i

PROPOSAL

PENELITIAN LABORATORIUM

DANA ITS TAHUN 2020

PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA SQUALENE PADA DAUN

NYAMPLUNG (CALOPHYLLUM INOPHYLLUM L.)

Tim Peneliti:

1. Hakun Wirawasista, ST, M.MT, PhD (0022097808 / Teknik Kimia / FTI)

2. Setiyo Gunawan, ST. Ph.D (0023037604 / Teknik Kimia / FTI)

DIREKTORAT PENELITIAN DAN PENGABDIAN KEPADA MASYARAKAT

INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER

SURABAYA

2020

ii

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL

DAFTAR ISI .............................................................................................................ii

DAFTAR TABEL ....................................................................................................iv

DAFTAR GAMBAR .................................................................................................v

BAB I RINGKASAN.................................................................................................1

BAB II LATAR BELAKANG ...................................................................................2

II.1Latar Belakang ...................................................................................................2

II.2 Perumusan dan Batasan Masalah.......................................................................4

II.3 Tujuan Penelitian ...............................................................................................5

II.4 Urgensi ...............................................................................................................5

BAB III TINJAUAN PUSTAKA ...............................................................................7

III.1. Teori Penunjang.........................................................................................7

III.1.1. Kondisi Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia ...... 7

III.1.2. Persebaran Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia.................7

III.1.3. Karakteristik Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) .................9

III.1.4. Manfaat dan Kandungan dalam Tanaman Nyamplung (Calophyllum

inophyllum) .............................................................................................................10

III.1.5. Metode Ekstrak Daun Nyamplung ...........................................................18

III.1.6. Batchwise Solvent Extraction (BSE) .........................................................19

III.1.7. Metode Microwave-assisted Extraction (MAE) ..........................................20

III.1.8. Gelombang Mikro (Microwave) ................................................................22

III.1.9. Identifikasi dan Analisa Senyawa Bioaktif ...............................................23

III.1.10. Metode Kromatografi ...........................................................................24

BAB IV METODE ..................................................................................................34

IV.1. Garis besar Penelitian ..............................................................................34

IV.2. Bahan dan Peralatan ................................................................................34

IV.3. Variabel Penelitian ...................................................................................35

IV.4. Prosedur Penelitian ..................................................................................38

IV.5. Analisa .....................................................................................................43

BAB V JADWAL ....................................................................................................48

V.1. Jadwal Penelitihan .......................................................................................48

V.2. Anggaran Biaya ...........................................................................................48

iii

DAFTAR PUSTAKA ..............................................................................................51

LAMPIRAN 1 Biodata Tim Peneliti........................................................................55

iv

DAFTAR TABEL

Tabel III. 1 Manfaat dan Kegunaan Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) .. 11

Tabel III. 2. Klasifikasi Senyawa Fenol Berdasarkan Jumlah Atom Karbon ................. 12

Tabel III. 3. Polaritas Solvent ................................................................................... 18

Tabel III. 4. Kondisi Operasi untuk Berbagai Macam Proses Ekstraksi ........................ 20

Tabel III. 5. Energi dengan Jenis Radiasi Berbeda...................................................... 23

Tabel III. 6. Jenis Adsorbent..................................................................................... 24

Tabel IV. 1 Variabel Penelitian Bacthwise solvent extraction ....................................... 36

Tabel IV.2. Variabel Penelitian Metode Microwave Assisted Extraction pada Proses

Ekstraksi................................................................................................................... 37

Tabel IV.3. Variabel Penelitian Microwave Assisted Extraction pada Proses Pemurnian. 38

v

DAFTAR GAMBAR

Gambar III. 1. Persebaran Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum ) di

Indonesia.................................................................................................................... 8

Gambar III. 2. Bagian-bagian Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) ......... 10

Gambar III. 3.Gugus Fenol ...................................................................................... 13

Gambar III. 4. Struktur Senyawa (a) flavan, (b) flavanon, (c) flavon, (d) flavonol

(quarcetin), (e) dihidroflavonol, (f) flavan‐3‐ol, (g) flavan‐4‐ol, dan (h) flavan‐3,4‐diol . 13

Gambar III. 5. Bentuk Senyawa Xanthone ................................................................ 14

Gambar III. 6. Kemungkinan Posisi Oksigenasi Senyawa Xanthone ........................... 14

Gambar III. 7. Bentuk Seyawa Kumarin ................................................................... 15

Gambar III. 8. Betuk Senyawa Benzodipiranon......................................................... 15

Gambar III. 9. Gugus Isopren .................................................................................. 15

Gambar III. 10. Bentuk Senyawa Triterpenoid dan gugus fungsi friedelin (R= CH3),

canophyllalic acid (R= COOH) , dan canophyllol (R=CH2OH) .................................... 16

Gambar III. 11. Bentuk Senyawa (a) squalene (b) canophyllic acid ............................ 16

Gambar III. 12. Bentuk Senyawa (a) Steroid (b) Sitosterol (c) Kolesterol.................... 17

Gambar III. 13.a) Perbandingan Temperatur Microwave dengan Pemanasan

Konvensional. b) Kondisi thermal Pemanasan pada Microwave dan Pemanasan

Konvensional ........................................................................................................... 21

Gambar III. 14. Penggambaran Skema TLC.............................................................. 25

Gambar III. 15. Penentuan Retardation factor (Rf) .................................................... 25

Gambar IV. 1. Tahapan proses Penelitihan ................................................................ 34

Gambar IV. 2.Alat untuk Microwave Assisted Extraction (MAE) ................................. 35

Gambar IV.3. Skema Esktraksi Crude Non-Polar ...................................................... 39

Gambar IV.4. Sistem cross-current pada ekstraksi batchwise multistage ..................... 40

Gambar IV.5. Skema Proses Batchwise Solvent Extraction ........................................ 41

Gambar IV.6. Skema Proses Microwave Assisted Extraction ..................................... 42

Gambar IV.7. Skema Proses Kombinasi.................................................................... 43

Gambar IV.8. Skema Analisa Total Kandungan Fenolik Metode Folin-Ciocalteu ........ 44

Gambar IV.9 Skema Analisa Total Kandungan Flavonoid.......................................... 45

1

BAB I

RINGKASAN

Di era globasisasi ini penyakit kanker merupakan penyakit yang tidak

menular tetapi menjadi penghalang untuk meningkatkan harapan hidup di

dunia. Kanker yang terjadi pada organ pernapasan atau paru-paru menjadi

kanker pembunuh nomor satu di dunia dan Indonesia. Oleh karena itu para

penderita kanker di dunia, perlu penanganan khusus dan diberikan obat agar

memiliki angka harapan hidup yang tinggi. Kemoterapi pengobatan kanker

yang terkenal dengan membunuh atau menghentikan perkembangan sel yang

aktif. Hal ini berdampak yang terbunuh tidak hanya sel kanker, melainkan sel-

sel yang baik bagi tubuh juga, selain itu biaya untuk pengobatan kemoterapi

cukup tinggi. Hal ini menyebabkan beberapa peneliti mencari solusi lain. Salah

satunya dengan pengembangan dan isolasi senyawa boaktif yang terdapat dalam

tanaman. Tanaman nyamplung dikenal sebagai tanaman yang memiliki banyak

manfaat, salah satunya sebagai obat sebab memiliki banyak kandungan bioaktif.

Squalene merupakan senyawa bioaktif yang terdapat pada tanaman nyamplung

yang dapat menghambat pertumbuhan sel kanker. Diharapkan pada penelitihan

ini nantinya mampu menjadikan senyawa squalene sebagai obat herbal yang

dapat digunakan sebagai penghambat dan terapi penyembuhan. Penelitihan ini

memiliki target untuk mengisolasi dan memurnikan senyawa squalene hingga

>99% dengan metode pemurnian Microwave-assisted Extraction (MAE),

batchwise solven extraction (BSE) dan kombinasi MAE-BSE yang nantinya

akan dianalisa dengan TLC, GC serta GC-MS. Untuk mengetahui kandungan

senyawa bioaktif uji TPC, TFC, Antioxidant Activity diperlukan. Sedangkan

untuk tahapan selanjutnya diharapkan mampu mengimplementasikan bahwa

senyawa squalene dapat digunakan sebagai pengobatan kanker yang lebih aman

dengan melakukan analisa toksisitas.

Kata Kunci : Bioaktif, Pemurnian, Separasi, Squalene

2

BAB II

LATAR BELAKANG

II.1 Latar Belakang

Pada abad 21 ini kanker yang merupakan penyakit tidak menular menjadi

penghalang untuk meningkatkan harapan hidup di dunia. Menurut WHO kanker

menjadi penyebab utama kematian pertama atau kedua pada usia sebelum 70 tahun

di 91 negara, sedangkan menjadi peringkat ketiga di 22 negara dari 172 negara yang

telah disurvei. Berdasarkan data Globocan di Indonesia sendiri pada tahun 2018

jumlah penderita kanker menjadi bertambah 348.809 orang. Setiap tahunnya angka

tersebut terus bertambah. Salah satu pengobatan kanker yang paling terkenal adalah

kemoterapi. Kemoterapi merupakan pengobatan dengan membunuh atau

menghentikan perkembangan sel yang aktif. Sehingga hal ini memiliki dampak

tidak hanya bagi sel kanker, melainkan sel-sel yang baik bagi tubuh juga dibunuh,

selain itu biaya untuk pengobatan kemoterapi ini cukup tinggi. Hal ini

menyebabkan beberapa peneliti mencari solusi lain. Salah satunya adalah

pengobatan herbal.

Beberapa orang beralih ke obat herbal alami yang relatif lebih murah serta

telah dipercaya sejak jaman dahulu. Selain itu lebih mudah di dapat, pembuatannya

sederhana, serta tidak memiliki efek samping yang membahayakan karena

memakai bahan-bahan yang berasal dari alam. Pengembangan dan pencarian

sumber senyawa bioaktif (bioactive compounds) dilakukan seiring dengan makin

banyaknya penyakit-penyakit baru yang bermunculan, mulai dari penyakit infeksi,

kanker, dan beberapa penyakit berbahaya lainnya. Salah satu komponen bioaktif

yang kita ketahui adalah squalene.

Squalene adalah triterpene dengan rumus C30H50 yang disintesis pada

tumbuhan, hewan, bakteri, dan jamur sebagai prekursor untuk sintesis metabolit

sekunder seperti sterol, hormon, atau vitamin (Ghimire dkk, 2016). Konsentrasi

squalene terbesar di dunia yang hidup ismet di hati spesies ikan tertentu, terutama

3

hiu yang hidup di laut pada kedalam di bawah 400m. Squalene dianggap penting

dalam ekstrak berminyak untuk kelangsungan hidup hewan laut, di mana pasokan

oksigen miskin dan tekanan sangat tinggi (Andries dkk ̧ 2014). Squalane sebagai

langkah perantara dalam biosintesis kolesterol. Squalane memiliki banyak fungsi

diantanya sebagai antioksidannya yang terkenal (Gunes, 2013); memiliki efek

penghambatan pada kanker dan aktivitas anti tumor yang tinggi (Alvaro dan

Eduardo, 2018); anti penuaan pada kosmetik sebagai pelembab alami dan dalam

biosintesis kolesterol (Grande dkk, 2018). Penggunaan minyak hewan laut sebagai

sumber squalene telah dibatasi oleh peraturan perlindungan hewan dan keberadaan

polutan organik (POPs) sebagai pestisida organoklorin, hidrokarbon aromatik

polisiklik, dioksin, atau logam berat yang menyebabkan kanker (Grande dkk,

2018). Ekstraksi Squalane dari sumber tanaman memiliki daya minat yang tinggi.

Salah satu tanaman yang memiliki kandungan squalene adalah Nyamplung.

Tanaman nyamplung (Calophyllum inophyllum L.) adalah salah satu jenis

tanaman hutan bakau yang memiliki banyak manfaat. Selain akar tanaman tersebut

dapat mencegah abrasi, bagian tanaman yang lain juga tidak kalah penting. Hampir

setiap bagian dari tanaman ini dapat diolah menjadi produk bernilai tinggi. Namun,

masih sedikit masyarakat Indonesia yang mengetahui keunggulan tanaman tersebut.

Di India, seluruh bagian tanaman nyamplung digunakan sebagai obat untuk

menyembuhkan reumatik dan berbagai penyakit kulit. Batang nyamplung

digunakan untuk mengobati pendarahan internal dan sebagai bahan astringen untuk

produk perawatan kulit. Daun nyamplung dapat bermanfaat untuk mengobati iritasi

mata, vertigo, migrain, dan heat stroke (Ling dkk., 2009; Chavan dkk., 2013).

Menurut Giesen dkk. (2006), tanaman mangrove dapat ditemukan di daerah pesisir

Indonesia, dimana 60% total mangrove yang tumbuh di Asia Tenggara tumbuh di

wilayah Indonesia dengan sisanya tersebar di Malaysia (11,7%), Myanmar (8,8%),

Papua Nugini (8,7%), dan Thailand (5,0%)Salah satu jenis tanaman mangrove di

indonesia yang memiliki nilai ekonomis tinggi adalah tanaman nyamplung

(Calophyllum inophyllum). Indonesia merupakan negara dengan populasi hutan

bakau terbesar di dunia dengan tingkat keanekaragaman hayati yang sangat

bervariasi di dunia dengan area seluas 3,1 juta hektar atau 22% dari total populasi

4

hutan bakau dunia. Sisanya berada di Australia (7,1%), Brazil (7%), Meksiko

(5,4%), Nigeria (4,7%) dan di beberapa negara lainnya.

Sebagai tanaman obat, Prasad dkk. (2012), menemukan bahwa daun

nyamplung memiliki senyawa bioaktif yang bersifat antidislipidemik dan

antioksidan. Sedangkan, Novianti dkk. 2015, menyebutkan bahwa pada kulit batang

dan daun nyamplung mengandung komponen bioaktiaf yang bersifat analgesik,

antibakteri, antitoksik, dan antitumor. Selain itu, nyamplung berkhasiat dalam

menyembuhkan luka, meredakan iritasi mata, dan mencegah penyakit jantung

(Aparatmarta dkk, 2016).

Isolasi komponen senyawa bioaktif yang yang telah dilakukan Yohed dan

Maulinda (2017), terhadap daun nyamplung berdasarkan total kandungan fenol

(Total Phenolic Content, TPC), total kandungan flavonoid (Total Flavonoid

Content, TFC), dan aktivitas antioksidan melalui analisa DPPH (1,1-Diphenyl-2-

picrylhydrazyl). Oleh karena banyak manfaatnya dalam menyembuhkan penyakit,

dan dalam dunia kesehatan, maka penelitian mengenai tanaman nyamplung mulai

berkembang. Selain itu pada penelitian yang dilakukan sebelumnya oleh Ardhyni

dan Sholehah (2019), menggunakan ekstrak daun nyamplung dengan menggunakan

pelarut n-hexane didapati kandungan squalane sebesar 40,1%. Dari penelitihan

tersebut menunjukan bahwa nyamplung memiliki potensi untuk menjadi sumber

squalene. Tetapi untuk konsentrasi squalene dalam daun nyamplung masih

diperlukan proses pemisahan dan pemurnian yang sebelumnya belum dilakukan

pada daun nyamplung. Sehingga untuk penelitihan kali ini untuk proses pemurnian

dan pemisahan menggunakan metode Batchwise Solvent Extraction (BSE), dan

Microwave Assisted Extraction (MAE). Serta nantinya akan dilakukan pengujian

lebih lanjut mengenai pengaruh senyawa squalene terhadap pertumbuhan sel

kanker.

