1

Reno Frei Klinische Mikrobiologie

Antigen-/Schnellteste

Antigen-/Schnellteste EIA / Immunchromatographie

Erreger Sensitivität % Bemerkung

Gruppe-A-Streptokokken 75 - 85

von Abstrichqualität abhängig

Influenza A & B 40 - 80 bei Erwachsenen (bei Kindern 60-85%)

Norovirus 55 - 75 bei frischen Proben, u.a. abhängig vom Genotyp

HIV 99.9 meist nur AK-Nachweis, nicht AG! → Bestätigung

Malaria 94 - 100 bei P. falciparum

Selten falsch positive Resultate (Spezifität >95%)

Nachweis toxigener C. difficile Sensitivität (%) versch. Methoden

J Clin Microbiol 2008,46:1996-2001

%

C. difficile Algorithmus mit Antigentest

Antigentest

Kein C. difficile

87%

Toxintest

Toxinprod. C. difficile

5%

Unklar 8%

PCR oder tox. Kultur

negativ positiv

negativ

J Clin Microbiol 2008,46:328-330

positiv

Legionella pneumophila Urin-Antigentest

•  Immunchromatografischer Membrantest, <15 Min. •  Nur L. pneumophila Serogr. 1 zuverlässig erfasst •  Zusatz oder Alternative zur Kultur oder PCR •  Sensitivität 70-90%

abhängig u. a. vom Anteil der Serogruppe 1 •  Falsch-negativ

–  sehr früh im Verlauf (<4 Tage) → wiederholen –  Bei anderen Serogruppen und Spezies –  Bei leichten Fälle

•  Spezifität fast 99% •  Bleibt auch unter Antibiotika für Wochen positiv

2

Legionella Urin-Antigentest Sensitivität (%) nach klinischem Schweregrad

J Clin Microbiol 2002,40:3232

Streptococcus pneumonie Urin-Antigentest

•  Methodisch und technisch gleich wie Legionellen-AG •  Nachweis von Zellwand-Polysaccharid (alle Serotypen) •  Probe leicht erhältlich, schnell, auch bei Anbehandlung •  Sensitivität 50-87%, bei Bakteriämie 70-92% •  Pneumonie-Aetiologie von 28 auf 49% gesteigert1,

38% mehr Pneumokokken als mit Kultur2

•  Spezifität 90-100% bei Erwachsenen •  Kann lange positiv bleiben, Titer-HWZ 1-3.4 Wochen3

•  Validiert für Urin, Liquor, Pleurapunktat und Blutkultur

3) Scand J Infect Dis 2006,38:166-71 4) Int J Infect Dis 2007,11:284-5

1) Clin Vaccine Immunol 2006,13:1092-7 2) Chest 2007,131:1442-7

Ambulant erworbene Pneumonie (CAP) Guidelines

•  Urin-Antigentests: schnell, einfach, spezifisch, auch nach/unter Antibiotika

•  Pneumokokken-Antigen: sensitiver als Blut- und Sputumkulturen

•  Bei Pat. mit schwerer CAP: Legionellen- und Pneumokokken-Antigen aus Urin empfohlen neben Blut und Sputumkulturen

•  Bei ambulanten Pat. ist mikrobiologische Diagnostik optional

Clin Infect Dis 2007,44:S27–72 British Thoracic Society. Thorax 2009,63; Suppl. III

Klinische Bakteriologie Aktuelle Entwicklung

MALDI-TOF MS

Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight

Mass Spectrometry

MALDI-TOF MS

Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization – Time of Flight

Mass Spectrometry

3

MALDI-TOF versus Routine Korrekte Spezies (%)

J Clin Microbiol 2010,48:900-7

%

MALDI-TOF MS in der klinischen Mikrobiologie

•  Genauere Identifikation von kultivierten Bakterien, Hefen und Schimmelpilzen

•  Zurzeit 1500-2000 Spezies in Datenbank •  Schnelle Resultate: ~6 Min./Einzelisolat,

bis 96 Isolate: ca. 1 Min. pro Isolat •  Tiefere Kosten im Betrieb •  Stellt Revolution / Quantensprung in der

diagnostischen Bakteriologie dar

Clin Microbiol Infect 2010,16, ganze November-Ausgabe

MALDI-TOF ab pos. Blutkultur Performance (%)

* Mod. nach J. Bille, IDSA Vancouver 2010

Frage

Wachstum von Streptococcus gallolyticus in der Blutkultur: Was suchen Sie?

1) Zahnabszess/Wurzelgranulom 2) Gastrointestinales Malignom 3) Pleuraempyem 4) Infekt der Luftwege 5) Nichts Spezifisches

Enterobacter cloacae-Komplex

•  E. cloacae •  E. asburiae •  E. kobei •  E. budwigii •  E. hormaechei •  E. nimipressuralis

