

Appl ica t ion of a new p e r o x i d e i n d i c a t o r r e a c t i o n to the s p e c i f i c , au toma ted d e t e r m i n a t i o n of ~ lucose with g lucose ox idase . N. G o ch man and J . M. Schmi tz .

Bes t . von Glucose in Biolog. F l f i s s igke i t en ; Autoana- l y s a t o r ; neue P e r o x i d - I n d i c a t o r - R e a k t i o n .

Es w i rd e ine p h o t o m e t r i s c h e Methode z u r B e s t i m m u n g yon Glucose in b i o l o g i s c h e n F l f i s s i gke i t en b e s c h r i e - ben. Obwohl die G l u c o s e o x i d a s e in s e h r r e i n e m Zu- s tand e rh~ l t l i ch und ffir ~ - D - G l u c o s e s e h r s p e z i f i s c h i s t , kann e ine StSrung du rch a n d e r e r e d u z i e r e n d e Subs tanzen n ich t a u s g e s c h l o s s e n w e r d e n . Eine neue P e r o x i d - I n d i c a t o r - R e a k t i o n be ruh t auf ox ida t i ve r Kupp- lung yon 3 - M e t h y l - 2 - b e n z o t h i a z o l i n o n - h y d r a z o n und N, N - D i m e t h y l a n i l i n in A n w e s e n h e i t yon P e r o x i d a s e . Das Reak t ionsp roduk t i s t e in w a s s e r l S s l i c h e r Indamin - F a r b s t o f f , d e s s e n K o n z e n t r a t i o n d e r H ~O 2 -K o n zen t r a - t ion p r o p o r t i o n a l i s t . Die e r z i e l t e n E r g e b n i s s e d ie- s e r G l u c o s e - B e s t i m m u n g mi t dem A u t o a n a l y z e r s ind mi t denen a n d e r e r Methoden v e r g l e i c h b a r . D i e s e s a u t o m a t i s i e r t e V e r f a h r e n i s t zu r G l u c o s e - B e s t i m - mung in Harn , Se rum, P l a s m a und a n d e r e n K S r p e r - f l f i s s igke i t en gee ignet . Die op t ima len R e a k t i o n s b e - d ingungen und d e r Einflu~ a n d e r e r s t S r e n d e r Stoffe wurden u n t e r s u c h t .

Clin. Chem. 18, 943-950 (1973). Clin. C e n t e r , Nat. Inst . Heal th , Be thesda , Md. 20014 (USA) S . L . All

A specific method for the quantitative determination of ~-glucose-l-phosphate. E. Belocopitow and L. R. Mar~chal.

Best. yon ~-Glucose-l-phosphat mit ~-Mutase; Spek- tralphotometrie; fiber G-6-phosphat-NADP.

Zur Bestimmung yon Glucose-l-phosphat wird die Umwandlung in Glueose-6-phosphat durch ~-Mutase, isoliert aus Euglena gracilis, eine Reaktion, die mit dem Glucose-6-phosphat-NADP-System gekop- pelt und photometrisch gemessen werden kann, be- nutzt . S tSrende oL-Mutase, im I~ -Mutase -Ex t r ak t nach P r o t a m i n s u l f a t - B e h a n d l u n g en tha l ten , wi rd d u t c h In- kubat ion in N E s s i g s ~ u r e bet 37~ i n a k t i v i e r t sowie du rch Z u s a t z yon A r s e n a t , das f i -Mutase ak t iv i e r t , g e h e m m t . Im 0 b e r s c h u ~ v o r h a n d e n e s G ! u c o s e - 6 - phospha t w i rd du rch Behandlung mi t B o r h y d r i d e l i - miniert.

Anal. Biochem., 53, 108-114 (1973). Inst. Investig. Bioqu~m. "Fundac~on Campomar", Buenos Aires, (Argentinien) J.B.

Ace ty l a t i on of pheny l th iohydan to ins of amino ac ids . A. S. Ingl i s and P. W. Nicho l l s .

A c e t y l i e r u n g de r Pheny lhydan to ine yon A m i n o s ~ u r e n ; C h r o m a t o g r a p h i c , Gas; Verha l t en .

Es w i rd die A c e t y l i e r u n g a l l e r gewShnl ichen A m i n o - s~u repheny l th iohydan to ine geprfif t und ansch l ie f iend ih r g a s - c h r o m a t o g r a p h i s c h e s V e r h a l t e n im V e r g l e i c h zu den Pheny l th iohydan to inen an e i n e r G las s~u le (100 x 0, 6 cm) aus 5% Dexsi l 300 GC auf s ~ u r e g e w a s c h e n e m , s i l a n i s i e r t e m C h r o m o s o r b W un te r T e m p e r a t u r p r o - g r a m m i e r u n g yon 165 - 290~ u n t e r s u c h t . Mit A u s -


n a h m e yon P r o l i n konn t en a l l e a n d e r e n S u b s t a n z e n a c e t y l i e r t w e r d e n , j e d o c h s ind j ew e i l s s p e z i e i l e A r - b e i t s m e t h o d e n e r f o r d e r l i c h und n u r in e i n i gen F a l l e n e r g e b e n s i c h gegenf ibe r dem n i ch t u m g e s e t z t e n P h e n y l - t h i o h y d a n t o i n c h r o m a t o g r a p h i s c h e V o r t e i l e .

J . C h r o m a t o g . 8._66, 117-123 (1973). Div. P r o t e i n C h e m . , CSIRO, Parkville (Melbourne), Victoria (Australien)

K. Henning

Rout ine a m i n o ac id capi l lar~r c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y of m i c r o q u a n t i t i e s in the p i c o m o l e r a n g e - p r o c e d u r e s and m o d i f i c a t i o n s of a c o m m e r c i a l anal~rzer . A . M . G r e s s n e r .

Bes t . yon A m i n o s a u r e n in Biolog. F l f i s s i g k e i t e n ; C h r o m a t o g r a p h i e , G a s / A u t o a n a l y s a t o r ; komb. G e r a t .

E in i m Handel e rh~i l t l i ches A m i n o s a u r e a n a l y s e n g e r ~ t m i t C a p i l l a r s ~ u l e n (~ 0, 7 ram) w i rd in e i n i gen T e i l e n m o d i f i z i e r t , u m f r e i e A m i n o s a u r e n in b i o l o g i s c h e n Flf iss igkei ten , , G e w e b e e x t r a k t e n und H y d r o l y s a t e n e r - f a s s e n zu kSnnen. I n s g e s a m t w e r d e n 3 Sau len e i n g e - s e t z t , so da~ b a s i s c h e , n e u t r a l e und s a u r e A m i n o - s a u r e n u n a b h a n g i g v o n e i n a n d e r m i t v e r s c h i e d e n e n P u f f e r l S s u n g e n und be t u n t e r s c h i e d l i c h e n T e m p e r a t u - t e n e l u i e r t w e r d e n kSnnen. E in F l i e f i s c h e m a i s t m i t - ge te i l t .

Anal . B i o c h e m . 5._66, 532-545 (1973). I n s t . B i o c h e m . I, F a c . M e d . , Univ. H e i d e l b e r g K. Henning

Determination of hydrox~rproline in fluorometric amino acid analysis with fluerescamine. A.M. Felix and G. Terkelsen.

Best. von Hydroxyprolin mit Fluoreseamin; Autoana- lys ator/Fluorimetrie.

Zur Bestimmung yon ~ 5 mMol Hydroxyprolin in einem Aminos~iuregemisch wird die chromatographische Trennung bet 59, 5~ mittels einer Saule (50 x 0, 28 cm) aus Durrum DC-4A nach der Arbeitsweise yon A. M. Felix und G. Terkelsen (Arch. Biochem. Bio- phys. 157, 177 (1973)) unter Verwendung yon 4 verschiedenen Citratpuffern und der Zugabe yon N-Chlor- succinimid durehgefilhrt. Die quantitative Auswertung erfolgt fluorimetrisch durch Verwendung yon Fluo- rescamin.

Anal. Biochem. 58, 810-815 (1973). Chem. Res. D e p t . , H o f f m a n n - L a Roche Inc. , Nut ley , N . J . (USA)

K. Henn ing

An i m p r o v e d m e t h o d f o r the a s s a y of h y d r o x y l y s i n e . N. B l u m e n k r a n t z and G. A s b o e - H a n s e n .

Bes t . yon Hydroxy lys in ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e .

Z u m s p e z i f i s c h e n N a c h w e i s yon H y d r o x y l y s i n gibt m a n z . B . zu 1 m l h y d r o l y s i e r t e r P r o b e l G s u n g m i t 0, 5 - 10 pg H y d r o x y l y s i n 6 m l C i t r a t / P h o s p h a t - P u f - f e r l S s u n g , 0, 5 m l 0, 0015 M P e r j o d s ~ i u r e und 2 m l E x t r a k t i o n s l S s u n g , sch f i t t e l t w~ihrend 15 ra in und zen - t r i f u g i e r t . 600 p1 d e r o rg . an i schen P h a s e w e r d e n m i t 150 }11 R e a g e n s n a c h E h r l i c h v e r s e t z t und n a c h 15 m i n be t 565 n m p h o t o m e t r i e r t . Die o. g. P u f f e r und Ex -

t r a k t i o n s l S s u n g w e r d e n n a c h den A n g a b e n von N. B lu - m e n k r a n t z und D. J. P r o c k o p (Anal. B i o c h e m . 39, 59 (1971)) b e r e i t e t .

Ana l . B i o c h e m . 56, 10-15 (1973). Univ. C o p e n h a g e n Dept. D e r m a t o l . , R i g s h o s p i t a l , C o p e n h a g e n (Dane- m a r k ) K. Henning

Rapid c h r o m a t o g r a p h i c t e c h n i q u e fo r the d e t e r m i n a - t ion of ~ - A m i n o c a p r o i c ac id in p h y s i o l o g i c a l f lu ids . J . A. Shephe rd , D.W. N ibbe l i nk and L. D. Stegink.

Bes t . yon g - A m i n o c a p r o n s ~ u r e in K 5 r p e r f l f i s s i g k e i - ten; C h r o m a t o g r a p h i e , S a u l e n / N i n h y d r i n .