II.2 Perumusan dan Batasan Masalah

Dari latar belakang yang telah dijelaskan, rumusan masalah dalam penelitian

ini adalah sebagai berikut:

5

1. Bagaimana cara mengisolasi dan memurnikan senyawa Squalane pada daun

nyamplung?

2. Bagaimana metode dan kondisi terbaik dalam mengisolasi senyawa Squalane

pada Tanaman Nyamplung serta perbandingan dari metode Batchwise

Solvent Extraction (BSE), dan Microwave Assisted Extraction) ?

3. Berapa yield dan kemurnian senyawa squalane yang berhasil dipisahkan pada

penggunaan metode Batchwise Solvent Extraction (BSE), dan Microwave

Assisted Extraction (MAE) ?

Dalam penelitian ini diberikan batasan masalah dengan ruang lingkup

sebagai berikut:

1. Bahan yang digunakan adalah daun nyamplung yang diperoleh dari Ekowisata

Mangrove Wonorejo, Surabaya Jawa Timur

2. Senyawa yang akan dipisahkan adalah Squalane.

II.3 Tujuan Penelitian

Adapun tujuan penelitian ini meliputi:

1. Mendapatkan metode pemurnian terbaik untuk senyawa squalene hingga

>99%

2. Menganalisa kandungan senyawa bioaktif dari tanaman nyamplung untuk

bisa dijadikan alternatif lain yang masih memiliki nilai pengembangan

kedepannya.

II.4 Urgensi

Data internasional dari Globocan 2018 yang baru saja dirilis menyatakan

kanker paru adalah kanker yang paling banyak ditemukan pada pria dan wanita di

seluruh dunia dibanding jenis kanker lainnya. Total, kanker paru berjumlah 11,6

persen dari semua kasus kanker di dunia. Disusul kanker payudara, usus besar,

prostat, dan perut. Oleh karena itu para penderita kanker di dunia, perlu dilakukan

penanganan khusus dan diberikan obat agar memiliki angka harapan hidup yang

tinggi. Jenis pengobatan yang menjadi alternatif saat ini adalah obat herbal. Tetapi

menurut WHO, Negara Asia dan Afrika 80% populasi tergantung dari obat

6

tradisional untuk kebutuhan kesehatan secara umum. Sehingga pelu adanya

alternatif lain untuk mencari sumber dari obat tradisional. Di Jepang banyak sekali

warga yang tinggal di pesisir laut untuk meminum hati minyak ikan hiu sebagai

obat tradisional. Sebab memiliki berbagai manfaat sebagai obat diabetes, pencegah

kanker serta dapat digunakan untuk memperhalus kulit. Dengan mengisolasi

senyawa squalene dari daun nyamplung ini diharapkan dapat digunakan untuk

mengobati penyakit. Sejalan dengan hal tersebut, Laboratorium Teknologi

Biokimia ITS mencantumkan penelitian dalam bidang Natural Products (Bahan-

Bahan Aktif) di dalamnya. Oleh sebab itu, judul ini memiliki relevansi atau

memiliki manfaat terhadap masyarakat dan juga didukung tersedianya bahan baku

yang melimpah di Indonesia, khususnya Jawa yaitu daun nyamplung yang sering

tidak dimanfaatkan. Dengan penelitian ini, dapat mengubah bahan baku yang tidak

bernilai menjadi bahan yang dapat dimanfaatkan dalam bidang kesehatan.

7

BAB III

TINJAUAN PUSTAKA

III.1. Teori Penunjang

III.1.1.Kondisi Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia

Di Indonesia, tanaman nyamplung (Calophyllum inophyllum) tersebar di

berbagai daerah di tepian pantai, atau dataran rendah yang menjorok ke pantai.

Nyamplung merupakan salah satu jenis tanaman kehutanan yang mulai

dikembangkan penanamannya di Indonesia pada tahun 1950, sebagai pelindung

pantai dari abrasi, penahan angin dari laut ke darat, penahan gelombang pasang,

penahan tebing sungai dan pantai dari longsor, dan penjaga kualitas air payau.

Namun, tanaman dapat beradaptasi dengan baik pada ketinggian 100 - 350 mdpl.

Saat ini habitatnya tersebar dari hutan di pantai, tepi sungai, rawa-rawa hingga

hutan di pegunungan tanaman nyamplung banyak. Di daerah Jawa, tanaman ini

tumbuh liar, bercabang rendah dekat permukaan tanah, dan tumbuh berkelompok

(Balitbang Pertanian, 2015).

Namun FAO (2007) mengatakan bahwa, jumlah tanaman nyamplung turut

mengalami penurunan setiap tahunnya seiring dengan kondisi hutan bakau di

Indonesia yang semakin memprihatinkan, dimana 40% hutan bakau per tahun

mengalami kerusakan. Penyebab utama hilangnya hutan bakau di Indonesia

termasuk akibat konversi tambak udang yang dikenal sebagai “revolusi biru”

(Sumatra, Sulawesi dan Jawa Timur), penebangan dan konversi lahan untuk

pertanian atau tambak garam (Jawa dan Sulawesi) serta degradasi akibat tumpahan

minyak danpolusi (Kalimantan Timur). Selain fungsinya dalam menjaga stabilitas

pantai, tanaman nyamplung memiliki banyak manfaat yang besar baik sebagai

sumber energi nabati terbarukan maupun sebagai obat.

III.1.2.Persebaran Nyamplung (Calophyllum inophyllum) di Indonesia

Tanaman nyamplung mempunyai sebaran yang cukup luas di dunia yakni

meliputi Madagaskar, Afrika Timur, Asia Selatan dan Tenggara, Kepulauan

Pasifik, Hindia Barat, dan Amerika Selatan. Persebaran nyamplung di Indonesia

dapat dilihat pada Gambar III.1. yang meliputi daerah Sumatera Barat, Riau,

8

Jambi, Sumatera Selatan, Lampung, Jawa, Kalimantan Barat, Kalimantan Tengah,

Sulawesi, Maluku hingga Nusa Tenggara Timur dan Papua .Tanaman ini

mempunyai nama yang berbeda pada setiap daerah seperti eyobe (Enggano),

nyamplung (Jawa,Sunda, dan Makassar), samplong atau camplong (Madura),

punaga (Minangkabau dan Bali), kanaga (Dayak atau Panaga), mantau (Bima),

pantar (Alor), fitako (Ternate) dan masih banyak nama lain di berbagai daerah

(Balitbang Pertanian, 2015).

Menurut Leksono dkk. (2014) tanaman nyamplung di pulau Jawa pada

umumnya tumbuh di daerah pantai berpasir (0 m dpl.) juga pada tanah mineral

sampai ketinggian 150 m dpl. Nyamplung tumbuh paling dekat pada posisi 50 –

1000 m dari bibir pantai dengan kerapatan pohon sangat bervariasi. Peta sebaran

nyamplung di pulau Jawa pada umumnya berdekatan dengan pantai selatan dan

pantai barat pulau Jawa, yang mempunyai karakteristik fisik lahan dalam klasifikasi

sistem dataran laut dan pantai, sistem dataran, sistem bukit kapur, sistem pesisir

pantai yang bergelombang, tipe batuan sedimen pasir serta tipe batuan kapur yang

terbentuk dari endapan muara dan endapan vulkanik. Daerah penyebaran

nyamplung dapat dilihat pada Gambar III.I.

Gambar III. 1. Persebaran Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum ) di

Indonesia

9

III.1.3.Karakteristik Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum)

Nama ilmiah dari Calophyllum inophyllum diambil dari bahasa yunani Kalos,

yang berarti cantik dan Phullon yang berarti daun. Di Inggris, pohonnya dikenal

sebagai beautiful leaf (terjemahan dari bahasa yunani), Indian Laurel (karena

berasal dari India), Alexandrian Laurel, dan Beach Calophyllum (karena pohonnya

biasanya tumbuh di tepi pantai). Di Tahiti, pohon ini dinamakan ati dan buahnya

disebut tamanu. Di Samoa, pohon ini dikenal dengan nama fetau, damanu di Pulau

Fiji, dan te itai di Pulau Kirbati. Sedangkan di Indonesia, tanaman ini disebut

dengan Nyamplung, Penaga Laut di Malaysia, dan Puna di Pulau Lakshadweep.

Sedangkan di Hawaii tanaman ini dinamakan Kamani Tree dan dikenal dengan

sebutan Foraha Tree di Madagascar (Ling dkk., 2009).

Menurut Heyne (1987) tanaman nyamplung memiliki taksonomi sebagai

berikut:

Kingdom : Plantae (tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (berpembuluh)

Superdivisio : Spermatophyta (Menghasilkan Biji)

Divisio : Magnoliophyta (berbunga)

Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)

Sub-Kelas : Dilleniidae

Ordo : Theales

Familia : Clusiaceae

Tanaman nyamplung mudah dibudidayakan, tumbuh baik pada ketinggian 0-

800 meter dpl seperti di hutan, pegunungan dan rawa-rawa, curah hujan antara

1000-5000mm per tahun, pH tanah 4-7,4, tumbuh pada tanah tandus, daerah pantai

yang kering dan berpasir atau digenangi air laut. Tinggi tanaman dapat mencapati

30 meter dengan diameter 0,8 meter, daun mengkilap, batang berwarna abu-abu

hingga putih, warna kayu bervariasi tergantung spesies. Tanaman nyamplung

berbuah sepanjang tahun terutama pada bulan Februari-Maret dan Agustus-

September di Indonesia dan di Hawaii pada bulan April- Juni dan Oktober-

Desember. Tanaman nyamplung memiliki daya tahan yang tinggi terhadap

lingkungan, ditemukan dalam jumlah populasi yang besar, dengan kisaran umur

10

yang lama (1-50 tahun), dan memiliki biji yang banyak (Friday dan Okano, 2006).

Untuk bagian-bagian dari tanman nyamplung ini dapat dilihat pada Gambar II.2.

Gambar III. 2. Bagian-bagian Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum)

III.1.4.Manfaat dan Kandungan dalam Tanaman Nyamplung (Calophyllum

inophyllum)

Tanaman nyamplung merupakan tanaman serba guna, mulai dari manfaat

pohonnya sebagai tanaman konservasi dan penghijauan sampai pada produk yang

dihasilkan yaitu kayu dan hasil hutan bukan kayu berupa biji yang dimanfaatkan

sebagai penghasil minyak nabati (Wibowo dan Hendra, 2011).

Menurut Ling dkk. (2009) tanaman nyamplung dapat berfungsi sebagai anti

bakteri, anti kanker, anti neoplastic, anti inflamasi, anti platelet, anti psikotik,

antiviral, photoprotective, molluscicidal, dan piscicidal. Pada Tabel III.1

merupakan manfaat tanaman nyamplung yang didapat dari berbagai sumber.

Manfaat tersebut didapatkan karena adanya metabolit sekunder yang

dihasilkan oleh tanaman nyamplung. Metabolit sekunder adalah senyawa organik

yang dihasilkan tumbuhan yang tidak memiliki fungsi langsung pada pertumbuhan,

perkembangan, maupun reproduksi tumbuhan, namun senyawa ini biasa digunakan

tanaman untuk mempertahankan diri dari kondisi lingkungan (Saifudin, 2014).

11

Tabel III. 1 Manfaat dan Kegunaan Tanaman Nyamplung (Calophyllum inophyllum)

Nama Bagian Tanaman Fungsinya dalam dunia medis

Dari Su dkk., 2008 Dari Ling dkk., 2009

Daun

Mengobati ruam kulit,

pembengkakan kaki,

merawat luka bakar, iritasi

pada mata, disentri,

migrain, dan vertigo

Mengobati penyakit

kulit, radang sendi,

linu panggul, dan

iritasi pada mata

Batang

Mengobati disentri,

kencing nanah, masalah

pencernaan, luka luar,

bisul, dan lain-lain.

Mengobati internal

haemorhage, sebagai

penyegar,

Buah/Biji

Mengobati nyeri lambung,

gatal-gatal, rematik, luka

bakar, kencing nanah,

arthritis, bisul, dan kurap.

Mengobati luka,

kusta, penyakit syaraf,

dan luka bakar.

Terdapat beberapa kelompok utama metabolit sekunder, yaitu senyawa

fenolik, terpenoid, steroid dan alkaloid.

a) Senyawa Fenolik

Senyawa fenolik adalah senyawa yang memiliki satu atau lebih gugus

hidroksil (OH) yang menempel di cincin aromatik. Dengan kata lain senyawa

fenolik adalah senyawa yang sekurang-kurangnya memiliki satu gugus fenol

(Gambar III.3), sedangkan senyawa yang memiliki gugus fenol lebih dari satu

disebut polifenol. Banyaknya variasi gugus yang mungkin tersubtitusi pada

kerangka utama fenol menyebabkan kelompok fenolik memiliki banyak sekali

anggota. Rincian klasifikasinya dapat dilihat pada Tabel.III.2.

12

Tabel III. 2. Klasifikasi Senyawa Fenol Berdasarkan Jumlah Atom Karbon

Struktur Kelas C6 Fenolik sederhana

C6-C1 Asam fenolat dan senyawa yang berhubungan lainnya

C6-C2 Asetofenon dan asam fenilasetat

C6-C3 Asam sinamat, sinamil aldehid, sinamil alkohol

C6-C3 Koumarin, isokoumarin, dan kromon

C15 Kalkon, auron, dihidrokalkon C15 Flavan

C15 Flavon C15 Flavanon

C15 Flavanonol

C15 Antosianidin C15 Antosianin

C30 Biflavonil C6-C1-C6,C6-C2-C6 Benzofenon, xanthone, stilben

C6,C10,C14 Kuinon C18 Betasianin

Lignan, neolignan Dimer atau oligomer Lignin Polimer

Tanin Oligoner atau polimer Phlobaphene Polimer

(Vermerris dan Nicholson 2006)

Flavonoid merupakan senyawa terbesar pada senyawa fenolik tumbuhan

yang memiliki struktur dasar yang dibangun oleh 15 atom C (C6‐C3‐C6).

Senyawa flavonoid dapat dibagi menjadi delapan jenis, yaitu flavan, flavanon,

flavon, flavonol, dihidroflavonol, flavan‐3‐ol, flavan‐4‐ol, dan flavan‐3,4‐diol

(Ramdani, 2005). Untuk macam-macam bentuk senyawa flavonoid dapat

dilihat pada Gambar III.4.

Pada penelitian yang telah dilakukan Ling dkk., (2009) menunjukan bahwa

tanaman Calophyllum inophyllum mengandung senyawa kumarin yang

mungkin dapat efektif dalam mengobati penyakit kanker dan menghambat

virus HIV. Menurut Lim (2012), dalam bukunya menurut Li dkk., (2007)

sedikitnya sembilan komponen telah di isolasi dari daun Calophyllum

inophyllum, diantaranya: 2hydroxy xanthone ; 4hydroxy xanthone;

1,5 dihydroxy xanthone; 1,7dihydroxyxanthone; 1, 3,5 – trihydroxy -2

methoxy xhantone; 6 -6 -deoxyjacaerubin; flavonoids, amentoflavone;

kaempferol -3-O-α-L-rhamnoside; dan quercetin-3-O-α-L-rhamnoside.

