Klinik und Poliklinik für Urologie Medizinische Fakultät der TU Dresden Susanne Schneider...
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Klinik und Poliklinik für Urologie Medizinische Fakultät der TU Dresden Susanne Schneider Biomolekulare Detektion des Prostatakarzinoms an minimalen Prostata-Gewebeproben
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Biomolekulare Detektion des
Prostatakarzinoms an minimalen Prostata-Gewebeproben (Biopsien) S.
Schneider, J. Seifert, S. Voigt, A. Lohse-Fischer, R. Fhrer, S.
Tomasetti, S. Fssel, M. Haase 2, R. Koch 3, G.B. Baretton 4, M.-O.
Grimm 1, M. P. Wirth 1 Klinik fr Urologie, Universittsklinikum der
TU Dresden 2 OncoRay, Zentrum fr Medizinische Strahlenforschung in
der Onkologie, Dresden 3 Institut fr Medizinische Informatik und
Biometrie, TU Dresden 4 Institut fr Pathologie, TU Dresden
Folie 2
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Transkriptquantifizierung ausgewhlter
Markergene 1. Etablierung von qPCR-Assays 2. Analysen an gepaarten
RPE-Gewebeproben (Tu&Tf) - Auswertung als Einzelmarker -
Markerkombination (3-, 4- & 5-Gen-Modell) - Follow-up
(prognostische Aussagen mglich?) 3. bertragung auf minimale
Prostatagewebeproben (RPE-Biopsien und diagnostische Biopsien)
Folie 3
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider RPE-Biopsien: 47 Patienten (215
RPE-Biopsien) - medianes Alter: 64 Jahre (47 76 J.) - medianer
pr-OP-PSA-Wert: 6,93 ng/ml (1,5 96,09 ng/ml) - histopath.
Begutahtung (RPE-Explantat): OCD: 34 Patienten; NOCD: 13 Patienten;
42 pN0, 5 pN1 - gengend RNA aus einer Hlfte der Biopsie: 11
Markergene und TBP (Ref.-Gen) Auswertung: a) Einzelmarker b)
Marker-Kombinationen
Folie 4
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider RPE-Biopsien: Relatives Expressionslevel
(zmol / zmol TBP) Marker- gene malignant (Tu) n = 76 median
tumorfrei (Tf) n = 140 medianP-values(unpairedt-test) mediane ber-
expression (Tu vs. Tf) (Tu vs. Tf) PCA3AMACRPSGR 54.8 (0 to 181.6)
54.8 (0 to 181.6) 775.6 (45.2 to 4800.2) 775.6 (45.2 to 4800.2)
34.4 (0.4 to 228.8) 34.4 (0.4 to 228.8) 0.3 (0 to 81.9) 0.3 (0 to
81.9) 26.1 (9.0 to 640.2) 26.1 (9.0 to 640.2) 1.3 (0 to 313.4) 1.3
(0 to 313.4) < 0.001 172 30 30 27 27
HepsinPSMATRPM8PDEFEZH2PSAAndr.R 0.5 (0 to 2.6) 0.5 (0 to 2.6) 14.8
(0 to 221.5) 14.8 (0 to 221.5) 34.1 (0 to 218.0) 34.1 (0 to 218.0)
23.7 (5.1 to 125.6) 23.7 (5.1 to 125.6) 0.5 (0 to 1.8) 0.5 (0 to
1.8) 394.8 (88.1 to 1994.6) 394.8 (88.1 to 1994.6) 6.1 (1.8 to
31.8) 6.1 (1.8 to 31.8) < 0.1 (0 to 1.0) 1.6 (0 to 72.6) 1.6 (0
to 72.6) 6.8 (0 to 145.9) 6.8 (0 to 145.9) 9.0 (0.3 to 89.4) 9.0
(0.3 to 89.4) 0.2 (0 to 6.8) 0.2 (0 to 6.8) 200.7 (0.7 to 10308.1)
4.7 (1.1 to 18.7) 4.7 (1.1 to 18.7) < 0.001 0.542 0.542 <
0.001 10 10 9 5 2 2 2 1 Prostein 5.2 (0.6 to 56.8) 5.2 (0.6 to
56.8) 5.1 (0 to 45.3) 5.1 (0 to 45.3) 0.378 0.378 1
Folie 5
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Cut-Off 0,65 4-Genmodell 5-Genmodell
Sensitivitt:83% 79% Spezifitt:89% 91% PPV:81% 82% NPV:91% 89% p
< 0,001
Folie 6
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider 3-Genmodell: - neues Modell Hepsin, PCA3