Z u r B e s t i m m u n g yon s in phys io - l o g i s c h e n F l f i s s i g k e i t e n w i rd n a c h dem D e p r o t e i n i s i e - t e n d e r P l a s m a p r o b e m i t S u l f o s a l i c y l s ~ u r e d e r Sul- f o s a l i c y l s a u r e g e h a l t d e r L S s u n g auf 3, 5% e i n g e s t e l l t , dann auf e ine S~ule (35 x 0, 6 cm) aus T e c h n i c o n C h r o - m o b e a d s B au fgegeben und be t 65~ m i t e i n e m 1 : 2- P u f f e r g e m i s c h aus 0, 05 M C i t r a t p u f f e r , pH 2 ,875 , und 0 ,267 M N a t r i u m c i t r a t p u f f e r , pH 4, 74, e l u i e r t . Das E lua t w i r d m i t N i n h y d r i n r e a g e n s u m g e s e t z t . Die Saule kann m i t 2 m l 2 N N s t r o n l a u g e und Aufgabe des E l u t i o n s p u f f e r s r e g e n e r i e r t we rden .

J . C h r o m a t o g . 86, 173-177 (1973). Dept. P e d i a t r i c s , N e u r o l o g y and B i o c h e m . , Univ. Iowa Coll . M e d . , Iowa Ci ty , Ia (USA) K. Henning

Microassa~f of free and total creatine from tissue ex- tracts by combination of chromatographic and fluorometric methods. H. Kammermeier.

Best. yon Kreatin in Biolog. Material; Chromatogra- phie, Papier/Fluorometrie.

Zur Bestimmung mittels Papier-Chromatographie wird der Oewebeextrakt auf Papier Whatman Nr. 1 ab- steigend wahrend 10 - 15 h mit dem Flie~mittel Me- thanol/Isopropanol/Ammoniak/Wasser (35 : 35 : 5 : 15) im Vergleich zu einem Standard entwickelt. Wird der Rf-Wert von Kreatinin gleich 1 gesetzt, so betragen die Werte ffir Kreatin 0, 84, Arginin 0, 67, Glycocy- amin 0, 63 und Kreatinphosphat 0, 19. Die Trennung mittels Dfinnschicht-Chromatographie kann an 0, 1 mm dicken Schichten aus DEAE-Cellulose 300 mit dem o.g. Flie~mittel in den Verh~.Itnissen 15 : 20 : 4 : I0 aufsteigend w~hrend 90 rain erfolgen. Die Rf-Wer- te betragen 0, 6, 0, 45 bzw. 0, 1 ffir Arginin, Kreatin und Kreatinphosphat. Zur Identifizierung kann mit einem Gemisch aus l%iger DiacetyllSsung/2, 5tiger athanol, o(- NaphthollSsung/20tiger Kalilauge (i: 1: i) besprfiht werden, wobei sich eine Rosafarbung ergibt. Zur Quantifizierung von Kreatin wird nach der Elution mit Wasser mit Ninhydrinreagens versetzt und fluorimetriseh ausgewertet.

Anal. Biochem. 56, 341-345 (1973). Dept. Physiol. Med. Fac., TU, Aachen K. Henning

The instability of S-S- (4-pyrid)rleth~rl)-L- cysteine to performic acid. K.J. Stevenson.

EinfluS von Perameisens~ure auf S-k-(4-Pyridylathyl)- L- cystein; Oxidationsprodukt.

Referate Spezielle Anwendungsgebiete: 4. Biologisehes Material 409

S- ~- (4-Pyridyl~thyl)-L- cystein (PEC) wird auf What- man 3 MM-Papier mit Perameisens~ure bedampft, danach mit Hochspannungselektrophorese bet pH 6, 5 entwickelt und mit Ninhydrin besprfiht. Hierbei ergibt sich zwischen PEC und den neutralen Aminos~u- ren eine Bande, die mittels Elementaranalyse zu PEC �9 SO 2 identifiziert werden kann. Dutch Hydroly- se mit 6 N Salzs~ure bet ll0~ w~hrend 20 h wird hieraus Cysteins~ure und Alanin erhalten.

Anal. Bioehem. 56, 450-459 (1973). Dept. Chem., Univ. Ca lga ry , A l b e r t a (Kanada) K. Henning

1% Molar absorptivit~r and AIc m values for proteins�9 selected wavelen~hhs of the ultraviolet and visible regions. IX. D.M. Kirsehenbaum.

Extinktionen und -Koeffizienten von Proteinen; tabel- larische Ubersicht.

Unter Berficksichtigung yon 138 Literaturzitaten werden eine umfangreiche Liste der molaren Extinktions- koeffizienten und die Extinktionen l%iger LSsungen in 1 cm-Kiivetten im UV-Bereich erstellt.

Anal. Bioehem. 5-6, 237-263 (1973). Dept. Biochem., Coll. Med., Downstate Med. Ctr., Brooklyn, N.Y. (USA) K. Henning

Estimation of free carboxyl groups in protein b~f re- verse dye partition technique. D.K. Vidyarthi, S.R. Palit und S. Mukhopadhyay.

Best. yon Carboxylgruppen in Proteinen; Spektralpho- tometrie; Umkehr farbverteilungstechnik.

Zur Ermittlung des Gehaltes an freien Carboxylgrup- pen in Proteinen wird ein Farbstoffreagens bereitet. Hierzu werden gleiche Volumina 0, 02tiger n-Dode- cylaminhydrochloridlSsung in Chloroform und 0, 01 N salzsaure 0, 01%ige Disulfinblau VN 15O-L6sung ins Gleichgewicht gesetzt und die Chloroformphase abgetrennt. Danach werden gleiche Volumina der organi- schen L6sung mit w~rigen ProteinlSsungen vermischt und die Extinktion bet 630 nm in der ohloro- formhaltigen Phase ermittelt, da ein ad~quater Teil des Farbstoffs auswandert.

Anal. Biochem. 5__66, 601-605 (1973). Dept. Phys. Chem. Indian Ass. Cultivation Sci., Jadavpur, Calcutta (Indien) K. Henning

A rapid, sensitive, and specifih method for the determination of protein in dilute solution. W. Schaffner and C. Weissmann.

Best. yon Proteinen in verdfinnten LSsungen; Spek- tralphotometrie; mit Amidoschwarz, Mikroverfahren.

Es wird eine Mikromethode zur Bestimmung yon 0, 5 - 30 pg Protein mitgeteilt, bet der naeh der F~I- lung mit Trichloressigs~[ure in Gegenwart yon Natri- umdodecylsulfat fiber Milliporfiltrierpapier filtriert und auf dem Papier mit Amidoschwarz i0 B ange- f~irbt wird. Der Fehler betr~igt + 15%, jedoeh werden bet Insulin nur 50% wiedergefunden.

Anal. B iochem. 56, 502-514 (1973). Inst . M o l e k u l a r - b i o l . , U n i v . , Zf i r ich (Schweiz) K. Henning

Colorimetric determination of pyrazole in blood. T. R. Ward and S. N. Pennington.

Best. von Pyrazol, (X-Pyrromonazol in Blut; Spek- tralphotometrie.

Eine colorimetrische Methode zur Bestimmung von Pyrazol (ether Hemrnsubstanz der Alkoholdehydroge- nase) im Blur auf der Basis seines Reaktionsproduktes mit Pentacyanoaminoferrat (III) wurde ausgearbeitet. Eine Eichkurve wird hergestellt durch Zufiigen von 0, 1 - I, 0 pMol P y r a z o l zu 0, 2 ml B l u t s e r u m yon Ra t - ten , dann wi rd mi t W a s s e r auf 0, 3 ml aufgeffill t . Die Mi s ch u n g wi rd 10 rain auf 100~ e rh i t z t . Nach Zen- t r i f u g i e r e n w e r d e n 0, 6 ml des U b e r s t a n d e s mi t 1 ml 0, 2% T r i n a t r i u m p e n t a c y a n o a m i n o f e r r a t v e r s e t z t und die LSsung mi t W a s s e r auf 3 ml aufgefiiUt. Dann w e r - den 0, 1 ml 10% NaNO 2 und 0, 1 ml E i s e s s i g zuge- s e t z t . Dann wi rd 20 rain z e n t r i f u g i e r t und die A b s o r p - t ion bet 458 nm gegen eine B l indprobe g e m e s s e n . Die Methode e ignet s i ch b i s zu r GrSf ienordnung yon 0, 1 }nMol P y r a z o l / 0 , 2 ml P r o b e . Im Se rum n o r m a l e r T i e - r e fanden s i ch ke ine die B e s t i m m u n g s t S r e n d e n Sub- s t an zen .

Mik r0ch im. Ac ta 1973, 297-300. Dept. B i o c h e m . , School M e d . , E a s t C a r o l i n a U n i v . , G r e e n v i l l e , N . C . (USA) R .H . S t e r z e l

A semi-automated colorimetric method for the analysis of dihydroxyphenylacetic acid (DOPA) in urine of Parkinson-ian patients receiving L-DOPA. H.E. Spiegel and R. P. Christian.

Best. yon Dihydroxyphenylessigs~ure in Ham; Spek- tralphotometrie; Autoanalysator.

DOPAC, Hauptmetabolit von L-DOPA, wird an einer Aluminiumoxids~ule aus dem Urin abgetrennt und mit 20 ml 0, 1 N HCI eluiert. Das Eluat wird - zur Ab- trennung anderer Catecholderivate - auf eine 4 cm x 9 mm-S~ule mit Dowex AG 5OW-4 gegeben, und anschlie~end mit i0 ml dest. Wasser nachgespfilt. Eluat und Wasser werden gemischt und im Autoanaly- sator (Teehnieon) die Brenzcatechinfunktion des DOPAC-Molekfils fiber die Molybdat-Nitrit-Reaktion spektralphotometrisch bet 510 nm bestimmt. Die gut reproduzierbare Nachweisgrenze des Verfahrens liegt bet 3 pg/ml DOPAC in Urin in Gegenwart yon DOPA, Dopamin, Norepinephrin und Epinephrin.

Anal. Letters 6, 877-891 (1973). Hoffman-La Roche, Nutley, N.J. ~USA) W. Czysz

Colorimetric assay of levodopa. N. Maggi and A. Co- metti.

Best. von Levodopa mit Isonicotins~urehydrazid; Spektralphotometrie.