13

OH

Gambar III. 3.Gugus Fenol

O

O

O

(a) (b)

O

O

O

O

OH

O

OOH

(c) (d) (e)

O

OH

O

OH

O

OH

OH

(f) (g) (h)

Gambar III. 4. Struktur Senyawa (a) flavan, (b) flavanon, (c) flavon, (d) flavonol

(quarcetin), (e) dihidroflavonol, (f) flavan‐3‐ol, (g) flavan‐4‐ol, dan (h) flavan‐3,4‐diol

Menurut beberapa penelitian yang telah dilakukan, kandungan senyawa

bioaktif yang dapat diisolasi pada nyamplung cukup beragam untuk jenis

senyawa fenolik tetapi bukan flavonoid diantaranya xanthone (Yimdjo dkk.,

2004; Linuma dkk., 1994), kumarin (Su dkk., 2008), benzodipiranon (Khan

dkk., 1996), berikut penjelasan senyawa secara singkat:

1. Xanthone

Xanthone merupakan senyawa dengan kerangka dasarnya dua fenil

yang dihubungkan dengan jembatan karbonil dan oksigen. Xanthone

mempunyai kerangka dasar yang terdiri atas 13 atom karbon yang

membentuk susunan C6-C1-C6, bentuk strukturnya dapat dilihat pada

Gambar III.5. Biosintesis senyawa xanthone belum diketahui secara jelas

14

namun diduga masih berhubungan dekat dengan biosintesis senyawa

flavonoid dan stilbenoid. Hal ini bisa dilihat dari tipe oksigenasi dua jenis

cincin aromatik yaitu satu cincin aromatik(A) memperlihatkan ciri berasal

dari jalur sikimat dan satu cincin(B) lagi memperlihatkan ciri berasal dari

jalur asetat-malonat. Senyawa xanthone yang di isolasi dari tumbuhan

Calophyllum inophyllum ada yang terprenilasi dan ada juga yang tidak

terprenilasi. Kebanyakan senyawa xanthone yang diisolasi dari tumbuhan

ini menunjukkan adanya ciri khas, salah satunya adalah gugus hidroksi pada

C1. Kemungkinan posisi oksigenasi ditunjukkan pada Gambar III.6.

R

R

R

RO

R

R

R

R

O

Gambar III. 5. Bentuk Senyawa Xanthone

O

O

A C B

6

7

8

5 4

3

2

1

Gambar III. 6. Kemungkinan Posisi Oksigenasi Senyawa Xanthone

Senyawa xanthone yang telah diisolasi dari tumbuhan Calophyllum inophyllum

cukup banyak. Kebanyakan senyawa tersebut mengandung gugus tambahan

terutama gugus isoprenil.

2. Kumarin

Senyawa bahan alam yang juga banyak diisolasi dari tumbuhan

Calophyllum inophyllum adalah golongan kumarin (Gambar III.7). Biosintesis

senyawa kumarin berasal dari jalur sikimat, atau masih sejalur dengan golongan

fenil propanoid. Dari segi biogenetik, kerangka benzopiran-2-on dari kumarin

berasal dari asam-asam sinamat melalui orto-hidrolaksi. Asam orto-kumarat yang

dihasilkan setelah menjalani isomerisasi cis-trans mengalami kondensasi (Lenny,

2006). Ciri khas senyawa ini adalah adanya gugus lakton yang terbentuk dari asam

pada ujung gugus propan dengan hidroksi pada gugus fenil. Oksigenasi senyawa

kumarin pada cincin aromatiknya juga khas, yaitu berselang-seling. Strukur

15

senyawa turunan kumarin dilihat dari gugus yang terikat pada C4 dapat dibedakan

menjadi 4-metilkumarin, 4-fenilkumarin, dan 4-(n-propil) kumarin. Diantara

ketiganya senyawa kumarin dengan gugus fenil dan n-propil pada C4 merupakan

senyawa yang terbanyak ditemukan.

R

R

R

R

R

O O

Gambar III. 7. Bentuk Seyawa Kumarin

3. Benzodipiranon

Benzodipiranon merupakan senyawa turunan dari kromanon. Senyawa-senyawa ini

memiliki kerangka yang mirip dengan stilben dengan tambahan dua gugus prenil.

Untuk gugus benzodipiranon dapat dilihat pada Gambar III.8.

OO

OH O

R

R

R

H

Gambar III. 8. Betuk Senyawa Benzodipiranon

b) Senyawa Terpenoida

Terpenoid adalah senyawa yang tersusun dari kerangka isopren (C5) pada

Gambar III.9, yakni rantai beranggota lima karbon bercabang (branching)

metil pada karbon nomor 2 atau kelipatannya. Menurut Lenny (2006)

klasifikasi terpenoid ditentukan dari unit isopren atau unit C5 penyusun

senyawa tersebut. Penggabungan kepala dan ekor dari unit isopren dapat

membentuk monoterpenoid (10 unit karbon), sesquiterpenoid (15 unit karbon),

diterpenoid (20 unit karbon), triterpenoid (30 unit karbon), tetraterpenoid (40

unit karbon), dan politerpenoid.

CH3

CH2

CH2

Gambar III. 9. Gugus Isopren

16

Selain itu, penelitian oleh Ragasa, (2015) membuktikan bahwa ada beberapa

senyawa terpenoid yang berada pada tanaman nyamplung umumnya

merupakan triterpenoid Gambar III.10. meliputi friedelin, squalene,

canophyllic acid, canophyllalic acid, dan canophyllol. Berikut adalah beberapa

bentuk senyawa triterpenoid Gambar III.11.

O

OHOH

OH OH

R

OHOH

OH

H HH

Gambar III. 10. Bentuk Senyawa Triterpenoid dan gugus fungsi friedelin (R= CH3), canophyllalic acid (R= COOH) , dan canophyllol (R=CH2OH)

CH3CH3

CH3CH3

CH3

CH3CH3

CH3

CH3 CH3

COOH

CH3CH3

CH3CH3

OH

HH

H

H

(a) (b)

Gambar III. 11. Bentuk Senyawa (a) squalene (b) canophyllic acid

Triterpenoid merupakan golongan senyawa terpenoid yang terdiri dari 30

atom C atau 6 unit isopren. Triterpenoid dalam jaringan tumbuhan dapat

dijumpai dalam bentuk bebasnya, tetapi juga banyak dijumpai dalam bentuk

glikosidanya. Triterpenoid terbagi dalam struktur siklik dan asiklik.

Triterpenoid asiklik yang penting hanya squalene yang dianggap sebagai

senyawa antara dalam biosintesis steroid. Triterpenoid yang paling tersebar

luas adalah triterpenoid pentasiklik. Kerangka yang paling banyak dijumpai

pada senyawa golongan triterpenoid di alam adalah ursam, lupan, oleanan, dan

friedelin (Kristanti, 2008).

17

c) Senyawa Steroid

Steroid ditemukan pada Calophyllum inophyllum adalah sitosterol (Kumar

dkk., (1976); Goh dan Jantan, (1991) dan kolesterol (Ali dkk., 1999). Sterol

adalah steroid yang memiliki gugus hidroksi pada C3-nya. Sterol dijumpai

dalam bentuk bebas ataupun bergabung dengan glukosa membentuk glikosida

(sterolin) atau sebagai ester asam lemak. Sterol merupakan senyawa bahan

alam yang umumnya tersusun dari 27 atom karbon (Kristianti, 2008). Berikut

adalah gambar senyawa Steroid.

R3

R2

R1

(a)

CH3

CH3

CH3 CH3

CH3

OH

H H

H

H

CH3

OH

H H

H

H

CH3CH3

(b) (c)

Gambar III. 12. Bentuk Senyawa (a) Steroid (b) Sitosterol (c) Kolesterol

d) Senyawa Alkaloid

Alkaloid didefinisikan sebagai senyawa tanaman yang aktif secara

farmakologis, mengandung nitrogen berbentuk hetrosikli, serta dapat

memblokir saluran ion, menghambat enzim, atau mengganggu transmisi saraf,

menghasilkan halusinasi, kehilangan koordinasi, kejang-kejang, muntah, dan

mati (Tiwari dan Rana, 2015).

Menurut klasifikasi Hegnauer, yang didasarkan pada keduanya, jenis

nitrogen dan asal biokimia, tiga jenis utama alkaloid dibedakan menjadi tiga

yaitu alkaloid sejati yang berasal dari asam amino dan memiliki nitrogen dalam

cincin heterosiklik, protoalakloid yang berasal dari asam amino dan tidak

memiliki nitrogen dalam cincin heterosiklik dan alkaloid semu yang tidak

berasal dari asam amino tetapi memiliki cincin heterosiklik nitrogen (Mazen,

18

2010). Pada penelitian Susanto dkk., (2017) menyebutkan bahwa ada senyawa

alkaloid yang terkandung dalam tanaman nyamplung.

III.1.5. Metode Ekstrak Daun Nyamplung

Senyawa polar adalah suatu senyawa yang terbentuk akibat satu atom

mempunyai keelektronegatifan yang substansial lebih besar daripada yang lain.

Semakin elektronegatif suatu atom, semakin besar tarikannya terhadap ikatan

elektron. Hasilnya adalah suatu ikatan dengan distribusi rapat elektron yang tak

merata. Senyawa non-polar adalah suatu senyawa yang terbentuk akibar atom

dengan keelektronegatifan yang sama atau hampir sama membentuk ikatan

kovalen, dimana kedua atom menerapkan tarikan yang sama atau hampir sama

terhadap elektron ikatan. Umumnya, ikatan karbon-karbon dan ikatan karbon-

hidrogen adalah jenis ikatan nonpolar yang paling umum (Fessenden,1986).

Untuk mengidentifikasi kandungan senyawa polar dan non-polar dari daun

nyamplung, hal yang perlu dilakukan pertama kali adalah memisahkan antara

kandungan polar dan non-polarnya. Pemisahan ini berdasarkan solvent yang

digunakan. Pemilihan solvent tersebut berdasarkan polarity index. Polar atau non-

polar suatu senyawa dapat dilihat pada Tabel III.3.

Tabel III. 3. Polaritas Solvent

Relative

Polarity Formula Group Solvents

Non-polar R-H Alkanes Petroleum ethers, hexanes, ligroin

Ar-H Aromatics Toluene

R-O-R Ethers Diethyl ether

R-X Alkyl halides Trichloromethane,

chloroform

R-COOR Esters Ethyl acetate

R-CO-R Aldehydes, Ketones

Acetone, MEK

R-NH2 Amines Phyridine,

triethylamine

R-OH Alcohols MeOH, EtOH, IPA,

Butanol

R-COHN2 Amides Dimethylformamide

R-COOH Carboxylic Acid Ethanoic acid

Polar H-O-H Water

(Sadek , 2002)

19

Ekstraksi adalah proses pemisahan suatu atau beberapa zat dari suatu padatan

atau cairan dengan bantuan pelarut. Pelarut tidak atau hanya sebagian larut dengan

padatan atau cairan dengan kontak secara terus menerus agen aktif berpindah dari

campuran padatan/cairan (raffinate) menuju pelarut (extract). Setelah pencampuran

dua fase, proses pemisahan dilakukan dengan prinsip gravitasi atau dengan gaya

sentrifugal (Gamse,2004).

Menurut Yunitasari (2008), dalam penelitiannya menjelaskan tentang

pengaruh jenis solvent pada berbagai variasi jumlah tray dari 6-10 untuk

pengambilan minyak nyamplung dengan metode ekstraksi kolom. Dari hasil

percobaan, penulis menjelaskan bahwa semakin banyak jumlah tray maka semakin

cepat waktu yang dibutuhkan solvent untuk mengekstrak minyak. Pelarut yang

digunakan adalah antara n-Hexane dan Petroleum. Dari hasil percobaan, penulis

menjelaskan bahwa kondisi maksimum ekstraksi dicapai Petroleum pada tray

ketujuh, kemudian pada tray selanjutnya semakin menurun jumlah minyak yang

diperoleh. Sedangkan untuk n-Hexane, minyak yang diperoleh terus meningkat di

setiap kenaikan tray. Pada Tabel III.4. ditunjukan perbandingan beberapa kondisi

operasi ekstraksi.

III.1.6. Batchwise Solvent Extraction (BSE)

Metode ini dilakukan untuk menghilangkan pengotor sekaligus memurnikan dan

memisahkan antara fraksi polar dan nonpolar yang masih ada dalam crude ekstrak

dengan menggunakan prinsip perbedaan polarity. Crude ekstrak yang diperoleh dari

metode ekstraksi dicampurkan dengan pelarut polar dan non polar. Larut an

kemudian akan terpisah menjadi dua layer dimana dibagian atasnya merupakan

Non Polar Lipid Fraction (NPLF) yang kaya akan TG sedangkan layer bawah

disebut Polar Lipid Fraction yang kaya akan senyawa bioaktif. Aparamarta et al

(2016) menggunakan metode ini untuk memurnikan minyak nyamplung.

Kemurnian TG dengan metode batchwise solvent-solvent extraction berhasil

ditingkatkan mulai dari 70.8 menjadi 98.53 wt%. (2013)

20

Tabel III. 4. Kondisi Operasi untuk Berbagai Macam Proses Ekstraksi

Modified

Sokhlet

Extraction1

Ekstraksi

Soxhlet2 Maserasi3

Pressurized

Liquid

Extraction4

Pelarut

Umum yang

Digunakan

Heksana,

Ethyl acetate

Methanol, ethanol,

atau campuran etanol dan

air

Methanol, ethanol,

atau campuran etanol dan

air

CO2, Alkohol,

Dichloromethane-acetone

Temperatur

(oC) Dipanaskan

Tergantung pelarut

yang digunakan

Dapat

dipanaskan Dipanaskan

Modified

Sokhlet

Extraction1

Ekstraksi

Soxhlet2 Maserasi3

Pressurized

Liquid

Extraction4

Penggunaan

Tekanan

diatas 1 atm

Tidak bisa Tidak Bisa Tidak Bisa Bisa

(50-250 bar)

Waktu yang

Dibutuhkan 11-12 jam 3 – 18 jam 3-4 hari 5 menit

Volume

Pelarut

yang

Dibutuhkan

(ml)

350 150 – 200 Tergantung banyaknya

sampel

Mengurangi

penggunaan pelarut 30 mL/sampel

dibandingkan dengan ekstraksi

soxhlet

1) Fabian dkk., 2009; Gunawan dkk., 2008; Kasim dkk., 2009; Gunawan

dkk.,2013

2) Yunitasari dkk., 2008

3) Sasidharan dkk., 2011

4) Saleh dan Sanagi 2009

III.1.7. Metode Microwave-assisted Extraction (MAE)

Microwave-Assisted Extraction (MAE) atau ekstraksi dengan bantuan

gelombang mikro merupakan proses ekstraksi yang memanfaatkan energi yang

ditimbulkan oleh gelombang mikro dengan frekuensi 0.30-300 GHz dalam bentuk

radiasi nonionisasi elektromagnetik. Keuntungan MAE yakni aplikasinya yang luas

dalam mengekstrak berbagai senyawa termasuk senyawa yang labil terhadap panas.

21

Selain itu, laju ekstraksi yang lebih tinggi, konsumsi pelarut yang lebih rendah, dan

pengurangan waktu ekstraksi yang signifikan dibanding ekstraksi konvensional

(Liu, dkk, 2013). Dapat dilihat pada Gambar III.13 untuk perbandingan

pemanasan menggunakan microwave dan konvesional

Gambar III. 13.a) Perbandingan Temperatur Microwave dengan Pemanasan

Konvensional. b) Kondisi thermal Pemanasan pada Microwave dan Pemanasan Konvensional

MAE merupakan teknologi untuk mengekstrak material organik dengan

memperhatikan alternatif yang penting dalam teknik ekstraksi karena dapat

bermanfaat untuk mengurangi waktu ekstraksi dan penggunaan solvent,

selektivitas, pemanasan volumetrik, dan proses pemanasan yang terkontrol. Sebagai

tambahan, untuk mengurangi waktu ekstraksi, pengguaan pelarut dan konsumsi

energi, proses ini menunjukkan lebih banyak keuntungan seperti lebih efektif dalam

proses pemanasan, transfer energi yang lebih cepat, ukuran peralatan yang tidak

terlalu besar,serta laju pemanasan yang lebih cepat dan peningkatan yield (Liu, dkk,

2013).