und PSA Cut-off = 1,00: Sensitivitt: 89 % Spezifitt:81 % PPV:71 %
NPV:93 % p = 0,151
Folie 7
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider GSTP1-Methylierungsstatus: - 59 Tu- und
108 Tf-RPE-Biopsien - DNA-Isolation und spezifische Umschreibung -
Messung von GSTP1 und -Actin als Referenzgen (qPCR) - Auswertung:
Cut off = 0,20 GSTP1-Methylierung Sensitivitt: 88 % Spezifitt:98 %
PPV:96 % NPV:94 % p < 0,001
Folie 8
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Studienpatienten: 64 Patienten mit
PCa-Verdacht + 4 Studienbiopsien - 22 Patienten (34%) mit
histologisch gesichertem PCa Therapie:RPE: 15 Patienten OCD: 10 (
pT2c) NOCD: 5 (pT3a pT4) Chemoth.: 1 Patient; Brachyth.: 2
Patienten; 4 unbekannt Prostatabiopsien: 237 Feinnadelbiopsien 151
BPH-PB 75 Tf-PB aus PCa-Patienten 11 Tu-PB
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Markerkombinationen: (4- und 5-Genmodell)
Cut-off 0,25 Markerkombinationen: (cut-off 0,25) 4-Gene 5-Gene
Sensitivitt: 61% 58% Spezifitt: 75% 88% PPV: 58% 74% NPV: 77%
79%
Folie 11
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Markerkombinationen: (3-Genmodell)
Markerkombination: mit Cut-off = 0,3 3-Gene Sensitivitt:58 %
Spezifitt:72 % PPV:54 % NPV:75 % cut-off = 0,3 p = 0,032
Folie 12
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Zusammenfassung: - Hlfte einer Biopsie
zur Transkriptquantifizierung von 11 Genen weiteres Material fr
z.B. Methylierungsuntersuchungen - Markerkombinationen liefern
hhere Wahrscheinlichkeiten zur PCa-Vorhersage - 4 Markergene + 1
Referenzgen fr zustzliche biomolekulare PCa-Diagnostik Ausblick: -
biomolekulare PCa-Detektion auf Urinproben bertragen - Korrelation
der Expressionsdaten mit Follow-up
Folie 13
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider MuMa (gepaarte Gewebeproben) -
Follow-up-Daten: (168 MuMa-Patienten 2 unbekannt verzogen) - 2
Hauptgruppen: a) ohne Rezidiv b) mit Rezidiv Rezidiv: PSA > 0,2
ng / ml; PSA-Verdopplg. < 10 Monate - Zeit bis Rezidiv
(PSA-Anstieg mit nachfolgender Therapie)
Folie 14
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider MuMa-Gewebeproben (Follow-up) a)ohne
Rezidiv (95 Patienten; 4 verstorben nicht an PCa!) - medianes
Alter: 65 Jahre (48 78 J.) - medianes Follow-up: 56 Monate (19 116
M.) - medianes pr-OP-PSA: 8,85 ng/ml (0,24 57,24 ng/ml) - medianes
post-OP-PSA: 0,04 ng/ml (0 2,81 ng/ml) - 68 OCD (72%) und 27 NOCD
(28%)
Folie 15
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider MuMa-Gewebeproben (Follow-up) b) Rezidiv
(73 Patienten; 8 (11%) verstorben 5 an PCa!) - medianes Alter: 64
Jahre (49 75 J.) - medianes Follow-up: 57 Monate (7 124 M.) -
medianes pr-OP-PSA: 9,70 ng/ml (0,92 113 ng/ml) - medianes
post-OP-PSA: 0,08 ng/ml (0 2,91 ng/ml) - 23 OCD (32%) und 50 NOCD
(68%) - mediane Zeit bis Rezidiv: 5 Monate (0 96 M.)
Folie 16
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Follow-up in Korrelation mit
Expressionsdaten I Tf - Kontroll- gewebeTf-MuMa Nicht-
RezidivRezidiv p-Werte (2-teil. t-Test) Tu- Quotient (Rez./ N.Rez.)