Es wird fiber eine colorimetrische Bestimmung yon Levodopa ((-) - 3- (3, 4- Dihydroxyphenyl) -L- alanin), das klinisch gegen Parkinsonsche Krankheit angewen-


det wi rd , b e r i c h t e t . Mit I s o n i c o t i n s ~ u r e h y d r a z i d wi rd e ine F ~ r b u n g e r h a l t e n , d e r e n A b s o r p t i 0 n s k u r v e be t v e r s c h i e d e n e n p H - W e r t e n au fgeze i chne t i s t . Die F a r b s t o f f e n t w i c k l u n g yon 0 b i s 60 min mi t v e r s c h i e - denen Zus~ tzen yon v e r s c h i e d e n s t a r k e n Na t ron l au - gen, d e r Einflu~ yon Sauers to f f , S t icks tof f und Luft sowie yon C e r s u l f a t , A m m o n i u m p e r s u l f a t , K a l i u m - cyanofer ra t ( I I I ) und Mangandioxid w e r d e n u n t e r s u c h t . Die E r g e b n i s s e s ind durch K u r v e n b i l d e r v e r a n s c h a u - l icht . Schl ief i l ich w e r d e n E i c h k u r v e n fiir 35 und 50~ angegeben . Die Kurven genfigen dem L a m b e r t - B e e r - s c h e n Gese t z . Wurde die A b s o r p t i o n be t 475 nm ge- m e s s e n , so s t 5 r t e n T y r o s i n , A m i n o t y r o s i n , T r y p t o - phan nnd R e s o r c i n nicht . Dagegen b o t d e r Zusa t z yon Hydroch inon e inen e r h e b l i c h e n StSreffekt . In d i e s e m Fa l l w a r die E r m i t t l u n g d e r A b s o r p t i o n bet 415 nm angeb rach t . Nut bet T y r o s i n und Tryp tophan konnte auch d i e s e Methode Anwendung f inden. W e i t e r e U n t e r - suchungen ycerden angekiindigt .

J. P h a r m . Sci. 6._11, 924-927 (1972). Anal . Res . L a b . , Gruppo Lepetit, Mailand (Italien) B. Ro~mann

Simultaneous determination of tolbutamide and its metabolites in biological fluids. S.B. Matin and M. Rowland.

Best. yon Tolbutamid und Tolbutamidmetaboliten in Biolog. Material; Extraktionsverfahren/Photometrie.

Tolbutamid und die beiden in Humanharn vorkommen- den Metaboliten i- Butyl- 3-p-carboxyphenylsulfonyl- harnstoff (T-COOH) und 1-Butyl- 3-p-hydroxymethyl- phenylsulfonylharnstoff (T-OH) werden durch selek- rive Extraktion getrennt: Tolbutamid dutch 0, 5% Isoamylalkohol in Hexan unter Zugabe yon 2, 55 M Na- Phosphatpuffer; T-COOH mit 0, 5% Isoamylalkohol in CH2CI 2 beim pH 5, 6 in Citratpuffer; T-OH schliel~- itch aus der CH2Cl2-Phase mit 1 N NaOH. Die ge- trermten Verbindungen werden dureh Reaktion mit Dinitrofluorbenzol in N-Butyl-2, 4-dinitroanilin um- gewandelt und als solches colorimetrisch (bet 420 nm gegen Pentylacetat) oder gas-chromatographisch (an 3% OV-17 auf DMCS Chromosorb W, 100-200 mesh, s~uregewasehen, Ni-63-Detektor, Einspritzblock 225~ S~ule 210~ Detektor 310~ 5% Methan in Argon, 30 ml/min) bestimmt.

Anal. Letters 6, 865-876 (1973). Dept. Pharm., Univ. Calif., San Francisco, Calif. (USA) W. Czysz

Evaluation of liquid-liquid systems for the chromatographic separation of the psychotropic drug thiorid- azine and its metabolites. R.G. Muusze and J. F. K. Huber.

Abtrenn. von Thioridazin in Biolog. Material; Chro- matographie, S~ulen.

Die Eignung einer Reihe yon fliissig-flfissig-chroma- tographischen Systemen zur Abtrennung des Tran- quilizers Thioridazin und seiner Metaboliten aus bio- legischen LSsungen wird untersucht. Verteilungskoef- fizienten, Verhalten bet verschiedenen pH-Werten und Retentiensdaten werden verglichen. Die besten Ergebnisse wurden an einer 250 x 2, 7 mm-Diatomit-

s~ule (K ie se lgu r Merck , spez . Ober f l~che 2 m 2 / g , 15 pm) mi t W a s s e r / D i i s o p r o p y l ~ t h e r / E s s i g s ~ u r e

27, 78 : 69, 44 : 2, 78) be t e i n e r D u rch l au fg es ch w in - digkei t yon 3, 2 m l / m i n e rha l t en . Die Detekt ion e r - fe lg te an e inem U V - P h o t o m e t e r (254 rim) mi t 8 ~ll- Ze l l e und p o t e n t i o m e t r i s c h e r Anze ige .

J . C h r o m a t o g . 8._33, 405-420 (1973). St. J o r i s Hospi ta l , Delft (Nieder lande) W. C z y s z

U s e of a n e w e r amino group r e a g e n t s fo r the d e t e c - t ion and d e t e r m i n a t i o n of kanamycin . D.M. Ben ja - min, J . J . M c C o r m a c k and D. W. Gump.

Bes t . yon Kanamyc in in Blur; C h r o m a t o g r a p h i e , Diinnschicht; d i r e k t e F l u o r i m e t r i e .

F i i r die E r a r b e i t u n g e i n e r B e s t i m m u n g s m e t h o d e des K a n a m y c i n - B l u t s p i e g e l s w~hrend de r T h e r a p i e wurde die Reaktion dieses Aminoglykosid-Antibioticums mit modernen Peptidreagentien untersucht. 7-Chlor- 4-nitrobenzol-2-oxo-l, 3-diazol (NBD) erweist sich als besonders geeignet, da es ein stark fluorescieren- des Reaktionsprodukt bildet. Da die Spektren denen anderer Aminoverbindungen ~hnlich sind, ist zuvor die Trennung durch Dfinnschicht-Chrematographie mit Methanol/Ammoniak/Wasser (3:1:1) notwendig. Die Elution des Reaktionsproduktes yon der Platte gelingt nicht. Vergleichende Untersuehungen in bio- logischen Medien werden dargestellt.

Anal. Chem. 4__55, 1531-1534 (1973). Dept. Pharmacol. and Med., Univ. Vermont Coll. Med. Burlington, Vt. 05401 (USA) E.H. Reimerdes

Rapid a n a l y s i s of s e r u m c h o l e s t e r o l u s ing r e a c t i o n gas c h r o m a t o g r a p h y . M. Matsu i , H. Mizunuma and N. Ikekawa.

Bes t . yon C h o l e s t e r i n in Se rum; C h r o m a t o g r a p h i e , Gas; KOH-Vors~u le .

We have s tud ie s on rap id an a l y s i s of c h o l e s t e r o l in s e r u m by r e a c t i o n gas c h r o m a t o g r a p h y . S e r u m s a m p l e was in j ec t ed into a gas c h r o m a t o g r a p h and the hydroly- s i s of c h o l e s t e r o l e s t e r was c a r r i e d out in a KOH r e a c t i o n column. The f i r s t 7 cm of the co lumn was packed with KOH on qua r t z powder , and the r e s t packed with 2% OV-1. Thus the tota l c h o l e s t e r o l was d e t ec t ed as a s ing le peak. - Appa ra tu s u sed was Sh imadzu Se i sakusho mode l G C-5 A P , dual co lumn s y s t e m , with f l a m e ion iza t ion de t ec to r . A g l a s s co lumn, 0 ,5 c r u x 3 m m i . d . , packed with 2% OV-1 on Sh ima l i t e W was used fo r d e t e r m i n a t i o n of f r e e c h o l e s t e r o l and the o t h e r co lumn ( s a m e s ize) packed with KOH on qua r t z p o w d e r and 2% OV-1 on Sh ima l i t e W was u s e d fo r tota l c h o l e s t e r o l . The condi t ions fo r o the a n a l y s i s were : co lumn t e m p e r a t u r e 230 C, d e t e c - o t o r and s a m p l e in j ec t ion p o r t t e m p e r a t u r e 300 C, n i t r o g e n flow r a t e 60 m l / m i n , and e l e c t r o m e t e r s e n - s i t iv i ty s e t t i n g 0, 32 �9 10 -10 A p e r mi l l ivo l t .

J apan Ana lys t 22, 987-992 (1973) ( Japan i sch , mi t engl . Zus . l a s s . ). Tokyo Res . L a b . , Sh imadzu Se i sakusho C o . , Shibasaki , Chofu - sh i , Tokyo; Tokyo Hosp. Jap. Mono. C o r p . , Mira, Mina to-ku , Tokyo; Lab. Chem. Nat. P r o d . , Tokyo Ins t . Technol . Ohokayama, Meguro -ku , Tokyo (Japan)

Referate Spezielle Anwendungsgebiete: 4. Biologisches Material 411

The twin ion t e c h n i q u e fo r d e t e c t i o n of m e t a b o l i t e s b~r gas c h r o m a t o g r a p h s - m a s s s p e c t r o m e t r y : i n t e r - m e d i a t e s in e s t r o g e n b i o s s n t h e s i s . W . E . B r a s e l t o n , j r . , J . C . O r r and L. L. Enge l .

U n t e r s u c h u n g yon S t e r o i d e n ; C h r o m a t o g r a p h i e , G a s / M a s s e n s p e k t r o m e t r i e ; Naehw. yon M e t a b o l i t e n d u r c h D o p p e l m a r k i e r u n g m i l 14C und 2H.