Keunggulan dalam pemilihan microwave sebagai media pemanas karena

microwave bisa bekerja cepat dan efisien. Hal ini dikarenakan adanya gelombang

elektromagnetik yang bisa menembus bahan dan mengeksitasi molekul-molekul

bahan secara merata. Gelombang pada frekuesnsi 2500MHz (2,5 GHz) ini diserap

bahan. Saat diserap, atom-atom akan tereksitasi dan menghasilkan panas. Proses ini

tidak membutuhkan konduksi panas seperti oven biasa. Maka dari itu, prosesnya

22

bisa dilakukan sangat cepat. Disamping itu, gelombang mikro pada frekuensi ini

diserap oleh bahan gelas, keramik, dan sebagian jenis plastik. Pemanasan dengan

gelombang mikro lebih merata karena bukan mentransfer panas dari luar tetapi

membangkitkan panas dari dalam bahan tersebut. Pemanasannya juga dapat bersifat

selektif artinya tergantung dari dielektrik properties bahan. Hal ini akan menghemat

energi untuk pemanasan. Selain itu waktu reaksi pemanasan dengan gelombang

mikro jauh lebih cepat jika dibandingkan dengan waktu reaksi pemanasan

konvensional. Pemanasan dengan microwave memiliki panas yang hilang lebih

kecil dibandingkan dengan pemanasan konvensional. Hal ini menandakan bahwa

efisiensi energi pemansan menggunakan microwave lebih besar dibandingkan

pemanasan konvensional.

III.1.8. Gelombang Mikro (Microwave)

Gelombang mikro atau mikro gelombang (microwave) adalah gelombang

elektromagnetik dengan frekuensi super tinggi (Super High Frequency, SHF), yaitu

diatas 3GHz (3x109 Hz). Sebenarnya gelombang ini merupakan gelombang radio,

tetapi panjang gelombangnya lebih kecil dari gelombang radio biasa. Panjang

gelombangnya termasuk ultrashort (sangat pendek) sehingga disebut juga mikro.

Dari sinilah lahir istilah microwave. Gelombang mikro berada pada frekuensi 2.500

MHz (2,5 GHz) ini diserap oleh air, lemak, dan gula. Saat diserap, atom tereksitasi

dan menghasilkan panas. Proses ini tidak memerlukan konduksi panas seperti oven

biasa. Karena itulah prosesnya bisa dilakukan sangat cepat. Hebatnya lagi,

gelombang mikro pada frekuensi ini tidak diserap oleh bahan-bahan gelas, keramik,

dan sebagian jenis plastik. Bahan logam bahkan memantulkan gelombang ini.

Untuk Energi dengan jenis radiasi berbeda dapat dilihat pada Tabel III.5.

Pemanasan dielektrik terjadi melalui dua fenomena utama; polarisasi dipolar dan

konduksi ionik. Polarisasi dipole dihasilkan ketika dipol atau beban dalam molekul

cair berusaha untuk menyesuaikan diri dengan elektromagnetik lapangan yang

disebabkan oleh MW iradiasi. Hal ini menyebabkan gesekan dipole dan tabrakan

dan akhirnya menghasilkan pemanasan dielektrik. Dalam konduksi ionik, ion

molekul akan bergerak dibawah pengaruh medan elektromagnetik yang berubah

23

dan memberikan panas dari tingkat tabrakan cepat pada tingkat molekuler (Liu,

dkk, 2013).

Tabel III. 5. Energi dengan Jenis Radiasi Berbeda

Radiasi Frekuensi (Hz) Energi (eV)

Gamma 3.0 x 1020 1.24 x 106

X 3.0 x 1019 1.24 x 106

Ultraviolet 1.0 x 1015 4.1

Visible 6.0 x 1014 2.5

Infrared 3.0 x 1012 0.012

Microwave 2.45 x 109 0.0016

Radio frekuensi 1.0 x 106 4.0 x 10-9

(De Souza, 2015)

III.1.9. Identifikasi dan Analisa Senyawa Bioaktif

Pemisahan campuran menjadi komponen-komponennya adalah hal yang

penting dalam semua cabang kimia dan tidak kalah pentingnya dalam banyak

bidang lain di mana teknik-teknik kimia digunakan untuk memecahkan berbagai

macam masalah. Pemisahan untuk identifikasi dan karakterisasi umumnya dibagi

menjadi dua macam, yaitu metode kromatografi dan metode nonkromatografi.

Kromatografi adalah suatu metode pemisahan fisik, dimana komponen-komponen

yang dipisahkan didistribusikan di antara dua fasa, salah satu fasa tersebut adalah

suatu lapisan stasioner dengan permukaan yang luas, yang lainnya sebagai fluida

yang mengalir perlahan di sepanjang landasan stasioner (Day dan Underwood,

2002). Untuk metode kromatografi diantaranya adalah dengan TLC, GC-MS, dan

HPLC. Dalam penelitian ini metode yang digunakan adalah TLC dan GC-MS.

Sedangkan metode non-kromatografi mencakup immunoassay yang menggunakan

antibodi monoclonal (MAbs), phytochemical screening assay, Fourier-transform

infrared spectroscopy (FTIR), dan Spectrophotometry UV-Vis.

24

III.1.10. Metode Kromatografi

III.1.10.1. Thin Layer Chromatography (TLC)

Thin Layer Chromatography (TLC) merupakan metode yang digunakan untuk

menganalisa dan mengidentifikasi senyawa yang terdapat di dalam campuran. TLC

dapat digunakan untuk membantu menentukan jumlah komponen dalam suatu

campuran, mengidentifikasi senyawa dan kemurnian suatu senyawa. TLC memiliki

dua fase yaitu fase gerak dan fase diam. Fase diam biasanya terdiri dari adsorben

halus, contohnya silika (SiO2), atau alumina (Al2O3) yang digunakan dalam bentuk

lapisan tipis (sekitar 0,25 mm). Fase gerak terdiri dari pelarut organik yang mudah

menguap. Jenis adsorben yang biasa digunakan terdapat pada Tabel III.6.

Tabel III. 6. Jenis Adsorbent

Adsorbent

Paling Kuat

Paling Lemah

Silika Gel

Alumunium Oksida

Magnesium Karbonat

Kalsium Phospat

Selulosa

(Das, 1994)

TLC terdiri atas tiga langkah yaitu spotting, development, dan visualization.

Pada spotting, sampel akan ditotolkan pada plate TLC dalam jumlah yang kecil

dengan menggunakan micropipet. Pada development, senyawa-senyawa dalam

sampel akan terelusi dengan kecepatan yang tergantung pada sifat senyawa-

senyawa tersebut (kemampuan terikan pada fasa diam dan kemampuan larut dalam

fasa gerak). Senyawa non-polar akan lebih sedikit tertarik pada plate sehingga akan

menghabiskan waktu yang lebih banyak pada fase gerak. Senyawa ini akan

bergerak lebih cepat dan muncul lebih dekat dengan puncak dari plate. Sedangkan

senyawa polar akan lebih tertarik pada plate sehingga akan menghabiskan waktu

lebih sedikit pada fase gerak dan akan muncul lebih rendah pada plate. Pada

visualisasi, spot-spot dapat secara langsung diamati setelah proses development.

Namun karena pada umumnya suatu senyawa tidak berwarna, metode visualisasi

dibutuhkan. Misalnya pada silika gel dalam plate TLC yang akan menampilkan

25

dark spot di bawah sinar ultraviolet atau dengan menempatkan plate pada iodin

vapor.

Pada Gambar III.14. dapat dilihat bahwa semakin berjalannya waktu,

komponen yang terdapat pada larutan sampel akan terpisah. Pelarut terus bergerak

menuju atas dengan prinsip kapilaritas. Komponen berwarna hijau merupakan

senyawa yang kurang polar dibandingkan komponen berwarna merah karena lebih

dekat dengan puncak plate. Sedangkan komponen berwarna merah merupakan

senyawa yang lebih polar.

Gambar III. 14. Penggambaran Skema TLC

Analisis suatu senyawa dalam TLC biasanya dilakukan dengan

dibandingkan terhadap senyawa standarnya. Nilai Rf (Retardation factor)

digunakan untuk mengkuantitaskan perpindahan dari suatu material sepanajang

plate. Rf sebanding dengan jarak yang berpindah dari suatu substansi dibagi dengan

jarak yang berpindah dari suatu solvent. Biasanya nilainya diantara nol dan satu.

Umumnya efektif solvent memiliki nilai Rf antara 0,3-0,7. Secara ideal, nilai Rf

akan sama dari senyawa yang diberikan dengan menggunakan pelarut yang sama.

Secara praktis,perpindahan berdasarkan dari struktur dan ketebalan dari layer,

jumlah air tersisa, dan efek dari binding agents. Dapat dilihat pada Gambar III.15.

untuk penentuan Rf.

Gambar III. 15. Penentuan Retardation factor (Rf)

X Y

SOLVENT FRONT

CENTER SPOT

STARTING

POINT OF SPOT

26

Thin Layer Chromatography (TLC) ini adalah analisa kualitatif. Keuntungan

dengan menggunakan metode TLC adalah mudah, cepat, dan murah. Namun

terkadang juga ada masalah dengan metode ini, misalnya adalah sampel tidak

muncul yang kemungkinan dapat disebabkan karena sampel tidak cukup atau

dibutuhkan metode visualisasi yang berbeda.

Dari penelitian Iskandari (2010), TLC digunakan untuk menentukan tiap

langkah yang dilakukan pada proses kromatografi untuk isolasi senyawa bahan

seperti pemilihan sistem eluen dan monitoring jumlah komponen yang ada dalam

suatu fraksi. TLC juga digunakan untuk memonitoring kemurnian dari suatu

senyawa. Senyawa tunggal tersebut dimonitoring dengan uji TLC menggunakan

variasi eluen, jika spot dari beberapa elusi tetap satu, maka senyawa diduga murni.

Pada penelitian ini digunakan plat silika yang spesifik untuk senyawa aromatik

yaitu plat silika GF254. Reagen penyemprot yang digunakan adalah reagen umum

untuk mendeteksi adanya senyawa aromatik, yaitu Ce(SO4)2. Senyawa yang diduga

murni ini dielusidasi dengan spektrofometri IR, UV, H NMR, C NMR, C NMR

DEPT 90 dan NMR dua dimensi.

Praveena, dkk. (2013) menggunakan analisa TLC untuk mengetahui senyawa

yang ada pada ekstrak metanol-daun Calophyllum inophyllum pada pelarut yang

berbeda baik pada fase normal dan balik. TLC ini dilakukan dengan prosedur

standar untuk mendeteksi phytochemical, memonitoring progres dari kromatografi

kolom, dan mengetes homogenitas dari bahan yang terisolasi. Plat yang digunakan

untuk fase normal dan balik adalah plat silika gel 60 F254 (Mercks, Germany) yang

digunakan untuk fase diam. Pendeteksian phytochemical pada plate TLC setelah

observasi terlebih dahulu pada siang hari, kemudian dibawah sinar UV, dan dispray

dengan reagen vanilin-sulphuric acid (VS). VS reagen tersebut mengandung 5%

larutan methanol dari asam sulfat (larutan 1) dan 1% larutan methanol dari vanilin

(larutan 2). Pertama, plat disemprot dengan larutan 1 untuk membasahinya, diikuti

dengan larutan 2, dan kemudian dipanaskan 3-4 menit pada suhu 110oC dibawah

pengawasan. Steroid atau triterpenoid dan glycoside akan memberikan spot

berwarna biru, biru-violet, pink dan warna kuning dari flavonoid.

27

III.1.10.2. Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)

GC-MS merupakan metode pemisahan senyawa organik yang menggunakan

dua metode analisis senyawa yaitu kromatografi gas (GC) untuk menganalisa

jumlah senyawa secara kuantitatif dan spektrometri massa (MS) untuk menganalisis

struktur molekul senyawa analit. Gas Chromatography (GC) menggunakan carrier

gas untuk membawa komponen sampel melewati packed column atau kolom

kapiler yang mengandung fase diam. Gas pembawa yang dipilih biasanya adalah

gas yang inert contohnya Helium yang bisa digunakan juga untuk deteksi MS. Fasa

diam yang digunakan bisa dalam bentuk solid atau immobilised polymeric liquid.

Prinsip pemisahan campuran dari GC berdasarkan perbedaan kecepatan

migrasi komponen-komponen penyusunnya. Ketika fase gerak membawa sampel

melewati fase diam, sebagian komponen sampel akan menempel ke fase diam dan

bergerak lebih lama dari komponen lain sehingga masing-masing komponen akan

keluar kolom dengan waktu yang berbeda (retention time). Pada GC, jika spektra

mengandung banyak senyawa, maka semakin banyak pula peak yang terbentuk.

Berdasarkan data waktu retensi yang sudah diketahui dari literatur, bisa diketahui

senyawa apa saja yang ada dalam sampel.

Mass spectrometer (MS) merupakan suatu instrumen yang didesain untuk

memisahkan ion-ion fase gas berdasarkan nilai mass to charge ratio (m/z). MS

memasukkan pemisahan dari charged species yang dihasilkan berdasarkan variasi

dari metode ionisasi, umumnya yang digunakan adalah Electron Impact (EI) dan

Chemical Ionisation (CI). Pemisahan dari fase ion dapat diperoleh dengan MS

menggunakan bidang elektrik atau magnetik yang akan membedakan ion. Pada

ionisasi EI dimana molekul analit diionisasi secara langsung melewati collision

dengan membombardir aliran elektron sehingga menghasilkan penghilangan

elektron untuk membentuk spesies kation radikal. Pada CI molekul analit diionisasi

melalui proses reaksi dengan mencharge reagen gas plasma menghasilkan baik

spesies anion atau kation berdasarkan kepolaran analit atau analiser.

Malarvizhi dan Ramakrishnan (2011) menggunakan analisa GC-MS untuk

mengetahui senyawa bioaktif dari daun Calophyllum inophyllum. Hasil dari

pembacaan GC-MS terdapat 17 senyawa teridentifikasi. Dari 17 senyawa yang

28

terisolasi, terdapat empat phytochemical yang terekam diatas 10% dari level peak

area, yaitu squalene (10,74%), 1-monolinoleoylglycerol trimethylsilyl ether

(11,80%), Androstan-1α-01-17- one, 2,3, isopropylidenedioxy - 4β – methyl-

(21,63%), 1-2- Benzene dicarboxylic acid, di isooctyl ester (28,11%). Dimana

cyclohexene muncul pertama kali dari kolom dengan retention time 10,83 menit.

III.2. Studi Hasil Penelitian Sebelumnya

Penelitian-penelitian tentang daun nyamplung (Calophyllum inophyllum) yang

telah dilakukan antara lain :

1. Pretto dkk. (2004)

Pretto dkk. Membuat suatu penelitian yang bertujuan untuk mencari fraksi

/ komponen yang bersifat sebagai antimikroba yang terdapat dalam Calophyllum

Brasiliensi. Prosedurnya adalah, bagian tanaman yang akan digunakan untuk

percobaan (akar, batang, daun, dan buah) dihilangkan kandungan airnya dan

dijadikan bentuk serbuk. Setelah itu kemudian bahan tersebut di maserasi dengan

menggunakan methanol selama 7 hari dan didiamkan pada suhu ruangan. Setelah

diambil larutan ekstraknya kemudian dievaporasi untuk menghilangkan sisa

campuran pelarut yang masih ada. Setelah itu kemudian crude exctract dilarutkan

dalam klorofom untuk memisahkan fraksi polar dan nonpolarnya. Fraksi polar dan

non-polar kemudian di uji kandungannya menggunakan TLC. Untuk menguji sifat

antimikroba ekstrak, digunakan beberapa mikroorganisme, diantaranya : Bacillus

Aureus, Enterobacter cloacae, Eschericia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas

Aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Staphylococcus

saprophyticus, Staphylococcus agalactiae, Candida albicans, dan Candida

tropiccals. Dari hasil penelitian didapatkan bahwa dari ke empat bagian tanaman

tersebut, tanaman yang memiliki sifat antimikroba paling baik adalah pada bagian

daun.