E. sakazakii heute Cronobacter sakazikii

Taxonomische Änderungen

Klinische Bedeutung

Früher Aktuell

Endokarditis Nutritionally variant streptococci

Abiotrophia defectiva Granulicatella adiacens Granulicatella elegans

* Clin Infect Dis 2005,40:1070-1

4

Taxonomische Änderungen

Klinische Bedeutung

Früher Aktuell

Endokarditis Nutritionally variant streptococci

Abiothrophia defectiva Granulicatella adiacens Granulicatella degans

Malignome im GI-Trakt

Streptococcus bovis* S. gallolyticus* S. infantarius

* Clin Infect Dis 2005,40:1070-1

Taxonomische Änderungen

Klinische Bedeutung

Früher Aktuell

Endokarditis Nutritionally variant streptococci

Abiotrophia defectiva Granulicatella adiacens Granulicatella elegans

Malignome im GI-Trakt

Streptococcus bovis* S. gallolyticus* S. infantarius

Abszesse Empyeme

Streptococcus milleri (-Gruppe)

S. anginosus-Gruppe: S. anginosus S. constellatus S. intermedius

* Clin Infect Dis 2005,40:1070-1

Endokarditis Taxonomie HACEK-Gruppe

Früher H Haemophilus

parainfluenzae Haemophilus (para-) aphrophilus

A Actinobacillus actinomycetemcomitans

C Cardiobacterium hominis

E Eikenella corrodens

K Kingella kingae

Endokarditis Taxonomie HACEK-Gruppe

Früher Aktuell H Haemophilus

parainfluenzae Haemophilus parainfluenzae H

Haemophilus (para-) aphrophilus

Aggregatibacter aphrophilus A

A Actinobacillus actinomycetemcomitans

Aggregatibacter actinomycetemcomitans

C Cardiobacterium hominis Cardiobacterium hominis C

E Eikenella corrodens Eikenella corrodens E

K Kingella kingae Kingella kingae K

Taxonomie-Websites für Bakterien

•  J. P. Euzéby, Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse, France www.bacterio.cict.fr → All names cited in the List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature → früherer Namen = Basonym

•  Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen www.dmsz.de → microorganisms → Nomenclature Up-to-Date → Search an alphabetical list of bacterial names A – Z → früherer Namen = Synonym

Tuberkulose-Diagnostik PCR ab Sputum

Verflüssigung + Homogenisierung

Konzentration

Zell-Lyse

Zubereitung Mastermix

DNA-Amplifikation (PCR)

Detektion

Interpretation

DNA-Extraktion

5

N Engl J Med 2010,363:1005-15

GeneXpert MTB/RIF Schneller PCR-Nachweis GeneXpert® MTB/RIF

•  Nachweis von   Mycobacterium tuberculosis-Komplex und   Mutationen für Rifampicinresistenz im rpoB-Gen

•  Multizentrische Studie in Peru, Azerbaijan, Südafrika, Indien 1730 Patienten

•  M. tbc-Nachweis gegenüber Kultur   Sensitivität bei Mikroskopie-pos 98.2%   Sensitivität bei Mikroskopie-neg 72.5%   Spezifität 99.2%

•  Rifampicinresistenz   Sensitivität 97.6%   Spezifität 98.1%

•  Robust, auch in nicht spezialisiertem Labor •  Für Einzelprobe vorgesehen, notfallmässig durchführbar

N Engl J Med 2010,363:1005-15

Bakteriologie Molekulare Tests (PCR u.a.)

•  Schnell, sensitiv und spezifisch •  In der Regel keine Resistenztestung •  Oft teurer als andere Verfahren •  Weisen vitale und tote Keime nach → •  Nachweis nach/unter Antibiotika möglich •  Zur Verlaufsüberwachung nicht geeignet

Mässiger Lungenbefall

J Clin Microbiol 1999,37:3601-7

Lungentuberkulose Wie lange bleibt PCR positiv?

Herzlichen Dank

Referenzen - 1

•  Tarr Ph, Frei R. Molekulare Früherkennung in der Infektiologie –Molekulare Diagnostik: Eine praktische Einführung für Kliniker. Ther Umschau 2010;67: 381-6

•  Mandell LA et al. Infectious Diseases Society of America / American Thoracic Society Consensus Guidelines on the management of community-acquired pneumonia in adults. Clin Infect Dis 2007;44:S27–72 (www.idsociety.org → guidelines)

•  British Thoracic Society. Guidelines for the management of community acquired pneumonia in adults: update 2009. Thorax 2009;64, Suppl. III (www.brit-thoracic.org.uk → guidelines)

•  Yzerman EPF et al. Sensitivity of three urinary antigen tests associated with clinical severity in a large outbreak of legionnaires’ disease in The Netherlands. J Clin Microbiol 2002;40: 3232-6

6

Referenzen - 2 •  Genné D. Enhancing the etiologic diagnosis of community-

acquired pneumonia in adults using the urinary antigen assay (Binax NOW). Int J Infect Dis 2006;10:124-8

•  Fenner L et al. Rapid and reliable diagnostic algorithm for detection of Clostridium difficile. J Clin Microbiol 2008;46:328-30

•  van't Wout JW, Bijlmer HA. Bacteremia due to Streptococcus gallolyticus, or the perils of revised nomenclature in bacteriology. Clin Infect Dis 2005;40:1070-1

•  van Veen SQ et al. High-throughput identification of bacteria and yeast by matrix-assisted laser desorption ionization–time of flight mass spectrometry in conventional medical microbiology laboratories. J Clin Microbiol 2010;48:900-7

•  Boehme CC et al. Rapid molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance. N Engl J Med 2010;363:1005-15