M i s c h u n g e n yon 14C(4 )- und e twa z u r H~lf te 7~Tdeute- r i e r t e s A n d r o s t e r o n - b z w . T e s t o s t e r o n e r g e b e n im M a s s e n s p e k t r o m e t e r zwei M o l e k u l a r p e a k s g l e i c h e r HShe e n t s p r e c h e n d den M o l e k u l a r i e n e n d e r P r o t i u m - und D e u t e r i u m - F o r m m i t e i n e r u m e ins g r S ~ e r e n M a s s e n e i n h e i t , die s i c h deu t l i ch yon den M a s s e n s p e k - t r e n n i c h t m a r k i e r t e r V e r b i n d u n g e n u n t e r s c h e i d e n . Bet V e r w e n d u n g d i e s e r M i s c h u n g e n a l s S u b s t r a t e ffir a r o m a t i s i e r e n d e E n z y m e m e n s e h l i c h e r P l a c e n t a w e r - den die M e t a b o l i t e n c h a r a k t e r i s t i s c h m a r k i e r t und yon n i c h t m a r k i e r t e n V e r b i n d u n g e n d e u t l i c h u n t e r - s c h e i d b a r . Die S u b s t a n z e n w e r d e n m i t dem E n z y m in G e g e n w a r t yon NADP, G l u c o s e - 6 - p h o s p h a t sowie d e r D e h y d r o g e n a s e i n k u b i e r t , die S t e r o i d e m i t CH2C12 e x t r a h i e r t , an e t h e r Kolonne m i t H y d r o x y a l k o x y p r o - p y l - S e p h a d e x in T r i m e t h y l p e n t e n / I s o p r o p a n o l / H 2 0 (2:10:3) g e r e i n i g t , d u r c h z w e i d i m e n s i o n a l e Dfinn- s c h i c h t - C h r o m a t o g r a p h i e die S t e ro ide a u f g e t r e n n t ( A t h e r / B e n z o l , 5:4 bzw. CHC13/Athy lace ta t /CH30H , 1:1:1) und in e i n e m k o m b i n i e r t e n G a s - C h r o m a t o g r a - p h e n - M a s s e n s p e k t r o m e t e r (LKB 9000) bzw. e i n e m Flfissigszintillationsz~ihler untersucht. 17~, 19-Di- hydroxyandrost-4- en- 3-on, 19-Hydroxyandrost-4- en- 3, 17 - dion, 17 ~- Hydroxy- 3- oxoandrost-4' en- 19 - al, 172-0stradiol und 0stron konnten isoliert, identifiziert und quantitativ bestimmt werden.

Anl. Biochem. 5_33, 64-85 (1973). John Collins Warren Lab., Huntington Memorial Hosp. of Harvard Univ. at Mass. General Hosp., Boston, Mass. 02114 (USA) J.B.

Bestimmung yon Progesteron im Plasma durch dfinns chicht- chromatographis che Direktauswertung. D. Egg.

Best. von Progesteron in Plasma; Chromatographie, Dfinns chicht.

Zur Bestimmung yon ~ 0, 01 ppm Progesteron in Plasma werden 5 rnl Plasma mit 1 N Nalronlauge auf pH 10 eingestellt, zweimal mit je 20 ml Petrol~ther (K = 40-60~ extrahiert, fiber Natriumsulfat fil- tr~ert und im Rotationsverdampfer zur Trockne eingeengt. Der Rfickstand wird mit ca. 3 ml ~thanol in einen Spitzkolben fiberffihrt, im Luftstrom eingeengt und mit i00 }11 Athanol aufgenommen. 10 }11 werden auf eine Aluminiumoxidplatte F254, Typ T, aufgetra- gen und gegen StandardlSsung mitDiehlormethan entwickelt. Die lufttroekene Platte wird auf einer Heiz- platte 20 min bet 150~ erhitzt, bet 366 nm angeregt und die Fluorescenz bet 440 nm bestimmt. Die Em- pfindlichkeit betr~gt 0,005 - 0, 01 ~g.

J. Chromatog. 86, 15 i- 157 (1973). Inst. Allg. u. Exp. Pathol., Univ., Innsbruek (Osterreieh)

K. Henning

B e s t i m m u n g von J o d a m i n o s ~ u r e n in T a b l e t t e n und ~e- t r o c k n e t e n Sch i lddr f i sen . E. Wachho lz und S. P f e i f e r .

Bes t . yon J o d a m i n o s ~ u r e n in P h a r m a z . P r o d u k t e n und Biolog. M a t e r i a l ; C h r o m a t o g r a p h i e , Df innseh ich t / P o l a r o g r a p h i e .

E s w i r d an Hand d e r L i t e r a t u r und auf Grund e i g e n e r V e r s u c h e aus f f i h r l i ch f iber die v e r s c h i e d e n e n B e s t i m - m u n g s m e t h o d e n des J o d g e h a l t e s in J o d a m i n o s ~ u r e n b e r i c h i e t . Dies s ind t i t r i m e t r i s c h e , p h o t o m e t r i s c h e und p o l a r o g r a p h i s c h e V e r f a h r e n . Nach d f innsch i ch t - c h r o m a t o g r a p h i s c h e r T r e n n u n g d e r i m S c h i l d d r f i s e n - p u l v e r v o r h a n d e n e n W i r k s i o f f e L i o t h y r o n i n und L e v o - t h y r o x i n w i r d die p o l a r o g r a p h i s c h e Methode empfoh - len , die auch auf T a b l e t t e n angewand t wurde . F a r die D f i n n s c h i c h t - C h r o m a t o g r a p h i e w e r d e n die R f - W e r t e f i i r K i e s e l g e t G u n d C e l l u l o s e MN 300 und ffir 9 v e r - s c h i e d e n e L a u f m i t t e l angegeben . Z u m Schlu~ d e r A r - b e i t w e r d e n genaue A r b e i t s v o r s c h r i f t e n z u r B e s t i m - m u n g yon D i j o d i y r o s i n in T a b l e t t e n , yon L i o t h y r o n i n in T r i j o d t h y r o n i n t a b l e t t e n , yon K a l i u m j o d i d in Thy- r e o c o m b t a b l e t t e n , von L i o t h y r o n i n und L e v o t h y r o x i n in T h y r e o c o m b t a b l e t t e n und N o v o t h y r a l t a b l e t i e n so - wie yon L i o t h y r o n i n und L e v o t h y r o x i n in Sch i lddr f i - s e n p u l v e r gegeben . Be t a l l e n V o r s c h r i f t e n w e r d e n auch die H e r s t e l l u n g e n d e r E i c h k u r v e n b e s c h r i e b e n .

P h a r m a z i e 28, 97-106 (1973). VEB B e r l i n - C h e m i e und Sek t ion C h e m i e , B e r e i e h P h a r m a z i e , H u m b o l d t - Univ . B e r l i n B. R o ~ m a n n

Quantitative assay of melanin in melanoma cells in culture and in tumors. M.H. Rosenthal, J. W. Krei- der and R. Shiman.

Best. von Melamin in Biolog. Material; Fluorimetrie.

Zur Bestimmung wird die Probe nach Zusatz yon 5 ml 0, 05 M SodalSsung bet 0~ w~hrend 3 min durch UI- traschall vermischt, mit 0005 M SodalGsung auf 25 ml aufgeffillt und 30 min mit 17000 g zentrifugiert. Danach wird nochmals in 4 ml 0, 01 M SodalGsung mittels Ultraschall suspendiert, mit 1 N Salzs~ure

�9 . O .

auf pH 7, 8 elngestellt, 3 h be137 C inkubiert und mit 20 ml 0, 06 M SodalSsung versetzt. Anschliel~end wird auf 100~ erhitzt, mit 50 ~130%iger Wasser- stoffperoxidlSsung versetzt, 30 min bet I00~ inkubiert, abgekfihlt und zentrifugiert. Die quantitative Auswertung erfolgt fluorimetriseh bet 410/500 nm.

Anal. Bioehem. 5__66, 91-99 (1973). Dept. Biol. Chem. and Pathol., Milton S. Hershey Med. Ctr., Pa. State Univ., Hershey, Pa. (USA) K. Henning

Microbiological assay of purines. R.D. Berlin and J. NI. Oliver.

Best. von Purinen, Adenin; Szintillationsmessung; durch Synthese yon Nucleins~uren mit 3H-Uracil.

Die einfache und sehnelle und empfindliche Methode zur Bestimmung yon Purinen basiert auf der Purin- abh~ngigen Synthese yon Nucleins~uren in E. colt KI2, doppelt auxotroph fiir Adenin und Uracil. Die Zellen werden mit fiberschfissigem 3H-Uracil und der zu messenden LSsung inkubiert, abgetrennt und in ei-


n e m F l i i s s i g s z i n t i l l a t i o n s z f i h l e r g e m e s s e n . Die M e n - ge des e i n g e b a u t e n U r a c i l s i s t d e r A d e n i n - K o n z e n - t r a t i o n d e r L S s u n g d i r e k t p r o p o r t i o n a l . B i s zu e t h e r A d e n i n - K o n z e n t r a t i o n yon 1, 5 �9 10 -6 M A d e n i n b e t r ~ g t die S t a n d a r d a b w e i c h u n g 7, 8%. E i n 5 0 f a c h e r 0 b e r - schu[~ an Hypoxan th in bee in f lu~ t die A d e n i n - B e s t i m - m u n g n ich t . 20 pM kSnnen m i t g l e i c h e r G e n a u i g k e i t wie grSl~ere M e n g e n g e m e s s e n w e r d e n . Die E m p f i n d - l i c h k e i t d e r Me thode l~flt s i c h d u t c h V e r w e n d u n g k l e i n e r e r V o l u m i n a und U r a c i l h o h e r s p e z i f i s c h e r Akt iv i t~ t noch e rhShen .

Anal. Bioehem. 53, 21-27 (1973). Dept. Physiol., Harvard Med. School, Boston, Mass. 02115 (USA)

J.B.

P r e p a r a t i v e s o l v e n t p a r t i t i o n c h r o m a t o g r a p h y of b u t y r y l a t e d c~rclic A M P a n a l o g u e s . F . A . Nee lon , B. M. B i r c h and H. E. I~ebovi tz .

T r e n n . d e r B u t y r y l d e r i v a t e yon A d e n o s i n - 3 ' , 5' - m o n o - phospha t , cycl . ; C h r o m a t o g r a p h i e , S~ulen.

Die Trennung yon cyclischem Adenosin-3', 5"-mono- phosphat und seiner Butylrylderivate kann an einer S~ule (~ 0, 9 era) aus Sephadex G 25 durchgeffihrt werden, indem exfrem feines Sephadex G 25 fiber Naeht in Isopropanol/0, 5 M Ammoniumacetat (4:1) suspendiert und dann eingeffillt wird. Das Probema- terial wird in 0, 1 ml des gleichen LSsungsmittels ge- 15st, aufgegeben und ebenfalls mit diesem LSsungs- mittel bet einer Durchfluflgesehwindigkeit mif 4, 5 oder 9 ml/h eluiert. Naeh jeweils 15 rain wird das Eluat bet 259 und 273 nm photomefriert, wodurch die Besiimmung der molaren Konzentration der einzel- hen Komponenten mSglich ist. Auf diese Weise kSn- nen auch die N6-Monobutylderivate getrennt werden.