2. Frederic Laure dkk. (2008)

Melakukan penelitian tentang Screening of anti-HIV-1 inophyllums by

HPLC-DAD of Calophyllum Inophyllum Leaf Exctract from French Polynesia

Islands.Penelitian ini menggunakan HPLC untuk menganalisa senyawa bioaktif di

29

ekstrak daun Calophyllum inophyllum. Hasilnya, di tiap-tiap daerah kandungan

bioaktifnya tidak seragam.

3. Prasad dkk. (2012)

Melakukan penelitian tentang Antislipidemic dan aktifitas antioksidan dari

senyawa yang diisolasi dari daun Calophyllum inophyllum. Daun Calophyllum

inophyllum ditumbuk hingga berbentuk serbuk. Serbuk daun di ekstrak dengan

95% ethanol dan dibiarkan pada suhu kamar selama 24 jam. Hasil ekstraksi lalu

dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 400 C. Ekstrak ethanol di

fraksinasi dengan toluene dan air. Bagian yang larut di dalam Toluene dipisahkan

menggunakan corong pemisah dan dipekatkan sedangkan bagian aqeous

dilarutkan kembali dengan athyl asetat. Bagian yang larut di ethyl asetat

dipisahkan dan dipekatkan menggunakan rotary evaporator. Bagian aqeous

kemudian di fraksinasi dengan n-butanol. Tiap bagian yang larut di masing-masing

pelarut dilakukan analisa kromatografi menggunakan silica gel sehingga akan

didapatkan senyawa bioaktif yang bisa diisolasi. Komponen yang diisolasi adalah

calophyllic acid dan isocalophyllic acid, canophyllic acid, amentoflavone, dan

shikimic acid. Calophyllic acid dan isocalophyllic acid,calophyllic acid, serta

amentoflavone dapat menurunkan kadar lemak serta baik sebagai antioksidan.

4. Indrakumar dkk. (2012)

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui komponen phytochemical yang

terkandung dalam daun Calophyllum inophyllum. Daun Calophyllum inophyllum

segar dikeringkan terlebih dahulu selama 15 hari lalu diblender hingga halus.

Serbuk daun tersebut kemudian dilarutkan dalam 3 pelarut yang berbeda yaitu

Petroleum Eter, Methanol, dan Chloroform kemudian di ekstraksi menggunakan

soklet. Ekstrak yang dihasilkan kemudian di uji kandungan senyawanya

menggunakan Mayer’s test untuk uji alkaloids, Benedict’s test untuk uji

karbohidrat, Modified Borntrager’s test untuk uji glikosid, Froth test untuk uji

saponin, Xanthoproteic untuk uji protein, Alkaline reagent test untuk uji

flavonoids, deteksi steroid, anthraquinone oleh Harbone, dan deteksi diterpenes,

phenol dan kumarin oleh Mace.

30

5. Praveena dkk. (2013)

Penelitian ini bertujuan untuk menganalisa komponen fitokimia dalam daun

Calophyllum inophyllum. Serbuk daun Calophyllum inophyllum dimaserasi

menggunakan methanol selama 7 hari dalam labu alas datar. Ekstrak yang

dihasilkan kemudian disaring lalu dikentalkan dan dimasukkan dalam desikator.

Ekstrak yang terbentuk kemudian di uji menggunakan TLC (Thin Layer

Chromatography). Hasil analisa menyebutkan bahwa ekstrak daun tersebut

mengandung flavonoidal, glycosides, dan steroidal glycosides.

6. Susanto dkk. (2017)

Penelitian ini bertujuan menyelidiki adanya komposisi proksimat,

kandungan mineral, dan fitokimia senyawa yang terdapat pada daun Calophyllum

inophyllum. Serta isolasi dan identifikasi pyrene juga dilakukan. Daun

Calophyllum inophyllum diekstraksi dengan metanol dengan metode perkolasi.

Komposisi proksimat yang terdapat di daun Calophyllum inophyllum dianalisis

dengan metode standar. Kandungan mineral dalam tanaman ini dianalisis

menggunakan spektrofotometer serapan atom. Skrining dan analisis fitokimia

tanaman dilakukan dengan metode spektrofotometri. Metode pencucian dengan

karbon disulfida digunakan untuk mengisolasi senyawa dihydropyrene dari

ekstrak daun Calophyllum inophyllum. Hasil penelitian mengatakan bahwa daun

Calophyllum inophyllum dapat digunakan sebagai sumber serat yang baik. Serta

daun Calophyllum inophyllum berpotensi sebagai obat herbal karena kandungan

fitokimia.

7. Susanto dkk. (2018)

Mengetahui pengaruh tingkat polaritas pelarut pada pemisahan senyawa

xanthone dan coumarin yang terkandung dalam ekstrak daun Calophyllum

inophyllum. Ekstrak daun kasar diperoleh dengan metode perkolasi. Menggunakan

metode Liquid Liquid Extraction (LLE) yang berguna untuk memisahkan senyawa

xanthone dan coumarin. Dilakukan dengan menggunakan metanol sebagai

pelarut polar dan n-heksan sebagai pelarut non-polar dengan rasio pelarut 1.

Konsentrasi metanol dalam air yang digunakan adalah 20%, 50%, 80%, dan 100%.

Setiap fraksi yang diperoleh diuji secara kualitatif menggunakan Thin Layer

31

Chromatography (TLC) dan secara kuantitatif menggunakan Gas

Chromatography (GC) untuk menganalisis xanthone dan coumarin. Hasil

pemisahan terbaik diperoleh dengan menggunakan 50% metanol. Dalam hasil ini,

coumarin dan xanthone dipisahkan dalam fraksi metanol (81,18% recovery) dan

fraksi n-heksan (81,91% recovery).

8. Govindappa, 2018

Ekstaksi secara microwave dengan pelarut air menggunakan Daun

Calophyllum tomentosum yang tumbuh didaerah india membuktikan adanya

bioactive compounds yang memiliki kemampuan antibakteri, antioksidan,

antidiabetik, anti-inflamantori, serta anti-tirosin. Penelitian ini dilakukan dengan

pengujian ekstrak terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa, Eschericia coli,

Staphylococcus aureus, dan Klebsiella aerogenes.

II.5. Peta Jalan Penelitian

Laboratorium biokimia, jurusan teknik kimia FTI-ITS mempunyai topik

penelitian dibidang bioenergi, bahan-bahan aktif alamiah, teknologi pangan, dan

teknologi pengolahan biogas seperti pada table dibawah ini.

32

Topik Capaian 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017-2020

Bioenergi

(Biodiesel,

Bioetanol,

Biogas dan

Biohidrogen)

-Diversifikasi feedstock untuk produksi biodisel dari dedak

padi, buah xylocarpus dan nyamplung.

-Modifikasi proses produksi dan peralatan:

separasi, reaktor, and purifikasi.

-Feedstock menjadi biodiesel yang ekonomis:

bahan bakar dan ada produk sampingan.

Pengembangan

& Aplikasi

Teknologi

Biobased Energy

Produksi enzim untuk konversi lignocellulose menjadi gula Konversi Lignocelulose -> Gula -> bioetanol

-Diversifikasi feedstock untuk produksi bioetanol dari limbah

tapioka/onggok dan sorgum

- Pemilihan pelarut yang optimal pada proses ekstraksi broth

untuk pemisahan etanol dari glukosa yang belum terfermentasi

dan mengurangi beban proses destilasi

-Pemodelan produksi bioetanol dengan sistem proses terpadu

fermentasi-ekstraktif untuk mendapatkan kondisi yang optimal

-Modifikasi proses produksi dan sistem proses

fermentasi-ekstraktif dengan

-Feedstock menjadi bioetanol yang ekonomis

dengan keunggulan produktivitas dan mampu

saving energi.

- Rekayasa produksi bioetanol sistem proses

kontinyu fermentasi-ekstraktif dan destilasi

dilengkapi dengan adsorpsi

-Pengembangan produksi bietanol secara kontinyu

menggunakan teknik immobilisasi sel dan penggunakan

mikroorganisme yang handal/termutasi

- Rekayasa peningkatan produktivitas bioetanol dengan sistem

proses fermentasi-ekstraktif

Produksi enzim

selulase dan

xylanase

- Optimasi

aktifitas dan

stabilitas enzim

selulase dan

xilanase

- Optimasi proses

pretreatment alkali

- Optimasi degradasi

enzimatik

hemiselulosa dan

selulosa

- Optimasi proses pretreatment yang lain:

pretreatment asam, organic solvent, subcritical

dan supercritical extraction, serta pretreatment

biologis

- Optimasi proses fermentasi xilosa menjadi

etanol atau hidrogen

- Optimasi proses fermentasi glukosa menjadi

etanol atau hydrogen

33

- Kinetika degradasi

enzimatik selulosa dan

hemiselulosa

- Kinetika fermentasi etanol dan biohidrogen

Produksi dan Pemurnian biogas Pemurnian dan transportasi biogas

Natural

products

(Bahan-

bahan aktif)

-Karakterisasi dan identifikasi komposisi dedak padi

-Karakterisasi dan identifikasi komposisi buah xylocarpus

-Karakterisasi dan identifikasi komposisi buah nyamplung

-Modifikasi proses produksi dan peralatan:

separasi, reaktor, and purifikasi.

Pengembangan

& Aplikasi

Teknologi herbal

Teknologi

Pangan

-Karakterisasi dan identifikasi komposisi singkong

- Karakterisasi dan identifikasi mikroorganisme seperti yeast,

rhizopus oryzae, dan lactobacilus

- Kajian mutu produk dari fermentasi singkong dengan yeast,

rhizopus oryzae, dan lactobacilus

-Modifikasi proses produksi dan peralatan:

separasi, reaktor, and purifikasi.

Pengembangan

& Aplikasi

Teknologi

singkong

termodifikasi

Teknologi

Pengolahan

Limbah

Biologis

-Karakterisasi dan identifikasi fouling pada sistem proses

pengolahan limbah industri berkadar bahan organik dan

ammonia dengan teknik SMBR dan MBR

-Kajian fouling pada kombinasi proses lumpur aktif-

membran-adsorpsi untuk mengolah limbah B3

-Rekayasa pengolahan limbah industri berkadar

bahan organik dan ammonia dengan teknik

SMBR dan MBR

-Rekayasa pengolahan limbah industri berkadar

bahan organik, ammonia dan B3 dengan teknik

SMBR dan MBR yang dikombinasikan dengan

adsorpsi karbon aktif

Pengembangan

& Aplikasi

Teknologi

pengolahan

limbah biologis &

membran yang

handal

Riset Fundamental

Riset Terapan

Riset Industri

34

BAB IV

METODE

IV.1. Garis besar Penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah melakukan pemisahan senyawa squalene dari

daun nyamplung, mengetahui kondisi dan metode terbaik yang digunakan untuk

memisahkan senyawa squalene, dan mengetahui yield squalane yang dapat diisolasi dan

persen kemurniannya dengan metode Batchwise Solvent Extraction (BSE), dan

Microwave Assisted Extraction (MAE). Tahapan proses penelitihan terdiri secara

umum terdapat 3 tahap dapat dilihat di Gambar III.1 yaitu proses ekstraksi, proses

pemurnian, dan analisa. Untuk proses pertama yaitu ekstraksi daun nyamplung

menggunakan pelarut n-heksana metode maserasi. Proses yang kedua yaitu proses

pemurian terdapat 3 metode yaitu metode Batchwise Solvent Extraction (BSE),

Microwave Assisted Extraction (MAE), dan kombinasi kedua metode. Proses yang

terakhir adalah analisa yang terdiri dari analisa kualitatif TLC (Thin Layer

Chromatography), analisa kuantitatif menggunakan Gas Chromatography (GC), dan

nalisa kuantitatif menggunakan Gas Chromatography (GC-MS).

Gambar IV. 1. Tahapan proses Penelitihan

IV.2. Bahan dan Peralatan

IV.2.1. Bahan yang digunakan

1. Daun nyamplung (wilayah Ekowisata Edukasi Mangrove Wonorejo Surabaya, Jawa

Timur)

2. N-heksana (Merck, Germany)

3. Metanol (Merck, Germany)

4. TLC Silica gel 60 F254 (Merck, Germany)

5. Squalene ≥98%, liquid (Sigma Aldrich)

Proses

Analisa

Proses

Ekstraksi

Proses

Pemurnian

Daun

Nyamplung

35

1. Alat yang digunakan

2. Beaker Glass

3. Erlemeyer

4. Kertas saring

5. Kondensor

6. Labu distilasi

7. Magnetic Stirer

8. Batang Segitiga

9. Petri dish

10. Pipet Tetes

11. Tabung Reaksi

12. Termometer

13. UV-Vis

14. Peralatan MAE

Keterangan :

1. Microwave Oven

2. Reactor

3. Bahan Baku

4. Power Setting

5. Time Setting

6. Condensor

Gambar IV. 2.Alat untuk Microwave Assisted Extraction (MAE)

IV.3. Variabel Penelitian

Penelitian ini menggunakan variabel kontrol daun nyamplung (Calophyllum inophyllum).

Terdapat 2 proses yang divariabel yang ditetapkan yaitu proses ektraksi yang menggunakan

metode solid-liquid extraction (SLE) dan microwave assisted extraction (MAE) dan proses

36

pemurnian dengan menggunakan tiga metode batchwise solvent extraction (BSE), proses

microwave assisted extraction (MAE) dan proses kombinasi BSE-MAE. Hasil dari setiap

variabel yang ada nantinya akan dilakukan analisa berupa analisa Total Phenolic Compound

(TPC), Total Flavonoid Compound (TFC), Antioxidant Activity (AA), Thin Layer

Chromatography (TLC), dan Gas Chromatography (GC).

Pada proses ekstraksi untuk SLE telah ditetapkan dengan pemilihan pelarut heksana

dengan perbandingan Solid: Liquid adalah 1:3 (kg/L) dengan perendaman selama tiga hari dan

dilakukan pengulangan berdasarkan penelitihan sebelumnya yang dilakukan Danissa, dkk

(2019). Sedangkan untuk metode MAE Sedangkan pada proses pemurnian pemilihan pelarut

methanol dan heksana. Adapun dalam pemilihan pelarut berdasarkan hasil penelitian

sebelumnya. Menurut Aparamarta, dkk (2016) pelarut yang paling baik digunakan adalah

petroleum ether (PE) dan methanol dengan perbandingan massa petroleum ether : methanol

adalah 75 : 25 atau 3 : 1. Tetapi untuk saat ini dimodifikasi untuk menggunakan pelarut n-heksana.