AMACR16,2082,521372,52967,740,600,71 AR2,927,858,869,170,541,03
BCL22,101,150,810,870,451,08 BCLXl16,9312,4214,9114,460,660,97
D-GPCR-1,222,873,590,751,25 EZH20,170,390,800,880,351,10
Hepsin0,000,070,590,510,990,88 Ki670,770,320,580,800,011,39
PCA30,000,5143,5023,700,110,54
Folie 17
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Follow-up in Korrelation mit
Expressionsdaten II Tf - Kontroll- gewebeTf-MuMa Nicht-
RezidivRezidiv p-Werte (2-teil. t-Test) Tu- Quotient (Rez./ N.Rez.)
PCGEM10,110,690,810,400,230,50 PDEF2,5712,4424,7021,570,020,87
Prostein1,6411,0015,4712,400,000,80
PSA36,83194,35342,97262,280,030,76 PSGR0,115,9642,2643,720,521,03
PSMA0,284,1224,6829,490,151,19 Survivin0,610,150,180,270,031,51
TRPM86,927,5935,8828,570,150,80
XIAP13,1914,7020,9317,470,080,83
Folie 18
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Biopsie-Entnahme: Routine: i. R. 12 bis
24 Biopsien bei PCa-Verdacht 1.) Biopsien aus Poliklinik (Haus 28;
Endo-Saal) Re- /Biopsien; Anruf, wenn Patient zugestimmt hat
zustndig: Dr. Heberling, Hr. Rentschler, Dr. Rippel 2.) Biopsien
aus Haus 8 (TUR- oder Saal 4 [Rntgen]) meist Re- und
Sttigungsbiopsien, auch in Narkose Anruf, wenn Patient zugestimmt
hat und bereit ist zustndig: meist Fr. Voigt
Folie 19
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider - unter Trans-Rektalem-UltraSchall (TRUS)
12er Biopsie-Schema: (12 Kassetten) 1.) rechts apikal zentral 2.)
rechts apikal peripher 3.) rechts Mitte zentral 4.) rechts Mitte
peripher 5.) rechts basal Mitte 6.) rechts basal peripher 7.) links
apikal zentral 8.) links apikal peripher 9.) links Mitte zentral
10.) links Mitte peripher 11.) links basal zentral 12.) links basal
peripher
Folie 20
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider - unter Trans-Rektalem-UltraSchall (TRUS)
12er Biopsie-Schema: (12 Kassetten) 1.) rechts apikal zentral 2.)
rechts apikal peripherStudienbiopsie 3.) rechts Mitte zentral 4.)
rechts Mitte peripher 5.) rechts basal Mitte 6.) rechts basal
peripherStudienbiopsie 7.) links apikal zentral 8.) links apikal
peripherStudienbiopsie 9.) links Mitte zentral 10.) links Mitte
peripher 11.) links basal zentral 12.) links basal
peripherStudienbiopsie
Folie 21
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Prostatabiopsie von Nadel auf
Filterpapier ziehen, ggf. Lage korrigieren (planar, gerade) in fl.
Stickstoff tauchen, dann ins Rhrchen legen (wiederum in fl.
Stickstoff) - Stickstoffbehlter + 4 zustzliche Biopsien und
Routinebiopsien mit (unterschriebenen) Patho-Anforderungsschein
mitnehmen - Lagerung bei -80 C bis Kryoschneiden - ein
Patho-Eingang: Routine-Biopsien + Mappe mit 4 OT (je 6
Schnitte)
Folie 22
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Statistik: (diagnostische
Prostatabiopsien) Stand 21.Mai 2008 - Beginn der Studie: Juni 2006
- aktuelle Anzahl: 71 Patienten Jahr 2006: 19 Patienten 18 Pat.
ohne Elastographie 1 Pat. mit Elastographie gekoppelt Jahr 2007: 46
Patienten 18 Pat. ohne Elastopraphie 28 Pat. mit Elastographie
gekoppelt Jahr 2008: 6 Patienten 6 Pat. mit Elastographie
gekoppelt
Folie 23
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider Statistik: (Urinproben) Stand 21.Mai 2008
- Beginn der Studie: 28.April 2008 - aktuelle Anzahl: 26 Patienten
1.Woche: 5 Patienten vor RPE 2.Woche: 8 Patienten vor RPE 3.Woche:3
Patienten vor RPE 4.Woche:8 Patienten vor RPE
Folie 24
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider nur PCA3: RPE-Biopsien: Sensitivitt: 87%
Spezifitt: 88% PPV: 79% NPV: 93%
Folie 25
Klinik und Poliklinik fr Urologie Medizinische Fakultt der TU
Dresden Susanne Schneider nur PCA3: diagnost. Biopsien:
Sensitivitt: 61% Spezifitt: 73% PPV: 57% NPV: 76%