Anal. Biochem. 56, 74-83 (1973). Div. Endocrinol., Dept. Med., Duke Univ., Med. Cir., Durham, N. Carolina (USA) K. Henning

C o m p a r i s o n b e t w e e n r a t and r a b b i t a n t i c y c l i c A M P a n t i b o d i e s - s p e c i f i c i t y t o w a r d acy l d e r i v a t i v e s of c [ c l i c AMP. H . L . C a l l l a , G .S . C r o s , E . J . P . Jo lu , M. A. De laage and R. C. Dep ieds .

D e r i v a t b i l d u n g yon A d e n o s i n - 3 ' , 5 ' - m o n o p h o s p h a t , cycl . ; U n t e r s u c h u n g m i t A n t i k 5 r p e r n .

Es w e r d e n die c y c l i s c h e n an t i -3 ' , 5 ' - A M P - A n t i k S r p e r yon Ra t t e und K a n i n c h e n u n t e r V e r w e n d u n g von c y c l i - s c h e m 2 ' - O - S u c c i n y l - A M P - A l b u m i n a l s I m m u n o g e n i s o l i e r t und U n t e r s u c h u n g e n z u r H e r s t e l l u n g yon De- r i v a t e n du rchge f f ih r t . H i e r b e i e r g a b e n s i c h in b e i d e n F ~ l l e n m i t 2 ' - O - a c y l i e r t e n D e r i v a t e n yon c y c l i s c h e m A M P die b e s t e n E r g e b n i s s e . Die D i s s o z i a t i o n s k o n - s t a n t e n l i e g e n u n t e r 1 0 - 1 0 w ~ h r e n d be t den A u s g a n g s - p r o d u k t e n die W e r t e be t ca. l0 -8 M l i egen .

Anal . B i o c h e m . 56, 383-393 (197 3). C f r . B i o c h i m . et Biol . Mol~culaire- 'UCNRS, M a r s e i l l e ( F r a n k r e i c h ) .

K. Henn ing

A s e n s i t i v e m e c h a n i z e d d e t e r m i n a t i o n of A T P + ADP. J . A. L o o s , R . C . H . v a n D o o r n and D. Roos .

Bes t . yon A d e n o s i n t r i p h o s p h a t und A d e n o s i n d i p h o s - phat ; E n z y m a t i s c h e A n a l y s e ; f iber NADH.

Z u r B e s t i m m u n g yon A T P und ADP wi rd d e r V e r - b r a u c h yon NADH be t d e r G l y c e r i n a l d e h y d p h o s p h a t - d e h y d r o g e n a s e - , G l y c e r i n - 3 - p h o s p h a t d e h y d r o g e n a s e - und L a c t a t d e h y d r o g e n a s e - R e a k t i o n in e i n e m c y c l i - s c h e n S y s t e m f l u o r i m e t r i s c h g e m e s s e n , wobei die O x i d a t i o n s g e s c h w i n d i g k e i t yon NADH d e r A T P - + A D P - K o n z e n t r a t i o n p r o p o r t i o n a l i s t . A l l e e r f o r d e r - l i c h e n E n z y m e s ind in d e r " A l d o l a s e - P a s t e " aus K a n i n c h e n m u s k e l naeh E. R a c k e r (J. Biol . C h e m . 167, 843 (1947)) e n t h a l t e n . P h o s p h o f r u c t o k i n a s e a l s v e r - u n r e i n i g u n g w i r d d u t c h Inkuba t ion ffir 30 m i n be t 37~ i n a k t i v i e r t , s p o n t a n e r N A D H - V e r b r a u e h d u r c h B e h a n d l u n g m i t Ak t ivkoh le un te rd r f i ck t . Die B e s t i m - mung wi rd n i ch t d u r c h G lucose , G l u c o s e p h o s p h a t e , 2, 3 - D i p h o s p h o g l y c e r i n , G l y c e r i n , P y r u v a t o d e r A M P g e s t S r t . Die Me thode i s t s p e z i f i s c h f i i r A T P + ADP und ze ig t be t 12, 5 bzw. 25 nMol A T P + ADP e ine S t a n d a r d a b w e i c h u n g yon 2, 5 bzw. 0, 8 %. De r A T P - + ADP-Gehal% yon 104 L y m p h o c y t e n kann b e s t i m m t w e r d e n .

Anal . B i o c h e m . 53, 309-312 (1973). C e n t r a l Lab . N e t h e r l a n d Red C r o s s T r a n s f u s i o n S e r v . , A m s t e r - d a m (Niede r l ande ) J . B .

A r a p i d and s e n s i t i v e a s s a y fo r p y r i m i d i n e d i m e r s in DNA. B . M . S u t h e r l a n d and M. J . C h a m b e r l i n .

Bes t . yon P y r i m i d i n - D i m e r e n in N u c l e i n s ~ u r e n ; R a d i 0 m e t r i e ; 3H- und 3 2 p - M a r k i e r u n g .

Die B e s t i m m u n g von P y r i m i d i n - D i m e r e n in g e r e i n i g - t e r 3 2 p - D N S bzw. 3 H - T h y m i d i n - m a r k i e r t e r DNS aus T 7 - P h a g e n yon E. col t e r f o l g t d u r c h P h o t o r e a k t i v i e - r u n g d u t c h Ikuba t ion m i t p h o t o r e a k t i v i e r e n d e m E n z y m (E. co l t W 3350) und B e s t r a h l u n g m i t w e i ~ e m L i c h t , B e h a n d l u n g d e r DNS m i t DNase , S c h l a n g e n - P h o s p h o - d i e s t e r a s e und b a k t e r i e l l e r a l k a l i s c h e r P h o s p h a t a s e , A b t r e n n u n g d e r 3 2 p - O l i g o n u c l e o t i d e an N o r i t und M e s s u n g d e r Rad ioak t iv i t~ t des F i l t r a t e s , Die Me- rhode b e r u h t auf d e r R e s i s t e n z d e r N u c l e o t i d p h o s p h a t - Bindung i m D i m e r e e n t h a l t e n d e n B e r e i c h d e r DNS gegenf iber den a b b a u e n d e n E n z y m e n und d e r s p e z i f i - s c h e n A d s o r p t i o n d e r ~ZP^-Oligonucleofide an Nor i t . Die an N o r i t gebundene ~ z P - A k t i v i t ~ f i s t d e m P y r i - m i d i n - D i m e r e n - G e h a l t d e r DNS d i r e k t p r o p o r t i o n a l . Die Me thode i s t s e h r e m p f i n d l i c h und w i r d n i ch t d u r c h die i ib l i chen N u c l e a s e - A k t i v i t ~ t e n in Z e l l e x - t r a k t e n g e s t 5 r t . Es kSrmen so auch die p h o t o r e a k t i - v i e r e n d e n E n z y m e g e m e s s e n w e r d e n .

Anal . B i o c h e m . 53, 168-176 (1973). Dept. Mol. Biol . and V i r u s L a b . , U---niv. B e r k e l e y , Cal i f . 92664 (USA)

J . B .

L a r g e s c a l e p r e p a r a t i o n of DNA fo r v a s t DNA e x c e s s h~,br id iza t ign . C . J . C h e s t e r t o n , B . E . H . C o u p a r and P. H. W. B u t t e r w o r t h .

D a r s t e l l u n g yon N u c l e i n s ~ u r e n aus Biolog. M a t e r i a l ; Z e n t r i f u g a l - V e r f a h r e n ; C s C 1 - G r a d i e n t .

Referate SpezieUe Anwendungsgebiete: 4. Biologisches Material 413

DNS aus Z e l l k e r n h 0 m o g e n a t von R a t t e n l e b e r w i r d d u r c h Z e n f r i f u g i e r e n in e i n e m C s C 1 - G r a d i e n t e n (190 000 g, 2,5 Tage , 15~ f r a k t i o n i e r t und die F r a k - f i onen d u r c h P r o n a s e - B e h a n d l u n g und P h e n o l e x t r a k - t i on g e r e i n i g t . G e g e n i i b e r d e r Me t hode n a c h J. M a r m u r (J. Mol. Bio leg . 3 , 208 (1961)) i s t die i s o l i e r t e DNS n u r m i t 0, 2 a n s t a t t 0, 6% P r o t e i n v e r u n r e i n i g t . Die I s o l i e r u n g e r f o r d e r t n u t e in Dr i f f e l d e r Ze i t und ge- r i n g e r e M e n g e n an C s C 1 - G r a d i e n t e n . Die i s o l i e r t e DNS z e i g t die t y p i s c h e H y b r i d i s i e r u n g s c h a r a k t e r i s - tik im "vast DNA-excess"-Technik.

Anal. Biochem. 5-3, 28-34 (1973). Dept. Virol., Royal Postgrad. Med. School, Hammersmith Hosp., London W 12 (Groi~britannien) J.B.

Measurement of s dimers in DNA bsr thin-layer chromatographer. K. Goldmann and E. C. Friedberg.

Abtrerm. yon Thymin aus Nucleins~uren; Chromato- graphie, Dfinnschich%.

Die Trennung yon 3H-markiertem Thymin yon Thy- min-Dimeren in UV-bestrahlter DNS gelingt durch zweidirnensienale Diinnschicht-Chromatographie ana- log der yon W. R. Carrier und R. B. Setiow (Methods in Enzymol., Vol. XXI, Part D, p. 230-237, Acade- mic Press, New York 1971) beschriebenen zweidimen- sionalen Papierchromatographie. Die Substanzen werden an Dfinnschichtcellulosebl~ttern in n-Butanol/H20 (86:14) und in der 2. Richtung in ges~ttigter (NHa) 2- SO4/M Na-Acetat/Propanol- (2) (80:18: 2) getrenn~. Gegeniiber den bisher angewandten Verfahren ist die Methode zeitsparend und einfacher.

Anal. Biochem. 53, 124-131 (1973). Dept. Pathel., Stanford Univ. School Med., Stanford, Calif. 94305 (USA) J.B.

A s s a y of deox3rnucleot ides wi th d e p h e n y l a m i n e : r e - m o v a l of d i th io l i n t e r f e r e n c e s by m e r c u r i c c h l o r i d e . F. S t u t z e n b e r g e r .

Bes t . yon N u c l e o t i d e n m i t D ipheny lamin ; S p e k t r a l - p h o t o m e t r i e ; A u s s c h a l t u n g d e r D i th io l s tS rung .