Untuk Variabel bebas dapat dilihat pada Tabel IV.1 untuk proses batchwise solvent extraction

Tabel IV. 1 Variabel Penelitian Bacthwise solvent extraction

No Variabel

Perbandingan

Massa Crude :

Solvent

Perbandingan

Massa Heksana :

ME

Jumlah

stage

1

Crude

Nyamplung

(0,5 gr)

1 : 5 3 : 1 8

Pada proses ekstraksi metode microwave assisted extraction (MAE) menggunakan

Response Surface Methodology (RSM) dengan Box Behnken pada Design of Experiment (DOE)

menggunakan software minitab 18.1. Dalam hal ini continous factors yang digunakan adalah 15

dengan parameter-parameter yang digunakan sebagai berikut.

-Variabel Daun Nyamplung: Pelarutan = 1:10 – 1: 30 (gram:mL)

- Daya = 150 – 600 (Watt)

- Waktu = 5 – 15 (menit)

Untuk hasil run order dapat dilihat pada Tabel III.2.

37

Tabel IV.2. Variabel Penelitian Metode Microwave Assisted Extraction pada Proses Ekstraksi

Run

Order Perbandingan

Daun:Pelarut (gr/mL) Daya (Watt)

Waktu Ekstraksi

(menit)

1 1:10 150 10

2 1:30 150 10

3 1:10 600 10

4 1:30 600 10

5 1:10 375 5

6 1:30 375 5

7 1:10 375 15

8 1:30 375 15

9 1:20 150 5

10 1:20 600 5

11 1:20 150 15

12 1:20 600 15

13 1:20 375 10

14 1:20 375 10

15 1:20 375 10

Pada proses pemurnian metode microwave assisted extraction (MAE) menggunakan

Response Surface Methodology (RSM) dengan Box Behnken pada Design of Experiment (DOE)

menggunakan software minitab 18.1. Dalam hal ini continous factors yang digunakan adalah 15

dengan parameter-parameter yang digunakan sebagai berikut.

-Variabel Daun Nyamplung: Pelarutan = 1:10 – 1: 30 (gram:mL)

- Daya = 150 – 600 (Watt)

- Waktu = 5 – 15 (menit)

Untuk hasil run order dapat dilihat pada Tabel IV.3.

38

Tabel IV.3. Variabel Penelitian Microwave Assisted Extraction pada Proses Pemurnian

Run

Order Perbandingan

Daun:Pelarut (gr/mL) Daya (Watt)

Waktu Ekstraksi

(menit)

1 1:100 150 10

2 1:300 150 10

3 1:100 600 10

4 1:300 600 10

5 1:100 375 5

6 1:300 375 5

7 1:100 375 15

8 1:300 375 15

9 1:200 150 5

10 1:200 600 5

11 1:200 150 15

12 1:200 600 15

13 1:200 375 10

14 1:200 375 10

15 1:200 375 10

IV.4. Prosedur Penelitian

III.4.1. Ekstraksi Crude Non-polar Daun Nyamplung

Ekstraksi senyawa bioaktif daun nyamplung menggunakan pelarut N-heksana dengan

ekstraksi solid-liquid

a. Solid berupa bubuk daun nyamplung.

b. Pelarut yang digunakan yakni n-Heksana

c. Perbandingan solid:pelarut n-Heksana adalah 1:3 (kg/L). Sebanyak 3 kg dalam 9L

n-heksana direndam selama 3 hari dan disaring

39

d. filtrat hasil ekstraksi di distilasi untuk menghilangkan pelarut n-heksan sehingga

didapat crude non-polar yang kemudian di simpan pada suhu 4oC

Skema ekstrasi non-polar terlihat pada Gambar IV.3.

Gambar IV.3. Skema Esktraksi Crude Non-Polar

III.4.2. Proses Pemurnian Crude

a. Metode Batchwise Solvent Extraction (BSE)

Proses Pemurnian Non Polar Fraction (NPF) dan Polar Fraction (PF) dengan

batchwise solvent extraction (BSE) (Aparamarta dkk, 2016)

a. Massa crude n-heksana 0,5 gram.

b. Ekstraksi menggunakan corong pemisah.

c. Pelarut yang digunakan = n-hexane : methanol-air dengan rasio 75:25 (g/g).

d. Rasio massa total pelarut : crude minyak nyamplung = 5:1.

e. Ekstraksi hingga delapan stage.

Pada penelitian ini, dilakukan proses ekstraksi multistage batchwise solvent yang

N-heksana Distilasi

Serbuk daun nyamplung kering dimaserasi dengan pelarut

N-heksan

Saring Residu di oven 50oC

selama 8 jam

NPLF dalam

N-heksana Residu Solid

Crude n-heksana

Metode BSE Metode MAE Metode Kombinasi

MAE dan BSE

Analisa TLC, GC, GC-MS

40

bertujuan untuk lebih memurnikan squalene yang termasuk bagian dari senyawa non-polar.

Proses ekstraksi batchwise menggunakan sistem cross-current seperti pada Gambar IV.4.

Sistem ini dikatakan cross-current karena menggunakan pelarut polar baru untuk setiap proses

ekstraksinya hingga n-stage dan produk yang diharapkan bersifat non-polar akan terikut dalam

n-heksana. Jumlah campuran metanol yang ditambahkan selalu sama, yaitu sesuai

perbandingan yang digunakan. Gambar IV.5 merupakan skema proses batchwise.

Gambar IV.4. Sistem cross-current pada ekstraksi batchwise multistage

metanol metanol metanol

Crude

n-heksan

Fraksi 1 2 n

non-polar

Fraksi

polar

Fraksi

polar

Fraksi

polar

41

Gambar IV.5. Skema Proses Batchwise Solvent Extraction

b. Metode microwave assisted extraction (MAE)

Proses Pemurnian Non Polar Fraction (NPF) dan Polar Fraction (PF) dengan proses

microwave assisted extraction (MAE)

a. Massa daun nyamplung 1 gram

b. Pelarut n-heksana 100 mL, 200 mL, 300 mL

c. Variabel daya microwave 150, 375, dan 600 Watt

d. Waktu ekstraksi 5,10,15 menit

Setelah itu campuran dimasukkan ke corong pemisah dan diambil fraksi non polar.

Setelah itu dilakukan distilasi untuk senyawa non polar. Hasil yang didapat dilakukan analisa.

Untuk gambar alat metode ini dapat dilihat pada Gambar IV.6.

8 stages

42

Gambar IV.6. Skema Proses Microwave Assisted Extraction

c. Metode Kombinasi

Metode ini merupakan metode kombinasi antara MAE dan BSE. Prosesnya awalnya

sama dengan metode BSE mula-mula crude n-heksana 0,5 gram dilarutkan dengan pelarut n-

heksana 50mL, setelah itu diaduk dengan kecepatan 300rpm selama 15 menit pada suhu ruang.

Kemudian dilakukan ekstraksi MAE, crude diletakkan ke dalam microwave dengan variabel

daya (150, 375, dan 600 Watt). Campuran diaduk dengan variable waktu (5,10,15 menit).

Setelah itu campuran dimasukkan ke corong pemisah dan diambil fraksi non polar. Setelah itu

dilakukan distilasi untuk senyawa non polar. Setelah itu dilakukan pencuncian dengan metanol

hingga 8 stages. Hasil yang didapat dilakukan analisa. Untuk skema proses dapat dilihat pada

Gambar III.7.

43

Gambar IV.7. Skema Proses Kombinasi

IV.5. Analisa

IV.5.1. Analisa Total Phenolic Content (TPC)

Total kandungan fenolik pada tiap ekstrak dianalisa menggunakan metode Folin-

Ciocalteu oleh Bahorun (1996) dengan sedikit modifikasi. Membuat konsentrasi ekstrak

menjadi 1000mg/L dengan melarutkan 4 mg ekstrak dengan metanol 4 mL. Hasil pengenceran

ekstrak diambil 0,6 ml dan dicampur dengan 1,5 mL reagen Follin-Ciocalteu 10% (v/v) diaduk

8 stages

44

selama 5 menit. Kemudian tambahkan 4,5 mL natrium karbonat 6% (b/v) diaduk dan

didiamkan selama 2 jam pada suhu ruang dalam keadaan gelap. Setelah itu hasil reaksi dianalisa

dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 760 nm.

Proses pembuatan larutan standar asam galat digunakan untuk kurva kalibrasi. Mula-

mula 20 mg asam galat diencerkan dengan akuades hingga 40 mL untuk membuat larutan induk

asam galat. Dibuat larutan standar asam galat dengan konsentrasi 0; 5; 10; 30; dan 60 mg/L

dengan mengambil masing-masing larutan induk asam galat sebanyak 0; 1; 2; 6; dan 12 ml dan

dimasukkan ke dalam labu takar ukuran 100 mL untuk dilakukan pengenceran. Diambil

masing-masing 1 mL larutan asam galat seperti langkah-langkah sebelumnya. Hasil dari analisa

masing-masing sampel ini dinyatakan dalam satuan mg Gallic Acid Equivalent (GAE) per gram

ekstrak daun nyamplung. Berikut ini disajikan skema analisa total kandungan fenolik pada

Gambar IV.8.

Gambar IV.8. Skema Analisa Total Kandungan Fenolik Metode Folin-Ciocalteu

IV.5.2. Analisa Total Flavonoid Content (TFC)

Total flavonoid pada tiap ekstrak dianalisa menggunakan metode AlCl3 oleh Bahorun

(1996) dengan sedikit modifikasi. Membuat konsentrasi ekstrak menjadi 1000mg/L dengan

melarutkan 4 mg ekstrak dengan metanol sebanyak 4 mL. Hasil pengenceran ekstrak diambil

0,75 mL dan dicampur dengan 0,375 mL akuades dan 0,225 mL NaNO3 % (b/v). Kemudian

Melakukan analisa dengan spektrofotometer pada panjang

gelombang 760 nm.

Melakukan pengenceran pada tiap ekstrak dengan metanol

Mereaksikan hasil pengenceran ekstrak dengan reagen FC

Mereaksikan campuran reagen dan ekstrak dengan natrium

karbonat

Mendiamkan hasil reaksi pada suhu ruang dalam keadaan gelap

45

dimasukkan ke dalam inkubator shaker dengan kecepatan 100rpm. Kemudian tambahkan 0,45

mL AlCl3 10%(b/v) diamkan selama 5 menit. Setelah itu tambahkan 15 mL NaOH 4% (b/v)

dan 0,825 mL akuades. Setelah itu hasil reaksi dianalisa dengan spektrofotometer pada panjang

gelombang 319 nm

Prosedur pembuatan larutan standar quercetin digunakan sebagai kurva kalibrasi. Mula-

mula 50 mg quercetin diencerkan dengan 100 mL akuades untuk membuat larutan induk

quercetin. Dibuat larutan standar quarcetin dengan konsentrasi 0; 25; 50; 125; dan 250 mg/L

dengan mengambil masing-masing larutan induk quercetin sebanyak 0; 5; 10; 25; dan 50 mL

dan dan diencerkan hingga 100 mL dengan akuades menggunakan labu takar. Diambil masing-

masing 1 mL larutan standar quercetin dan direaksikan dengan metode kalorimetrik alumunium

klorida seperti langkah-langkah sebelumnya. Hasil dari analisa metode ini dinyatakan dalam

satuan mg Quercetin Equivalent (QE) per gram ekstrak daun nyamplung. Skema analisa total

kandungan flavonoid pada Gambar IV.9.

Gambar IV.9 Skema Analisa Total Kandungan Flavonoid

IV.5.3. Analisa Antioxidant Activity (AA)

Analisa antioksidan pada tiap ekstrak dianalisa menggunakan metode Asorbic Acid oleh

Klein dan Perry (1982) dengan sedikit modifikasi. Mengambil 100 mg diekstrak dengan 10ml

Melakukan analisa dengan spektrofotometer pada panjang

gelombang 319 nm

Melakukan pengenceran pada tiap ekstrak dengan metanol

Mereaksikan hasil pengenceran ekstrak dengan Natrium Nitrat

dan AlCl3

Mendiamkan campuran reaksi selama 5 menit kemudian

dilanjutkan penambahan dengan natrium hidroksida dan akuades

Mendiamkan hasil reaksi pada suhu ruang dalam keadaan gelap

46

dari 1% Asam metafosforik selama 45 menit pada suhu kamar. Kemudian menyaring dengan

kertas saring Whatmann No.4. Hasil filtrat diambil 1 mL dan dicampur dengan 2,6-

dichlorophenolidophenol ditunggu selama 30 menit. Setelah itu hasil reaksi dianalisa dengan

spektrofotometer pada panjang gelombang 515nm

Prosedur pembuatan larutan standar quercetin digunakan sebagai kurva kalibrasi. Mula-

mula 50 mg quercetin diencerkan dengan 100 mL akuades untuk membuat larutan induk

quercetin. Dibuat larutan standar quarcetin dengan konsentrasi 0; 25; 50; 125; dan 250 mg/L

dengan mengambil masing-masing larutan induk quercetin sebanyak 0; 5; 10; 25; dan 50 mL

dan dan diencerkan hingga 100 mL dengan akuades menggunakan labu takar. Diambil masing-

masing 1 mL larutan standar quercetin dan direaksikan dengan metode kalorimetrik alumunium

klorida seperti langkah-langkah sebelumnya. Hasil dari analisa metode ini dinyatakan dalam

satuan mg Asorbic Acid (AA) per gram ekstrak daun nyamplung.

IV.5.4. Analisa Thin Layer Chromatography (TLC)

Tiap fraksi yang didapatkan kemudian diuji kandungan komponennya menggunakan

TLC (Thin Layer Chromatography). TLC digunakan untuk menguji secara kualitatif. Sebelum

dilakukan uji TLC, mula-mula kertas TLC yang telah ditetesi oleh sampel direndam dalam

mobile phase dengan kadar hexane:etil asetat:asam asetat sebesar 80:20:1 (v/v/v). Perendaman

dalam mobile phase dilakukan dalam botol tertutup rapat. Pada saat perendaman, tinggi mobile

phase tidak diperbolehkan melebihi area yang telah ditentukan pada kertas TLC. Setelah

perendaman, kertas TLC kemudian dikeringkan pada suhu ruangan lalu dilakukan pewarnaan

menggunakan iodin. Pelat TLC yang telah direndam dalam mobile phase tersebut dimasukkan

dalam botol yang berisi iodin hingga terbentuk spot-spot pada kertas TLC. Fungsi dari iodin

adalah untuk memberi warna pada sampel yang telah diteteskan pada pelat TLC tersebut. Pada

pembacaan pelat TLC, selain menggunakan iodin, dapat juga menggunakan lampu UV, dengan

cara setelah setelah pelat TLC direndam dalam mobile phase, pelat TLC disinari dengan

menggunakan alat UV (UVITEC Cambridge) dengan menggunakan lampu UV gelombang 254

dan 365 nm.

IV.5.5. Analisa Gas Chromatography (GC)

Kandungan xanthone, coumarin dan friedelin dalam tiap fraksi dianalisa dengan GC.

Kurva kalibrasi standar eksternal diperoleh dengan 0,2-20 mg standar murni. Analisa

47

kromatografi dilakukan pada pelat TLC dan Shimadzu GC-2010 (Kyoto, Japan) Gas

Chromatography yang dilengkapi dengan Flame Ionization Detector. Separasi dilakukan

dengan DB-5HT (5%-phenyl)- methylpolysiloxane non-polar column (15m x 0,32mm i.d.;

Agilent Tech. Palo Alto, California). Temperatur injektor dan detector diset pada suhu 370ºC.

Temperatur kolom dimulai pada 80ºC. Sebanyak 20 mg sampel dilarutkan dalam 1mL etil

asetat, dan 1 μL sampel diambil dan diinjeksikan ke dalam GC.