Z u r B e s t i m m u n g d e r Ak t iv i t~ t yon R i b o n u c l e o t i d - R e d u c t a s e w e r d e n 1 m l e i n e r L S s u n g aus 1 - 2, 2 m g P r o t e i n (behande l t m i t DNase und d i a l y s i e r t ) , 3 ~Mol A d e n o s i n p h o s p h a t , 10 - 50 pdVIol RLA o d e r DTT, 10 - 100 nMol B 1 2 - C o e n z y m , 5 ~Mol M a g n e s i u m a c e - t a t und 50 ]~Mol P h o s p h a t p u f f e r (pH 6) 2 ra in gekoch t , geki ihl t und z u r Ausf~il lung yon s t S r e n d e m Di th io l m i t 0, 5 m l e i n e r Q u e c k s i l b e r ( I I ) - c h l o r i d l S s u n g , e n t h a l - t end 10 - 75 p_Mol, v e r s e t z t . D e r . r o s a N i e d e r s c h l a g w i rd a b z e n t r i f u g i e r t und I m l d e r O b e r p h a s e m i t 1 rnl 4%iger D i p h e n y l a m i n l G s u n g in E i s e s s i g m i t 10% S c h w e f e l s ~ u r e , d ie p r o 10 m l 25 p1 e i n e r 8%igen A c e t - a ldehyd lSsung enth~ilt, v e r s e t z t und be t 595 n m pho to - metriert.

Anal. Biechem. 56, 294-299 (1973). Ruakura Agric. Res. Cir., Hamilton (Neu-Seeland).

K. Henning

V i s u a l i z a t i o n of d i h [ d r o u a c i l d e h ~ d r o ~ e n a s e a c t i v i t y a f t e r d i s c Gel e l e c t r o p h o r e s i s . R .O. Hal lock and E. W. Y a m a d a .

I d e n t i f i z i e r u n g yon D i h y d r o u r a c i l - d e h y d r o g e n a s e ; E l e k t r o p h o r e s e , Gel; m i t N i t r o b l a u t e t r a z o l i u m .

Die I d e n t i f i z i e r u n g von D i h y d r o u r a c i l - d e h y d r o g e n a s e i m Ansch lu~ an die G e l s c h i c h t - E l e k t r o p h o r e s e e r f o l g t d u r c h A n f ~ r b e n m i t f o l g e n d e r LSsung: 2, 5 m l N i t r o - BT ( N i t r o b l a u t e t r a z o l i u m , 1 m g / m l ) , 0, 25 m l P h e n - a z i n m e t h o s u l f a t (1 m g / m l ) , 1 m l 0, 1 N N a t r i u m - c h l o r i d l 5 s u n g und 6, 25 m l S t a n d a r d l S s u n g n a c h den A n g a b e n yon A. E. Smi th und E. W. Y a m a d a (J. Biol . C h e m . 246, 3610 (1971)). M i t t e l s d e n s i t o m e t r i s c h e r A u s w e r t u n g k a n n h a l b q u a n t i t a t i v a u s g e w e r t e t w e r d e n .

Anal . B i o c h e m . 56, 84-90 (1973). Dept. B i o c h e m . , Univ . Man i toba , Winn inpeg , M a n i t o b a (Kanada)

K. Henn ing

Separation and preliminary studies on 2-ketopantoyl lactone and 2-ketopantoic acid reductases of yeast. H. L. King, Jr. and D. R. Wilken.

Best. von Ketopantoyllactonreduktase und Bietopan- tothens~urereduktase in Hefe; Spektralphotometrie; fiber NADH.

Aus zerkleinerten Hefezellen isolieren Verff. die beiden Enzyme 2-Ketopantoyllactonreduktase mit ei- nero Aktivit~tsmaximum bet pH 7 mit Ketopantoyllac- ton und NADPH in Trismaleat-Puffer und 2-Keto- pantothens~urereduktase mit einem Aktivit~tsmaximum bet pH 5 mit Keteopantothens~ure und NADH durch Chromatographie an DEAE-Cellulose. Die En- zymreaktion ist pH-abh~ngig und besitzt ausgepr~igte Substratspezifit~t. Die stSchiometrischen Verhiiltnis- se der Reaktion (1 Mol Ketpantoyllacton bzw. Keto- pantothens~ureZ~ 1 Mol oxidiertem NADPH bzw. NADH) und die spezifische Aktivit~t wurden ermittelt. Weitere Untersuchungen folgen.

J. Biol. Chem. 247, 4096-4098 (1972). Lab. Exp. Path- ology, Veterans Admin. Hosp., Madison, Wisc. (USA)

C. Jung

A s e n s i t i v e f l u o r o m e t r i c a s s a y fo r m o n o a m i n e ox i - d a s e ac t iv i ty . M. H a r a d a and T. Naga t su .

Bes t . yon M o n o a m i n o x i d a s e in Biolog. M a t e r i a l ; F l u o r i m e t r i e .

Z u r B e s t i m m u n g d e r Ak t iv i t~ t yon M o n o a m i n o x i d a s e w i rd die A r b e i t s w e i s e n a c h H. Y a m a d a , H. Suzuki und Y. O g u r a (Advan. B i o c h e m . P s y c h o p h a r r n a c o l . 5 , 185 (1972)) angewende t , i n d e m nach dem U m s a t z m i t NADH, o t - K e t o g l u t a r a t und G l u t a m a t d e h y d r o g e n a s e in T r i s / M a l e a t - P u f f e r yon 0 - 25 nMol A m m o n i a k be t R a u m - t e m p e r a t u r m i t S a l z s ~ u r e z e r s e t z t , dann a l k a l i s c h ge- m a c h t und m i t W a s s e r s t o f f p e r o x i d o x i d i e r t w i rd . H i e r - d u r c h b i l d e t s i ch e ine be t 460 n m f l u o r e s c i e r e n d e V e r - b indung , die be i 360 n m a n g e r e g t wi rd .

Ana l . B i o c h e m . 56, 283-288 (1973). Dept. B i o c h e m . , M a t s u m o t o Denta l C o l l . , Sh io j i r i , N a g a m o (Japan)

K. Henn ing


An i m p r o v e d a u t o m a t e d m e t h o d f o r the e s t i m a t i o n of s i a l i c ac id r e l e a s e d in the n e u r a m i n i d a s e a s s a y . K. J. F idgen .

Bes t . yon N e u r a m i n i d a s e ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; a l s S i a l i n s ~ u r e .

Es w i rd e ine a u t o m a t i s i e r t e B e s t i m m u n g yon N e u r a m i - n i d a s e d u r c h M e s s u n g d e r f r e i g e s e t z t e n S i a l i n s ~ u r e aus m a k r o m o l e k u l a r e n S u b s t r a t e n b e s c h r i e b e n . Die M e s s u n g e r f o l g t auf b e k a n n t e Wei se d u r c h Oxida t ion der Sialins~ure mit Perjodat und Erhitzen mit 2-Thio- barbiturs~ure unter Bildung eines Fuchsin-farbenen Chromogens anhand dessen Absorption bet 549 nm. Die Messung wird in einem Technicon Autoanalyser I, a u s g e s t a t t e t m i t e i n e m D i a l y s a t o r s y s t e m , d u r c h g e - ff ihrt . Die U r s a c h e n ffir die s c h e i n b a r e b i m o d a l e V e r - t e i l ung d e r MeBwer te w e r d e n d i s k u t i e r t .

Anal . B i o c h e m . , 54, 379-385 (1973). W e l l c o m e Res . L a b . , Dept. Biol . C h e m . , B e c k e n h a m , Ken t (Gro~- b r i t a n n i e n ) J . B .

A staining method for nitrite reductase on polyacryl- amide Gels after electrophoresis. D.P. Hucklesby and R. H. Hageman.

Nachw. von Nitritreduktase mit Benzylviologen; F~r- bung nach Gel-Elektrophorese.

Zum Nachweis yon Nitritreduktase auf Polyacrylamid- gelen wird die Elektrophorese nach B.J. Davis (Ann. N.Y. Acad. Sci. 121, 404 (1964)) mit 5 mM Tris-Gly- cin-Puffer, pH 8, 3, enthaltend 5% Saccharose, ausge- ffihrt, wobei Bromphenol als Begleitsubstanz verwendet wird. Anschlie~end wird bet 27~ in einem eva- kuierten Thunberg-Apparat inkubiert, der 9 ml 0, 5 mM NatriumnitritlSsung und 1 ml ether Benzylviole- genlSsung (i, 5 mg/ml in 0, 05 M Kaliumphosphatpuf- fer, pH 7, 5) enth~it, die an Palladium mittels Was- serstoff zu 28 - 40% reduziert wnrde. Innerhalb von 1 - 3 h bildet sich an den Stellen, an denen Benzyl- viologen reduziert wurde, keine F~irbung aus.

Anal. Biochem. 56, 591-592 (1973). Agronomy Dept., Univ. Ill., Urbana-Champaign, Ill. (USA)

K. Henning

R i b o n u c l e a s e : A s p e c t r o p h o t o m e t r i c a s s a y u s i n G a c r i - d ine o r a n g e - R N A complex . T. C h a p l i n s k i and D. A. W e b s t e r .

Bes t . von N u c l e a s e m i t A c r i d i n o r a n g e ; S p e k t r a l p h o - t o m e t r i e ; RNase .

F t i r d ie B e s t i m m u n g ven R N a s e w i rd a l s S u b s t r a t e in R N S - A c r i d i n o r a n g e - K o m p l e x v o r g e s c h l a g e n . D e r l : 1 - K o m p l e x a l s f e ine S u s p e n s i o n ze ig t e in A b s o r p - t i o n s m a x i m u m be t 470 nm, d e r f r e i e F a r b s t o f f d u r c h RNase freige~setzt , be t 492 nm . Die e n z y m a t i s c h e Reak t ion w i r d anhand d e r E x t i n k t i o n s z u n a h m e be t 492 n m ve r fo lg t . O p t i m a l e B e d i n g u n g e n l i e g e n b e t e i n e m 1 : 1 - K o m p l e x m i t 0, 3 m g R N S / m l in 0, 05 M N a - A c e - ta t (pH 5) und 37 ~ vor . Die Me t hode i s t e m p f i n d l i c h e r a l s die b e k a n n t e n Methoden , wenn auch n i c h t i m m e r g e n a u e r .

Ana l . B i o c h e m . , 5__44, 395-405 (1973). Dept . B i o l . , Ill . Ins t . of T e c h n o l . , Ch icago , I l l . (USA) J . B .

An alkaline phosphatase-linked assay for ribonuclea- ses. R. Stern and J. Wilczek.

Best. von Nuclease; Spektralphotometrie; RNase, Methode mit alkal. Phosphatase.

Ffir die Bestimmung yon RNase wird ein an alkali- sche Phosphatase gekuppeltes System vorgeschlagen. Durch die RNase-Einwirkung auf RNS wird ein Phos- phat-Rest freigelegt und durch die Phosphatase abge- spalten. Die Bestimmung erfolgt entweder nach ge- meinsamer Inkubation yon RNS mit RNase und Phos- phatase, Zugabe yon Molybdat/Ascorbins~ure und Messen der Absorption bet 820 nm, oder es wirdnach Inkubation mit RNase deren Aktivitgt durch Zugabe yon ADTA gestoppt und danach die Spaltung mit Phos- phatase durchgeffihrt. Die in alkalischer Phosphatase als Verunreinigung enthaltene RNase wird durch Be- handlung mit gepulvertem Glas in 0, 01 M Tris abgetrennt. 1 ng RNase kSnnen noch nachgewiesen werden. Die Anfangsgeschwindigkeit der Reaktion kann mit dieser Methode gemessen werden.

Anal. Biochem., 54, 419-428 (1973). Cell. Biol. Sec- tion, Lab. Biochem., Nat. Inst. Dent. Res., Bethesda, Md. (USA) J.B.

I m p r o v e d r a p i d i t y and p r e c i s i o n in the d e t e r m i n a t i o n of b r a i n 2 ' , 3 ' - c y c l i c nuc l eo t ide 3' - p h o s p h o h y d r o l a - se . J . R . P r o h a s k a , D.A. C l a r k and W. W. Wel l s .

Bes t . von 2 ' , 3' - N u c l e o t i d - 3' - p h o s p h o h y d r o l a s e , in G e h i r n ; S p e k t r a l p h o t o m e t r i e ; ' cycl. :

Z u r B e s t i m m u n g d e r Ak t iv i t~ t c y c l i s c h e r 2 ' , 3' -Nu- c l e o t i d - 3 ' - p h o s p h o h y d r o l a s e aus H i r n w i rd die ge- s a m t e H i r n p r o b e h o m o g e n i s i e r t , d a n a c h 5 - 25 ~g P r o t e i n zu 7, 5 m M 2 ' , 3' - C A M P und 50 m M T r i s / M a l e a t - P u f f e r , pH 6, 2, gegeben , so dab das Endvo- l u m e n 0, 2 m l be t r~g t . A n s c h l i e ~ e n d w i rd 10 m i n fang be t 30~ und danach 30 s ec l ang be i 100~ e r h i t z t . Dann w i rd be t 30~ m i t 0, 1 ml 0, 3 M T r i s / H C i - P u f - f e r l 5 s u n g , pH 9, die 21 m M M a g n e s i u m e h l o r i d en t - h~l t , sowie m i t 60 ~g E. C o l i - A l k a l i p h o s p h a t a s e be t pH 8, 5 v e r s e t z t , au fgekoch t und be t 410 nm p h o t o m e - t r i e r t .

Ana l . B i o c h e m . 5_~6, 275-282 (1973). Dept. B i o c h e m . , Michigan State Univ., East Lansing, Michigan (USA)

K. Henning

A convenient assay for ADP reductase activity using dowex-l-borate columns. J.G. Cory, F.A. Russel, and M. M. Mansell.

Best. von Adenosin, Desoxyadenosin und Reduktase; Chromatographic, S~ulen/Spektralphotometrie; ADP- Reduktase.

Die Trennung yon 14C-Deoxyadenosin und 14C-Adeno- sin kann an einer S~ule aus Dowex-l-borat ausge- ffihrt werden. Das S~ulenmaterial wird hergestellt aus Dowex-1 in der Chloridform, das zun~chst mit 1 M Salzs~ure und danach mit Wasser neutral gewaschen wird. AnschlieBend wird es ffir 48 h in eine ge- s~tt. NatriumboratlGsung gegeben, filtriert, mit Was- ser gewaschen und in Wasser dispergiert. Nach der

Referate Spezielle Anwendungsgebiete: 4. Biologlsches MateriM 415

Eingabe in die S~ulen (Pasteur-Pipetten) wird mit 2 ml 1 mM NatriumboratlSsung pH 9, 2 gewaschen, und ca. 0, 8 ml der w~grigen ProbelSsnng werden aufgegeben. Ansehlie~end wird mit 2 ml und danach mit 12 ml 1 mM NatriumboratlSsung gewaschen bzw. eluiert. Hierbei wird zuerst Deoxyadenosin und danach Adenesin eluiert. Der Nachweis erfolgt durch Bestim- mung der Aktivit~t oder der Extinktion bet 260 nm in den Eluatfraktionen.

Anal. Biochem. 5_~5,449-456 (1973). Dept. Med. Micro- biol. and Chem., Univ. South Florida, Tampa, Fa. (USA) K. Henning

G a s - c h r o m a t o ~ r a p h i s c h e s V e r f a h r e n zu r B e s t i m m u n g des Koh lenmonox idgeha l t e s im Blur. R. I ff land und G. Sticht .

Bes t . yon Kohlenmonoxid in Blur; C h r o m a t o g r a p h i e , Gas.

Bet F~ulnis oder Hitzeeinwirkung kann der CO-Gehalt des Blutes wegen der teilweisen ZerstSrung des H~ moglobins nach den fiblichen Methoden (BezugsgrS~en: Hb-Gehalt bzw. vollst~ndige Abs~ttigung mit CO) nicht bestimmt werden. Das Eisen unterliegt keinen derartigen Ver~nderungen und kann daher als Bezugs- grS~e verwendet werden. - Arbeitsvorschrift . CO-Be- stimmung. 2 ml Blut + 6 ml-3-~-S-a-p-o-n~Ss-g.- + 12 ml H20 h~molysieren und filtrieren; 5 ml L6sg. + einige Tropfen Octanol in einer 20 ml-Einmalspritze mit Stempeleinstellung 14 ml + 4 ml 3, 3% K 3 [Fe(CN)] 6- LSsg. I0 min schfitteln; Gasphase fiber eine i0 ml- Gasschleife in Gas-Chromatographen einieiten (Per- kin-Elmer & Co mit I-litzdrahtdetektor; Stahls~ule 2 m, Au~endurchmesser 4 mm; Molekularsieb 5 A; Helium, 30 ml/min; Temperatur: Detektor 150~ S~ule 60~ Schreiber; Empfindlichkeitsstufe des De- tektors: 5/16). - Eisenbestimmung. Methode nach Koch (Koch- Dedic~ Har~dl~u~l~ }i-er--Spurenanalyse, Ber- lin 1964). - I00 ~g Hb-Eisen -~ i, 79 ~Mol CO ~ 40 ~i CO. Ffir beide Bestimmungen wurde eine Streuung yon 3 - 4% ermitfelt, weniger als 1% CO-Hb kSnnen noch bestimmt werden.

Arch. Toxikol. 2__99, 325-330 (1972). Inst. Gerichtl. iVied. Univ. KSln C. Jung

The determination of nanogram amounts of indium, lead and drugs of forensic importance b~r enzymic in- hibition. R.A. Sheikh.

Best. yon Indium, Blei und Drogen; Enzymatische Analyse; Enzymhemmreaktionen.

Auf der Basis enzymatischer Hemmreaktionen wird die Bestimmung anorganischer Ionen und Drogen (Ly- sergsguredi~thylamid LSD, Tetrahydrocannabinol THC, Morphin, Barbiturate) beschrieben. Die Be- stimmung von Indium und Blei beruht auf der Hem- mung yon Nicotinamid-Adenin-Dinucleotid-Phosphat (NADP) in Verbindung mit Isocitrat-Dehydrogenase. Die gebildete NADPH wird spektrophotometrisch bet 340 nm gemessen. Auf diese Weise lassen sich 1 - i00 ng Indium und 1 - 70 ngBlei/ml Reaktionsge- misch nachweisen. Die Extraktionsmethode mit

N - B e n z y l a n i l i n in C h l o r o f o r m ffihrt z u r B e s t i m m u n g yon Ble i (45 ng) nach T ren n u n g yon Bi 3+, Ba 2+ und Ca 2+. Die e rw~hn ten Drogen kSnnen mi t Hilfe yon G l u co s eo x i d a s e , I s o c i t r a t d e h y d r o g e n a s e und Gluta- m a t d e h y d r o g e n a s e b e s t i m m t werden . Die H e m m u n g yon G l u t a m a t d e h y d r o g e n a s e t r i t t be t fo lgenden Kon- z e n t r a t i o n e n (g/m1-1) ein: L S D - T a r t r a t : 4x 10 -8, ,~ 9-THC: 4 x 10 -8, Mo rp h i n h y d ro ch l o r i d ; 1 x 10 -6, D i a m o r p h i n h y d r o c h l o r i d : 5 x 10 -6, P h e n o b a r b i t o n - N a - t r i um: 1 x 10 -4 .

P r o c . Soc. Anal. Chem. 10, 267-268 (1973). Chem. D ep t . , B i r m i n g h a m U n i v . , B i r m i n g h a m , B 15 2 TT. (Gro~bri tarmien) F. K n e r r

Determination of lead and copper in hair by non-fla- me atomic absorption spectrophotometr~r. G.D. Rens- haw, C.A. Pounds and E. F. Pearson.

Best. yon Blei und Kupfer in Haaren; Spektralphoto- metrie, Atomabsorption; f t a m m e n l o s .

Prinzip: Die dutch Atherextraktion entfetteten Haare werden auf dem Kohlestab des Spektrometers bet 300~ verascht und dann durch Erh5hung der Tempe- ratur auf 2 500~ atomisiert. - Der Kohlestab des A t o m i s e u r s hat 2 m m ~ , i s t z w i s c h e n zwei w a s s e r - gekfihlten E l e k t r o d e n aus r o s t f r e i e m Stahl e inge - k l e m m t und wi rd yon unten mi t A r g o n angeb l a sen . Bet d e r s an f t en E rh i t zung kann man e inze lne H a a r e r e g e l r e c h t auf de r Kohle " e i n s c h m e l z e n " . - Die Me~- e r g e b n i s s e fiber die Ve r t e i l ung yon Cu und Pb b e i m e inze lnen Haar , b e i m Haa rwuchs e ines Kopfes und bet e i n e r Popu la t ion yon 64 M e n s c h e n w e r d e n d isku- t i e r t .