IV.5.6. Analisa Gas Chromatography- Mass Spectrometry (GC-MS)

Analisis GC-MS digunakan oleh Agilent 6890 sistem GC dengan Agilent 6971 detektor

selektif massa inert (Agilent Tech. Palo Alto, California, USA). Pemisahan terjadi kolom

kapiler, HP5 5% fenilmetilsiloksana non-polar kolom (30 000 mm × 0,32 mm id, dengan

ketebalan lapisan fase diam 0,25 mm. Suhu oven diatur pada 800C dan dipertahankan selama

5 menit. Kemudian, oven suhu dinaikkan 150C / mnt ke suhu 3000C dan naik selama 2 mnt.

Gas pembawa yang digunakan adalah helium ultrapure (99,999%) .Suhu untuk injektor,

antarmuka, dan sumber ion masing-masing adalah 310, 280 dan 230 _C. Volume injeksi adalah

1 mL, menggunakan model dengan inlet split 1:10, dengan laju aliran gas di kolom pada 1,3

mL / menit.

IV.6. Susunan Organisasi Tim Peneliti / Pelaksana dan Pembagian Tugas

NO Nama / NIDN Instansi

Asal

Bidang

Ilmu

Alokasi

Waktu

(Jam/minggu)

Uraian Tugas

1 Hakun Wirawasita

Aparamarta /

0022097808

ITS T Kimia 21 Mengkoordinasi, melakukan

kroscek data dan penulisan

serta melakukan analisa GC,

GC-MS beserta validasinya

2 Setiyo Gunawan /

0023037604

ITS T Kimia 21 Mengkoordinasi experiment

dan analisa GC serta

melakukan analisa TPC,

TFC, Antioxidant Activity

pada masing-masing bahan

baku.

48

BAB V

JADWAL

V.1. Jadwal Penelitihan

Berikut adalah rencana jadwal penelitihan yang disajikan pada table berikut:

No. KEGIATAN Bulan ke-

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

1. Studi Pustaka

2. Persiapan Bahan dan Alat

3. Ekstraksi Crude n-heksana

4. Proses Pemurnian

Squalene dengan Metode

Batchwise

5. Proses Pemurnian

Squalene dengan Metode

Microwave

6. Proses Pemurnian

Squalene dengan Metode

Kombinasi

7. Analisa TLC

8. Analisa GC

9 Analisa GC-MS

10 Pengolahan Data

11 Pembuatan Laporan

12. Penulisan jurnal

13. Seminar dan Publikasi

Jurnal

V.2. Anggaran Biaya

NO

Jenis Pengeluaran Biaya yang diusulkan (Rp)

1 Bahan Habis pakai 21.315.000

2 Analisa 7.250.000

3 Publikasi dan Penggandaan Laporan 21.435.000

TOTAL 50.000.000

49

Berikut adalah rincian dari anggaran biaya

1. Bahan Habis Pakai

Material Item Satuan

Harga

satuan (Rp)

Total

(Rp)

Daun Nyamplung 10 Kg 10,000 100,000

Hexane 50 L 75,000 3,750,000

Methanol 30 L 25,000 750,000

Kertas TLC 1 pak 3,475,000 3,475,000

Aluminium foil 3 buah 22,000 66,000

Plastic wrap 3 buah 20,000 60,000

Standar Squalene 100mL 1 pak 4,500,000 4,500,000

Labu distilasi 1 L 1 buah 250,000 250,000

Masker, 1 box 1 box 25,000 25,000

Botol sampel 10 ml 100 biji 1,000 100,000

Botol sampel 200 ml 100 biji 2,000 200,000

Kondensor reflux 2 buah 250,000 500,000

2,6 dichloindophenol 1 buah 3,200,000 3,200,000

standar asorbic acid 100gram

1 buah 160,000 160,000

Stirring bar 3 buah 100,000 300,000

Kertas Whatman No 4 filter

1 buah 295,000 295,000

Cawan 100mL 10 buah 25,000 250,000

Tissue 10 rol 1 pak 39,000 39,000

Methaphosporic Acid 100gram

1 pak 1,470,000 1,470,000

Etil Asetat 1 liter 100,000 100,000

Asam Asetat 5 liter 220,000 1,100,000

NaHCO3 100gram 1 pak 50,000 50,000

Labu Tiga Leher 1000mL 1 buah 575,000 575,000

SUB TOTAL 21,315,000

2. Analisa

Material Item Satuan

Harga

satuan (Rp)

Total (Rp)

Analisa GC-MS 4 sampel 500,000 2,000,000

Analisa GC 50 sampel 75,000 3,750,000

Operator TPC 50 sampel 10,000 500,000

Operator TFC 50 sampel 10,000 500,000

50

Operator Antioxidant Activity

50 sampel 10,000 500,000

SUB TOTAL 7,250,000

3. Publikasi dan Penggandaan Laporan

Material Item Satuan Harga satuan

(Rp)

Total (Rp)

Publikasi Internasional 1 Publikasi 15,000,000 15,000,000

Biaya Perjalanan Seminar 3 orang 2,000,000 6,000,000

Tinta (Hitam, Biru, Merah,

Kuning) 4 Botol 50,000 200,000

Kertas HVS A4 80gram 5 Rim 47,000 235,000

SUB TOTAL 21,435,000

TOTAL ANGGARAN YANG DIPERLUKAN (Rp) 50,000,000

51

DAFTAR PUSTAKA

(1) Ghimire GP, Thuan NH, Koirala N, Sohng JK. 2015. Advances in biochemistry and

microbial production of squalene and its derivatives. J Microbiol Biotechnol.;26(3):441-

451. doi:10.4014/jmb.1510.10039

(2) A. Andries ,̧ I. Popa, N. Elena B˘abeanu, S. Nit¸̆ a, and O. Popa, 2014. “Squalene- natural resources and applications,” Farmacia, vol. 62, no. 5, pp. 840–862,

(3) GUNES F. Medical use of squalene as a natural antioxidant. 2013 J Marmara Univ Inst Heal Sci.;3(4):1. doi:10.5455/musbed.20131213100404

(4) Ronco Alvaro, De Stéfani Eduardo. 2013.Squalene: a multi-task link in the crossroads

of cancer and aging. Funct Foods Heal Dis.;3(12):462. doi:10.31989/ffhd.v3i12.30 (5) Lozano-Grande MA, Gorinstein S, Espitia-Rangel E, Dávila-Ortiz G, Martínez-Ayala

AL. 2018. Plant Sources, Extraction Methods, and Uses of Squalene. Int J Agron.;2018.

doi:10.1155/2018/1829160

(6) Ling K.H., Kian C.T., dan Hoon T.C.. 2009.A Guide toMedicinal Plant. Singapore

World Scientific: 32-33.

(7) Chavan SB, Kumbhar RR, Deshmukh RB. 2013. Callophyllum Inophyllum Linn

("honne") Oil, A source for Biodiesel Production. Res J Chem Sci.;3(11):24-

31. www.isca.me.

(8) Giesen, W., Wulffraar, S., Zieren, M., dan Scholten, L., 2006. Mangrove Guidebook for Southeast Asia. Thailand: RAP REPUBLICATION.

(9) Prasad Janki., Shrivastava Atul., Khanna A.K., Bhatia G., Awasthi S.K., Narender, T.

2012. Antidyslipidemic and antioxidant activity of the constituents isolated from the leaves of Calophyllum inophyllum. Phytomedicine Vol 19, 1245-1249.

(10) Mutiara Novianti, Qurrotul Aini, Irma Fadhila Putri, Triana Kusumaningsih. 2015.

ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF EXTRACT NYAMPLUNG (Calophyllum

inophyllum Linn.) LEAVES. ALCHEMY jurnal penelitian kimia, vol. 11 (2015), no. 2,

hal. 200-210

(11) Aparamarta, H.W, Saputra T, Clarantika A, Ju Y.H, dan Gunawan S., 2016. Separation

and Purification of Triacylglycerols from Nyamplubg (Calophyllum inophyllum) Oil by Batchwise Solvent Extraction. I&EC Research, hal 3113-3119.

(12) Yohed I, dan Maulinda A., 2017. Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Total Phenolic

Content, Total Flavonoid Content dan Antoksidan Ekstrak Daun Nyamplung. Surabaya: Departemen Teknik Kimia FTI-ITS.

(13) Danissa H Ardhyni, dan Putri S Sholehah, 2019. Efektivitas Fraksinasi Senyawa Bioaktif Terhadap Aktivitas Antibakteri Daun Nyamplung (Calophyllum inophyllum). Surabaya: Departemen Teknik Kimia FTI-ITS.

(14) Balitbang Pertanian. 2015 .Nyamplung Calophyllum inophyllum L. Bahan Bakar

Nabati. Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Jakarta Selatan

(15) FAO. 2007.Mangroves of Oceania 1980-2005. Ctry. Reports, 155 pages.

(16) Leksono, B.; Windyarini, E.; Hasnah, T. M. 2014.Budidaya Nyamplung (Calophyllum

Inophyllum L.) Untuk Bioenergi Dan Prospek Pemanfaatan Lainnya. Direct 1–46.

(17) Ling K.H., Kian C.T., dan Hoon T.C.. 2009.A Guide toMedicinal Plant. Singapore

52

World Scientific:,32-33.

(18) Heyne K.,1987. Tumbuhan Berguna Indonesia Jilid 3. Jakarta Departemen Kehutanan

(19) Friday, J.B. dan Okano, D. 2006. Calophyllum inophyllum (Kamani),College of

Tropical Agriculture and Human Resources. Hawai’i: University of Hawai’i.

(20) Wibowo, S., dan Hendra, D. 2011. Manfaat Tanaman Nyamplung dan Prospek

Pengembangannya. Sumatera : Balai Penelitian Kehutanan.

(21) Saifudin A.. 2014 Senyawa Alam Metabolit Sekunder. Yogyakarta: Deepublish. ,

(22) Su, X.-H.; Zhang, M.-L.; Li, L.-G.; Huo, C.-H.; Gu, Y.-C.; Shi, Q.-W. 2008, Chemical

Constituents of the Plants of the Genus Calophyllum. Chem. Biodivers. 5 (12), 2579–

2608. https://doi.org/10.1002/cbdv.200890215.

(23) Lim, T. K. 2012 Calophyllum Inophyllum. In Edible Medicinal And Non-Medicinal

Plants; Springer Netherlands: Dordrecht,; Vol. 2, pp 7–20. https://doi.org/10.1007/978-

94-007-1764-0_2.

(24)) Li Y.Z., Li Z.L., Hua H.M., Li Z.G., dan Liu M.S., 2007. Studies on flavonoids from

stems and leaves of Calophyllum inophyllum . J Chin Materia Medica.. 32, 692–694

(25) Vermerris W., dan Nicholson R. 2006. Phenolic Compound Biochemistry. Netherlands:

Springer.

(26) Ramdani. 2016. Senyawa Kimia Alam Terpenoid. Tarbawi:Jurnal ilmu pendidikan.

(27) Yimdjo M.C., Azebaze A.G., Nkengfack A.E., Meyer A.M., Bodo B., dan Fomum Z.T.

2004.Antimicrobial and Cytotoxic Agents from Calophyllum inophyllum.

Phytochemistry. Vol 65, 2789-2795

(28) Linuma M., Tosa H., Tanaka T., dan Yonemori S., 1994. Two Xanthones from Root

Bark of Calophyllum inophyllum. Phytochemistry .. 35, 527-532.

(29) Khan N.U., N Parveen., M.P Singh., R Singh., dan B Achari. 1996.Two Isomeric

Benzodipyranone Derivatives from Calophyllum inophyllum. Phytochemistry., 42,

1181-1183.

(30) Lenny, S.; Ssi, M. 2006. Karya Ilmiah Senyawa Terpenoida Dan Steroida.

(31) Ragasa, C. Y.; Jr, V. E.; Reyes, M. M. D. L.; Emelina, H.; Brkljača, R.; Urban, S.

2015. Triterpenes from Calophyllum Inophyllum Linn . No. August.

(32) Kristanti A.N. 2008.Buku Ajar Fitokimia Laboratorium Kimia Organik Jurusan Kimia-

FMIPA. UNAIR ,Surabaya,Airlangga Universuty Press.

(33) Kumar, V.; Ramachandran, S.; Sultanbawa, M. U. S. Xanthones and Triterpenoids

from Timber of Calophyllum Inophyllum. Phytochemistry 1976, 15 (12), 2016–2017.

(34) Goh, S.H., dan I, Jantan. 1991A Xanthone from Calophyllum inophyllum.

Phytochemistry.. 30, 366-367.

(35) Ali, M.S., S. Mahmud., S, Parveen., V.U. Ahmad, dan G.H. Rizani. 1999. Epimers from

Leaves of Calophyllum inophyllum. Phytochemistry. 50, 1385-1389.

(36) Kaur H Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., dan Kaur G. 2011. Phytochemical Screening

And Extraction: A Review. International Pharmaceutica Sciencia. 1, 1, 98-106.

(37) Mazen A. El-Sakka Dr. 2010.PHYTOCHEMISTRY (3) ALKALOIDS. Third Edition Al

Azhar University. Faculty of Pharmacy. Department of. Pharmacognosy.

53

(38) Susanto, D. F.; Aparamarta, H. W.; Widjaja, A.; Gunawan, S. 2017. Identification of

Phytochemical Compounds in Calophyllum Inophyllum Leaves. Asian Pac. J. Trop.

Biomed. 7 (9), 773–781. https://doi.org/10.1016/j.apjtb.2017.08.001.

(31) Fessenden J. R. 1986. Kimia Organik Edisi Ketiga Jilid 1. Jakarta: Erlangga.

(32) Sadek, P. 2002.. The HLPC Solvent Guide. United States of America: Wiley of

Interscience.

(33) Gamse, T. 2004.Extraction: Liquid-Liquid, Solid-Liquid, High Pressure. Inffeledgasse:

Graz University of Technology.

(34) Fabian C., Gunawan S., Kasim N.S., Chiang C.L., dan Ju Y. H., 2009. Separation of

Nonpolar Lipid from Soybean Oil Deodorizer Distillate by Stirred Batch-Wise Silica

Gel Adsorption-Desorption. Separation Science and Technology. 44:7. 1621-1637

(35) Gunawan, S., Fabian, C., Ju, Y. H., 2008.. Isolation and Purification of Fatty Acid

Steryl Esters from Soybean Oil Deodorizer Distillate. Ind-Eng-Chem Rex. 47, 7013-

7018.

(36) Kasim, N. S., Gunawan, S., dan Ju, Y. H.,. 2009. Isolation and Identification of

Steroidal Hydrocarbons in Soybean Oil Deodorizer Distillate. Elsivier. Food

Chemistry. 117, 15-19.

(37) Gunawan, S., Jeng, B. R., Ju, Y. H., 2013.. Regeneration of Silica Gel for Separation

of Squalene and Steryl Esters from Soybean Oil Deodorizer Distillate. International

Review of Chemical Engineering. Vol. 5, N.2

(38) Sasidharan, S., Chen, Y., Saravanan, D., Sundram, K. M., dan Latha, L. Y. 2011.

Extraction, Isolation, and Characterization of Bioactive Compounds from Plants

Extract. Afr J Tradit Complement Altern Med. 8(1), 1-10

(39) Saleh, N. M., Sanagi, M. M., 2009. Comparison of Pressurized Liquid Extraction with

Soxhlet Extraction in the Determination of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons in Soil.

The Malaysian Journal of Analytical Sciences. Vol 13 No 1, 141-145.

(40) Liu W., Yin P., Liu X., Chen W., Chen H., Liu C., Qu R., Xu Q., 2013. Microwave

Assisted Esterification of Free Fatty Acid Over a Heterogeneous Catalyst for Biodiesel

Production. Energy Conversion and Management. Volume 76, pp. 1009– 10014.