J . F o r e n s i c Sci. 18__., 143-151 (1973). C e n t r a l Res . E s t a b l i s h m e n t , A t d e r m a s t o n , Reading, B e r k s h i r e (Gro~br i tannien) E. N i e m a n n

Determination of lead in biological materials by atomic absorption spectrophotometry. Y. Marumo, T. Oikawa and T. Niwaguchi.

Best. yon Blei in Biolog. Material; Spektralphotome- trie, Atomabsorption.

For the purpose of investigating lead distribution in rat tissues after administration of lead compounds, lead in biological materials is determined by atomic absorption spectrophotometry. As pretreatment of the determination ammonium pyrrolidine dithiocar- bamate (APDC)-methyl isobutyl ketone (MIBK) extraction is applied for concentrating lead in samples. The lead is extracted quantitatively at a pH range i. 0 - 5.0. There is no interference with coexisting ions except a large quantify of iron, which should be removed by cupferron-MIBK extraction prior to APDC-MIBK ex t r ac t ion . It i s c o n s i d e r e d that the m e - thod is app l icab le to the d e t e r m i n a t i o n of l ead in b io- log ica l m a t e r i a l s , s i n c e r e c o v e r y of l ead f r o m r a t t i s s u e s is 98.0 - 102.3%, the coe f f i c i en t of v a r i a t i o n is 1.1 - 5.6%, and the b ias i s not s ign i f i can t .

J apan A n a l y s t 2._22, 1024-1028 (1973) ( Japan i sch , mi t engl. Zus . f a s s . ). Nat. Res . Ins t . P o l i c e S c i . , Sanban- cho, Ch iyoda-ku , Tokyo (Japan)


I d e n t i f i c a t i o n of n o n c a n n a b i n o i d p h e n o l s in m a r i h u a n a s m o k e c o n d e n s a t e u s i n g c h e m i c a l i o n i s a t i o n m a s s s p e c t r o m e t r y . A . F . F e n t i m a n j r . , R . L . Fo l t z and G. W. K i n z e r .

Bes t . yon P h e n o l e n in M a r i h u a n a - R a u c h k o n d e n s a t ; C h r o m a t o g r a p h i e , G a s / M a s s e n s p e k t r o m e t r i e .

Das M a r i h u a n a - R a u c h k o n d e n s a t w i r d z u r B e s t i m m u n g und Identifizierung der nichtcannabinoiden Phenole mit Methylenchlorid/~thanol (,I : i) gelSst und Wasser und LSsungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der Rfickstand wird mit Methylenehlorid aufgenommen und filtriert. Das Filtrat wird zuerst mit ges~ttigter Natriumhydrogencarbonatl6sung und dann mit 0, I N NatriumhydroxidlSsung extrahiert. Die w~2rigen Extrakte werden anges~uert und mit Ather extrahiert, die Atherextrakte getrocknet, filtriert und der ~ther entfernt. Die Rfickst~nde werden mit N, O- Bis (trimethylsilyl) -trifluoracetamid behandelt und im Gas-Chromatographen (3 m S~ule mit 1% OV- 17 auf Gas Chrom Q) mit 6~ zwischen 75 und 300~ u n t e r s u c h t ( V a r i a n A e r o g r a p h 1740), d e s s e n Auslaf i d i r e k t m i t e i n e m Q u a d r u p o l - M a s s e n s p e k t r o - m e t e r ( F i n n i g a n 1015) m i t c h e m i s c h e r Ionenque l l e v e r b u n d e n i s t . Die A u s w e r t u n g e r f o l g t m i t e i n e r a n g e s c h l o s s e n e n S y s t e m s I n d u s t r i e s 250 D a t e n - v e r a r b e i t u n g , die auch das M a s s e n s p e k t r o m e t e r s t e u e r t . Mi t He l ium a u f g e n o m m e n e M a s s e n s p e k - t r e n g l e i c h e n denen , die m i t E l e k t r o n e n s t o 8 auf- g e n o m m e n wurden , und geben gute " f i n g e r p r i n t s " , w~hrend die E r m i t t l u n g des M o l e k u l a r p e a k s m i t M e t h a n o d e r I sobu t an e r fo lg t .

Ana l . C h e m . 4_55, 580-583 (1973). B a t t e l l e , C o l u m b u s L a b s . , C o l u m b u s , Ohio 43201 (USA)

J . R a s c h

S c r e e n i n g fo r h e r o i n - a c o m p a r i s o n of c u r r e n t m e - thods . D. Sohn, J . S imon, M . A . Hanna , G .V . Gha l i , "R. A. To lba , and V. Melkon ian .

Bes t . yon H e r o i n in H a m ; M e t h o d e n v e r g l e i c h ffir S ieb - t e s t s .

H e r o i n ( d i a c e t y l m o r p h i n e ) is e x c r e t e d as m o r p h i n e p r i m a r i l y in u r i n e . T w o - t h i r d s o r m o r e of u r i n a r y m o r p h i n e i s g l u c u r o n i d e con juga ted . Qu in ine i s a m a - j o r d i luen t of h e r o i n . A s tudy i s m a d e of 3009 s a m p - l e s p o s i t i v e fo r qu in ine a m o n g s o m e 50 ,000 u r i n e s a m p l e s e x a m i n e d d u r i n g the f i r s t ha l f of 1972. They w e r e a n a l y z e d by th in l a y e r c h r o m a t o g r a p h y (TLC), s p e c t r o p h o t o f l u o r o m e t r y (SPF) , and a u t o m a t e d m o r - ph ine a n a l y z e r (AM_A). Y ie lds of m o r p h i n e - p o s i t i v e s a m p l e s w e r e 19 .9 , 24 .3 , and 27.0%, r e s p e c t i v e l y , by TLC, AMA, and SPF . Add i t i ona l s t ud i e s i n c l u d i n g e f f i cacy of h y d r o l y s i s ; g a s - l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y (GLC); and H e m a g g l u t i n a t i o n Inh ib i t i on (HI) i m m u n o - a s s a y a r e p r e s e n t e d . R e s u l t s i n d i c a t e the need fo r h y d r o l y s i s in t e c h n i q u e s s e n s i t i v e only to u n c o n j u g a - ted m o r p h i n e ; t h a t new c o l u m n s , wi th s h o r t e r r e t e n - t ion t i m e s fo r m o r p h i n e , m a y p e r m i t GLC to be u s e d fo r i n i t i a l s c r e e n i n g ; and t h a t HI which i s a l so s e n s i - t i ve to con juga t ed m o r p h i n e m a y r e p r e s e n t a s u p e r i o r m e t h o d of s c r e e n i n g . L i m i t s of s e n s i t i v i t y w e r e on the o r d e r of 0 . 5 , 0 . 2 , 0 . 1 , 0 . 1 , and 0. 031~g/ml , r e s p e c t i v e l y , f o r T L C , S P F , AMA, GLC, and HI.

Anal . C h e m . 45, 1498-1502 (1973). Dept. P a t h o l . , New Y o r k Med. Co l l ege C e n t e r f o r C h r o n i c D i s e a s e , W e l f a r e Island~ New York , N.Y. 10017 (USA)

Selective complexation of impurities in the electron capture gas chromatograph), determination of some chlorinated pol~c[clodiene pesticide metabolites and derivatives. J. McKinney, L. Fishbein and L. Barling.

Best. von Pesticiden in Biolog. Material; Chroma- tographie, Gas; Komplexierung yon StSrsubstanzen.

Hydroxylierte und ~hnliche Metaboliten werden dureh die Trimethylsilyl (TMS)-Gruppe substituiert. Bei der GC mit dem ECD werden st6rende Verunreini- gungen mit Eu(NO3)3 entfernt, so dab Konzentratio- nen von ~ 1 ppm an Metabolifen bestimmbar sind. - Arbeitsweise. 1 ml Urin wird mit 0, 1 ml HCI konz. versBtz-t~'geschfittelt, 3 mal mit 2 ml wasserfreiem Ather extrahiert, die vereinigten Extrakte unter N 2 eingeengt und mit 0, 2 ml Tri-Sil Z versetzt (ferti- ges Reagens, Pierce Chem. Comp.). Nach Erhitzen auf 80~ I0 rain, wird mit Benzol auf 1 ml verdfinnt, 50 m g Eu(NO3) 3 z u g e s e t z t , 5 m i n geschf i t t e l t , zen - t r i f u g i e r t und d i r e k t e i n g e s p r i t z t . GC V a r i a n A e r o - g r a p h M o d e l 1 1 8 6 8 - 4 0 m i t T r i t i u m - E C D , S~ule 5% Q F - 1 auf 100 /120 V a r a p o r t 30, Einlal~ 190, S~ule 182, D e t e k t o r 200~ 36 ml N 2 / m i n . 0, 1 ppm Me- t a b o l i t e n s ind noch n a c h w e i s b a r , je 3 M e t a b o l i t e n von A l d r i n und D i e l d r i n s ind m i t S t r u k t u r a n g e g e b e n , R e c o v e r y ~ 95%.

Bull . E n v i r o n m . Conta in . Toxico l . 7 , 2 - 8 (1972). Nat . Ins t . E n v i r o n m . Hea l th S c i . , Res . T r i a n g l e P a r k , N . C . (USA) W. Dedek

Determination of chlorinated pesticides in whole blood. P.E. Stretz and H. M. Stahr.

Best. yon Pesticiden in Blut; Chromatographie, Diinns chicht; Ringversuch.

8 Blutproben (6 yon Schafen, 2 yon Menschen), denen 2, 5, 12,6, 126 bzw. 630 ppb Lindan, Dieldrin und p, p'-DDT zugegeben wurden, sowie eine Blindprobe wurden in ii Laboratorien nach der Methode yon S. J. Henderson, J. G. DeBoer and H. M. Stahr (Anal. Chem. 0 4_/3, 445 (1971)), also durch Behandlung der Blutprobe mit 60"/, H2SO 4, darauffolgende Extraktion mit Hexan/Aceton (9 : i) und Analyse durch DCh untersucht. Wiederfindungsrate i00 -+ 20%. Bei 2, 5 ppb verursachte die Empfindlichkeit, bei 630 ppb die Ver- dfinnung Probleme. Aufgrund der statistischen Aus- wertung der Ergebnisse war in allen Laboratorien ein groGer systematischer Fehler vorhanden, und die Methode ist als offizielles Verfahren noch nicht verwendbar.

J. Assoc. Offic. Anal. Chemists, 56, 1173-1177 (1973). Veterinary Diagnostic Lab., Iowa State Univ., Ames, Iowa (USA) K. Jeney

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IV. Spezielle Anwendungsgebiete