(41) Day, R.A. dan Underwood, A.L. 2002.Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam.

Jakarta: Erlangga.

(42) Das, Dipak Kumar. 1994. Naturally occurring flavonoids: Structure, chemistry, and

high-performance liquid chromatography methods for separation and characterization.

Methods in Enzymology. 234, 410-420

(43) Iskandari, A. 2010.Isolasi dan Elusidasi Struktur Quercetrin dari Daun Nyamplung.

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret Surakarta.

(44) Praveena, Rani, Swaroopa, Veeresham. 2013.Phytochemical Investigation of

Calophyllum Inophyllum Linn. Natural Products Chemistry & Research. 1, 4.

(45) Malarvizhi, P dan N,Ramakrishnan. 2011. GC-MS Analysis of Biologically Active

Compoundsin Leaves of Calophyllum inophyllum L. International Journal of

ChemTech Research. 3 (2): 806-809.

54

55

LAMPIRAN 1 Biodata Tim Peneliti

Biodata Tim Peneliti

4. Ketua

a. Nama Lengkap : Hakun Wira, ST, M.MT, PhD

c. NIP/NIDN : 197809222008121001/0022097808

d. Fungsional/Pangkat/Gol. : Asisten Ahli/ III-b

e. Bidang Keahlian : Teknologi Biokimia

f. Departemen/Fakultas : Teknik Kimia/ Fakultas Teknologi Industri dan Rekayasa

Sistem

g. Alamat : Kampus ITS Keputih, Sukolilo, Surabaya 60111

h. No. Telp : 031-3763729/ 087855887372

i. Pengalaman Penelitian dalam 5 tahun terakhir

No Tahun Judul Penelitian Pendanaan

Sumber Jumlah (Juta Rp)

1 2019 Pengaruh komposisi Fatty

Acid terhadap pembuatan

biodiesel dengan metode

Batchwise solvent

extraction, Microwave dan

kombinasi

Dana Lokal

ITS

Rp 50 Juta

2 2017 Pembuatan Biodiesel dengan

metode batchwise solvent-

solvent extraction

Dana Lokal

ITS

Rp 50 Juta

3 2016 Pemanfaatan Biji dan Daun

Nyamplung untuk bahan

makanan, obat-obatan dan

biodiesel tahap 2

PUPT-DIKTI Rp. 150 Juta

4 2016 Pembuatan Tepung MOCAF

(Modified Cassava Flour)

tahap 1

PUPT-Dikti Rp 105 Juta

56

5 2015 Pemanfaatan Biji dan Daun

Nyamplung untuk bahan

makanan, obat-obatan dan

biodiesel tahap 1

PUPT-DIKTI Rp. 180 Juta

6 2009 Engineering properties of

bio-ethanol and isooctane

mixtures as the effort to

improve the quality of

biofuel

IMHERE Rp 50 Juta

j. Publikasi Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 tahun terakhir

No Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/Tahun

1 COMPARATIVE STUDY OF

BATCHWISE SOLVENT

EXTRACTION AND THE

MICROWAVE ASSISTED

EXTRACTION METHOD

FOR THE PURIFICATION

OF TRIGLYCERIDE FOR

BIODIESEL FEEDSTOCK

FROM CRUDE

CALOPHYLLUM

INOPHYLLUM OIL (CCIO)

International

Journal of

Technology

(IJTECH)

10(3): 46-55, 2019

2 Separation of Xanthone and

Vitamin E from Calophyllum

inophyllum Leaf.

MJFAS 14, 4, 2018

3 Separation and Identification

of Fatty Acid in

Triacylglycerol Isolated from

Calophyllum Inophyllum Oil.

ARPN JEAS. 13, 2. 2018

4 Separation and Purification of

Triacylglycerols from

Nyamplung (Calophyllum

Industrial and

Engineering

Chemistry

55 (11), pp 3113–3119

(2016)

57

inophyllum) Oil by Batchwise

Solvent Extraction

Research (ACS

Journal)

5 Effect of fermenting cassava

with Lactobacillus plantarum,

Saccharomyces cereviseae, and

Rhizopus oryzae on the

chemical composition of their

flour

International Food

Research Journal

22 (3), pp 1280 – 1287

(2015)

6 The utilization of Xylocarpus

moluccensis seed oil as

biodiesel

feedstock in Indonesia

Industrial Crops

and ProductsC

52, 286-291 (2013)

k. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation) dalam 5 tahun terakhir

No Nama Pertemuan Ilmiah/Seminar Judul Artikel Ilmiah Waktu

dan Tempat

1 ISICHEM 2018 The Effect of Power

and Extraction Time

in Purification of

Triglycerides from

Crude Calophyllum

inophyllum Oil for

Biodiesel Feedstock

By Microwave

Extraction Method

Padang, 3-6

Oktober 2018

2 CINIA 2017 The Election of

Edible and Non

Edible Crop for

Biodiesel Feedstock

in Indonesia with

AHP-BCR and GC

Analysis

Bumi Hotel,

Surabaya,

Desember 2017

58

3 International Seminar of

Chemical Engineering

(ISFACHE)

Fragmentation of

Triglyceride in Non

Polar Fraction

from Nyamplung Oil

(C. Inophyllum)

Tahun 2016,

Surabaya,

Indonesia

4 International Seminar Young

Chemical Engineering

Separation and

Purification of

Xanthone from Polar

Fraction Nyamplung

(Calophyllum

inophyllum) Leaf

Tahun 2016,

Taipei, Taiwan

5 International Seminar Young

Chemical Engineering

Effect of

Fermentation Time

and Cell Number on

The Psycochemical

Characteristic of

Modified Cassava

Flour.

Tahun 2016,

Taipei, Taiwan

6 International Seminar of

Chemical Engineering

(ISFACHE)

Identification of

Triglyceride in Non

Polar Fraction

Isolated

from Nyamplung Oil

(Calophyllum

Inophyllum)

Tahun 2014,

Bali, Indonesia

7 “, The 6th National Conference

on Hydrogen Energy and Fuel

Cell

Modified graphene

oxide by amine

groups : Synthesis,

Characterization,

It’S Application for

Capturing CO2

Tahun 2011,

Yilan, Taiwan

59

8 Seminar Nasional Teknik Kimia

Indonesia – SNTKI, , 2009

Integrated

Distillation for

Separating Mixtures

of Ethanol azeotrope

System – Water

Tahun 2009,

Bandung

l. Karya Buku dalam 5 tahun terakhir

No Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit

1 Inspirasi BMI

Taiwan, Tips Aman

Bekerja di Taiwan

dan Pulang jadi

pengusaha”

2015 97 -

2 Handbook on

Cassava: Production,

Potential Uses and

Recent Advances

2017 200 Nova Science

Publisher

3 UTILIZATION OF

CALOPHYLLUM

INOPHYLLUM

SEED OIL

2018 200 Nova Science

Publisher

4 Benefits and Uses of

Calophyllum

inophyllum

2019 200 Intech

m. Perolehan HKI dalam 5-10 tahun terakhir

No Judul/ Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID

1 Ekstraksi pelarut organic

sebagai metode

pemisahan untuk bahan

2015 Paten P00201507494

60

baku pembuatan

biodiesel dan obat

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila dikemudian hari ternyata dijumpai

ketidaksesuaian dengan kenyataan , saya sanggup menerima sanksi.

Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan

dalam pengajuan penelitian laboratorium.

Surabaya, 5 Maret 2020

(Hakun Wirawasista, ST, M.MT PhD)

61

2. Anggota

a. Nama Lengkap : Setiyo Gunawan, ST, PhD

b. NIP/NIDN : 197603232002121001/ 0023037604

c. Fungsional/Pangkat/Gol. : Asisten Ahli/ III-b

d. Bidang Keahlian : Teknologi Biokimia

e. Departemen/Fakultas : Teknik Kimia/ Fakultas Teknologi Industri dan Rekayasa

Sistem

f. Alamat : Kampus ITS Keputih, Sukolilo, Surabaya 60111

g. No. Telp : 031-3763729/ 087855887372

h. Pengalaman Penelitian dalam 5 tahun terakhir

No Tahun Judul Penelitian Pendanaan

Sumber Jumlah

(Juta Rp)

1 2010 Pengaruh Penambahan Metanol dan

Katalis Asam Terhadap Yield

Biodiesel dari Dedak Padi dengan

Proses in-situ Esterifikasi

Researh Grand

I-MHere

30

2 2011 Pemanfaatan dan Karakterisasi

Minyak Biji Buah Mangrove

Xylocarpus Moluccensis Sebagai

Bahan Baku Pembuatan Biodiesel

Unggulan ITS

Tahun 2011

40

3 2012 Teknik Proses Fermentasi

Terimobilisasi menggunakan

Z.Mobilis Termutasi dan Ekstraksi

Kontinyu yang Terintegrasi Sebagai

Upaya Meningkatkan Produktivitas

Etanol

Penelitian

Strategis

Nasional

Tahun 2012

40

4 2013 Pembuatan Biodiesel dari Minyak

Murni Nyamplung (Calophyllum

Inophyllum) (Tahun ke 1)

Unggulan ITS

Tahun 2013

90

62

5 2014 Pembuatan Biodiesel dari Minyak

Murni Nyamplung (Calophyllum

Inophyllum) (Tahun ke 2)

Unggulan ITS

Tahun 2014

80

i. Publikasi Artikel Ilmiah dalam Jurnal dalam 5 tahun terakhir

No Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/

Tahun

1 Isolation and identification of steroidal

hydrocarbon in soybean oil deodorizer

distillate.

Food Chemistry 117, 15-19

(2009)

2 Analysis of trans-cis fatty acids in fatty

acid steryl esters isolated from Soybean

oil deodorizer distillate.

Food Chemistry 121, 752-757

(2010)

3 Rice Bran, a Potensial Source of the

Biodiesel Production in Indonesia.

Industrial Crops

and Products

33:624-628

(2011)

4 Irresolvable Complex mixture of

Hydrocarbons in Soybean Oil

Deodorizer Distillate with High Purity

and Recovery

Journal of

Separation

Science,

35: 327-333

(2012)

5 Proximate composition of Xylocarpus

moluccensis seeds and their oils

Industrial Crops

and Products

41:107-112

(2013)

6 The utilization of Xylocarpus

moluccensis seed oil as biodiesel

feedstock in Indonesia

Industrial Crops

and Products,

52:286-291

(2014)

j. Pemakalah Seminar Ilmiah (Oral Presentation) dalam 5 tahun terakhir

No Nama Pertemuan

Ilmiah/Seminar

Judul Artikel Ilmiah Waktu dan

Tempat

1 The 1st International

Seminar on Fundamental

Biodiesel Production

from Rice Bran by

2010, November 3-4, Bali,

Institut Teknologi Sepuluh

63

& Application of

Chemical Engineering,

in-situ Esterification:

The Effect of

Methanol

Concentration and

Reaction Time

Nopember Surabaya,

Indonesia

2 Bali International

Seminar on Science and

Technology

The analysis and

characterization of

xylocarpus

moluccensis

mangrove fruit seeds

2011, July 22-23, Bali

Indonesia. ISBN 978-979-

98623-1-0,

3 The 5th International

Conference on Industrial

Bioprocesses IFIB

Biodiesel production

from Xylocarpus

moluccensis seed oils

2012, October 7-10, Taipei,

Taiwan, National Taiwan

University of Science and

Technology

4 5th Nanoscience and

Nanotechnology

Symposium (NNS2013)

Optimization of

Operating

Conditions for

Separation Non Polar

Lipids Fraction from

Soybean Oil

Deodorizer Distillate

by regenerated Silica

Gel

2013, Institut Teknologi

Sepuluh Nopember

Surabaya, Indonesia

5 Seminar Rekayasa

Kimia dan Proses

Pemisahan

Trigliserida dari

Minyak Mentah

Nyamplung

2014, UNDIP, Semarang

k. Karya Buku dalam 5 tahun terakhir

No Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit

64

1 Soybean deodorizer

distillate: An

Integrated isolation

and analysis method

of bioactive

compounds. In

Soybeans Cultivation,

uses and nutrition

2010 23 Buku Chapter

International,

Soybeans

Cultivation, uses

and nutrition,

Editor Jason E

Maxwell, Nova

Publisher, New

York, 309-332.

l. Perolehan HKI dalam 5-10 tahun terakhir

No Judul/ Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID

1 Metode Fermentasi -

Ekstraksi Terpadu

untuk Menghasilkan

Etanol

2012 Paten P.00201201228

m. Pengalaman Merumuskan Kebijakan Publik/Rekayasa Sosial lainnya dalam 5 tahun

terakhir

No Judul/ Tema/ Jenis

Rekayasa Sosial Lainnya

yang Telah Diterapkan

Tahun Tempat

Penerapan

Respon

Masyarakat

-

n. Penghargaan dalam 10 Tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau institusi

No Nama Pertemuan Ilmiah/Seminar Judul Artikel Ilmiah Waktu

dan Tempat

1 Dosen Berprestasi II tingkat FTI - 2012, Surabaya

2 Dosen Berprestasi I tingkat FTI - 2013, Surabaya

3 Dosen Berprestasi II tingkat

Institut

- 2013, Surabaya

65

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat

dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila dikemudian hari ternyata dijumpai

ketidaksesuaian dengan kenyataan , saya sanggup menerima sanksi.

Demikian biodata ini saya buat dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan

dalam pengajuan penelitian laboratorium.

Surabaya, 5 Maret 2030

(Setiyo Gunawan, ST, PhD)

DATA USULAN DAN PENGESAHAN

PROPOSAL DANA LOKAL ITS 2020

1. Judul Penelitian

PEMISAHAN DAN PEMURNIAN SENYAWA SQUALENE PADA DAUN NYAMPLUNG (CALOPHYLLUM INOPHYLLUM L.)

Skema : PENELITIAN LABORATORIUM

Bidang Penelitian : Agri-pangan dan Bioteknologi

Topik Penelitian : Teknologi ketahanan dan kemandirian pangan dan obat

2. Identitas Pengusul

Ketua Tim

Nama : Hakun Wirawasista Aparamarta S.T, M.MT, Ph.D

NIP : 197809222008121001

No Telp/HP : .

Laboratorium : Laboratorium Teknologi Biokimia

Departemen/Unit : Departemen Teknik Kimia

Fakultas : Fakultas Teknologi Industri dan Rekayasa Sistem

  Anggota Tim

No Nama Lengkap Asal Laboratorium Departemen/UnitPerguruan

Tinggi/Instansi

1Hakun Wirawasista

Aparamarta S.T, M.MT, Ph.D

Laboratorium Teknologi Biokimia

Departemen Teknik Kimia

ITS

2Setiyo Gunawan

S.T., Ph.DLaboratorium

Teknologi BiokimiaDepartemen Teknik

KimiaITS

3. Jumlah Mahasiswa terlibat : 1

4. Sumber dan jumlah dana penelitian yang diusulkan

  a. Dana Lokal ITS 2020 : 50.000.000,-

  b. Sumber Lain : 0,-

 

  Jumlah : 50.000.000,-

Tanggal Persetujuan

Nama Pimpinan Pemberi

Persetujuan

Jabatan Pemberi Persetujuan

Nama Unit Pemberi

PersetujuanQR-Code

09 Maret 2020

Dr.rer.nat., Ir. Maya Shovitri

M.Si

Kepala Pusat Penelitian/Kajian/Unggulan

Iptek

Kepala Pusat Penelitihan

Agri-pangan dan

Bioteknologi

09 Maret 2020

Agus Muhamad Hatta , ST, MSi,

Ph.DDirektur

Direktorat Riset dan Pengabdian

Kepada Masyarakat